Влияние электропунктурной стимуляции на Zusanli Acupoint (ST36) на моторику желудка: возможно через PKC и MAPK путей передачи сигнала

Влияние электропунктурной стимуляции на Zusanli Acupoint (ST36) на моторику желудка: возможно через PKC и MAPK путей передачи сигнала
Аннотация
Справочная информация
Электроакупунктура (EA) стимуляции было показано, имеют большой терапевтический потенциал для лечения желудочно-кишечного тракта двигательные расстройства. Тем не менее, никаких доказательств не выяснены механизмы, способствующие воздействию стимуляции EA на Acupoint Zusanli (ST.36). Данное исследование было разработано, чтобы исследовать регулирующее действие стимуляции EA в СТ.36 на моторику желудка и изучить его возможные механизмы
методы
Тридцать крыс Sprague-Dawley были случайным образом разделены на три группы:. В СТ.36 группа, группа, не Acupoint, и контрольной группы. стимуляция EA была установлена ​​на уровне 2 Гц, непрерывном режиме и 1 В в течение 30 мин. Амплитуда и частота средний пик моторику желудка измеряли электрогастрографии. Протеинкиназы С (ПКС) и митоген-активируемая протеинкиназа (МАРК) сигнальных путей оценивали с использованием в режиме реального времени полимеразной цепной реакции. Кальдесмона (CaD) и экспрессия calponin (РПЖ) белка в антральном желудка были обнаружены на Вестерн-блоттинга. Вычисляемый система обработки видео была использована для оценки морфологических изменений в клетках гладких мышц (СМЦ) из антрума желудка.
Результаты
стимуляции EA в СТ.36 имел двойное влияние на частоту и средней амплитуды пика. Кроме того, стимуляция EA в СТ.36 регулирует экспрессию некоторых генов в сигнальных путях PKC и MAPK, и она регулирует экспрессию CaD и колпачком белков. Е. А. сывороточный индуцированное SMC сократимость. Содействие моторику желудка может коррелировать с повышающей регуляции MAPK6 (ERK3), MAPK13 и простагландин-эндопероксид-синтазы 2 экспрессии генов (PTGS2) и понижающей регуляции коллагена, I, альфа-1 гена (COL1A1) типа и CaD и экспрессии белка колпачком. Торможение моторики желудка может коррелировать с понижающей регуляции типа рецептора интерлейкина-1 2 (IL1R2) и металлопротеиназы 9-ти (ММР9) генов матрицы, а
повышающей регуляции CaD и колпачком экспрессии белка. Выводы
Е.А. стимуляция в СТ.36 регулируется двигательную функцию желудка, а эффекты были поощрение и ингибирование у крыс. Возможные механизмы могут коррелировать с путей передачи сигнала PKC и MAPK.
Ключевые слова
Электроакупунктура Zusanli моторики желудка ПКС МАРК фона
моторики желудка является одним из наиболее важных физиологических функций кишечника человека. Без скоординированной моторики, переваривание и всасывание питательных микроэлементов не может иметь место. Регулирование моторики желудочно-кишечного тракта является сложным и включает в себя сокращение гладких мышечных клеток (СМЦ). Сокращение SMCs в основном регулируется переходных изменениях в внутриклеточного Са 2 + концентрация [1]. Существуют два основных путей, участвующих в этом механизме, а именно, RhoA-Rho киназы и протеинкиназы С (ПКС) путь [2]. Calponin (РПЖ), хорошо организованной пробирке
субстрат в течение сигнальных белков с помощью PKC [3], непосредственно взаимодействует с ПКС [4]. Кальдесмона (CaD) является актин и миозин-связывающий белок, который существует в двух изоформ, которые генерируются с помощью альтернативного сплайсинга [5]. Существует накопившиеся данные для вторичного пути в регуляции сокращения гладких мышц, что является PKC зависимым, и этот путь может быть опосредовано кепке и активацией CaD [6-9]. Митоген-активируемой протеинкиназы (МАРК) сигнальных путей также вовлечены в SMC сжатия [10]. Есть три основные группы четко регулируемых МАРК, которые приводят к изменению экспрессии генов. Внеклеточные киназ, связанных с сигналом 1 и 2 (ERK1 /2), С-концевой киназы Июню (JNK) и р38 МАРК, как известно, играют важную роль во внутриклеточной реакции передачи сигналов на внеклеточные стимулы [11]. Кроме того, РПЖ может способствовать ЭРК-зависимой сигнализации, таким образом, играет важную роль в регуляции SMC сокращения [12].
Акупунктура, который был использован в течение тысяч лет в Китае, все чаще используется во всем мире для управления различные заболевания [13]. Считается, что стимуляция Acupoint может непосредственно влиять на соответствующие органы и добиться эффекта терапии акупунктуры. EA представляет собой комбинированный процедура, которая стимулирует Acupoint с электрической стимуляции вместо ручных манипуляций с игл. Многочисленные исследования оценивали эффекты и механизмы EA на моторику желудка [14-20]. На основании данных из этих исследований, стимул Е. А. Было показано, что имеют большой терапевтический потенциал для лечения желудочно-кишечных нарушений перистальтики. Zusanli (СТ.36) является одним из наиболее часто используемых акупунктурных для желудочно-кишечных заболеваний. Согласно теории традиционной китайской медицины (ТКМ), существует взаимосвязь между ST.36 и функции желудочно-кишечного тракта. На сегодняшний день, однако, никаких доказательств не выяснены точные механизмы, способствующие воздействию стимуляции EA.
