Effetto della stimolazione elettroagopuntura a Zusanli punto terapeutico (ST36) sulla motilità gastrica: possibile attraverso le vie di trasduzione del segnale PKC e MAPK

Effetto della stimolazione elettroagopuntura a Zusanli punto terapeutico (ST36) sulla motilità gastrica: possibile attraverso PKC e MAPK percorsi di trasduzione del segnale
Abstract
sfondo
Electroacupuncture (EA) la stimolazione ha dimostrato di avere un grande potenziale terapeutico per il trattamento di gastrointestinale disturbi della motilità. Tuttavia, nessuna prova ha chiarito i meccanismi che contribuiscono agli effetti di stimolazione EA presso il punto terapeutico Zusanli (ST.36). Questo studio è stato progettato per studiare l'effetto regolativo della stimolazione EA al ST.36 sulla motilità gastrica e di esplorare le sue possibili meccanismi
Metodi
Trenta ratti Sprague-Dawley sono stati divisi casualmente in tre gruppi:. Il ST.36 gruppo, il gruppo non-terapeutico, e il gruppo di controllo. stimolazione EA stato impostato a 2 Hz, modalità continua, e 1 V per 30 min. L'ampiezza e la frequenza di picco media di motilità gastrica sono stati misurati da electrogastrography. La proteina chinasi C (PKC) e proteina chinasi mitogeno-attivata (MAPK) vie di segnalazione sono stati valutati utilizzando reazioni a catena della polimerasi in tempo reale. Caldesmon (CAD) e l'espressione della proteina calponin (PAC) nel gastrico sono stati rilevati su macchine occidentali. Un Video Processing System computerizzata è stato utilizzato per valutare le variazioni morfologiche nelle cellule muscolari lisce (SMC) dal gastrico.
Risultati
stimolazione EA a ST.36 hanno avuto un duplice effetto sulla frequenza e l'ampiezza media di picco. Inoltre, la stimolazione EA al ST.36 regolata l'espressione di alcuni geni nelle vie di segnalazione PKC e MAPK, ed è regolata l'espressione del CAD e proteine ​​PAC. EA siero indusse SMC contrattilità. Promozione della motilità gastrica può correlare con up-regulation di MAPK6 (ERK3), MAPK13, e COX-2 (PTGS2) l'espressione genica, e la down-regolazione del collagene, I, alfa 1 gene tipo (COL1A1) e CaD e l'espressione della proteina CAP. L'inibizione della motilità gastrica può correlare con down-regolazione di tipo recettore dell'interleuchina-1 2 (IL1R2) e 9 metalloproteinasi-geni Matrix (MMP9), e up-regolazione dell'espressione della proteina CAD e CaP
. Conclusioni
EA la stimolazione a ST.36 regolata motilità gastrica, e gli effetti sono stati sia promuovendo e inibendo nei ratti. I possibili meccanismi possono correlazione con il segnale di vie di trasduzione del PKC e MAPK.
Parole
Elettroagopuntura Zusanli gastrica motilità PKC MAPK Sfondo
motilità gastrica è una delle funzioni fisiologiche più critici della nell'intestino umano. Senza motilità coordinata, la digestione e l'assorbimento dei nutrienti nella dieta non può avere luogo. La regolazione della motilità gastrointestinale è complicata e coinvolge la contrazione di cellule muscolari lisce (SMC). La contrazione di SMC è regolata principalmente da variazioni transitorie nel intracellulare Ca 2 + concentrazione [1]. Ci sono due principali percorsi coinvolti in questo meccanismo, vale a dire, la via chinasi RhoA-Rho e il percorso della proteina chinasi C (PKC) [2]. Calponin (cap), una in vitro
substrato ben consolidata per la segnalazione di proteine ​​da PKC [3], interagisce direttamente con PKC [4]. Caldesmon (CAD) è un actina e miosina binding protein che esiste in due isoforme, che sono generati da splicing alternativo [5]. Ci sono prove accumulando per una via secondaria nella regolazione della contrazione della muscolatura liscia che è PKC dipendente, e questo percorso può essere mediata da tappo e attivazione CaD [6-9]. percorsi mitogeno-activated protein chinasi (MAPK) di segnalazione sono stati implicati in SMC contrazione [10]. Ci sono tre principali gruppi di MAPK distintamente regolamentati che portano all'espressione gene alterato. Le chinasi relativi segnali extracellulari 1 e 2 (ERK1 /2), la chinasi c-Jun terminale (JNK), e la p38 MAPK sono noti a svolgere ruoli importanti nella risposta segnalazione intracellulare agli stimoli extracellulari [11]. Inoltre, CaP può facilitare la segnalazione ERK-dipendente, svolgendo così un ruolo significativo nella regolazione della contrazione SMC [12].
