Hatása elektroakupunktúra stimuláció Zusanli akupunktúrás (ST36) gyomor- motilitás: lehetővé PKC és a MAPK jelátviteli pathways

hatása elektroakupunktúra stimuláció Zusanli akupunktúrás (ST36) gyomor- motilitás: lehetővé PKC és a MAPK jelátviteli utak katalógusa Abstract
Háttér
Elektroakupunkturája (EA) stimulációs kimutatták, hogy van egy nagy terápiás potenciállal kezelésére gasztrointesztinális motilitási rendellenességek. Azonban nincs bizonyíték tisztázta a mechanizmusok hozzájárulnak a hatását EA stimulációt a Zusanli acupoint (ST.36). Ez a tanulmány célja az volt, hogy vizsgálja meg a szabályozó hatása EA stimulációval ST.36 a gyomor motilitás és tárja fel annak lehetséges mechanizmusait. Katalógusa módszerek katalógusa harminc Sprague-véletlenszerűen három csoportra oszthatók: a ST.36 csoport, a nem-acupoint-csoport, és a kontroll csoport. EA stimuláció állítottuk be 2 Hz, folyamatos üzemmódban, és 1 V 30 percig. A frekvencia és az átlagos legnagyobb amplitúdó gyomormozgékonysági mértük electrogastrography. A protein kináz C (PKC) és a mitogén-aktivált protein-kináz (MAPK) jelátviteli értékelték segítségével valós idejű polimeráz láncreakciót. Caldesmon (CAD) és calponin (KAP) fehérje expresszióját a gyomor antrum mutattunk ki Western blot. A számított Videó feldolgozó rendszer értékelésére használt morfológiai változásokat simaizom sejtek (SMC-k) a gyomor antrum.
Eredménye
EA stimuláció ST.36 kettős volt hatása a frekvencia és az átlagos csúcs amplitúdója. Továbbá, az EA stimuláció ST.36 szabályozott kifejezése bizonyos gének a PKC és a MAPK jelátviteli, valamint szabályozta a kifejezés a CAD és a KAP fehérjéket. EA szérum okozta SMC összehúzódási képességét. Elősegítése gyomor motilitás korrelálhatnak up-regulációját MAPK6 (ERK3), MAPK13, és a prosztaglandin-endoperoxid szintáz 2 (PTGS2) génexpresszió, és a down-regulációja a kollagén, I. típusú, alfa 1 (COL1A1) gén és a CAD és Cap fehérje expresszióját. Gátlása gyomormotilitás korrelálhatnak down-regulációja a interleukin-1 receptor 2-es típusú (IL1R2) és mátrix metalloproteináz-9 (MMP9) géneket, és up-regulációját CAD és Cap fehérje expresszióját.
Következtetések
EA stimuláció ST.36 szabályozott gyomormotilitási, és a hatások egyaránt elősegítő és gátló patkányokban. A lehetséges mechanizmusok korrelál a PKC és a MAPK jelátviteli utak.
Kulcsszavak
Elektroakupunktúrája Zusanli gyomormotilitás PKC MAPK alapon
gyomormotilitás az egyik legkritikusabb fiziológiai funkciói az emberi bélben. Anélkül összehangolt mozgékonyságát, az emésztést és a felszívódást a táplálék a tápanyagok nem kerülhet sor. A gasztrointesztinális motilitás szabályozásában bonyolult és magában foglalja a simaizom sejtek (SMC-k). Az összehúzódás SMC-k elsősorban szabályozza tranziens változásai az intracelluláris Ca 2+ [1]. Két fő útvonal részt vesz ebben a mechanizmus, nevezetesen a RhoA-Rho-kináz-útvonal és a protein kináz C (PKC) útvonal [2]. Calponin (KAP), a jól megalapozott in vitro katalógusa szubsztrátja jelátviteli fehérjék PKC [3], közvetlenül kölcsönhatásba PKC [4]. Caldesmon (CAD) egy aktin és a miozin-kötő fehérje, hogy létezik két izoformája, amelyek révén keletkezett alternatív splicing [5]. Egyre több bizonyíték a másodlagos útvonal szabályozásában simaizom összehúzódás, amely PKC függő, és ez az útvonal is közvetíti a KAP és a CAD-aktiválás [6-9]. Mitogén aktivált protein-kináz (MAPK) jelátviteli is szerepet játszanak az SMC összehúzódás [10]. Három fő csoportja világosan