Поэтому, исследуя морфологические изменения и миоэлектрических активности, настоящее исследование с целью оценить регулирующее действие стимуляции EA на ST.36 Acupoint на двигательную функцию желудка у крыс и исследовать его возможные механизмы.
Методы
Животные и реактивы
Тридцать взрослых самцов крыс Sprague-Dawley (SD) крыс весом 180-220 г содержали в 12-х светоподобной темный цикл при 25 ± 2 ° с и относительной влажности 60% при свободном доступе к пище и воде. крыс SD были приобретены у подопытных животных Центра Четвертого военного медицинского университета. Все эксперименты на животных проводились в соответствии с ведомственным руководящим принципам Четвертого военного медицинского университета по уходу и использованию лабораторных животных. Утверждение протокола исследования было получено от Комитета по этике по изучению животных, четвертого военного медицинского университета, Китай. Животные были случайным образом распределены на три группы. В СТ.36 группы она не-Acupoint, и контрольной группы
коллагеназы II, ингибитор трипсина, дитиотреитола сахарный спирт, бычий сывороточный альбумин, кальций-фосфатный буферный солевой раствор (PBS, ), глутаровый альдегид, и трипанового синего были приобретены у Sigma Chemical Co. Общую РНК Extraction Kit, SuperScript III обратной транскриптазы, и SuperArray Master Mix ПЦР были приобретены у Invitrogen Co. Anti-козой, анти-мыши, и анти-антитела кролика были приобретен у Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co.
процедуры стимуляции EA
СТ.36 располагался примерно 5 мм сбоку от малоберцовой кости задних конечностей, в то время как не-Acupoint был расположен на задней ноге рядом с ST.36 открытые 5 мм [21]. Иглы были вставлены 5 мм вглубь мышечного слоя выбранного Acupoint и стимулировались EA с частотой 2 Гц и 2 V с помощью электрического стимулятора (G6805-2A, Shanghai Huayi Medical приборостроительный завод, Шанхай, Китай). Каждая стимуляция длилась 20 мин в непрерывном режиме, и стимуляция проводили 1 раз /сут в течение 5 дней. Крысам в контрольной группе были представлены только в иммобилизации без стимуляции в течение 30 мин, в то же время каждый день.
Электрогастрографии
электрогастрографии наносили с использованием Многоканальный Физиологические приема сигнала и обработки информации (режим RM-6280) после того, как последний стимуляции на пятый день. После 12-часового периода голодания (со свободным доступом к воде) и 6 ч без питья, крыс анестезировали внутрибрюшинно (внутрибрюшинно) с добавлением 10% уретана в дозе 1 г /кг массы тела, а затем иммобилизовали. Первый электрод был прикреплен к хвосту, и управляемые электроды были имплантированы на серозную поверхность желудка 0,3 - 0,5 см выше привратника. Электроды были покрыты 37 ° C нормальный физиологический раствор марлю, связанный с проволокой. Экспериментальные параметры были использованы следующим образом:. Частота 400 Гц, фильтр 10 Гц, скорость сканирования 2 с /деление, чувствительность 25 мВ, постоянная времени постоянного тока, а время записи Осциллограф 1 ч [18]
в режиме реального времени полимеразной цепной реакция (ПЦР) анализ
После последней стимуляции с помощью ЭА, были умерщвлены крысы. Для контрольной группы и не-Acupoint группы, одна крыса была случайным образом выбраны соответственно. Для группы EA, мы сначала разделили его на EA группу содействия и ЕА ингибирования группы по результатам электрогастрографии. И потом, там крысы были выбраны случайным образом из обеих групп. Желудочный ткани антрума (от пилорического 0,8 - 1 см) разрезают на куски, которые были приблизительно 0,3 см × 0,5 см и сразу же помещают в -70 ° С жидким азотом. Общее количество образцов РНК экстрагировали с использованием TRIzol из разных групп в соответствии с инструкциями изготовителя. Качество РНК оценивали спектрофотометрически на основе отношения А260 /А280. Образцы РНК были проверены на предмет целостности РНК 18S и 28S с помощью гель-электрофореза. Суммарную РНК (1,5 мкг) использовали для получения первой нити кДНК с индек- III обратной транскриптазы (1 мкл) из выделенной РНК. В ПЦР в реальном времени реакции получали с использованием SuperArray Master Mix ПЦР (кат. Номером PA-112), содержащий гены, сигнальный путь PKC и MAPK. Разбавленный кДНК (102 мкл) добавляли в каждую лунку, соответствующий чип ПЦР. Затем чипы ПЦР были помещены в ПЦР в реальном времени инструмент для ПЦР-реакции. Условия езда на велосипеде были следующими: 95 ° С в течение 10 мин, 60 ° С в течение 15 с, и 60 ° С в течение 1 мин (40 циклов). Различия в экспрессии генов, выраженные как Наклоняемый изменения, были рассчитаны с использованием -ΔΔCt метод 2.