Agopuntura, che è stato utilizzato per migliaia di anni in Cina, è sempre più utilizzato in tutto il mondo per la gestione dei varie malattie [13]. Si ritiene che la stimolazione di un punto terapeutico può influenzare direttamente organi pertinenti e ottenere l'effetto di terapia di agopuntura. EA è una procedura mista che stimola un punto terapeutico con stimolazione elettrica invece che con manipolazioni manuali di aghi. Numerosi studi hanno valutato gli effetti ei meccanismi di EA sulla motilità gastrica [14-20]. Sulla base delle prove da questi studi, stimolazione EA ha dimostrato di avere un grande potenziale terapeutico per il trattamento di disturbi della motilità gastrointestinale. Il Zusanli (ST.36) è uno dei punti terapeutici più comunemente usati per le malattie gastrointestinali. Secondo la teoria della medicina tradizionale cinese (TCM), vi è una relazione tra ST.36 e la funzione del tratto gastrointestinale. Fino ad oggi, tuttavia, nessuna prova ha chiarito i meccanismi esatti che contribuiscono agli effetti di stimolazione EA.
Pertanto, esaminando i cambiamenti morfologici e l'attività mioelettrica, il presente studio si propone di valutare l'effetto della stimolazione regolativo EA al ST.36 punto terapeutico sulla motilità gastrica nel ratto e di esplorare le sue possibili meccanismi.
Metodi
Animali e reagenti
Trenta adulti maschi Sprague-Dawley (SD) ratti del peso di 180-220 g sono stati mantenuti su un 12-h luce- ciclo di buio a 25 ± 2 ° C e 60% di umidità con libero accesso a cibo e acqua. ratti SD sono stati acquistati dal Centro Sperimentale di animali della Quarta Università Medica Militare. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti in conformità con le linee guida istituzionali della Quarta Università Medica Militare per la cura e l'uso di animali da laboratorio. L'approvazione del protocollo di studio è stato ottenuto da parte del Comitato Etico per la Ricerca degli animali, Quarto militare Medical University, Cina. Gli animali sono stati assegnati in modo casuale in tre gruppi:. Il gruppo ST.36, il gruppo non-terapeutico, e il gruppo di controllo
Collagenasi II, inibitore della tripsina, ditiotreitolo zucchero alcool, albumina di siero bovino,-calcio libero tampone fosfato (PBS ), glutaraldeide, e blu Trypan sono stati acquistati da Kit Sigma Chemical Co. L'RNA totale di estrazione, SuperScript III della trascrittasi inversa, e SuperArray PCR master Mix sono stati acquistati da Invitrogen Co. anti-capra, anti-topo, e anti-coniglio anticorpi sono stati acquistato da Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co.
procedura di stimolazione EA
il ST.36 è stato situato a circa 5 mm lateralmente al perone degli arti posteriori, mentre il non-terapeutico è situato sul piede posteriore accanto alla ST.36 aperti 5 mm [21]. Gli aghi sono stati inseriti 5 mm di profondità nello strato muscolare della acupoint selezionati e sono stati stimolati da EA a 2 Hz e 2 V utilizzando uno stimolatore elettrico (G6805-2A; Shanghai Huayi strumento medico di fabbrica, Shanghai, Cina). Ogni stimolazione durato 20 minuti in modo continuo, e la stimolazione è stata effettuata 1 volta /giorno per 5 giorni. I topi del gruppo di controllo sono stati sottoposti alla sola immobilizzazione senza stimolazione per 30 minuti alla stessa ora ogni giorno.
