Effekt av elektrostimulering på Zusanli acupoint (ST36) på gastrisk motilitet: mulig gjennom PKC og MAPK signaltransduksjonsveiene

Virkningen av elektrostimulering ved Zusanli acupoint (ST36) på gastrisk motilitet: mulig gjennom PKC og MAPK signaltransduksjonsveier
Abstract
Bakgrunn
elektro (EA) stimulering har vist seg å ha et stort terapeutisk potensial for behandling av gastrointestinal motilitetslidelser. Imidlertid har ingen bevis avklart hvilke mekanismer som bidrar til effekten av EA stimulering på Zusanli acupoint (ST.36). Denne studien var designet for å undersøke regulerende effekt av EA stimulering på ST.36 på gastrisk motilitet og å utforske dens mulige mekanismer
Metoder
Tretti Sprague-Dawley rotter ble tilfeldig delt inn i tre grupper:. Den ST.36 gruppe, den ikke-acupoint gruppe og kontrollgruppen. EA stimulering ble innstilt på 2 Hz, kontinuerlig modus, og en V i 30 minutter. Frekvensen og gjennomsnittlige toppamplitude av gastrisk motilitet ble målt ved electrogastrography. Protein kinase C (PKC) og mitogen-aktivert proteinkinase (MAPK) signalveier ble vurdert ved hjelp av sanntids-polymerase kjedereaksjoner. Caldesmon (DAK) og calponin (CAP) protein uttrykk i mage antrum ble oppdaget på Western blot. En beregnet Video Processing System ble brukt til å vurdere morfologiske endringer i glatte muskelceller (SMC) fra mage antrum.
Resultater
EA stimulering på ST.36 hadde en dobbel effekt på frekvens og gjennomsnittlig peak amplitude. I tillegg EA stimulering på ST.36 regulert uttrykket av noen gener i PKC og MAPK signalveier, og det regulert uttrykk for CAD og Cap proteiner. EA serum indusert SMC kontraktilitet. Fremme av gastrisk motilitet kan relatere til oppregulering av MAPK6 (ERK3), MAPK13, og Prostaglandin-endoperoxide syntase 2 (PTGS2) genekspresjon, og nedregulering av kollagen, type I, alfa 1 (COL1A1) genet og CAD og Cap protein uttrykk. Hemming av gastrisk motilitet kan relatere til nedregulering av Interleukin-1 reseptor type 2 (IL1R2) og matriksmetalloproteinase-9 (MMP9) gener, og oppregulering av CAD og Cap protein uttrykk.
Konklusjoner
EA stimulering på ST.36 regulert gastrisk motilitet, og effekten ble både fremme og hemme hos rotter. De mulige mekanismer kan korrelere med PKC og MAPK signaltransduksjonsveiene.
Nøkkelord
elektro Zusanli gastrisk motilitet PKC MAPK Bakgrunn
gastrisk motilitet er en av de mest kritiske fysiologiske funksjoner i human tarm. Uten koordinert motilitet, kan fordøyelsen og absorpsjon av kosttilskudd næringsstoffer ikke finne sted. Reguleringen av gastrointestinal motilitet er komplisert og innebærer sammentrekning av glatte muskelceller (SMC). Sammentrekning av SMC reguleres primært av forbigående forandringer i det intracellulære Ca 2+ konsentrasjon [1]. Det er to hovedveier som er involvert i denne mekanisme, nemlig RhoA-Rho-kinase pathway og protein kinase C (PKC) pathway [2]. Calponin (CAP), en godt etablert in vitro
substrat for signalering proteiner ved PKC [3], samhandler direkte med PKC [4]. Caldesmon (CAD) er en actin og myosin bindende protein som eksisterer i to isoformer, som er generert ved alternativ spleising [5]. Det er vist for en sekundær bane i reguleringen av kontraksjon av glatt muskulatur som er PKC avhengig, og denne veien kan være mediert av hetten og CAD-aktivering [6-9]. Mitogen-aktivert proteinkinase (MAPK) signalveier har også vært implisert i SMC sammentrekning [10]. Det finnes tre hovedgrupper av utpreget regulerte MAPK som fører til forandret genekspresjon. Det ekstracellulære signal relaterte kinaser 1 og 2 (ERK1 /2), den C-terminale juni kinase (JNK), og p38 MAPK er kjent for å spille en viktig rolle i den intracellulære signalerings respons på ekstracellulære stimuli [11]. I tillegg kan CAP lette ERK-avhengige signalering, og dermed spille en betydelig rolle i reguleringen av SMC sammentrekning [12].
