Effect van elektro-stimulatie Zusanli acupoint (ST36) op de beweeglijkheid van de maag: mogelijk door middel van PKC en MAPK signaaltransductie pathways

effect van elektro-stimulatie Zusanli acupoint (ST36) op de beweeglijkheid van de maag: mogelijk door middel van PKC en MAPK signaaltransductie
Abstract
Achtergrond
Electroacupuncture (EA) stimulatie is aangetoond dat een groot therapeutisch potentieel voor de behandeling van gastro-intestinale motiliteit aandoeningen. Er is echter geen bewijs dat de mechanismen die bijdragen aan de effecten van EA stimulatie de Zusanli acupoint (ST.36) verduidelijkt. Deze studie werd ontworpen om de regulerende effect van EA stimulatie te onderzoeken op de ST.36 op beweeglijkheid van de maag en de mogelijke mechanismen te onderzoeken
Methods
Dertig Sprague-Dawley ratten werden willekeurig verdeeld in drie groepen:. De ST.36 groep, de non-acupoint groep en de controlegroep. EA stimulatie werd ingesteld op 2 Hz, continue wijze, en 1 V gedurende 30 min. De frequentie en de gemiddelde piekamplitude van gastrische motiliteit werden gemeten door electrogastrography. Het eiwit kinase C (PKC) en door mitogeen geactiveerde eiwitkinase (MAPK) signaalroutes werden beoordeeld met behulp van real-time polymerase kettingreacties. Caldesmon (CAD) en calponine (CaP) eiwitexpressie in de maag antrum werden gedetecteerd op Western blots. Een Computed videoverwerkingssysteem werd gebruikt om morfologische veranderingen in gladde spiercellen (SMC) van de maag antrum evalueren.
Resultaten
EA stimulatie ST.36 had een dubbel effect op de frequentie en de gemiddelde piekamplitude. Bovendien EA stimulatie ST.36 regelde de expressie van bepaalde genen in de PKC en MAPK signaalwegen, en regelde de expressie van het CAD-eiwitten en CaP. EA serum geïnduceerde SMC contractiliteit. Bevordering van darmmotiliteit kan correleren met up-regulatie van MAPK6 (ERK3), MAPK13, en cyclo-oxygenase 2 (PTGS2) genexpressie, en de down-regulatie van het collageen, type I, alpha 1 (COL1A1) gen en CAD en Cap eiwitexpressie. Remming van darmmotiliteit kan correleren met down-regulatie van de interleukine-1 receptor type 2 (IL1R2) en Matrix metalloproteïnase-9 (MMP9) genen en up-regulatie van CAD- en CaP eiwitexpressie
. Conclusies
EA stimulatie ST.36 geregeld gastrische motiliteit en de effecten zowel bevordering en remming bij ratten. De mogelijke mechanismen kunnen correleren met de PKC en MAPK signaaltransductie.