Electrogastrography
Electrogastrography è stato applicato usando il multicanale fisiologica del segnale acquisizione ed elaborazione del sistema (modalità RM-6280) dopo l'ultima stimolazione il quinto giorno. Dopo 12 ore di digiuno (con libero accesso all'acqua) e 6 ore senza bere, i ratti sono stati anestetizzati intraperitoneale (i.p.) con il 10% di uretano ad una dose di 1 g /kg del corpo e poi immobilizzate. Il primo elettrodo è stato fissato alla coda, e gli elettrodi guidate sono stati impiantati sulla superficie sierosa dello stomaco 0,3 - 0,5 cm sopra il piloro. Gli elettrodi sono stati coperti con 37 ° C normale soluzione fisiologica garza, collegato con filo. I parametri sperimentali utilizzati sono stati i seguenti:. Frequenza di 400 Hz, il filtro 10 Hz, velocità di scansione 2 s /divisione, la sensibilità di 25 mV, il tempo corrente costante e tempo di registrazione oscilloscopio 1 h [18]
a catena della polimerasi in tempo reale reazione (PCR)
Dopo l'ultimo stimolazione con EA, i ratti sono stati sacrificati. Per il gruppo di controllo e il gruppo non-terapeutico, un ratto è stato scelto a caso, rispettivamente. Per il gruppo di EA, in primo luogo abbiamo divisi in EA promuovere gruppo e EA inibendo gruppo in base ai risultati del electrogastrography. E poi, ci ratti sono stati selezionati in modo casuale da entrambi i gruppi. tessuti gastrico (dal piloro 0,8-1 cm) sono stati tagliati in pezzi che erano circa 0,3 cm × 0,5 cm di dimensione e subito messi in -70 ° C dell'azoto liquido. Totale campioni di RNA sono stati estratti utilizzando TRIZOL da diversi gruppi in base alle istruzioni del produttore. qualità dell'RNA è stata valutata spettrofotometricamente sulla base del rapporto A260 /A280. campioni di RNA sono stati controllati per l'integrità del 18S e 28S RNA mediante gel elettroforesi. RNA totale (1,5 mg) è stato utilizzato per generare cDNA primo filamento con SuperScript III Reverse Transcriptase (1 ml) dalla RNA isolato. Le reazioni PCR in tempo reale sono stati preparati utilizzando un SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112) contenente i geni pathway di segnale PKC e MAPK. Il cDNA diluito (102 microlitri) è stato aggiunto ad ogni foro corrispondente al chip PCR. Poi le patatine PCR sono stati inseriti nello strumento PCR in tempo reale per la reazione PCR. Le condizioni di ciclo sono state le seguenti: 95 ° C per 10 min, 60 ° C per 15 s, e 60 ° C per 1 min (40 cicli). Le differenze di espressione genica, espressi come fold-modifiche, sono stati calcolati utilizzando il 2 -ΔΔCt metodo.
Western blot CAD e Cap
I livelli CAD e proteine ​​CaP sono stati rilevati mediante Western blotting. Dopo il trattamento con EA, i ratti sono stati sacrificati. I ratti sono stati poi fissati, seguita da incisione della pelle addominale e del peritoneo. I visceri sono stati esposti, e centrale 1/3 del corpo gastrico è stato tagliato in piccoli pezzi che erano circa 0,3 cm x 0,5 cm. I pezzi sono stati immediatamente conservati a -70 ° C in azoto liquido. Brevemente, estratti cellulari (30 ug) dal 1/3 superiore della metà del corpo gastrico erano separati da sodio dodecil solfato-SDS-PAGE (SDS-PAGE) e trasferite su membrane di nitrocellulosa. I filtri sono stati bloccati con soluzione salina Tris tamponata (TBS) Latte /5%, seguita da incubazione con anticorpi policlonali contro CAD (1: 3000 diluizione), PAC (1: 3000 diluizione), e β-actina (1: 10.000). Dopo le membrane sono state lavate, sono state incubate con anticorpi coniugati con perossidasi secondarie diluito 1: 5000 in TBS con 0,01% Tween 20. Il sistema di rilevamento di anticorpi è stato utilizzato, e le membrane sono state esposte a pellicola a raggi X secondo le istruzioni del produttore.