Akupunktur, som har vært brukt i tusenvis av år i Kina, er i økende grad brukes over hele verden for forvaltningen av forskjellige sykdommer [13]. Det antas at stimulering av en acupoint kan direkte påvirke relevante organer og oppnå effekten av akupunktur terapi. EA er en kombinert prosedyre som stimulerer en acupoint med elektrisk stimulering i stedet for med manuelle manipulasjoner av nåler. Tallrike studier har evaluert effekter og mekanismer for EA på gastrisk motilitet [14-20]. Basert på resultater fra disse studiene har EA stimulering vist seg å ha et stort terapeutisk potensial for behandling av gastrointestinale motilitetsforstyrrelser. Den Zusanli (ST.36) er en av de mest brukte akupunkturpunkter for gastrointestinale sykdommer. I henhold til teorien for tradisjonell kinesisk medisin (TCM), det er en sammenheng mellom ST.36 og funksjon av mage-tarmkanalen. Hittil har imidlertid ingen bevis avklart de eksakte mekanismene bidrar til effekten av EA stimulering.
Derfor ved å undersøke morfologiske endringer og myoelectrical aktivitet, denne studien forsøkte å evaluere regulerende effekt av EA stimulering på ST.36 acupoint på gastrisk motilitet hos rotter og å utforske dens mulige mekanismer.
Metoder
Dyr og reagenser
Tretti voksne Sprague-Dawley (SD) rotter som veide 180-220 g ble opprettholdt på en 12-timers lys- mørke syklus ved 25 ± 2 ° C og 60% luftfuktighet med fri tilgang til mat og vann. SD-rotter ble kjøpt fra Experimental Animal Center for fjerde Military Medical University. Alle dyreforsøk ble utført i henhold til institusjonelle retningslinjer i fjerde Military Medical University for omsorg og bruk av forsøksdyr. Godkjenning av studieprotokollen ble innhentet fra etiske komité for Forsøksdyrutvalget, fjerde Military Medical University, Kina. Dyrene ble tilfeldig fordelt i tre grupper:. Den ST.36 gruppen, den ikke-acupoint gruppe og kontrollgruppen Collagenase II
, trypsin inhibitor, ditiotreitol alkohol sukker, bovin serum albumin, kalsium-fritt fosfatbuffret saltvann (PBS ), glutaraldehyd, og Trypan blå ble innkjøpt fra Sigma Chemical Co. Total RNA Extraction Kit, Superscript III revers transkriptase, og SuperArray PCR masterblanding ble innkjøpt fra Invitrogen Co. anti-geit, anti-mus og anti-kanin-antistoffer var kjøpt fra Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co
EA stimuleringsprosedyren
ST.36 lå ca 5 mm lateralt for fibula av baklemmene, mens de ikke-acupoint ble plassert på bakfot ved siden av ST.36 åpen 5 mm [21]. Nålene ble satt inn 5 mm dypt inn i muskelen laget av den valgte acupoint og ble stimulert av EA på 2 Hz og 2 V ved hjelp av en elektrisk stimulator (G6805-2A; Shanghai Lam Medical Instrument Factory, Shanghai, Kina). Hver stimulering varte 20 min i kontinuerlig modus, og stimulering ble utført en gang /dag i 5 dager. Rottene i kontrollgruppen ble sendt til immobilisering alene uten stimulering i 30 minutter på samme tid hver dag.