szabályozott MAPK, hogy a vezető megváltozott génexpresszió. Az extracelluláris jel rokon kinázok 1 és 2 (ERK1 /2), A c-Jun terminális kináz (JNK), a p38 MAPK ismerten fontos szerepet játszanak az intracelluláris jelátviteli válasz extracelluláris stimulus [11]. Ezen túlmenően, a KAP elősegítheti ERK-függő jelátviteli, így jelentős szerepet játszanak a szabályozásában SMC kontrakció [12]. Katalógusa akupunktúra, amely már használt több ezer éve Kínában, egyre inkább használják világszerte irányításához különböző betegségek [13]. Úgy tartják, hogy a stimuláció az acupoint közvetlenül érintheti érintett szervekben és a hatás eléréséhez a akupunktúrás kezelés. EA egy kombinált eljárás, amely stimulálja az akupunktúrás elektromos stimuláció helyett kézi manipulációk tű. Számos tanulmány értékelte a hatások és mechanizmusai EA gyomormozgékonysági [14-20]. Bizonyítékok alapján ezekben a vizsgálatokban, az EA stimuláció kimutatták, hogy van egy nagy terápiás potenciállal kezelésére gasztrointesztinális motilitási rendellenességek. A Zusanli (ST.36) az egyik leggyakrabban használt acupoints a gyomor-bélrendszeri betegségek. Az elmélet szerint a hagyományos kínai orvoslás (TCM), van egy kapcsolata ST.36 és a funkciója a gyomor-bél traktus. Eddig azonban semmiféle bizonyítékot nem tisztázott a pontos hatásmechanizmus hozzájárul hatásainak EA stimuláció.
Ezért megvizsgálva morfológiai változások és mioeiektromos aktivitás, a jelen tanulmány célja, hogy értékelje a szabályozó hatása EA stimulációval ST.36 acupoint a gyomor motilitásra patkányokban és felfedezni annak lehetséges mechanizmusait.
módszerek
Állatok és reagensek
harminc kifejlett hím Sprague-Dawley (SD) patkányokat tömegű 180-220 g tartottuk egy 12-H fény- sötét ciklus 25 ± 2 ° C hőmérsékleten és 60% páratartalom mellett szabad hozzáféréssel a táplálék és víz. SD patkányokat szereztünk a kísérleti állat Center negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem. A kísérleteket végeztünk összhangban intézményi előírásoknak negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem az ellátás és a laboratóriumi állatok felhasználását. Jóváhagyása a protokollt úgy nyert az etikai bizottság és Takarmányozási Kutatóintézet, Negyedik Katonai Orvostudományi Egyetem, Kína. Az állatokat random három csoportba sorolhatók: a ST.36 csoport, a nem-acupoint csoport és a kontroll csoport.
Collagenase II, tripszin inhibitor, ditiotreitol alkohol cukor, szarvasmarha szérum albumin, kalcium-mentes, foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS ), glutáraldehid, és tripánkék a Sigma Chemical Co. A teljes RNS-Extraction Kit, SuperScript III reverz transzkriptázt, és SuperArray PCR master Mix cégtől vásároltuk Invitrogen Co. anti-kecske, anti-egér, és az anti-nyúl antitestek voltak vásárolt Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co. katalógusa EA stimulációs eljárással katalógusa a ST.36 ben található, körülbelül 5 mm oldalirányú a fibula a hátsó végtagok, míg a nem-acupoint volt található a hátsó láb mellett ST.36 nyitva 5 mm [21]. A tűt helyezünk 5 mm mélyen az izomba réteg a kiválasztott acupoint és arra ösztönözte az EA 2 Hz és 2 V egy elektromos stimulátor (G6805-2A; Shanghai Huayi orvosi eszköz Factory, Shanghai, Kína). Mindegyik stimulációs tartott 20 percig folyamatos üzemmódban, és a stimuláció végeztük 1 alkalommal /nap 5 napon át. A patkányok kontroll csoportban nyújtottak be a rögzítés csak stimulálás nélkül 30 percig ugyanabban az időben minden nap.