preparazione Siero
siero è stato preparato come precedentemente descritto con modifiche [22]. Dopo l'ultimo stimolazione con EA, tutti i ratti sono stati sacrificati. Avanti, 6 ml di sangue è stata presa dalla carotide di ogni ratto. Il sangue è stato mantenuto ancora per 1 h, quindi centrifugato a 3000 rpm per 15 min. Il siero è stato raccolto, filtrato per eliminare batteri e 1,5 ml è stato confezionato in un tubo EP, che è stato conservato a -70 ° C in azoto liquido.
Effetti del siero EA su SMC contrattilità
Cinque normali ratti SD erano ip anestetizzato con 10% uretano ad una dose di 1 g /kg di peso corporeo. Dopo essere stato anestetizzato, la pelle addominale e del peritoneo sono stati incisi, ei visceri sono stati esposti. L'intero stomaco era tagliato e tessuti gastrico sono stati isolati e immediatamente posto in ossigeno satura PBS con penicillina (100 U /ml) e streptomicina (100 ug /ml) a 4 ° C. Dopo essere stato risciacquato, i tessuti sono stati trasferiti in ossigeno saturo HEPES, diffondere e fissati su una piastra di gel di silice con un ago sottile. Lo strato mucoso è stato accuratamente tagliato, esponendo la mucosa circolare, che è stata tagliata in 9 - 10 strisce muscolari (da 1 mm x 4 mm), posti in soluzione di Tyrode, e mantenuto a 4 ° C in frigorifero per circa 15 min. Le strisce muscolari sono stati digeriti in 1% collagenasi di tipo II, 0,05% inibitore della tripsina, 0,05% di zucchero alcool ditiotreitolo, e 0,2% di BSA enzima a bagnomaria per 25 minuti a 36 ° C. Dopo la digestione, la miscela è stata lavata con HEPES privo di enzimi, incubate per 30 minuti, e filtrata con una maglia 200 schermo per raccogliere le singole libere SMCs gastriche. La vitalità cellulare è stata misurata con il test blu Trypan. Le cellule viventi sono stati più del 95% ad una densità di 10 6 cellule /ml.
Le SMC isolate sono stati divisi casualmente in gruppo siero normale, gruppo siero ST.36, e il gruppo di siero non terapeutico. sospensioni SMC (50 microlitri) con una densità di 1,0 × 10 6 cellule /ml sono stati posti in piastre da 96 pozzetti. Ogni campione di siero è stato inattivato dopo 30 minuti in un bagno d'acqua a 56 ° C, e poi diluito 1: 2 con HEPES. Serum (50 microlitri) dei diversi gruppi inserito SMC, mescolato con una pipetta per 30 s, e fissato con 30 microlitri 2,5% glutaraldeide. lunghezza delle cellule è stata valutata con un Video Processing sistema Computerizzata (DP2-BSW), che è stato utilizzato per calcolare la percentuale di restringimento. La percentuale di restringimento delle cellule = (lunghezza delle cellule prima del trattamento - la lunghezza delle cellule dopo il trattamento). /Lunghezza delle cellule prima del trattamento × 100%
Analisi statistica
I dati sono stati espressi come media ± S.D. analisi della varianza ad una via seguita dal test di comparazione multipla di Bonferroni è stato applicato con il software SPSS 10.0. I valori ΔCt ottenuti dalla PCR in tempo reale, che sono stati utilizzati per calcolare le differenze armadio cambio (qui espresse come percentuale del controllo), sono stati utilizzati anche per l'analisi statistica. A p
-value < 0.05 o un fold-change > 2 è stato definito come statisticamente significativa per tutte le analisi.