Sleutelwoorden
Electroacupuncture Zusanli maagmotiliteit PKC MAPK Achtergrond
Gastric beweeglijkheid is een van de meest kritische fysiologische functies van de menselijke darm. Zonder gecoördineerde beweeglijkheid, kan de vertering en opname van voedingsstoffen niet plaatsvinden. De regulering van motiliteit gecompliceerd en omvat de contractie van gladde spiercellen (SMC). De contractie van gladde spiercellen voornamelijk bepaald door voorbijgaande veranderingen in de intracellulaire Ca 2+ concentratie [1]. Er zijn twee belangrijke routes betrokken bij dit mechanisme, namelijk de RhoA-Rho kinase pathway en de proteïne kinase C (PKC) pathway [2]. Calponine (CaP), een gevestigde in vitro
substraat voor signaaleiwitten door PKC [3], direct met PKC [4]. Caldesmon (CAD) is een actine en myosine bindend eiwit dat in twee isovormen, die worden gegenereerd door alternatieve splicing bestaat [5]. Er is een groeiend bewijs voor een secundaire route bij de regulatie van gladde spieren die afhankelijk PKC, en dit enzym kan worden gemedieerd door CaP en CAD-activering [6-9]. Mitogeen geactiveerde eiwitkinase (MAPK) signaalroutes zijn ook betrokken bij SMC contractie [10]. Er zijn drie belangrijke groepen van duidelijk gereguleerd MAPK's die leiden tot veranderde genexpressie. De extracellulair signaal verwante kinasen 1 en 2 (ERK1 /2), de C-jun eindstandige kinase (JNK) en de p38 MAPK is bekend dat ze een belangrijke rol spelen in de intracellulaire signalering respons op extracellulaire stimuli [11]. Daarbij mag CaP ERK-afhankelijke signalering
Acupunctuur, die voor duizenden jaren gebruikt in China, wordt in toenemende mate wereldwijd gebruikt voor het beheer van te vergemakkelijken, en speelt daarmee een belangrijke rol in de regulering van SMC contractie [12]. verschillende ziekten [13]. Er wordt aangenomen dat de stimulatie van een acupoint rechtstreeks kan beïnvloeden betrokken organen en het effect van acupunctuur therapie bereiken. EA is een gecombineerde procedure die een acupoint met elektrische stimulatie in plaats van met handmatige manipulaties van naalden stimuleert. Talrijke studies hebben de effecten en mechanismen van EA op beweeglijkheid van de maag [14-20] geëvalueerd. Op basis van de gegevens uit deze studies is EA stimulatie blijkt een groot therapeutisch potentieel voor de behandeling van gastro-intestinale motiliteit aandoeningen. De Zusanli (ST.36) is een van de meest gebruikte acupunctuurpunten voor gastrointestinale aandoeningen. Volgens de theorie van de Traditionele Chinese Geneeskunde (TCM), is er een relatie tussen ST.36 en de functie van het maagdarmkanaal. Tot dusver is geen enkel gegeven de exacte mechanismen die bijdragen aan de effecten van stimulering EA verduidelijkt.
Daarom door het onderzoeken van morfologische veranderingen en myoelectrical activiteit deze studie gericht op de regulerende effect van EA stimulatie de ST.36 evalueren acupoint op darmmotiliteit bij ratten en zijn mogelijke mechanismen te verkennen.
methoden
Dieren en reagentia
Dertig volwassen mannelijke Sprague-Dawley (SD) ratten met een gewicht van 180-220 g op een 12-h licht- werden gehandhaafd donker cyclus bij 25 ± 2 ° C en 60% luchtvochtigheid met vrije toegang tot voedsel en water. SD-ratten werden gekocht van de Experimental Animal Center van de Vierde Militaire Medische Universiteit. Alle dierlijke experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen van de Vierde Militaire Medische Universiteit voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. Goedkeuring van het studieprotocol werd verkregen van de ethische commissie for Animal Research, vierde Militaire Medische Universiteit, China. Dieren werden willekeurig verdeeld in drie groepen:. ST.36 de groep, de niet-acupoint groep en de controlegroep
collagenase II, trypsineremmer, dithiothreïtol suikeralcohol, runderserumalbumine, calciumvrij fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS ), glutaaraldehyde en Trypan blauw werden gekocht bij Sigma Chemical Co. De Total RNA Extraction Kit, SuperScript III reverse transcriptase en SuperArray PCR Master Mix werd aangekocht van Invitrogen Co. anti-geit anti-muis en anti-konijn antilichamen gekocht van Shanghai Kangcheng Bio-engineering Co
EA stimulatieprocedure
ST.36 bevond zich ongeveer 5 mm lateraal van de fibula van de achterste ledematen, terwijl de niet-acupoint was op de achterste voet naast de ST.36 geopend 5 mm [21]. De naalden werden ingebracht 5 mm diep in de spierlaag van de geselecteerde acupoint en werden gestimuleerd door EA op 2 Hz en 2 V met behulp van een elektrische stimulator (G6805-2A; Shanghai Huayi medisch instrument Factory, Shanghai, China). Elk stimulatiekanaal duurde 20 min continue wijze, en stimulering werd 1 maal /dag uitgevoerd gedurende 5 dagen. De ratten in de controlegroep werden zonder stimulatie alleen immobilisatie ingediend gedurende 30 minuten op hetzelfde tijdstip iedere dag.