Electrogastrography
Electrogastrography ble påført ved hjelp av Multichannel fysiologisk Signalfangsttid og Processing System (modus RM-6280) etter siste stimulering på den femte dagen. Etter en 12-timers hurtig (med fri tilgang til vann) og 6 timer uten drikke, ble rottene bedøvet intraperitonealt (i.p.) med 10% uretan i en dose på 1 g /kg kropps og deretter immobilisert. Den første elektrode var festet til halen, og guidet elektroder ble implantert på den serosale overflate av magesekken 0,3 - 0,5 cm over pylorus. Elektrodene ble dekket med 37 ° C normalt saltvann gasbind, forbundet med ledning. De eksperimentelle parametre som ble brukt var som følger:. Frekvens 400 Hz, 10 Hz filter, skannehastighet på 2 s /inndeling, følsomhet 25 mV, tidskonstant likestrøm, og oscilloskop opptakstid 1 t [18]
sanntid polymerase chain aksjon (PCR) -analyse
Etter siste stimulering med EA, ble rottene avlivet. For kontrollgruppen og ikke-acupoint gruppe, ble en rotte tilfeldig valgt hhv. For EA gruppe, må vi først delt det inn i EA fremme gruppen og EA hemme gruppen i henhold til resultatene av electrogastrography. Og så var det rotter tilfeldig valgt fra begge grupper. Gastric antrum vev (fra pyloric 0,8 til 1 cm) ble skåret i stykker som var ca 0,3 cm x 0,5 cm i størrelse og umiddelbart plassert i -70 ° C flytende nitrogen. Totalt RNA prøver ble hentet ved hjelp TRIZOL fra ulike grupper i henhold til produsentens instruksjoner. RNA kvalitet ble vurdert spektrofotometrisk på basis av A260 /A280-forhold. RNA prøver ble kontrollert for integriteten til 18S og 28S RNA ved gelelektroforese. Total RNA (1,5 pg) ble anvendt for å generere første-tråd cDNA med Superscript III revers transkriptase (1 ul) fra det isolerte RNA. De Real-Time PCR reaksjoner ble utarbeidet med en SuperArray PCR Master Mix (kat. Nr PA-112) som inneholder PKC og MAPK signal sti gener. Den fortynnede cDNA (102 ul) ble tilsatt til hvert hull som svarer til den PCR-chip. Deretter ble PCR-chips ble plassert inn i den real-time PCR instrument for PCR-reaksjonen. Syklusbetingelsene var som følger: 95 ° C i 10 min, 60 ° C i 15 s, og 60 ° C i 1 min (40 sykluser). Forskjeller i genuttrykk, uttrykt som fold-endringer, ble beregnet ved hjelp av to -ΔΔCt metode.
Western blot av CAD og Cap
CAD og Cap proteinnivåer ble oppdaget av Western blotting. Etter behandling med EA, ble rottene avlivet. Rottene ble deretter fiksert, fulgt av innsnitt av abdominal hud og peritoneum. De indre organer ble utsatt, og den sentrale tredjedel av den gastriske legeme ble kuttet i små stykker som var ca. 0,3 cm x 0,5 cm i størrelse. Stykkene ble umiddelbart lagret ved -70 ° C i flytende nitrogen. Kort sagt ble celleekstrakter (30 ug) fra den øvre 1/3 av den midtre av gastrisk legeme separert ved natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) og deretter overført til nitrocellulosemembraner. Filtrene ble blokkert med Tris-bufret saltvann (TBS) /5% melk, etterfulgt av inkubasjon med polyklonale antistoffer mot CAD (1: 3000 fortynning), lokket (1: 3000 fortynning), og β-aktin (1: 10000). Etter at membranene ble vasket, ble de inkubert med sekundær peroksidase-konjugert antistoff fortynnet 1: 5000 i TBS med 0,01% Tween 20. antistoffpåvisningssystem ble anvendt, og membranene ble utsatt for røntgenfilm i henhold til produsentens instruksjoner.