Вестерн-блоттинга кан и колпачком
Уровни Cad и белковые РПЖ были обнаружены с помощью Вестерн-блоттинга. После обработки EA, были умерщвлены крысы. Крыс затем фиксировали, а затем разрез кожи живота и брюшину. Внутренностей были выставлены, а центральная 1/3 тела желудка разрезали на мелкие кусочки, которые были приблизительно 0,3 см × 0,5 см в диаметре. Кусочки немедленно хранили при -70 ° С в жидком азоте. Вкратце, клеточные экстракты (30 мкг) от верхней 1/3 середины тела желудка были разделены додецилсульфата натрия-электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE), а затем переносили на нитроцеллюлозные мембраны. Фильтры блокировали с помощью трис-буферном солевом растворе (TBS) /5% молока, с последующей инкубацией с поликлональными антителами против Cad (1: 3000 разведение), горловину (1: 3000 разведение) и бета-актина (1: 10000). После того, как отмывали мембраны, их инкубировали со вторичными пероксидаза-конъюгированными антителами в разведении 1: 5000 в TBS с 0,01% Tween 20. Система обнаружения антител использовали, а мембраны были подвергнуты воздействию рентгеновской пленки в соответствии с инструкциями изготовителя.
препарат сыворотки
Сыворотку получали, как описано ранее, с модификацией [22]. После последней стимуляции с помощью ЭА, забивали у всех крыс. Затем 6 мл крови отбирали из сонной каждой крысы. Кровь оставляли в покое в течение 1 часа, а затем центрифугировали при 3000 оборотах в минуту в течение 15 мин. Сыворотку собирали, фильтровали для удаления бактерий, и 1,5 мл загружали в ЕР трубку, которую хранили при -70 ° С в жидком азоте.
Влияние EA сыворотки на SMC сократительной
Пять нормальных крыс SD были наркозом IP с 10% уретана в дозе 1 г /кг массы тела. После того, как под наркозом, кожа живота и брюшины были врезаны и внутренностей были выставлены. Весь желудок был вырезан, и желудочные ткани антральном были выделены и сразу же помещают в кислороде насыщенный PBS с пенициллином (100 ед /мл) и стрептомицина (100 мкг /мл) при 4 ° С. После того, как промыть, ткани переносили на кислород насыщенный HEPES, распространение и фиксируется на пластинке с силикагелем с тонкой иглой. Слой через слизистую оболочку тщательно отрезали, обнажая круговую слизистую оболочку, который был обрезан на 9 - 10 мышечных полосок (1 мм × 4 мм), помещали в раствор Тироде, и выдерживали при 4 ° С в холодильнике в течение приблизительно 15 мин. Мышечные полоски были расщеплены в 1% типа коллагеназы II, 0,05% ингибитор трипсина, 0,05% сахара дитиотреитола спирта и 0,2% бычьего сывороточного альбумина фермента на водяной бане в течение 25 мин при температуре 36 ° C. После гидролиза смесь промывали ферментных свободных HEPES, инкубировали в течение 30 мин и фильтровали с сеткой 200 экрана, чтобы собрать свободные одиночные желудочных СМЦ. Жизнеспособность клеток измеряли с синим тестом Трипановый. Живые клетки были более чем на 95% при плотности 10 6 клеток /мл.
Выделенные SMCs были случайным образом разделены на группы нормальной сыворотки, сыворотки группы ST.36 и не-Acupoint сыворотки группы. SMCS суспензии (50 мкл) при плотности 1,0 × 10 6 клеток /мл помещали в 96-луночные планшеты. Каждый образец сыворотки инактивируется через 30 мин в C водяной бане при 56 °, а затем разводили 1: 2 с HEPES. Сыворотка (50 мкл) из разных групп добавляли к SMCs, смешанный с пипеткой в ​​течение 30 с, и фиксировали с 30 мкл 2,5% глутаральдегида. Длина клеток оценивали с помощью компьютерной системы обработки видеопотока (DP2-BSW), которая была использована для расчета процента усадки. Клетка усадки в процентах = (длина клетки до обработки - длина клеток после обработки). /Длина клетки до обработки × 100%
Статистический анализ
Данные были выражены как среднее ± S.D. Односторонний дисперсионный анализ с последующим многократным сравнительного теста Бонферрони была применена с SPSS 10.0 программного обеспечения. Значения, полученные из Δ CТ в ПЦР в реальном времени, которые были использованы для расчета разницы складными изменения (выражены в виде процента от контроля), также были использованы для статистического анализа. П
-value &л; 0,05 или складная изменение > 2 была определена как статистически значимое для всех анализов.