Electrogastrography
Electrogastrography werd aangebracht met behulp van de Multichannel Fysiologische Signal Acquisition en Processing System (mode RM-6280) na de laatste stimulatie op de vijfde dag. Na een 12-uur snel (met vrije toegang tot water) en 6 h zonder drank werden de ratten intraperitoneaal (i.p.) met 10% urethaan verdoofd in een dosis van 1 g /kg lichaamsgewicht en vervolgens geïmmobiliseerd. De eerste elektrode is bevestigd aan de staart en geleide elektroden werden geïmplanteerd op de serosale oppervlakte van de maag 0,3-0,5 cm boven de pylorus. De elektroden werden bekleed met 37 ° C normale zoutoplossing gedrenkt, verbonden met draad. De experimentele parameters waren als volgt:. Frequentie 400 Hz, 10 Hz filter, scansnelheid 2 s /afdeling, gevoeligheid 25 mV, tijdconstante gelijkstroom en oscilloscoop opnametijd 1 uur [18]
real-time polymerase chain analyse (PCR)
Na de laatste stimulering met EA werden de ratten gedood. Voor de controlegroep en non-acupoint groep werd één rat willekeurig respectievelijk geselecteerd. EA groep we eerst verdeelde het in EA bevorderen groep en EA inhiberende groep volgens de resultaten van de electrogastrography. En dan zijn er ratten werden willekeurig geselecteerd uit beide groepen. Maag antrum weefsels (van de pylorus 0,8-1 cm) werden gesneden in stukken die ongeveer 0,3 cm x 0,5 cm groot waren en onmiddellijk geplaatst in -70 ° C vloeibare stikstof. Totaal RNA monsters werden geëxtraheerd met behulp van TRIZOL van verschillende groepen volgens de instructies van de fabrikant. RNA kwaliteit werd spectrofotometrisch bepaald op basis van de A260 /A280-verhouding. RNA-monsters werden gecontroleerd op integriteit van de 18S en 28S RNA door gelelektroforese. Totaal RNA (1,5 ug) werd gebruikt voor eerste streng cDNA met SuperScript III reverse transcriptase (1 ul) van het geïsoleerde RNA te genereren. De real-time PCR-reacties werden bereid met een SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112) met de PKC en MAPK signaalroute genen. Het verdunde cDNA (102 pl) werd aan elk gat overeenkomt met de PCR-chip toegevoegd. Vervolgens de PCR chips werden in de real-time PCR instrument voor de PCR reactie. De fietsen waren als volgt: 95 ° C gedurende 10 min, 60 ° C gedurende 15 s en 60 ° C gedurende 1 min (40 cycli). Verschillen in genexpressie, uitgedrukt als fold-changes, werden berekend met behulp van de 2 -ΔΔCt methode.
Western blots van CAD- en CaP
De CAD- en CaP eiwit niveaus werden gedetecteerd door Western blotting. Na behandeling met EA werden de ratten gedood. De ratten werden daarna gefixeerd, gevolgd door insnijding van de buikhuid en peritoneum. De ingewanden werden blootgesteld en de centrale 1/3 van het gastrische lichaam werd gesneden in kleine stukjes die ongeveer 0,3 cm x 0,5 cm groot waren. De stukken werden onmiddellijk opgeslagen bij -70 ° C in vloeibare stikstof. Kort samengevat, celextracten (30 ug) van het bovenste 1/3 van het midden van het gastrische lichaam werden gescheiden door natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese (SDS-PAGE) en daarna overgebracht naar nitrocellulose membranen. De filters werden geblokkeerd met Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS) /5% melk, gevolgd door incubatie met polyklonale antilichamen tegen CAD-(1: 3000 verdunning), CaP (1: 3000 verdunning) en β-actine (1: 10.000). Nadat de membranen werden gewassen, werden ze geïncubeerd met secundaire peroxidase-geconjugeerde antilichamen verdund 1: 5000 in TBS met 0,01% Tween 20. Het antilichaam detectiesysteem werd gebruikt, en de membranen werden blootgesteld aan röntgenfilm volgens de instructies van de fabrikant.