Serum forberedelse
Serum ble fremstilt som tidligere beskrevet med modifikasjon [22]. Etter den siste stimulering med EA ble alle rottene avlivet. Deretter ble 6 ml blod tatt fra halspulsåren av hver rotte. Blodet ble holdt fortsatt i 1 time, og deretter sentrifugert ved 3000 rpm i 15 min. Serumet ble samlet, filtrert for å fjerne bakterier, og 1,5 ml ble pakket i en EP rør, som ble lagret ved -70 ° C i flytende nitrogen.
Effekter av EA serum på SMC kontraktilitet
Fem normale SD-rotter var bedøvet ip med 10% uretan i en dose på 1 g /kg kroppsvekt. Etter å ha blitt bedøvet, ble magehuden og bukhinne radert, og de indre organene ble utsatt. Hele magen ble skåret ut, og det gastriske antrum vev ble isolert og umiddelbart plassert i oksygenmettet PBS med penicillin (100 U /ml) og streptomycin (100 ug /ml) ved 4 ° C. Etter å ha blitt renset, ble vevene overført til oksygen mettet HEPES, spre og fikseres på en silikagelplate med et fin-nål. Mucosal laget ble nøye avskåret, utsette den sirkulære mukosa, som ble klippet til 9 - 10 muskelstrimler (1 mm x 4 mm) som er lagt inn i Tyrodes-løsning, og ble holdt ved 4 ° C i kjøleskap i ca. 15 min. Muskelstrimler ble spaltet i 1% kollagenase type II, 0,05% trypsin-inhibitor, 0,05% ditiotreitol alkohol sukker, og 0,2% bovint serumalbumin enzym i et vannbad i 25 minutter ved 36 ° C. Etter fordøyelse, ble blandingen renset med enzym-fri HEPES, inkubert i 30 minutter, og filtrert med en 200 mesh sikt for å samle inn de frie enkle gastriske SMC. Cellelevedyktigheten ble målt med Trypan blå test. De levende cellene var mer enn 95% ved en tetthet på 10 6 celler /ml.
Den isolerte SMC ble tilfeldig inndelt i normalt serum-gruppe, ST.36 serum gruppe, og ikke-acupoint serum gruppe. SMCS suspensjoner (50 ul) ved en tetthet på 1,0 x 10 6 celler /ml ble plassert i 96-brønners plater. Hver serumprøve ble inaktivert etter 30 minutter i et 56 ° C vannbad, og deretter fortynnet 1: 2 med HEPES. Serum (50 ul) fra de forskjellige grupper ble tilsatt til SMC, blandet med en pipette i 30 s, og fiksert med 30 ul 2,5% glutaraldehyd. Cellelengden ble vurdert med en beregnet Video Processing System (DP2-BSW), som ble brukt til å beregne svinn prosentandel. Cellen krymping prosent = (cellelengden før behandling - cellelengden etter behandling). /Cellelengden før behandling × 100%
Statistisk analyse
Data ble uttrykt som gjennomsnitt ± S.D. Én-veis analyse av varians, etterfulgt av Bonferroni multiple sammenligningstest ble påført med SPSS 10,0 programvare. De ΔCt verdier hentet fra den real-time PCR, som ble brukt til å beregne fold-endring forskjeller (uttrykt her som prosent av kontroll), ble også brukt for statistisk analyse. En p
-verdi < 0,05 eller en fold-endring > 2 ble definert som en statistisk signifikant for alle analyser.