Результаты Влияние EA на моторику желудка
EA в СТ.36 произвело значительные изменения в абсолютной величине средней пиковой амплитуды и частоты по сравнению с контролем или не-Acupoint группы (P &
л; 0,01). В отличие от этого, EA в не-Acupoint не вызывает существенных изменений в двигательную функцию желудка по сравнению с контрольной группой (дополнительный файл 1: Рисунок S1). наблюдались два типа желудка моделей двигателя для ST.36 группы в 10 крыс протестирована в соответствии среднего пика: крысы с положительной средней пика были оценены на продвижение модели, в то время как у крыс с отрицательным средним пиком были оценены на продвижение картины. Результаты исследования показали, 5 (50,0%) крыс показали ST.36 образец и способствуя 5 (50,0%) крыс показали ST.36 тормозящее картину. У крыс с ST.36 продвижения модели, средние пиковые амплитуды и частоты значения были 47,13 ± 0,44 и 0,19 ± 0,06 соответственно. У крыс с СТ.36 ингибирующих рисунком, средняя пиковой амплитуды и частоты значения были -43.41 ± 0,62 и 0,17 ± 0,03 соответственно. (Дополнительный файл 2: Таблица S1)
Влияние EA на PKC и MAPK сигнальные пути
EA в СТ.36 значительно регулировал экспрессию некоторых генов в PKC и MAPK сигнальных путей. В таблице 1 приведены результаты анализа микрочипов из ST.36 продвижения группы (по сравнению с контрольной группой). Экспрессия многих генов была увеличена после стимуляции EA, включая ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA и PTGS2. Другие гены показали снижение экспрессии после стимуляции EA, включая IL1R2. В таблице 2 приведены результаты анализа микрочипов от ST.36 ингибирования группы (по сравнению с контрольной группой). Экспрессии генов IL1R2 и ММР9 снизились после того, как Е. А. stimulation.Table изменения 1 гена сравнения EA продвижения группы с контрольной группой
сигнального пути