Serum bereiding
Serum werd bereid zoals eerder beschreven modificatie [22]. Na de laatste stimulering met EA werden alle ratten opgeofferd. Vervolgens werd 6 ml bloed afgenomen uit de halsslagader van elke rat. Het bloed werd nog gedurende 1 uur gehouden, en vervolgens gecentrifugeerd bij 3000 rpm gedurende 15 min. Het serum werd verzameld, gefiltreerd om bacteriën te verwijderen en 1,5 ml werd verpakt in een EP buis, die bij -70 ° C werd bewaard in vloeibare stikstof.
Effecten van EA serum op SMC contractiliteit
Vijf normale SD ratten narcose ip met 10% urethaan in een dosis van 1 g /kg lichaamsgewicht. Na te zijn verdoofd, werden de buikhuid en het buikvlies ingesneden, en de ingewanden werden blootgesteld. De gehele maag werd verwijderd, en de maag antrum weefsels werden geïsoleerd en onmiddellijk geplaatst in zuurstofrijke PBS met penicilline (100 U /ml) en streptomycine (100 ug /ml) bij 4 ° C. Na te zijn gespoeld, werd het weefsel overgebracht naar zuurstof verzadigde HEPES, verdeeld en gefixeerd op een silica gel plaat met een dunne naald. De slijmvlieslaag werd voorzichtig afgesneden, waardoor de circulaire slijmvlies, dat klemfitting 9-10 spierstrips (1 mm x 4 mm), geplaatst in Tyrodes oplossing en bewaard bij 4 ° C in de koelkast gedurende ongeveer 15 minuten. De spierstrips werden gedigereerd in 1% collagenase type II, 0,05% trypsine-inhibitor, 0,05% dithiothreitol suikeralcohol en 0,2% runderserumalbumine enzym in een waterbad gedurende 25 minuten bij 36 ° C. Na digestie werd het mengsel gespoeld met enzymvrije HEPES, gedurende 30 minuten en gefiltreerd door een 200 mesh zeef om de vrije enkele maag SMC verzamelen. Levensvatbaarheid van de cellen werd gemeten met de trypan blauw-test. De levende cellen waren meer dan 95% bij een dichtheid van 10 6 cellen /ml. Ondernemingen De geïsoleerde SMC's werden willekeurig verdeeld in de normale serum groep, ST.36 serum groep en niet-acupoint serum groep. SMC suspensies (50 ui) in een dichtheid van 1,0 x 10 6 cellen /ml in platen met 96 putjes geplaatst. Elk serummonster werd geïnactiveerd na 30 min in een 56 ° C waterbad en vervolgens verdund 1: 2 met HEPES. Serum (50 ui) uit de verschillende groepen werd toegevoegd aan SMC's, gemengd met een pipet voor 30 s, en met 30 ul 2,5% glutaaraldehyd gefixeerd. Cellengte werd onderzocht met Computed videoverwerkingssysteem (DP2-BSW), die werd gebruikt om de krimp percentage te berekenen. De cel krimp percentage = (cell lengte voorafgaand aan de behandeling - cell lengte na de behandeling). /Lengte cel voorafgaand aan de behandeling × 100%
Statistische analyse
Data werden uitgedrukt als gemiddelde ± S.D. Enkele factoren variantieanalyse gevolgd door meervoudige vergelijkingstest Bonferroni werd toegepast met SPSS 10.0 software. De ACt waarden verkregen uit het real-time PCR, die werden gebruikt voor de veelvoudverandering verschillen berekenen (hier uitgedrukt als percentage van de controle) werden ook gebruikt voor de statistische analyse. Een p-waarde
< 0.05 of een fold-change > 2 werd gedefinieerd als statistisch significant voor alle analyses.