Resultater
Effekter av EA på gastrisk motilitet
EA ved ST.36 produsert betydelige endringer i den absolutte verdi av den gjennomsnittlige toppamplitude og frekvens sammenlignet med kontrollen eller non-acupoint grupper (P
< 0,01). I motsetning til dette ble EA på den ikke-acupoint ikke induserer signifikante endringer i gastrisk motilitet sammenlignet med kontrollgruppen (Tilleggs fil 1: Figur S1). To typer mage motoriske mønstre ble observert for ST.36 gruppen i 10 rotter testet i henhold gjennomsnittlig peak: rotter med positiv gjennomsnittlig topp ble dømt til å fremme mønster, mens rotter med negativ gjennomsnittlig topp ble dømt til å fremme mønster. Resultatene viste 5 (50,0%) rotter viste ST.36 fremme mønster og 5 (50,0%) rotter viste det ST.36 inhiberende mønster. Hos rotter med ST.36 fremme mønster, gjennomsnittlig peak amplitude og frekvensverdiene var 47,13 ± 0,44 og 0,19 ± 0,06, henholdsvis. Hos rotter med ST.36 hemme mønster, gjennomsnittlig peak amplitude og frekvensverdiene var -43,41 ± 0,62 og 0,17 ± 0,03, henholdsvis. (Tilleggsfiler 2: Tabell S1)
Effekter av EA på PKC og MAPK signalveier
EA på ST.36 betydelig regulert ekspresjon av noen gener i PKC og MAPK signalveier. Tabell 1 viser resultatene fra microarray analyse av ST.36 fremmende gruppe (sammenlignet med kontrollgruppen). Uttrykket av mange gener ble økt etter EA stimulering, inkludert ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA, og PTGS2. Andre gener viste redusert uttrykk etter EA stimulering, inkludert IL1R2. Tabell 2 viser resultatene fra microarray analyse av ST.36 inhiberende gruppe (sammenlignet med kontrollgruppen). Genuttrykket av IL1R2 og MMP9 ble redusert etter at EA stimulation.Table en Gene endring sammenligne EA fremmende gruppe med kontrollgruppen
Signal pathway
Gene
nettsteder
EA /kontroll (endring)
EA /kontroll (Fold opp- eller nedregulering)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Fold-endring (2-ΔΔCt) er den normaliserte genekspresjon (2-ΔCt) i prøven dividert med det normaliserte genekspresjon (2-ΔCt) i kontrollprøven. Fold-regulering representerer fold-endringen fører til en biologisk meningsfull måte. Fold-change-verdier større enn en indikerer en positiv-eller opp-regulering, og den fold-regulering er lik fold-endringen. Fold-endring verdier som er mindre enn ett indikerer en negativ eller nedregulering, og fold-regulering er den negative inverse av den sammenleggbare endringen.
Tabell 2 Gene endring sammenligne EA hemmende gruppe med kontrollgruppen
Signal pathway <.no> Gene
nettsteder
EA /kontroll (endring)
EA /kontroll (Fold opp- eller down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Fold-endring (2-ΔΔCt) er normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i prøven dividert med normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i kontrollutvalget. Fold-regulering representerer fold-endringen fører til en biologisk meningsfull måte. fold-change-verdier større enn en indikerer en positiv-eller opp-regulering, og den fold-regulering er lik fold-endringen. fold-endre verdier mindre enn en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -regulation er den negative inverse av folden-endringen.