Electrogastrography katalógusa Electrogastrography vittük fel a többcsatornás élettani jel megszerzése és feldolgozó rendszer (mód RM-6280) után az utolsó stimuláció az ötödik napon. Miután egy 12 H gyors (szabad hozzáféréssel a vízhez) és 6 órán nélkül inni, a patkányokat elaltattuk intraperitoneálisan (i.p.) 10% uretán dózisban 1 g /kg testtömeg, majd immobilizált. Az első elektród rögzítettük a farok, és irányított elektródákat ültettünk a serosa felszínen a gyomor 0,3-0,5 cm-rel a pylorus. Az elektródákat borították 37 ° C normál sóoldatot géz, kapcsolódó vezetéket. A kísérleti paraméterek a következők voltak: frekvencia 400 Hz, szűrő 10Hz, szkennelési sebesség 2 s /osztás, érzékenység 25 mV, időállandó egyenáram, és a szkóp felvételi idő 1 óra [18]. Katalógusa Valós idejű polimeráz lánc reakció (PCR) elemzés
Miután az utolsó stimulálás EA, a patkányokat leöltük. A kontroll csoport és a nem-akupunktúrás csoportban egy patkányt véletlenszerűen kiválasztott ill. EA csoport, először felosztotta EA elősegítő csoport és az EA gátló csoporttal eredményei szerint a electrogastrography. És aztán ott patkányokat véletlenszerűen kiválasztott mindkét csoportban. Gyomor antrum szövetekben (a pylorus 0,8-1 cm) vágtuk darabokra, amelyek mintegy 0,3 cm x 0,5 cm méretű, és azonnal helyezzük -70 ° C-on folyékony nitrogénben. A teljes RNS-mintákat extraháltuk TRIZOL a különböző csoportok a gyártó utasításai szerint. RNS minőségét értékeltük spektrofotometriásán alapján az A260 /A280 arány. RNS-mintát vizsgáltak meg az integritását a 18S és 28S RNS-gél-elektroforézissel. A teljes RNS (1,5 ug) előállításához használt első cDNS-szálat a Superscript III reverz transzkriptáz (1 pl) az izolált RNS-t. A valós idejű PCR reakciókat állítottuk elő SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112), amely a PKC és a MAPK jelátviteli út géneket. A hígított cDNS-t (102 ul) adunk minden egyes lyukba megfelelő PCR-chip. Ezután a PCR-chipet helyeztünk be a valós idejű PCR-eszköz a PCR-reakcióban. A kerékpáros körülmények a következők voltak: 95 ° C-on 10 percig, 60 ° C-on 15 s, és 60 ° C-on 1 perc (40 cikluson keresztül). Különbségek a génexpresszió kifejezve kinyitható változások számításához a 2 -ΔΔCt módszer.
Western blot CAD és Cap
CAD és Cap fehérje szintjét mutattuk ki Western blot. Kezelés után az EA, a patkányokat leöltük. A patkányokat ezután rögzített, majd bemetszése hasi bőr és a hashártya. A zsigerek voltak kitéve, és a központi 1/3 a gyomor test kis darabokra vágjuk, amelyek mintegy 0,3 cm x 0,5 cm-es méretű. A darabokat azonnal -70 ° C-on folyékony nitrogénben. Röviden, sejtkivonatokat (30 ng) a felső 1/3 közepén a gyomor test voltak elválasztva nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézissel (SDS-PAGE), majd nitrocellulóz membránra transzferáltuk. A szűrőket blokkoltuk Tris-pufferelt sóoldattal (TBS) /5% tej, majd inkubáltuk poliklonális antitestek ellen CAD-ben (1: 3000 hígítás), sapka (1: 3000 hígítás), és β-aktin (1: 10000). Miután a membránokat mostuk, azokat inkubáltuk másodlagos peroxidázzal konjugált antitestek hígított 1: 5000 TBS-ben 0,01% Tween 20. A antitest kimutatási rendszert használtuk, és a membránokat kitéve röntgen szerinti fólia, a gyártó utasításai szerint.
szérum készítmény
szérum állítottuk elő az előzőekben leírt módosításával [22]. Miután az utolsó stimulálás EA az összes patkányt leöltük. Ezután 6 ml vért vettünk a nyaki mindegyik patkány. A vér tartottuk még 1 órán át, majd centrifugáltuk 3000 rpm-en, 15 percig. A szérumot összegyűjtjük, szűréssel eltávolítjuk a baktériumokat, és 1,5 ml-ben csomagolva egy EP cső, melyet -70 ° C-on folyékony nitrogénben.