Resultaten
Effecten van EA op gastrische motiliteit
EA bij ST.36 veroorzaakte significante veranderingen in de absolute waarde van de gemiddelde piekamplitude en frequentie vergeleken met de regeling of non-acupoint groepen (P Restaurant < 0,01). Daarentegen EA bij de niet-acupoint geen significante veranderingen in maagbeweeglijkheid vergelijking met de controlegroep (Figuur S1 aanvullende bestandsinformatie 1) induceren. Twee types van maag motorische patronen werden waargenomen voor de ST.36 groep in de 10 ratten getest volgens de gemiddelde piek: ratten met positieve gemiddelde piek werden beoordeeld aan de bevordering van patroon, terwijl de ratten met een negatieve gemiddelde piek werden beoordeeld op het bevorderen van patroon. De resultaten toonden aan 5 (50,0%) ratten toonde de ST.36 bevorderen patroon en 5 (50,0%) ratten toonde de ST.36 remmende patroon. In ratten met de ST.36 bevorderen patroon, de gemiddelde piek amplitude en frequentie-waarden waren 47,13 ± 0,44 en 0,19 ± 0,06, respectievelijk. In ratten met de ST.36 remmen patroon, de gemiddelde piek amplitude en frequentie-waarden waren -43,41 ± 0,62 en 0,17 ± 0,03, respectievelijk. (Extra file 2: Tabel S1)
Effecten van EA op de PKC en MAPK signaalwegen
EA op ST.36 aanzienlijk geregeld de expressie van bepaalde genen in de PKC en MAPK signaalwegen. Tabel 1 geeft de resultaten van de microarray-analyse van de ST.36 bevorderen groep (in vergelijking met de controlegroep). De expressie van vele genen werd verhoogd na EA stimulatie, met inbegrip van ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA en PTGS2. Andere genen toonde verminderde expressie na EA stimulatie, inclusief IL1R2. Tabel 2 geeft de resultaten van de microarray-analyse van de ST.36 inhiberende groep (in vergelijking met de controlegroep). De genexpressie van IL1R2 en MMP9 werden afgenomen na EA stimulation.Table 1 Gene verandering vergelijken EA bevorderen groep met een controlegroep
signaalroute
Gene
sites
EA /control (Fold change)
EA /controle (Klap omhoog of omlaag-regeling)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Veelvoudverandering (2-ΔΔCt) de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het testmonster gedeeld door de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het controlemonster. Fold-regeling stelt de fold-verandering resulteert in een biologisch zinvolle manier. Fold-change waarden groter dan een duiden op een positieve- of up-regulering, en de vouw-regeling is gelijk aan de fold-change. Fold-change waarden van minder dan een duiden op een negatief of down-regulatie, en de vouw-regeling is de negatieve inverse van de vouw-verandering.
Tabel 2 Gene verandering vergelijken EA remmende groep met een controlegroep
signaalroute

Gene
sites
EA /controle (Fold change)
EA /controle (Fold omhoog of down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Veelvoudverandering (2-ΔΔCt) de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het testmonster gedeeld door de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het controlemonster. Opvouwen regeling geeft de veelvoudverandering resulteert in een biologisch zinvolle manier. fold-change waarden groter dan een duiden op een positieve- of up-regulering, en de vouw-regeling is gelijk aan de fold-change. fold-change waarden minder dan een duiden op een negatief of down-regulatie, en de vouw -regeling is de negatieve inverse van de veelvoudverandering.
Tabel 3 vermeldt de resultaten van de microarray-analyse van de ST.36 bevorderen groep (vergeleken met de niet-acupoint groep). de expressie van het COL1A1-gen verhoogd EA na stimulatie. de expressie van het IL1R2 en SERPINE1 genen af ​​na stimulatie EA. Tabel 4 geeft de resultaten van de microarray-analyse van de ST.36 inhiberende groep (vergeleken met de niet-acupoint groep). Veel van de genen vertoonden verminderde expressie na EA stimulatie, met inbegrip van de ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA en PTGS2 genen. De expressie van het COL1A1 gen werd verhoogd na EA stimulation.Table 3 Gene verandering vergelijken EA bevorderen groep met niet-acupoint groep
signaalroute
Gene
Sites
EA /Non-acupoint (Fold change)
EA /Non-acupoint (Fold omhoog of down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Veelvoudverandering (2-ΔΔCt) de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het testmonster gedeeld door de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het controlemonster. Opvouwen regeling geeft de veelvoudverandering resulteert in een biologisch zinvolle manier. fold-change waarden groter dan een duiden op een positieve- of up-regulering, en de vouw-regeling is gelijk aan de fold-change. fold-change waarden minder dan een duiden op een negatief of down-regulatie, en de vouw -regeling is de negatieve inverse van de vouw-verandering.