Risultati
Effetti di EA sulla motilità gastrica
EA a ST.36 prodotto cambiamenti significativi nel valore assoluto della ampiezza media di picco e frequenza rispetto al controllo o gruppi non acupoint (P
< 0,01). Al contrario, EA al non-terapeutico non ha indotto cambiamenti significativi nella motilità gastrica rispetto al gruppo di controllo (file complementare 1: Figura S1). Sono stati osservati due tipi di schemi motori gastrici per il gruppo ST.36 nei 10 ratti testato secondo il picco medio: ratti con picco medio positivo sono stati giudicati per promuovere modello, mentre i ratti con picco medio negativo sono stati giudicati per promuovere modello. I risultati hanno mostrato 5 (50,0%) ratti hanno mostrato l'ST.36 promuovere modello e 5 (50,0%) ratti hanno mostrato l'inibizione ST.36 pattern. Nei ratti con il modello ST.36 promozione, i valori medi di ampiezza e frequenza dei picchi erano 47.13 ± rispettivamente 0,44 e 0,19 ± 0,06,. Nei ratti con il modello ST.36 inibendo, i valori medi di picco di ampiezza e frequenza sono stati -43,41 ± 0,62 e 0,17 ± 0,03, rispettivamente. (Sui file 2: Tabella S1)
Effetti della EA sulla PKC e vie di segnalazione MAPK
EA a ST.36 significativamente regolata l'espressione di alcuni geni nel PKC e vie di segnalazione MAPK. Tabella 1 elenca i risultati delle analisi microarray del gruppo ST.36 promozione (rispetto al gruppo di controllo). L'espressione di molti geni è stato aumentato dopo stimolazione EA, tra cui ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA, e PTGS2. Altri geni mostrato diminuita espressione dopo la stimolazione EA, tra cui IL1R2. Tabella 2 elenca i risultati delle analisi microarray del gruppo ST.36 inibizione (rispetto al gruppo di controllo). L'espressione genica di IL1R2 e MMP9 erano diminuite dopo EA stimulation.Table cambio 1 Gene confrontando EA promuovere gruppo con gruppo di controllo
percorso del segnale
Gene
Siti
EA /controllo (fold change)
EA /controllo (Fold up- o down-regulation)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Pieghevole cambio (2-ΔΔCt) è l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione divisa per l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione di controllo. Fold-regolazione rappresenta i risultati pieghevole il cambiamento in modo biologicamente significativa. Fold-change valori maggiori di uno indicano un comandata o up-regolazione, e la piega-regolazione è uguale alla piega cambio. Fold-cambiamento valori meno di un indicano un negativo o down-regulation, e la piega-regolamentazione è l'inverso negativo della piega-cambiamento.
Tabella 2 cambiamento Gene confrontando EA gruppo di inibizione con gruppo di controllo
pathway di segnale
Gene
Siti
EA /controllo (Fold cambia)
EA /controllo (Fold up- o down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Fold-cambio (2-ΔΔCt) è l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione in esame diviso per l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione di controllo. Fold-regolamentazione rappresenta i risultati pieghevole cambiare in un biologicamente modo significativo. Fold-cambiamento valori superiori a uno indicano un comandata o up-regolazione, e la piega-regolamentazione è uguale alla piega-cambio. Fold-change valori meno di un indicano un negativo o down-regulation, e la piega -il regolamento è l'inverso negativo della piega-cambiamento.