Hatásai EA szérum SMC kontraktilitásra
Öt normál SD patkányokat elaltatott ip 10% uretán dózisban 1 g /kg testtömeg. Miután elaltattuk, a hasi bőr és a hashártya is metszeni, és a zsigerek voltak kitéve. Az egész gyomrot kivágjuk, és a gyomor antrum szöveteket izoláltunk és azonnal elhelyezzük oxigénnel telített PBS-penicillin (100 U /ml) és sztreptomicint (100 ng /ml) 4 ° C-on. Miután leöblítettük, a szöveteket vittük át oxigénnel telített HEPES, elterjedt és a rögzített szilikagél lemez egy finom-tű. A nyálkahártya réteget óvatosan levágta, felfedve a kör alakú nyálkahártya, amelyet nyomással lehet a 9-10 izomcsíkokat (1 mm x 4 mm), Tyrode-oldattal, majd 4 ° C-on hűtőszekrényben körülbelül 15 percig. Az izomcsíkokat emésztettük, 1% -os kollagenáz II típusú, 0,05% tripszin inhibitor, 0,05% ditiotreitol alkohol cukor, és 0,2% szarvasmarha szérum albumint enzim vízfürdőben 25 percen át 36 ° C-on. Az emésztés után az elegyet öblítjük enzim-mentes HEPES, 30 percig inkubáljuk, és leszűrjük egy 200 képernyő mesh, hogy összegyűjtsék a szabad egyetlen gyomor simaizomsejtek. A sejtek életképességét mértük a tripánkék teszt. Az élő sejtek több mint 95% sűrűségben 10 6 sejt /ml.
A izolált SMC-ket véletlenszerűen oszlik a normál szérum-csoport, ST.36 szérum-csoport, és a nem-acupoint szérum-csoport. Simaizomsejtek szuszpenziókat (50 ul) sűrűségben 1,0 × 10 6 sejt /ml helyeztünk 96 lyukú lemezeken. Mindegyik szérummintát inaktiváltuk 30 perc után 56 ° C-os vízfürdőbe, majd hígított 1: 2 HEPES. Szérum (50 ul) a különböző csoportok adtunk SMC-k, keverve egy pipettával 30 másodpercig, és a rögzített 30 ul 2,5% -os glutáraldehid. Cellahosszúság értékelték a Computer Videó Processing System (DP2-BSW), amelyet kiszámításához használt zsugorítás mértéke. A sejt zsugorodás százalékos = (cella hossza a kezelés előtt - sejt hossza a kezelés után) /sejt hossza a kezelés előtt × 100%.
Statisztikai analízis
Az adatokat átlag ± S.D. Egytényezős varianciaanalízissel, majd Bonferroni-féle többszörös összehasonlító tesztet alkalmazva az SPSS 10.0 szoftver. A ΔCt kapott értékek a valós idejű PCR, melyeket kiszámításához használt szeres-változás különbség (itt kifejtett százalékában kontroll), szintén használható a statisztikai elemzést. A p katalógusa -érték < 0.05 vagy egy kinyitható változás > 2 definiálták statisztikailag szignifikáns minden elemzések. Katalógusa eredményei katalógusa hatásai EA gyomormozgékonysági katalógusa EA a ST.36 életében jelentős változást hozott az abszolút érték az átlagos csúcs amplitúdója és frekvenciája, mint a kontroll, vagy nem-acupoint csoportban (p
< 0,01). Ezzel ellentétben, az EA a nem-acupoint nem okozott jelentős változást a gyomor motilitás, mint a kontroll csoportban (Kiegészítő fájl 1: ábra S1). Kétféle gyomor motoros minták figyeltek meg a ST.36 csoport 10 patkányok szerint tesztelték átlagos csúcs: patkányok pozitív átlagos csúcs ítélt támogatása minta, míg a patkányok negatív átlagos csúcs ítélt előmozdítása mintát. Az eredmények azt mutatták, 5 (50.0%) patkányoknál a ST.36 előmozdítása mintát, és 5 (50.0%) patkányoknál a ST.36 gátló mintát. Patkányokban a ST.36 elősegítő minta, az átlagos legnagyobb amplitúdó és frekvencia értékek 47,13 ± 0,44 és 0,19 ± 0,06 volt. Patkányokban a ST.36 gátló minta, az átlagos legnagyobb amplitúdó és frekvencia értékek -43,41 ± 0,62 és 0,17 ± 0,03 volt (Kiegészítő fájl 2: Táblázat S1). Katalógusa hatásai EA a PKC és a MAPK jelátviteli utak