Tabel 4 Gene verandering vergelijken EA remmende groep met niet-acupoint groep
signaalroute
Gene
sites

EA /Non-acupoint (Fold change)
EA /Non-acupoint (Klap omhoog of omlaag-regeling)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0.18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0.42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0.39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0.28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0.26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Veelvoudverandering (2-ΔΔCt) de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het testmonster gedeeld door de genormaliseerde genexpressie (2-ACt) in het controlemonster. Opvouwen regeling geeft de veelvoudverandering resulteert in een biologisch zinvolle manier. fold-change waarden groter dan een duiden op een positieve- of up-regulering, en de vouw-regeling is gelijk aan de fold-change. fold-change waarden minder dan een duiden op een negatief of down-regulatie, en de vouw -regeling is de negatieve inverse van de veelvoudverandering.
Effecten van EA op CAD- en CaP eiwitexpressie
Stimulatie met EA aanzienlijk toegenomen CAD- en CaP eiwitexpressie in de ST.36 inhiberende groep vergeleken met de niet-acupoint groep, terwijl stimulatie met EA aanzienlijk gedaald CAD- en CaP eiwitexpressie in ST.36 bevorderen groep vergeleken met de niet-acupoint groep (Figuur 1A, B, C, D). Figuur 1 Effecten van EA stimulering van caldesmon (CAD) en calponine (GLB) eiwitgehalte. A. Expressie van caldesmon eiwit niveaus door Western blotting. B. Densitometrische analyse caldesmon eiwitgehalte genormaliseerd door β-actine; C. Expressie van calponine eiwit niveaus door Western blotting; D Densitometrische analyse calponine eiwitgehalte genormaliseerd door β-actine. CAD gemodelleerd: caldesmon; CAP: calponine; 1: niet-acupoint groep; 2-4: EA remmende groep; 5-7: EA bevorderen groep. * P < 0,05 compard aan niet-acupoint groep
Effecten van EA serum op SMC contractiliteit
Zoals getoond in Extra file 3:. Figuur S2 en bijkomende file 4: Tabel S2, celmorfologie werd waargenomen onder de lichtmicroscoop na behandeling met verschillende soorten serum. Er waren geen verschillen in cellengte vóór de toevoeging van serum (p > 0,05). ST.36 serum verhoogde contractiliteit SMC (60,22 ± 3,84 pm) vergeleken met het controleserum (96,02 ± 6,24 pm) of de niet-acupoint serum (97,33 ± 6,97 pm). De krimp percentage was 41% na stimulatie met ST.36 serum, terwijl de dalende percentages 7% en 10% na stimulatie met ofwel de niet-acupoint serum of controleserum respectievelijk.