Tabella 3 elenca i risultati delle analisi microarray del gruppo ST.36 promuovere (rispetto al gruppo non-terapeutico). è stato aumentato l'espressione del gene COL1A1 dopo stimolazione EA. l'espressione dei geni IL1R2 e SERPINE1 erano diminuite dopo la stimolazione EA. Tabella 4 elenca i risultati dall'analisi microarray del gruppo ST.36 inibizione (rispetto al gruppo non-terapeutico). Molti dei geni mostrava diminuita espressione dopo stimolazione EA, tra cui il ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, e geni PTGS2. L'espressione del gene COL1A1 è stato aumentato dopo EA stimulation.Table cambiamento 3 Gene confrontando EA gruppo promotore con il gruppo non-terapeutico
pathway di segnale
Gene
Siti
EA /non-terapeutico (fold change)
EA /non-terapeutico (Fold up- o down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Fold-cambio (2-ΔΔCt) è l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione in esame diviso per l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione di controllo. Fold-regolamentazione rappresenta i risultati pieghevole cambiare in un biologicamente modo significativo. Fold-cambiamento valori superiori a uno indicano un comandata o up-regolazione, e la piega-regolamentazione è uguale alla piega-cambio. Fold-change valori meno di un indicano un negativo o down-regulation, e la piega -il regolamento è l'inverso negativo della piega-cambiamento.
Tabella 4 cambiamento Gene confrontando EA gruppo di inibizione con il gruppo non-terapeutico
pathway di segnale
Gene
Siti

EA /non-terapeutico (Fold cambiamento)
EA /non-terapeutico (Fold up- o down-regulation)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0.18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0.42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0.39 -2.58

MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3.58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Fold-cambio (2-ΔΔCt) è l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione in esame diviso per l'espressione genica normalizzata (2-ΔCt) nel campione di controllo. Fold-regolamentazione rappresenta i risultati pieghevole cambiare in un biologicamente modo significativo. Fold-cambiamento valori superiori a uno indicano un comandata o up-regolazione, e la piega-regolamentazione è uguale alla piega-cambio. Fold-change valori meno di un indicano un negativo o down-regulation, e la piega -il regolamento è l'inverso negativo della piega-cambiamento.
Effetti di EA su CAD e l'espressione della proteina CaP
stimolazione con EA significativo aumento CAD e l'espressione della proteina PAC nel gruppo inibendo ST.36 rispetto al non-terapeutico gruppo, mentre la stimolazione con EA significativamente ridotta espressione della proteina CAD e cappello in ST.36 promuovere gruppo rispetto al gruppo non-terapeutico (Figura 1A, B, C, D). Figura 1 Effetti della stimolazione EA su Caldesmon (CAD) e Calponin (PAC) i livelli di proteina. A. L'espressione di caldesmon livelli di proteina mediante Western blotting. i livelli di proteina B. densitometrica analisi caldesmon normalizzati per β-actina; C. L'espressione di Calponin livelli di proteina mediante Western blotting; D densitometrica analisi Calponin livelli di proteina normalizzati per β-actina. CAD: Caldesmon; CAP: calponin; 1: gruppo non-terapeutico; 2-4: EA gruppo inibizione; 5-7: EA promuovere gruppo. * P < 0.05 compard al gruppo non-terapeutico
Effetti del siero di EA su SMC contrattilità
Come mostrato nel file aggiuntive. 3: Figura S2 e sui file 4: Tabella S2, la morfologia delle cellule è stata osservata al microscopio luce dopo il trattamento con diversi tipi di siero. Non ci sono state differenze di lunghezza cella prima l'aggiunta di siero (p > 0,05). ST.36 siero è aumentata contrattilità SMC (60.22 ± 3.84 micron) rispetto al siero di controllo (96.02 ± 6.24 micron) o il siero non-terapeutico (97.33 ± 6,97 micron). La percentuale di contrazione è stata del 41% dopo stimolazione con ST.36 siero, che le percentuali di contrazione sono stati 7% e il 10% dopo la stimolazione sia con il siero non-terapeutico o di siero di controllo, rispettivamente,
. Discussione
Il presente studio ha dimostrato che la stimolazione EA a ST.36 ha avuto un effetto regolativo sulla motilità gastrica in ratti che era o stimolante o inibitorio. L'effetto stimolante di EA può agire attraverso le vie di segnalazione PKC e MAPK.
Gli effetti di EA sulla motilità gastrica sono stati ampiamente studiati sia negli animali e negli esseri umani a causa della disponibilità di electrogastrography. È ben noto che gastrico dell'attività mioelettrica costituito da onde lente e picchi. Picchi sono direttamente associati con la comparsa di contrazioni. onde lente non evocano contrattilità gastrointestinale, ma ne determinano la frequenza massima di contrazioni gastriche.