EA a ST.36 jelentősen szabályozott kifejezése bizonyos gének a PKC és a MAPK jelátviteli. Az 1. táblázat az eredményeket a mikroarray analízise a ST.36 elősegítő csoport (mint a kontroll csoport). A kifejezés számos gén nőtt, miután az EA stimuláció, beleértve ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA és PTGS2. Egyéb gén mutatott csökkent expressziót követően EA stimuláció, beleértve IL1R2. A 2. táblázat felsorolja az eredményeket a mikroarray analízise a ST.36 gátló csoporttal (összehasonlítva a kontroll csoport). A génexpressziós IL1R2 és MMP9 is csökkent, miután az EA stimulation.Table 1 gén változása összehasonlítva EA elősegítő csoport a kontrollcsoporttal katalógusa jelátviteli út Matton Gene Matton Sites Matton EA /kontroll (Fold változás) Matton EA /kontroll (Hajtás felfelé vagy lefelé szabályozás) Matton MAPK katalógusa MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Fold-változás (2-ΔΔCt) a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a vizsgálati mintában osztva a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a kontroll mintában. Fold-szabályozás jelenti a hajtás-váltás eredménye egy biológiailag értelmes módon. Fold-változás értéke nagyobb, mint egy jeleznek pozitív- vagy up-szabályozás, és a hajtás-szabályozás megegyezik a fold-változás. Fold-értékek módosítása kevesebb, mint egy értéket negatív vagy leszabályozza, és a hajtás-szabályozás negatív inverze a hajtás-váltás. Katalógusa 2. táblázat Gene változás összehasonlításával EA gátló csoport kontrollcsoport katalógusa jelátviteli út
Gene Matton Sites Matton EA /kontroll (Fold változás) Matton EA /kontroll (Fold fel- vagy down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Fold-változás (2-ΔΔCt) a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a vizsgálati mintában osztva a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a kontroll mintában. Fold-szabályozás jelenti a hajtás-változás eredménye egy biológiailag értelmes módon. Fold-változás értéke nagyobb, mint egy jeleznek pozitív- vagy up-szabályozás, és a hajtás-szabályozás megegyezik a fold-változás. Fold-változási értékek kevesebb, mint egy értéket negatív vagy leszabályozza, és a hajtás -regulation a negatív inverze a fold-változás.
a 3. táblázatban az eredményeket a mikroarray analízise a ST.36 elősegítő csoport (mint a nem-acupoint-csoport). a kifejezés a COL1A1 gén fokozott után EA stimuláció. a kifejezés a IL1R2 és SERPINE1 géneket követően csökkent EA stimuláció. a 4. táblázat felsorolja eredmények a microarray elemzés a ST.36 gátló csoporttal (mint a nem-acupoint csoport). Számos gén mutatott csökkent kifejezés után EA stimuláció, beleértve a ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2 IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA és PTGS2 géneket. A kifejezés a COL1A1 gén megnövekedett után EA stimulation.Table 3 Gene változás összehasonlításával EA elősegítő csoportot nem acupoint csoport katalógusa jelátviteli út Matton Gene Matton Sites Matton EA /Non-acupoint (Fold változás) Matton EA /Non-acupoint (Fold fel- vagy down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Fold-változás (2-ΔΔCt) a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a vizsgálati mintában osztva a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a kontroll mintában. Fold-szabályozás jelenti a hajtás-változás eredménye egy biológiailag értelmes módon. Fold-változás értéke nagyobb, mint egy jeleznek pozitív- vagy up-szabályozás, és a hajtás-szabályozás megegyezik a fold-változás. Fold-változási értékek kevesebb, mint egy értéket negatív vagy leszabályozza, és a hajtás -regulation a negatív inverze a hajtás-váltás. katalógusa 4. táblázat Gene változás összehasonlításával EA gátló csoport nem acupoint csoport katalógusa jelátviteli út Matton Gene Matton oldalak katalógusa
