Vaikutus electroacupuncture stimulaatiota Zusanli acupoint (ST36) on mahan: mahdollista PKC ja MAPK singaalin

Vaikutus electroacupuncture stimulaatiota Zusanli acupoint (ST36) on mahan: mahdollista PKC ja MAPK signaalintransduktioreitteihin
tiivistelmä
tausta
Electroacupuncture (EA) stimulaatio on osoitettu olevan suuri terapeuttinen potentiaali hoitoon ruoansulatuskanavan motiliteettihäiriöissä. Kuitenkaan mitään todisteita on selvittänyt mekanismeja, jotka auttavat vaikutuksia EA stimulaation klo Zusanli acupoint (ST.36). Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia säätelevä vaikutus EA stimulaation klo ST.36 mahalaukun liikkuvuutta ja tutkia sen mahdollisten mekanismien. Tool Menetelmät
Kolmekymmentä Sprague-Dawley rottaa jaettiin satunnaisesti kolmeen ryhmään: ST.36 ryhmä, ei-acupoint ryhmä, ja kontrolliryhmään. EA stimulaatio asetettiin 2 Hz, jatkuva tila, ja 1 V 30 min. Taajuus ja keskimääräinen huippu amplitudi mahan mitattiin elektrogastrografia. Proteiinikinaasi C (PKC) ja mitogeeni-aktivoitu proteiinikinaasi (MAPK) signalointireittejä arvioitiin käyttäen reaaliaikaisen polymeraasiketjureaktion. Caldesmon (CAD) ja calponin (CAP) proteiinin ilmentymistä mahalaukkua havaittiin Western blot. Lasketun Video Processing System käytettiin arvioimaan morfologisia muutoksia sileän lihaksen soluissa (SMC) välillä mahalaukkua.
Tulokset
EA stimulaatiota ST.36 oli kaksinainen vaikutus toistuvuus ja keskimääräinen huippu amplitudi. Lisäksi EA stimulaatiota ST.36 säädellään ilmentymistä joidenkin geenien PKC ja MAPK signalointireitteihin, ja se säännelty ilmaus CAD ja korkki proteiineja. EA seerumin aiheuttama SMC contractility. Edistäminen mahalaukun motiliteetin voi korreloida säätely ylöspäin MAPK6 (ERK3), MAPK13, ja Prostaglandiini-endoperoksidisyntaasi 2 (PTGS2) geenien ilmentyminen, ja alas-säätely kollageenin, tyypin I, alfa 1 (COL1A1) geenin ja CAD ja Cap proteiinin ilmentymiseen. Esto mahalaukun motiliteetin voi korreloida alas-säätely interleukiini-1-reseptorin tyypin 2 (IL1R2) ja Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) geenejä, ja ylös-säätely CAD ja korkki proteiinin ilmentymiseen.
Johtopäätökset
EA stimulaatiota ST.36 säädellään mahan, ja vaikutukset sekä edistetään ja estämällä rotilla. Mahdolliset mekanismit voivat korreloida PKC ja MAPK signaalitransduktioreaktioteiden.
Avainsanat
Electroacupuncture Zusanli mahalaukun motiliteetin PKC MAPK tausta
mahan on yksi kriittisimmistä fysiologisia toimintoja ihmisen suolistossa. Ilman koordinoitua motiliteettia, ruoansulatusta ja imeytymistä ravinnosta ravintoaineita ei voi tapahtua. Sääntely suoliston toimintaa on monimutkainen ja siihen liittyy supistuminen sileän lihaksen soluissa (SMC). Supistuminen SMC säätelee pääasiassa ohimeneviä muutoksia solunsisäisessä Ca 2 + pitoisuus [1]. On olemassa kaksi suurta väyliä mukana tässä mekanismia, nimittäin RhoA-Rho kinaasireittiä ja proteiinikinaasi C (PKC) reitin [2]. Calponin (CAP), vakiintunut in vitro
substraatti signalointia proteiinien PKC [3], suoraan vuorovaikutuksessa PKC [4]. Caldesmon (CAD) on aktiinin ja myosiinin sitovaa proteiinia, joka esiintyy kaksi isoformia, jotka syntyvät vaihtoehtoisella silmukoinnilla [5]. On kertynyt näyttöä toissijaisen väylän säätelyssä sileän lihaksen supistumisen, joka on PKC riippuvainen, ja tämä reitti voi välittyä korkki ja CAD aktivointi [6-9]. -Mitogeeniaktivoidun proteiinikinaasin (MAPK) signalointireiteissä on myös liitetty SMC supistuminen [10]. On olemassa kolme suurta ryhmää selvästi säännelty MAPK jotka johtavat muuttuneeseen geenin ilmentymisen. Solunulkoisen signaalin liittyvien kinaasien 1 ja 2 (ERK1 /2), C-Jun terminaalisen kinaasin (JNK) ja p38 MAPK tiedetään olevan tärkeitä rooleja solunsisäisen signaloinnin vaste solunulkoiseen ärsykkeille [11]. Lisäksi Korkki voidaan helpottaa ERK-riippuvainen signalointi, ovat siten merkittävä rooli sääntelyn SMC supistuminen [12].