Tabell 3 viser resultatene fra microarray analyse av ST.36 fremmende gruppe (i forhold til den ikke-acupoint gruppe). ekspresjon av COL1A1-genet ble øket etter EA stimulering. ekspresjonen av de IL1R2 og SERPINE1 genene ble redusert etter EA stimulering. Tabell 4 lister opp resultater fra microarray analyse av ST.36 inhiberende gruppe (i forhold til den ikke-acupoint gruppe). Mange av genene viste redusert uttrykk etter EA stimulering, inkludert ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, og PTGS2 gener. Uttrykket av COL1A1-genet ble økt etter EA stimulation.Table tre Gene endring sammenligne EA fremme gruppen med ikke-acupoint gruppe
Signal pathway
Gene
nettsteder
EA /Non-acupoint (endring)
EA /Non-acupoint (Fold opp- eller down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Fold-endring (2-ΔΔCt) er normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i prøven dividert med normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i kontrollutvalget. Fold-regulering representerer fold-endringen fører til en biologisk meningsfull måte. fold-change-verdier større enn en indikerer en positiv-eller opp-regulering, og den fold-regulering er lik fold-endringen. fold-endre verdier mindre enn en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -regulation er den negative inverse av den sammenleggbare endringen.
Tabell 4 Gene endring sammenligne EA hemmende gruppen med ikke-acupoint gruppe
Signal pathway
Gene
nettsteder

EA /Non-acupoint (endring)
EA /Non-acupoint (Fold opp- eller nedregulering)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Fold-endring (2-ΔΔCt) er normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i prøven dividert med normalisert genuttrykk (2-ΔCt) i kontrollutvalget. Fold-regulering representerer fold-endringen fører til en biologisk meningsfull måte. fold-change-verdier større enn en indikerer en positiv-eller opp-regulering, og den fold-regulering er lik fold-endringen. fold-endre verdier mindre enn en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -regulation er den negative inverse av den sammenleggbare endringen.
Effekter av EA på CAD og Cap protein uttrykk
Stimulering med EA betydelig økt CAD og Cap protein uttrykk i ST.36 hemme gruppen sammenlignet med ikke-acupoint gruppe, mens stimulering med EA sunket betraktelig CAD og Cap protein uttrykk i ST.36 fremme gruppen sammenlignet med ikke-acupoint gruppe (Figur 1A, B, C, D). Figur 1 Effekter av EA stimulering på Caldesmon (DAK) og Calponin (CAP) protein nivåer. A. Expression of Caldesmon protein nivåer ved Western blotting. B. Densitometrisk analyse Caldesmon protein nivåer normalisert ved β-aktin; C. Expression of Calponin protein nivåer ved Western blotting; D Densitometrisk analyse Calponin protein nivåer normalisert ved β-aktin. Cad: Caldesmon; Cap: calponin; 1: ikke-acupoint gruppe; 2-4: EA hemme gruppe; 5-7: EA fremme gruppe. * P < 0,05 compard til ikke-acupoint gruppe
Effekter av EA serum på SMC kontraktilitet
Som vist i Tilleggs fil 3: Fig. S2 og tilleggsfiler 4: Tabell S2, cellemorfologi ble observert under lysmikroskop etter behandling med forskjellig typer serum. Det var ingen forskjeller i cellelengden før tilsetning av serum (p 0,05). ST.36 serum økte SMC kontraktilitet (60,22 ± 3,84 pm) sammenlignet med kontrollserum (96,02 ± 6,24 um) eller den ikke-acupoint serum (97,33 ± 6,97 um). Den prosentvise sammentrekning var 41% etter stimulering med ST.36 serum, mens sammentrekning prosenter var 7% og 10% etter stimulering med enten den ikke-acupoint serum eller kontrollserum, henholdsvis.
Diskusjon
Den foreliggende studien demonstrerte at EA stimulering på ST.36 hadde en regulerende effekt på gastrisk motilitet hos rotter som var enten stimulerende eller hemmende. Den stimulerende virkningen av EA kan handle gjennom PKC og MAPK signalveier.
Effekten av EA på gastrisk motilitet har blitt grundig studert i både dyr og mennesker på grunn av tilgjengeligheten av electrogastrography. Det er velkjent at mage myoelectrical aktivitet består av langsomme bølger og pigger. Spikes er direkte forbundet med utseendet på sammentrekninger. Langsomme bølger ikke fremkalle gastrointestinal kontraktilitet, men de bestemme maksimal frekvens av mage sammentrekninger.