EA /Non-acupoint (Hajtás változás) Matton EA /Non-acupoint (Hajtás felfelé vagy lefelé szabályozás) Matton MAPK katalógusa MAPK6 (ERK3) hotelben D02
0,18
-5,67 katalógusa MAPK katalógusa MAPK10 (JNK3) hotelben D07 katalógusa 0,42 katalógusa -2,40 katalógusa MAPK katalógusa MAPK11 (p38bMAPK) hotelben D08
0,39 katalógusa -2,58 katalógusa MAPK katalógusa MAPK13 katalógusa D10 katalógusa 0,28 katalógusa -3,58 katalógusa MAPK katalógusa MAPK3 (ERK1) hotelben G11 katalógusa 0,26 katalógusa -3,83 katalógusa MAPK katalógusa MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Fold-változás (2-ΔΔCt) a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a vizsgálati mintában osztva a normalizált génexpressziós (2-ΔCt) a kontroll mintában. Fold-szabályozás jelenti a hajtás-változás eredménye egy biológiailag értelmes módon. Fold-változás értéke nagyobb, mint egy jeleznek pozitív- vagy up-szabályozás, és a hajtás-szabályozás megegyezik a fold-változás. Fold-változási értékek kevesebb, mint egy értéket negatív vagy leszabályozza, és a hajtás -regulation a negatív inverze a hajtás-váltás. katalógusa hatásai EA CAD és Cap fehérje expressziós katalógusa stimulációt EA jelentősen megnövekedett CAD és a kupakot fehérje expressziójának ST.36 gátló csoporttal összehasonlítva a nem acupoint -csoport, míg a stimulálás EA jelentősen csökkent a CAD és CaP fehérje expresszió ST.36 előmozdításában csoportban, mint a nem-acupoint csoport (1A ábra, B, C, D). 1. ábra hatásai EA stimuláció Caldesmon (CAD) és Calponin (KAP) fehérje szintje. A. kifejezése Caldesmon fehérje szintjét Western blot segítségével. B. A denzitometriás elemzés Caldesmon fehérje szint normalizálódott a β-aktin; C. kifejezése Calponin fehérje szintjét Western blot segítségével; D denzitometriás elemzése Calponin fehérje szint normalizálódott a β-aktin. CAD: Caldesmon; Sapka: calponin; 1: nem acupoint csoport; 2-4: EA gátló csoporttal; 5-7: EA elősegítő csoport. * P < 0,05 compard a nem acupoint csoport.
Hatásai EA szérum SMC kontraktilitásra
Amint a Kiegészítő Fájl 3 ábra: S2 és további fájl 4: Táblázat S2, sejtek morfológiáját figyelték meg fénymikroszkóp alatt kezelés után különböző típusú szérum. Nem volt különbség a sejtek hossza hozzáadása előtt szérum (p 0,05). ST.36 szérum megnövekedett SMC kontraktilitást (60,22 ± 3,84 uM), mint a kontroll szérum (96,02 ± 6,24 uM) vagy a nem acupoint szérumot (97,33 ± 6,97 uM). Az összehúzódás százalékos 41% volt stimulálás után ST.36 szérum, míg az összehúzódás százalékos voltak 7% és 10% stimuláció után sem a nem-acupoint szérum vagy kontroll szérum, ill.
Megbeszélés
A jelen tanulmány bizonyította hogy az EA stimuláció ST.36 volt szabályozó hatása a gyomor motilitás patkányokban, amely vagy serkentő vagy gátló. A stimuláló hatása az EA járhat át a PKC és a MAPK jelátviteli útvonalak.
A hatásait EA a gyomor motilitásra kiterjedten tanulmányozták mind állatokban, mind emberekben miatt a rendelkezésre álló electrogastrography. Köztudott, hogy a gyomorsav mioeiektromos tevékenysége a lassú hullámok és tüskék. Tüskék közvetlenül kapcsolódó megjelenése összehúzódások. Lassú hullámok nem idéznek gasztrointesztinális kontraktilitás, de ezek határozzák meg a maximális frekvenciáját gyomor-összehúzódások.