Gene

сайтов

Е.А. /контроль (Fold изменить)

EA /контроль (Fold вверх или вниз регулирования)

МАРК
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Откидные изменение (2-ΔΔCt) нормализованная экспрессия гена (2-Δ CТ) в тестируемом образце, деленный на нормализованной экспрессии генов (2-Δ CТ) в контрольном образце. Fold-регулирование представляет результаты складными изменения в биологически значимым образом. Складывающиеся изменения значения больше единицы указывают на регулирование доступа или повышающей регуляции, а складка регулирование равно загнутой изменения. Складывающиеся изменения значения меньше единицы указывают на отрицательное или понижающей регуляции, и складка регулирование является отрицательной обратной загнутой изменения.
Таблица 2 изменения Gene сравнения ингибиторной группу EA с контрольной группой
сигнального пути

Генные

сайтов

EA /контроль (Fold изменение)

EA /управления (Fold вверх или down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Откидные изменение (2-ΔΔCt) нормализованная экспрессия гена (2-Δ CТ) в тестируемом образце, деленный на нормализованной экспрессии генов (2-Δ CТ) в контрольном образце. Откидные регулирование представляет результаты складными изменений в биологически осмысленно. Наклоняемый изменения значения больше единицы указывают на положительно- или повышающей регуляции, а складка регулирование равно загнутой изменения. Наклоняемый изменения значения меньше единицы указывают на отрицательное или понижающей регуляции, и складку -regulation является отрицательной обратной загнутой изменения.
в таблице 3 приведены результаты анализа микрочипов из ST.36 продвижения группы (по сравнению с группой, не Acupoint). увеличена экспрессия гена COL1A1 после стимуляции EA. экспрессия генов IL1R2 и SERPINE1 были снижены после стимуляции EA. в таблице 4 приведены результаты анализа микрочипов из ST.36 ингибирования группы (по сравнению с группой, не Acupoint). Многие из генов показали снизился выражение после стимуляции EA, включая ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, р38МАРК, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA и генов PTGS2. Экспрессия гена COL1A1 была увеличена после того, как EA stimulation.Table изменения 3 гена сравнения EA группу способствуя без Acupoint группы
сигнального пути

Gene

сайтов

EA /Non-Acupoint (Fold изменить)