Oftest brukt acupoint i behandling av gastrointestinale lidelser er ST.36. Det er vanlig å tro at akupunktur kan utøve fremme og hemme effekter på gastrointestinal motilitet avhengig stimulert acupoint. Hos mennesker er det blitt vist at EA stimulering ved ST.36 hadde doble effekt på gastrisk motilitet som enten er facilitative eller inhiberende [15, 23]. Selv om pasienter som lider av gastrointestinale sykdommer har dratt nytte av anvendelsen av akupunktur ved ST.36, men de nøyaktige molekylære mekanismene er fortsatt uklart. Hos hunder, EA på ST.36 økt regularitet av mage langsomme bølger [24, 25]. I bevisste rotter, EA stimulering ved ST.36 induserte to effekter, som enten var facilitative eller hemmende på gastrisk motilitet [26, 27]. Videre studier viste at den stimulerende effekt medieres via kolinerge baner, mens den hemmende effekten er uavhengig av det sympatiske veien [28]. Den generelle teorien om akupunktur medisin er forut på begrepet Yin og Yang, og akupunktur antas å endre ubalansen mellom Yin og Yang. Effekten av akupunktur for å balansere Yin Yang, og kan være mediert gjennom interaksjonen mellom GABA neurotransmisjon av glutamat og i hjernestammen.
I dagens papir, EA stimulering ved ST.36 var effektiv i å regulere gastrisk motilitet, som demonstrert ved den betydelige økning i maksimal amplitude og frekvens. I tillegg, mangel på slik respons når den samme stimuleringen ble utført ved den ikke-acupoint var indikativ for spesifisiteten av denne effekten. I henhold til topp amplitude og frekvens, ble det ST.36 gruppen videre delt inn i fremmer og hemmende mønstre, ettersom EA viste en dobbel effekt. For ytterligere å utforske de mekanismer som EA regulerer gastrisk motilitet, isolert vi SMC fra magen og observerte effekten av ST.36 serum på SMC kontraktilitet ved hjelp av serologiske farmakologiske testmetoder. Resultatene viste at ST.36 serum signifikant økt SMC kontraktilitet; . Mens effekter produsert ved normal eller ikke-acupoint serum var ikke innlysende
Nyere undersøkelser antydet at effektene av EA stimulering blir mediert gjennom det opioide system [29] eller gjennom dets stimulerende effekt på vagus-aktivitet [30]; Men den nøyaktige mekanismer som påvirker EA gastrisk motilitet var ikke fullt ut forstått. Tidligere funn indikerte også at PKC-nivåene ble øket etter stimulering med EA [31]. Derfor valgte vi PKC og MAPK trasé som mål for formidling av stimulerende effekten av EA på mage mobilitet. Dessuten kan hetten og cad spille en rolle i regulering av gastrointestinal motilitet i løpet av fysiologisk og patologisk tilpasning. Oppregulering av CAP og CAD uttrykk hemmet gastrointestinal motilitet, og nedregulering av hetten og CAD uttrykk fremmet gastrointestinal motilitet [32, 33]. ERK1 /2, et medlem av MAPK-familien, har vist seg å spille en betydelig rolle i reguleringen av kontraksjon av glatt muskulatur [34]. Ifølge våre microarray resultater, kan fremme gastrisk motilitet korrelerer med oppregulering av MAPK6 (ERK3), MAPK13, og PTGS2 genuttrykk, og nedregulering av COL1A1 genekspresjon. Inhibering av gastrisk motilitet kan korrelere med nedregulering av IL1R2 og MMP9 genekspresjon. Western blot viste oppregulering av CAD og Cap protein uttrykk hemmet gastrisk motilitet, mens nedregulering av CAD og Cap protein uttrykk fremmet gastrisk motilitet. Disse resultatene viser at CAD og Cap kan spille en rolle i reguleringen av gastrointestinal motilitet under fysiologisk og patologisk tilpasning.