A leggyakrabban használt acupoint a gasztrointesztinális rendellenességek kezelésére van a ST.36. Általánosan azt tartják, hogy az akupunktúra fejthet elősegítése és gátló hatása a gasztrointesztinális motilitás függően stimulált acupoint. Az emberben, kimutatták, hogy az EA stimuláció ST.36 volt kettős hatást gyakorol a gyomor perisztaltika, amelyek vagy facilitatív vagy gátló [15, 23]. Bár a betegek szenvednek gyomor-bélrendszeri betegségek részesült alkalmazásával akupunktúrás ST.36, de a pontos molekuláris mechanizmus még nem tisztázott. Kutyáknál az EA a ST.36 fokozott szabályosságát gyomor lassú hullámok [24, 25]. Éber patkányokban, az EA stimuláció ST.36 indukált kettős hatással, amelyek vagy facilitatív vagy gátló, a gyomor motilitásra [26, 27]. További vizsgálatok feltárták, hogy a stimuláló hatás közvetíti kolinerg utak, míg a gátló hatás független a szimpatikus úton [28]. Az általános elmélet akupunktúra gyógyászat indul ki a koncepció a Yin és Yang, és az akupunktúrás úgy vélik, hogy módosítsa közötti egyensúlyhiány Yin és Yang. A hatások a akupunktúra a kiegyenlítő Yin és Yang lehet közvetíti a kölcsönhatás a neurotranszmisszió GABA és glutamát az agytörzsben.
A jelenlegi papír, az EA stimuláció ST.36 hatásos volt szabályozásában gyomor motilitás, amint azt a jelentős növekedése csúcs amplitúdója és frekvenciája. Ezen túlmenően, a hiánya egy ilyen válasz, ha az azonos stimuláció végeztük a nem acupoint volt jelzi a specificitása ezt a hatást. Szerint a csúcs amplitúdója és frekvenciája, a ST.36 csoport tovább osztható elősegítő és gátló mintákat, hiszen az EA megmutatta kettős hatást. Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a mechanizmusokat, amelyek révén EA szabályozza a gyomor motilitás, izoláltuk SMC a gyomorból és a megfigyelt hatása ST.36 szérum SMC kontraktilitás segítségével szerológiai farmakológiai vizsgálati módszereket. Az eredmények azt mutatták, hogy ST.36 szérum jelentősen megnövekedett SMC kontraktilitás; mivel a hatások által termelt normális vagy nem acupoint szérum nem voltak nyilvánvalóak.
A legfrissebb vizsgálatok azt javasolta, hogy a hatás az EA stimuláció közvetíti az opioid rendszer [29] vagy azon keresztül történő stimuláló hatása a vagus aktivitás [30]; Azonban a pontos mechanizmus, amellyel az EA érinti a gyomor motilitás nem teljesen tisztázott. Korábbi eredmények is azt mutatták, hogy a PKC emelkedtek stimulálás után EA [31]. Ezért a kiválasztott a PKC és a MAPK útvonalak célpontjául közvetítésében stimuláló hatása az EA a gyomor mobilitását. Sőt, sapka és CAD szerepet játszhat a gasztrointesztinális motilitás szabályozásában során fiziológiai és patológiai alkalmazkodás. Up-szabályozás a KAP és a CAD kifejezés gátolta gyomor, és leszabályozza a KAP és a CAD kifejezés támogatni gasztrointesztinális motilitás [32, 33]. ERK1 /2, tagja a MAPK család, kimutatták, hogy jelentős szerepet játszanak a szabályozásában simaizom összehúzódás [34]. Szerint microarray eredmények támogatása gyomormozgékonysági korrelálhatnak up-szabályozás MAPK6 (ERK3), MAPK13 és PTGS2 génexpresszió, és leszabályozza COL1A1 génexpresszió. Gátlása gyomormotilitás korrelálhatnak down-regulációja IL1R2 és MMP9 génexpressziót. Western blot felbukkant-szabályozás CAD és Cap fehérje expresszióját gátolja gyomormotilitási, míg leszabályozza CAD és Cap fehérje expresszióját támogatni gyomormotilitási. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a CAD és sapkát is szerepet játszhat a gasztrointesztinális motilitás szabályozásában során fiziológiás és patológiás alkalmazkodás. Katalógusa Voltak korlátai a jelen tanulmányban meg kell említeni. Először is, mi nem vizsgálta, hogy a PKC-inhibitorok és a MAPK érintheti, vagy blokkolja a szabályozó hatásának EA stimuláció ST.36 a gyomor mobilitását. További vizsgálatok szükségesek, hogy vizsgálja meg az befolyásolja a PKC és a MAPK-inhibitorok. Másodszor, a jövőben vizsgálatok középpontjában a teljes megértése a szerepe minden változás génexpressziós fel a szabályozása gyomor mobilitás.