EA /Non-Acupoint (Fold вверх или down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Откидные изменение (2-ΔΔCt) нормализованная экспрессия гена (2-Δ CТ) в тестируемом образце, деленный на нормализованной экспрессии генов (2-Δ CТ) в контрольном образце. Откидные регулирование представляет результаты складными изменений в биологически осмысленно. Наклоняемый изменения значения больше единицы указывают на положительно- или повышающей регуляции, а складка регулирование равно загнутой изменения. Наклоняемый изменения значения меньше единицы указывают на отрицательное или понижающей регуляции, и складку -regulation является отрицательной обратной загнутой изменения.
Таблица 4 изменение гена сравнения ингибиторной группу EA с не Acupoint группы
сигнального пути

Gene

сайтов

EA /Non-Acupoint (Fold изменение)

EA /Non-Acupoint (Fold вверх или вниз регулирования)

МАРК
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
МАРК
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
МАРК
MAPK11 (p38bMAPK)
D08 <бр> 0,39
-2,58
МАРК
MAPK13
D10
0,28
-3,58
МАРК
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
МАРК
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Откидные изменение (2-ΔΔCt) нормализованная экспрессия гена (2-Δ CТ) в тестируемом образце, деленный на нормализованной экспрессии генов (2-Δ CТ) в контрольном образце. Откидные регулирование представляет результаты складными изменений в биологически осмысленно. Наклоняемый изменения значения больше единицы указывают на положительно- или повышающей регуляции, а складка регулирование равно загнутой изменения. Наклоняемый изменения значения меньше единицы указывают на отрицательное или понижающей регуляции, и складку -regulation является отрицательной обратной загнутой изменения.
Влияние EA на CaD и экспрессии белка СаР
стимуляции EA значительно увеличенным CaD и экспрессии белка СаР в ST.36 ингибирующих группе по сравнению с не-Acupoint группы, в то время как стимуляция с EA значительно сниженную экспрессию белка Cad и колпачком в СТ.36 содействия группе по сравнению с не Acupoint группы (рис 1A, B, C, D). Рисунок 1 эффекты стимуляции EA на кальдесмона (ИБС) и Calponin (колпаком) уровни белка. A. Экспрессия уровней белка кальдесмона с помощью Вестерн-блоттинга. уровни белка B. Денситометрический анализ кальдесмона нормированные бета-актина; С. Выражение уровней белка Calponin с помощью Вестерн-блоттинга; D Денситометрический анализ Calponin уровни белка нормированные бета-актина. CaD: кальдесмона; Цоколь: calponin; 1: не-Acupoint группу; 2-4: EA ингибирующие группу; 5-7: EA продвижения группы. * P &л; 0,05 compard не-Acupoint группы
эффекты EA сыворотки на SMC сократительной
Как показано в дополнительном файле 3:. Рисунок S2 и дополнительный файл 4: Таблица S2, морфология клеток наблюдалась под световым микроскопом после обработки с различными типа сыворотки. Там не было никаких различий в длине клеток перед добавлением сыворотки (р &GТ; 0,05). СТ.36 сыворотка увеличилась SMC сократимость (60,22 ± 3,84 мкм) по сравнению с контрольной сывороткой (96,02 ± 6,24 мкм) или не-Acupoint сывороткой (97,33 ± 6,97 мкм). Процентное сокращение составляло 41%, после стимуляции ST.36 сыворотки, в то время как свертка проценты были 7% и 10%, после стимуляции либо без Acupoint сыворотки или контрольной сыворотки соответственно.
Обсуждение
Настоящее исследование показало, что стимуляция EA в СТ.36 было регулирующее действие на моторику желудка у крыс, которые были либо стимулирующего или тормозящее. Стимулирующий эффект EA может действовать через сигнальные пути PKC и МАРК.
Эффекты EA на моторику желудка широко изучены у животных и человека из-за наличия электрогастрографии. Хорошо известно, что желудочный миоэлектрических активность состоит из медленных волн и перепадов напряжения. Шипы непосредственно связаны с появлением сокращений. Медленные волны не вызывают желудочно-кишечные сократимость, но они определяют максимальную частоту сокращений желудка.