Il punto terapeutico più usato nel trattamento dei disturbi gastrointestinali rappresenta l'ST.36. Si crede comunemente che l'agopuntura può esercitare la promozione e inibendo gli effetti sulla motilità gastrointestinale a seconda del punto terapeutico stimolato. Negli esseri umani, è stato dimostrato che la stimolazione EA a ST.36 avuto effetti gemellate peristalsi gastriche che sono o facilitante o inibitorio [15, 23]. Anche se i pazienti affetti da malattie gastrointestinali hanno beneficiato l'applicazione di agopuntura a ST.36, ma l'esatto meccanismi molecolari sono ancora poco chiari. Nei cani, EA al ST.36 aumentato la regolarità delle onde lente gastrici [24, 25]. Nei ratti coscienti, la stimolazione EA a ST.36 indotto effetti duali, che erano sia facilitante o inibitorio, sulla motilità gastrica [26, 27]. Ulteriori studi hanno rivelato che l'effetto stimolatorio è mediato attraverso vie colinergici, mentre l'effetto inibitorio è indipendente dal pathway simpatica [28]. La teoria generale della medicina agopuntura si fonda sul concetto di Yin e Yang, e l'agopuntura è creduto di modificare lo squilibrio tra Yin e Yang. Gli effetti dell'agopuntura sul bilanciamento Yin e Yang possono essere mediati tramite l'interazione tra la neurotrasmissione di GABA e glutammato nel tronco cerebrale.
Nella carta corrente, stimolazione EA a ST.36 era efficace nel regolare la motilità gastrica, come dimostrato dal significativo aumento picco di ampiezza e frequenza. Inoltre, la mancanza di una tale risposta quando la stessa stimolazione è stata eseguita alla non-agopunto era indicativa della specificità di questo effetto. Secondo l'ampiezza di picco e frequenza, il gruppo ST.36 è ulteriormente diviso in promuovono e inibitori modelli, poiché EA ha un duplice effetto. Per esplorare ulteriormente i meccanismi con cui EA regolamenta la motilità gastrica, abbiamo isolato SMC dallo stomaco e osservato l'effetto del siero su ST.36 SMC contrattilità utilizzando metodi di test farmacologici sierologici. I risultati hanno mostrato che ST.36 siero aumentato significativamente SMC contrattilità; . Considerando che gli effetti prodotti dalla normale o non terapeutico di siero non erano evidenti
Recenti ricerche hanno suggerito che gli effetti della stimolazione EA sono mediati attraverso il sistema degli oppioidi [29] o tramite il suo effetto stimolante sull'attività vagale [30]; tuttavia, i precisi meccanismi con cui EA colpisce motilità gastrica non sono stati pienamente compresi. precedenti risultati anche indicato che i livelli di PKC sono aumentati dopo stimolazione con EA [31]. Pertanto, abbiamo selezionato i percorsi PKC e MAPK come obiettivi per mediare gli effetti stimolatori di EA sulla mobilità gastrica. Inoltre, PAC e CaD possono giocare un ruolo nella regolazione della motilità gastrointestinale durante l'adattamento fisiologico e patologico. Up-regolazione di cappuccio e di espressione CaD inibito la motilità gastrointestinale, e down-regulation della PAC e di espressione CaD promosso la motilità gastrointestinale [32, 33]. ERK1 /2, un membro della famiglia MAPK, ha dimostrato di svolgere un ruolo significativo nella regolazione della contrazione della muscolatura liscia [34]. Secondo i nostri risultati di microarray, la promozione della motilità gastrica può correlare con up-regulation di MAPK6 (ERK3), MAPK13, e l'espressione genica PTGS2, e down-regolazione dell'espressione genica COL1A1. L'inibizione della motilità gastrica può correlare con down-regulation di IL1R2 e l'espressione genica MMP9. Western blot ha mostrato up-regolazione dell'espressione della proteina CAD e CaP inibito la motilità gastrica, mentre down-regolazione dell'espressione della proteina CAD e CaP promosso la motilità gastrica. Questi risultati dimostrano che il CAD e il cappuccio possono giocare un ruolo nella regolazione della motilità gastrointestinale durante l'adattamento fisiologico e patologico.