Discussie De onderhavige studie toonde EA stimulatie ST.36 had een regulerende invloed op darmmotiliteit bij ratten die zowel stimulerend of remmend was. Het stimulerend effect van EA mogen via de PKC en MAPK signaalwegen. Ondernemingen De effecten van EA op gastrische motiliteit zijn uitvoerig bestudeerd bij zowel dieren als mensen door de beschikbaarheid van electrogastrography. Het is algemeen bekend dat de maag myoelectrical activiteit bestaat uit trage golven en spikes. Spikes zijn direct verbonden met de verschijning van de contracties. Trage golven niet roepen gastrointestinale contractiliteit, maar zij bepalen de maximale frequentie van maag contracties. Ondernemingen De meest gebruikte acupoint bij het behandelen van gastrointestinale aandoeningen is het ST.36. Er wordt algemeen aangenomen dat acupunctuur kan uitoefenen bevorderen en remmende effecten op de gastro-intestinale motiliteit, afhankelijk van de gestimuleerde acupunt. Bij de mens is aangetoond dat EA stimulatie ST.36 had dubbele gevolgen maag peristaltiek die ofwel remmende of faciliterende [15, 23] zijn. Hoewel patiënten die lijden aan gastro-intestinale ziekten hebben geprofiteerd van de toepassing van acupunctuur bij ST.36, maar de exacte moleculaire mechanismen zijn nog onduidelijk. Bij honden, EA bij ST.36 verhoogde de regelmatigheid van de maag trage golven [24, 25]. In bewuste ratten, EA stimulatie ST.36 geïnduceerde duale effecten, die ofwel faciliterende of remmend waren, op gastrische motiliteit [26, 27]. Verder onderzoek toonde dat het stimulerende effect wordt gemedieerd via cholinergische paden, terwijl het remmende effect onafhankelijk van het sympathische pathway [28]. De algemene theorie van de acupunctuur geneeskunde is gebaseerd op het concept van de Yin en Yang, en acupunctuur wordt verondersteld om het onevenwicht tussen Yin en Yang aan te passen. De effecten van acupunctuur op evenwicht Yin en Yang worden gemedieerd via de interactie tussen de neurotransmissie van GABA en glutamaat in de hersenstam.
In de huidige papieren, EA stimulatie ST.36 was effectief bij het reguleren van gastrische motiliteit, zoals aangetoond door de aanzienlijke toename van piekamplitude en frequentie. Bovendien, het ontbreken van een dergelijke reactie bij dezelfde stimulatie werd uitgevoerd bij de niet-acupoint was indicatief voor de specificiteit van dit effect. Volgens de piekamplitude en frequentie, werd de ST.36 groep verder onderverdeeld in bevordering en remmende patronen, aangezien EA een dubbel effect vertoonde. Om de mechanismen waarmee EA regelt maagmotiliteit verder te verkennen, geïsoleerd we SMC's uit de maag en observeerde het effect van ST.36 serum op SMC contractiliteit gebruik van serologische farmacologische testmethoden. De resultaten toonden aan dat ST.36 serum aanzienlijk toegenomen SMC contractiliteit; . Dat de effecten door normale of niet-acupoint serum waren niet duidelijk
Recent onderzoek suggereerde dat de effecten van EA stimulatie uitgeoefend via de opioïde systeem [29] of door de stimulerende werking op vagale activiteit [30]; De precieze mechanismen waardoor EA beïnvloedt darmmotiliteit niet volledig begrepen. Eerdere bevindingen ook aan dat PKC niveaus werden verhoogd na stimulatie met EA [31]. Daarom hebben we gekozen voor de PKC en MAPK trajecten als doelen voor het bemiddelen van de stimulerende effecten van EA op de maag mobiliteit. Bovendien kunnen CaP en CAD een rol in de regulatie van de gastro-intestinale motiliteit tijdens fysiologische en pathologische aanpassing spelen. Up-regulatie van CaP en CAD-expressie geremd gastro-intestinale motiliteit, en down-regulatie van CaP en CAD expressie bevorderd gastro-intestinale motiliteit [32, 33]. ERK1 /2, een lid van de familie MAPK, is aangetoond dat het een belangrijke rol in de regulatie van gladde spiercontractie [34] spelen. Volgens onze microarray resultaten kan bevordering van darmmotiliteit correleren met up-regulatie van MAPK6 (ERK3), MAPK13 en PTGS2 genexpressie en neerwaartse regulatie van genexpressie COL1A1. Remming van darmmotiliteit kan correleren met down-regulatie van IL1R2 en MMP9 genexpressie. Western blots toonden up-regulatie van CAD- en CaP eiwitexpressie geremd maagmotiliteit, terwijl down-regulatie van CAD- en CaP eiwit expressie bevorderd maagmotiliteit. Deze resultaten demonstreren dat CAD- en CaP een rol in de regulatie van gastrointestinale motiliteit tijdens fysiologische en pathologische aanpassing kunnen spelen.