Наиболее часто используется Acupoint при лечении желудочно-кишечных расстройств в ST.36. Принято считать, что акупунктура может оказывать содействие и ингибирующих действие на желудочно-кишечную подвижность в зависимости от вынужденном Acupoint. В организме человека, было показано, что стимуляция ЕА на СТ.36 имел двойное воздействие на желудочную перистальтику, которые либо стимулирующий или ингибирующий [15, 23]. Хотя пациенты, страдающие от желудочно-кишечных заболеваний, извлекли пользу из применения акупунктуры в СТ.36, однако точные молекулярные механизмы до сих пор не ясны. У собак, EA в СТ.36 увеличилась регулярность желудочных медленных волн [24, 25]. В сознании крыс, стимуляция EA в СТ.36 индуцированных двойной эффект, в которые были либо содействующий или тормозящее, на двигательную функцию желудка [26, 27]. Дальнейшее исследование показало, что стимулирующий эффект опосредован через холинергических мостков, в то время как ингибирующий эффект не зависит от симпатического пути [28]. Общая теория акупунктуры медицины основывается на концепции Инь и Ян, и иглоукалывание, как полагают, чтобы изменить дисбаланс между Инь и Ян. Эффекты акупунктуры на балансировку Инь и Ян может быть опосредовано через взаимодействие между нейротрансмиссии ГАМК и глутамата в стволе мозга.
В данной работе, стимуляция Е.А. на СТ.36 был эффективен в регуляции двигательной функции желудка, как показано значительным увеличением пиковой амплитуды и частоты. Кроме того, отсутствие такого ответа, когда та же стимуляция была выполнена в не-Acupoint свидетельствует о специфичности этого эффекта. В соответствии с пиковой амплитудой и частотой, группа СТ.36 была разделена на поощрение и ингибирующих моделей, так как EA показали двойной эффект. Для дальнейшего изучения механизмов, с помощью которых EA регулирует двигательную функцию желудка, мы выделили СМЦ из желудка и наблюдали эффект ST.36 сыворотки на SMC сократительной с помощью серологических фармакологические методы тестирования. Результаты показали, что сыворотка СТ.36 значительно увеличилась SMC сократимость; . В то время как эффекты, производимые нормальной или не Acupoint сыворотки не были очевидны
Недавние исследования предположили, что эффекты стимуляции EA опосредованы через систему опиоидов [29] или через его стимулирующее действие на блуждающий активности [30]; Однако точные механизмы, с помощью которых Е. А. влияет на двигательную функцию желудка были до конца не изучен. Предыдущие данные также показали, что уровни PKC были увеличены после стимуляции с ЕА [31]. Поэтому мы выбрали пути PKC и MAPK в качестве мишеней для опосредования стимулирующее воздействие EA на подвижность желудка. Кроме того, шапочку и CaD могут играть определенную роль в регуляции моторики желудочно-кишечного тракта во время физиологической и патологической адаптации. Повышающая регуляция экспрессии кепке и CaD тормозится моторику желудочно и понижающей регуляции экспрессии кепке и CaD способствовало моторику желудочно [32, 33]. ERK1 /2, член семейства МАРК, как было показано, играют важную роль в регуляции сокращения гладких мышц [34]. Согласно нашим результатам микрочипов, содействие моторику желудка может коррелировать с повышающей регуляции MAPK6 (ERK3), MAPK13 и экспрессии генов PTGS2, и понижающей регуляции экспрессии генов COL1A1. Торможение моторики желудка может коррелировать с понижающей регуляции IL1R2 и экспрессии генов ММР9. Вестерн-блоты показали, повышающей регуляции экспрессии белка CaD и колпачком ингибирует моторику желудка, в то время как понижающая регуляция экспрессии белка CaD и колпака способствует моторики желудка. Эти результаты показывают, что CaD и колпачком могут играть определенную роль в регуляции моторики желудочно-кишечного тракта во время физиологической и патологической адаптации.