Det var noen begrensninger i denne studien som bør nevnes. Først fikk vi ikke undersøke om hemmere av PKC og MAPK kan påvirke eller blokkere regulerende effekt av EA stimulering ved ST.36 på mage mobilitet. Videre studier vil være nødvendig for å undersøke påvirkning av PKC og MAPK hemmere. For det andre, vil fremtidige undersøkelser fokuserer på helt å forstå rollene til hver endring i genekspresjon på reguleringen av mage mobilitet.
Konklusjoner
Oppsummert våre funn viser at EA stimulering på ST.36 regulert gastrisk motilitet. EA stimulering ved ST.36 som utøves doble effekt på gastrisk motilitet som var enten stimulerende eller inhiberende. I tillegg kan regulering av gastrisk motilitet korrelerer med PKC og MAPK signaloverføringsveier.
Merknader
Qi Yang, Yan-Dong Xie bidratt likt til dette arbeidet
. Erklæringer
Takk
Dette studien ble støttet med tilskudd fra Natural Science Foundation National of China (nr 30801487)
Elektronisk supplerende materiale
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc tilleggsfiler. 1: Figur S1: Effekter av EA stimulering på gastrisk motilitet. Gastric motilitet ble målt ved electrogastrography. A. Control, B. ST.36, C. Ikke-acupoint. Stimulering med EA på ST.36 økte gjennomsnittlig peak amplitude og frekvens. Gastriske bølger viste tvilling endringer i ST.36 gruppen sammenlignet med kontrollgruppen eller ikke-acupoint gruppe. Verdier er uttrykt som gjennomsnitt ± S.D. (N
= 10). * P
< 0,05, ** p
< 0,01 vs
. kontrollgruppe. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 vs.
ikke-acupoint gruppe. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc tilleggsfiler 2: Tabell S1: Effekter av EA på mage myoelectrical aktivitet. Den ST.36 gruppen ble videre delt inn i EA fremme og EA hemme grupper i henhold til mage bølger. Verdier er uttrykt som gjennomsnitt ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc tilleggsfiler 3: Figur S2: Effekter av EA stimulering på mage SMC kontraktilitet. Cellemorfologi ble observert ved hjelp av et lysmikroskop (x 200 forstørrelse). Lengden av cellen og sammentrekning prosent ble målt med en datamaskin Image Analysis System. O. SMC; A. SMC + kontrollserum; B. SMC + ST.36 serum; C. SMC + non-acupoint serum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc tilleggsfiler 4: Tabell S2: Effekter av serum på SMC kontraktilitet. Som vurdert av den beregnede Video Processing System, Zusanli serum resulterte i betydelig kontraktilitet i SMC. Resultatene er uttrykt som gjennomsnitt ± S.D (n
= 10). * P
< 0,05 ** p
< 0,01 vs.
kontrollserum gruppe. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 vs.
ikke-acupoint serum. (DOC 28 KB) Forfatternes opprinnelige innsendte filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes opprinnelige innsendte filer for bilder. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Forfatteroriginalfilen for figur 1 Konkurrerende interesser
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende interesser.
Forfatternes bidrag
QY utførte molekylærgenetiske studier, deltok i sekvensen justering og utarbeidet den manuskript. YDX, MXZ, BH utførte immunologiske analyser. CZ, HYLi, RZ deltok i sekvensen justering. MQ, YXH deltatt i utformingen av studien og utført den statistiske analysen. JJW unnfanget av studien, og deltok i sin utforming og koordinering og bidratt til å utarbeide manuskriptet. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Ett-trinns kirurgisk reparasjon av luftveis mage fistel etter esophagectomy
• En studie av antimikrobiell aktivitet, akutt giftighet og cytoprotective effekten av en polyherbal ekstrakt i en rotte etanol-HCl magesår model