Következtetések katalógusa Összefoglalva, eredményeink azt mutatják, hogy az EA stimuláció ST.36 szabályozott gyomormotilitási. EA stimuláció ST.36 kifejtett kettős hatása a gyomor motilitását, amelyek vagy stimuláló vagy gátló. Ezen túlmenően, a szabályozás az gyomormozgékonysági korrelálhatnak a PKC és a MAPK jelátviteli utak. Katalógusa Notes katalógusa Qi Yang, Yan-Dong Xie hozzájárult egyaránt ezt a munkát. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás
tanulmány támogatták a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (No. 30801487). | elektronikai kiegészítő anyag katalógusa 12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc kiegészítő fájl 1: ábra S1: Effects of EA stimuláció gyomormotilitási. A gyomor motilitást mértük electrogastrography. A. Ellenőrzési, B. ST.36, C. Nem acupoint. Stimulációt EA a ST.36 növelte az átlagos legnagyobb amplitúdó és frekvencia. A gyomor hullámok megmutatta kettős változás a ST.36 csoportban, mint a kontroll, illetve a nem-akupunktúrás csoportban. Értékét az átlag ± S.D. (N
= 10). * P katalógusa < 0,05, ** p katalógusa < 0,01 vs katalógusa. ellenőrző csoport. #p katalógusa < 0,05, ## p katalógusa < 0,01 vs. katalógusa nem acupoint csoport. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Kiegészítő fájl 2. táblázat S1: Effects of EA gyomor mioeiektromos tevékenységet. A ST.36 csoport tovább osztható EA előmozdítása és az EA gátló csoportokat a gyomor hullámok. Az értékeket átlag ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Kiegészítő fájl 3: Ábra S2: Effects of EA stimuláció gyomor SMC összehúzódási képességét. Sejtek morfológiáját figyelték fénymikroszkóppal (× 200-szoros nagyítás). A hossza a sejt és az összehúzódás százalékos mértük számítógépes kép Analysis System. O. simaizomsejtek; A. simaizomsejtek + kontroll szérum; B. simaizomsejtek + ST.36 szérum; C. simaizomsejtek + nem acupoint szérum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Kiegészítő fájl 4. táblázat S2: Hatások szérummal SMC összehúzódási képességét. Értékelése szerint a komputer Video Processing System Zusanli szérum eredményezett jelentős összehúzódó SMC. Az eredményeket átlag ± S.D (n
= 10). * P katalógusa < 0,05 ** p katalógusa < 0,01 vs. kontroll szérum katalógusa csoport. #p katalógusa < 0,05, ## p katalógusa < 0,01 vs. katalógusa nem acupoint szérum. (DOC 28 KB) A szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti versengő érdekek
A szerzők kijelentik, hogy nem ellentétes érdekek. Katalógusa szerzôk hozzájárulása
QY végzett molekuláris genetikai vizsgálatok, részt vett a szekvencia illesztés és elkészítette a kézirat. YDX, MXZ, BH végzett az immunológiai vizsgálatokra. CZ, HYLi, RZ részt a szekvencia illesztés. MQ, YXH részt vett a vizsgálat kialakítása és végezte a statisztikai elemzést. JJW fogant a tanulmány, és részt vett a tervezés és koordináció, és segített, hogy megfogalmazza a kéziratot. Minden szerző elolvasta és jóváhagyta a végleges kéziratot. Katalógusa

• Egyfokozatú műtéti légúti gyomor fekély után nyelőcsőkiirtás
• Egy tanulmány szerint antimikrobiális aktivitást, az akut toxicitás és sejtvédő hatását polyherbal kivonatot egy patkány etanolos HCl gyomorfekély modell