Были некоторые ограничения в настоящем исследовании, которые должны быть упомянуты. Во-первых, мы не исследовали ли ингибиторы PKC и MAPK могут повлиять или блокировать регулируемую эффект стимуляции EA в СТ.36 на подвижность желудка. Дальнейшие исследования будут необходимы для исследования влияния ингибиторов PKC и МАРК. Во-вторых, будущие исследования будут сосредоточены на полного понимания роли каждого изменения в экспрессии генов при регуляции подвижности желудка.
Выводы
Таким образом, наши результаты показывают, что стимуляция EA в СТ.36 регулируется моторики желудка. стимуляция EA на ST.36 оказывали двойное действие на моторику желудка, которые были либо стимулирующего или тормозящее. Кроме того, регуляция моторики желудка может коррелировать с путей передачи сигнала PKC и МАРК.
Notes
Ци Ян, Ян-Донг Се также внесли вклад в эту работу.
Заявления
Выражение признательности Знакомства Работа выполнена при поддержке грантов от Национального фонда естественных наук Китая (№ 30801487)
Электронный дополнительный материал
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Дополнительный файл 1:. Рисунок S1: Влияние стимуляции EA на моторику желудка. Моторику желудка измеряли с помощью электрогастрографии. А. Контроль, Б. СТ.36, C. Non-Acupoint. Стимуляция с EA в СТ.36 увеличивало средний пиковой амплитуды и частоты. Желудочный волны показали двойные изменения в группе ST.36 по сравнению с контролем или без Acupoint группы. Величины выражены как среднее ± S.D. (П
= 10). * Р
&л; 0,05, ** р
&л; 0,01 против
. контрольная группа. #p
&л; 0,05, ## р
&л; 0,01 по сравнению с
без Acupoint группы. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Дополнительный файл 2: Таблица S1: Влияние ЕА на желудочную миоэлектрических деятельности. Группа СТ.36 была разделена на EA поощрения и EA группы, ингибирующие по желудочных волн. Величины выражены как среднее ± S.D (п
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Дополнительный файл 3: Рисунок S2: Влияние стимуляции EA на желудочную SMC сократительной. Морфология клеток наблюдали с помощью светового микроскопа (× 200-кратном увеличении). Длина ячейки и процент сжатия измеряли с помощью компьютерного анализа изображений системы. О. SMCs; A. SMCs + контрольная сыворотка; B. SMCs + СТ.36 сыворотки; С. SMCs + Acupoint без сыворотки. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Дополнительный файл 4: Таблица S2: Влияние сыворотки на SMC сократительной. Как оценивали с помощью компьютерной системы обработки видео, Zusanli сыворотки привело к значительному сократительной в SMCs. Результаты выражены в виде среднего значения ± S.D (п
= 10). * Р
&л; 0,05 ** р
&л; 0,01 по сравнению с контрольной сыворотки
группы. #p
&л; 0,05, ## р
&л; 0,01 по сравнению с
без Acupoint сыворотки. (DOC 28 KB) авторов оригинальные представленные файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинала, представленных файлов для изображений. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff авторов исходного файла для фигурного 1 конкурирующими интересами
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.
Авторов вклады
QY проведены молекулярно-генетические исследования, участвовали в створе последовательности и разработан проект рукопись. YDX, MXZ, BH осуществляется иммунологических. CZ, HYLi, RZ участие в выравнивании последовательности. MQ, YXH участвовал в разработке дизайна исследования и проводили статистический анализ. JJW задумана исследования, а также участвовал в ее разработке и координации и помог подготовить рукопись. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Одноступенчатый хирургическое восстановление проходимости дыхательных свища желудка после esophagectomy
• Изучение антимикробной активности, острой токсичности и цитопротекторного эффекта polyherbal экстракта в язвой ж…