Er waren enkele beperkingen in deze studie die moet worden vermeld. In de eerste plaats hebben we niet onderzocht of de remmers van PKC en MAPK kunnen beïnvloeden of blokkeren de regulerende werking van EA stimulatie ST.36 op de maag mobiliteit. Verdere studies nodig zijn om de invloed van PKC remmers en MAPK onderzoeken. Ten tweede zal toekomstig onderzoek zich richten op een volledig begrip van de rol van elke wijziging in genexpressie bij de regulatie van de maag mobiliteit.
Conclusies
Kortom, onze bevindingen tonen aan dat EA stimulatie ST.36 geregeld maagmotiliteit. EA stimulatie ST.36 uitgeoefend duale effecten op gastrische motiliteit die of stimulerend of remmend waren. Bovendien kan regulatie van darmmotiliteit correleren met de PKC en MAPK signaaltransductie.
Notes
Qi Yang, Yan-Dong Xie eveneens bijgedragen aan dit werk.
Verklaringen
Dankwoord Inloggen Deze studie werd ondersteund door subsidies van de National Natural Science Foundation of China (nr 30801487)
Electronic aanvullend materiaal
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Extra file 1:. Figuur S1: Effecten van EA stimulatie op de beweeglijkheid van de maag. Maagmotiliteit werd gemeten door electrogastrography. A. Controle, B. ST.36, C. Niet-acupoint. Stimulatie met EA op ST.36 verhoogde de gemiddelde piek amplitude en frequentie. Gastric golven toonden dubbele veranderingen in de ST.36 groep vergeleken met de controle of niet-acupoint groep. De waarden worden uitgedrukt als het gemiddelde ± S.D. (N
= 10). * P
< 0,05, ** p
< 0.01 vs
. controlegroep. #p Restaurant < 0,05, ## p
< 0,01 versus
non-acupoint groep. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Extra file 2: Tabel S1: Effecten van EA op de maag myoelectrical activiteit. De ST.36 groep werd verder onderverdeeld in EA bevorderen en EA remmen groepen volgens de maag golven. De waarden worden uitgedrukt als gemiddelde ± S.D. (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Extra file 3: Figuur S2: Effecten van EA stimulatie op de maag SMC contractiliteit. Celmorfologie werd waargenomen met een lichtmicroscoop (vergroting x 200). De lengte van de cel en het percentage krimp werd gemeten met een computer Image Analysis System. O. SMC's; A. SMC + controleserum; B. SMC + ST.36 serum; C. SMC + niet-acupoint serum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Extra file 4: Tabel S2: Effecten van serum op SMC contractiliteit. Zoals vastgesteld door de Computed Video Processing System, Zusanli serum resulteerde in aanzienlijke contractiliteit in SMC's. De resultaten worden uitgedrukt als het gemiddelde ± S.D. (n
= 10). * P
< 0.05 ** p
< 0,01 versus de kwaliteitscontrole serum groep. #p Restaurant < 0,05, ## p
< 0,01 versus
non-acupoint serum. (DOC 28 KB) Authors 'originele ingediende dossiers voor afbeeldingen
Hieronder staan ​​de links naar de auteurs oorspronkelijke ingediende dossiers voor afbeeldingen. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Authors 'originele bestand voor figuur 1 Concurrerende belangen Ondernemingen De auteurs verklaren dat ze geen concurrerende belangen.
Auteurs bijdragen
QY uitgevoerd moleculair genetische studies, nam deel in de reeks uitlijning en opstellers van het manuscript. YDX, MXZ, BH voerde de immunoassays. CZ, HYLi, RZ deel aan de sequence alignment. MQ, YXH deelgenomen aan de opzet van het onderzoek en voerde de statistische analyse. JJW bedacht van de studie, en nam deel aan het ontwerp en de coördinatie en geholpen om het manuscript op te stellen. Alle auteurs gelezen en goedgekeurd het definitieve manuscript.

• Single-fase chirurgische reparatie van de luchtwegen maag fistula na esophagectomy
• Een studie van antimicrobiële activiteit, acute toxiciteit en cytobeschermende effect van een polyherbal extract in een rat ethanol-HCl maagzweer model