Ci sono state alcune limitazioni nel presente studio che dovrebbero essere menzionati. In primo luogo, non abbiamo indagare se gli inibitori della PKC e MAPK potrebbero avere o bloccare l'effetto regolatore della stimolazione EA a ST.36 sulla mobilità gastrica. saranno necessari ulteriori studi per indagare le influenze di inibitori PKC e MAPK. In secondo luogo, le indagini future si concentreranno sul comprendere appieno il ruolo di ogni cambio di espressione genica sulla regolamentazione della mobilità gastrica.
Conclusioni
In sintesi, i nostri risultati dimostrano che la stimolazione EA a ST.36 regolata motilità gastrica. stimolazione EA a ST.36 esercita effetti doppi sulla motilità gastrica che erano o stimolante o inibitorio. Inoltre, regolazione della motilità gastrica può correlare con il segnale di vie di trasduzione del PKC e MAPK.
Note
Qi Yang, Yan-Dong Xie ha contribuito ugualmente a questo lavoro
. Dichiarazioni
Ringraziamenti
Questo studio è stato sostenuto da sovvenzioni dal National Science Foundation naturale della Cina (n ° 30.801.487)
materiale supplementare elettronica
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc sui file. 1: Figura S1: Effetti della stimolazione EA sulla motilità gastrica. motilità gastrica è stata misurata mediante electrogastrography. A. Controllo, B. ST.36, C. non-terapeutico. La stimolazione con EA al ST.36 aumentato l'ampiezza media di picco e frequenza. onde gastrico hanno mostrato dual cambiamenti nel gruppo ST.36 rispetto al controllo o al gruppo non-terapeutico. I valori sono espressi come media ± S.D. (N =
10). * P
< 0.05, ** p
< 0.01 vs
. gruppo di controllo. #p
< 0.05, ## p
< 0.01 vs
gruppo non-terapeutico. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc sui file 2: Tabella S1: Effetti della EA sulle attività mioelettrica gastrica. Il gruppo ST.36 stato ulteriormente suddiviso in EA promuovere e EA inibendo gruppi secondo le onde gastriche. I valori sono espressi come media ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc sui file 3: Figura S2: Effetti della stimolazione EA su gastrica contrattilità SMC. Morfologia cellulare è stata osservata con un microscopio ottico (× 200 ingrandimenti). La lunghezza della cella e la percentuale di contrazione è stata misurata con un computer Image Analysis sistema. O. SMC; A. SMC + siero di controllo; B. SMC + ST.36 siero; C. SMC + non terapeutico di siero. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc sui file 4: Tabella S2: Effetti del siero su SMC contrattilità. Come valutato dal Video Processing System Computerizzata, siero Zusanli comportato significativi contrattilità in SMC. I risultati sono espressi come media ± S.D (n
= 10). * P
< 0.05 ** p
< 0.01 vs
controllo di gruppo siero. #p
< 0.05, ## p
< 0.01 vs
non terapeutico di siero. (DOC 28 KB) degli autori fascicoli presentati originali per
di seguito sono riportati i link ai file degli autori originali inviati per le immagini. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Autori file originale per la figura 1 interessi in competizione
Gli autori dichiarano di non avere interessi in gioco.
Autori contributi
QY effettuato gli studi di genetica molecolare, ha partecipato alla allineamento di sequenze e ha redatto il manoscritto. YDX, MXZ, BH ha effettuato le prove immunologiche. CZ, HYLi, RZ ha partecipato alla allineamento di sequenze. MQ, YXH partecipato alla progettazione dello studio e dell'esecuzione dell'analisi statistica. JJW concepito lo studio, e ha partecipato alla sua progettazione e coordinamento e ha contribuito alla redazione del manoscritto. Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

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