Akupunktio, jota on käytetty tuhansia vuosia Kiinassa, käytetään yhä enemmän kaikkialla maailmassa hallintaan erilaisten sairauksien [13]. Uskotaan, että stimulaation acupoint voi vaikuttaa suoraan eri elimissä ja saavuttaa vaikutus akupunktion hoidon. EA on yhdistetty menettely, joka stimuloi acupoint kanssa sähköstimulaation sijasta käsin manipulointia neuloja. Lukuisat tutkimukset ovat arvioineet vaikutuksia ja mekanismeja EA mahan [14-20]. Todisteiden pohjalta Näistä tutkimuksista, EA stimulaatio on osoitettu olevan suuri terapeuttinen potentiaali maha-suolikanavan toiminnan häiriöt. Zusanli (ST.36) on yksi yleisimmin käytetty acupoints ruoansulatuskanavan sairaudet. Teorian mukaan perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM), on suhde ST.36 ja toimintaa ruoansulatuskanavassa. Tähän mennessä ei kuitenkaan ole todisteita on selvittänyt tarkka mekanismeja, jotka auttavat vaikutuksia EA stimulaatiota.
Siksi tarkastelemalla morfologisia muutoksia ja myoelectrical toimintaa, tässä tutkimuksessa pyrittiin arvioimaan säätelevä vaikutus EA stimulaation klo ST.36 acupoint mahalaukun motiliteetin rotilla ja tutkia sen mahdollisten mekanismien. Tool menetelmät
Eläimet ja reagenssit
Kolmekymmentä aikuista Sprague-Dawley (SD) rottia, jotka painoivat 180-220 g, pidettiin 12-h valo- pimeä sykli 25 ± 2 ° C ja 60% kosteudessa vapaasti ruokaa ja vettä. SD-rottia hankittiin Experimental Animal Center of neljännen Military Medical University. Kaikki eläinkokeet suoritettiin mukaisesti institutionaalisten ohjeiden neljännen Military Medical University hoitoon ja koe-eläinten käytön. Hyväksyminen tutkimussuunnitelman saatiin eettinen komitea eläinten Research, neljäs Military Medical University, Kiina. Eläimet jaettiin satunnaisesti kolmeen ryhmään: ST.36 ryhmä, ei-acupoint ryhmä, ja kontrolliryhmän.
Kollagenaasi II, trypsiini-inhibiittori, ditiotreitoli alkoholi sokeri, naudan seerumialbumiini, kalsium-vapaata fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS ), glutaraldehydiä, ja trypaanisini ostettiin Sigma Chemical Co: Kokonais-RNA Extraction Kit, SuperScript III käänteistranskriptaasia, ja SuperArray PCR Master Mix ostettiin Invitrogen Co. anti-vuohen anti-hiiri, ja anti-kani-vasta-aineet olivat ostettiin Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co
EA stimulaatioissa
ST.36 sijaitsi noin 5 mm lateraalisesti pohjeluu takaraajojen, kun taas ei-acupoint sijaitsi takajalat jalka vieressä ST.36 avoin 5 mm [21]. Neulat lisätään 5 mm syvälle lihakseen kerrokseen valitun acupoint ja stimuloitiin EA 2 Hz ja 2 V käyttäen sähköstimulaattori (G6805-2A; Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Shanghai, Kiina). Jokainen stimulaatio kesti 20 min jatkuvassa tilassa, ja stimulaatio suoritettiin 1 kerran /vrk 5 päivän ajan. Rottia kontrolliryhmässä toimitettiin liikkumattomuudesta yksin ilman stimulaatiota 30 minuuttia samaan aikaan joka päivä.
Elektrogastrografialla
Elektrogastrografialla sovellettiin käyttäen Monikanavainen Fysiologinen Signal Acquisition and Processing System (tila RM-6280), kun viimeinen stimulaatio viidentenä päivänä. Sen jälkeen 12 tunnin nopea (vapaa pääsy veteen) ja 6 h ilman juomaa, rotat nukutettiin intraperitoneaalisesti (i.p.) 10% uretaania annoksella 1 g /kg kehon ja sitten immobilisoidaan. Ensimmäisen elektrodin kiinnitettiin hännän, ja ohjaavat elektrodit implan- herakalvon pinnalla mahalaukussa 0,3-0,5 cm pylorus. Elektrodit peitettiin 37 ° C normaalia suolaliuosta sideharso, liittyy lanka. Kokeelliset parametrit olivat seuraavat: taajuus 400 Hz, suodatin 10 Hz, skannausnopeus 2 s /jako, herkkyys 25 mV, aikavakio tasavirtaa, ja oskilloskoopin tallennusaika 1 h [18].
Reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) analyysi
Kun viimeinen stimulaation EA, rotat tapettiin. Kontrolliryhmässä ja ei-acupoint ryhmä, yksi rotan valittiin satunnaisesti vastaavasti. EA ryhmä, ensin jaettu sen EA edistämiseen ryhmä ja EA estämällä ryhmän mukaan tulokset elektrogastrografia. Ja sitten rotat valittiin satunnaisesti molemmissa ryhmissä. Mahalaukkua kudokset (alkaen mahanportin 0,8-1 cm) leikattiin paloiksi, jotka olivat noin 0,3 cm x 0,5 cm kokoinen ja välittömästi laitettiin -70 ° C nestemäistä typpeä. Yhteensä RNA-näytteet uutettiin käyttäen TRIZOL eri ryhmien mukaan valmistajan ohjeiden. RNA laatu arvioitiin spektrofotometrisesti pohjalta A260 /A280-suhde. RNA-näytteet tarkastettiin eheyden 18S ja 28S RNA geelielektroforeesilla. Kokonais-RNA (1,5 pg) käytettiin tuottamaan ensimmäisen juosteen cDNA: n kanssa SuperScript III käänteistranskriptaasia (1 ui) eristetystä RNA: sta. Reaaliaikaisen PCR-reaktiot valmistettiin käyttämällä SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112), joka sisältää PKC ja MAPK signaalireitin geenejä. Laimennettu cDNA (102 ui) lisättiin kuhunkin reikään vastaavat PCR-siru. Sitten PCR-sirut laitettiin reaaliaikainen PCR-instrumentti, että PCR-reaktiossa. Pyöräily olosuhteet olivat seuraavat: 95 ° C: ssa 10 minuutin ajan, 60 ° C: ssa 15 s, ja 60 ° C 1 min (40 sykliä). Erot geenien ilmentyminen, ilmaistuna fold-muutoksia, laskettiin käyttäen 2 -ΔΔCt menetelmällä.
Western blot-CAD ja CaP
CAD ja CaP-proteiinin tasot havaittiin Western-blottauksella. Hoidon jälkeen EA, rotat tapettiin. Rotat kiinnitettiin sitten, jonka jälkeen viilto vatsan ihon ja vatsakalvon. Sisälmykset olivat altistuneet, ja keskeinen 1/3 mahalaukun runko leikattiin pieniksi paloiksi, jotka olivat noin 0,3 cm x 0,5 cm kokoisia. Kappaleet välittömästi varastoitiin -70 ° C: ssa nestemäisessä typessä. Lyhyesti, solu-uutteita (30 ug) ylemmästä 1/3 keskellä mahalaukun rungon erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) ja sitten siirrettiin nitroselluloosamembraaneille. Suodattimet blokattiin Tris-puskuroidulla suolaliuoksella (TBS) /5% maitoa, jota seurasi inkubointi polyklonaalisella vasta-aineita CAD (1: 3000 laimennos), suojus (1: 3000 laimennos), ja β-aktiini (1: 10000). Sen jälkeen, kun kalvot pestiin, niitä inkuboitiin johdetun peroksidaasikonjugoidulla vasta-aineita laimennettiin 1: 5000 TBS: llä, jossa oli 0,01% Tween 20-vasta-aineen havaitsemisen järjestelmää on käytetty, ja kalvot altistettiin röntgenfilmille mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.
Seerumin valmisteen
seerumi valmistettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu muutoksia [22]. Kun viimeinen stimulaation EA, kaikki rotat tapettiin. Seuraavaksi 6 ml verta otettiin kaulavaltimon kunkin rotan. Veri pidettiin vielä 1 h, ja sentrifugoitiin sitten 3000 rpm: llä 15 minuutin ajan. Seerumi kerättiin, bakteerien poistamiseksi, ja 1,5 ml pakattiin EP putki, joka säilytettiin -70 ° C: ssa nestemäisessä typessä.
Vaikutukset EA seerumin SMC supistuvuuteen
viisi normaalin SD-rottia oli nukutetun ip 10% uretaania annoksella 1 g /kg kehon painoa. Oltuaan nukutetaan, vatsan iho ja vatsakalvon oli viiltää, ja sisälmykset olivat altistuneet. Koko vatsa leikattiin pois, ja mahan antrum kudokset eristettiin ja pantiin välittömästi happea tyydyttyneitä PBS penisilliiniä (100 U /ml) ja streptomysiiniä (100 ug /ml) 4 ° C: ssa. Oltuaan huuhdellaan, kudokset siirrettiin hapen tyydyttyneitä HEPES, levittää ja kiinnitetty silikageelilevyllä hieno-neula. Limakalvon kerros oli huolellisesti leikattu pois, paljastaen pyöreä limakalvon, joka on leikattu osaksi 9-10 lihaksen liuskat (1 mm x 4 mm), asetettiin Tyroden liuokseen, ja pidettiin 4 ° C: ssa jääkaapissa noin 15 min. Lihaksen nauhat digestoitiin 1% kollagenaasia tyyppiä II, 0,05% trypsiini-inhibiittori, 0,05% ditiotreitolia alkoholia sokeria, ja 0,2% naudan seerumin albumiinia entsyymi vesihauteessa 25 minuutin ajan 36 ° C: ssa. Digestion jälkeen seos huuhdeltiin entsyymi-free HEPES, inkuboitiin 30 minuutin ajan, ja suodatettiin 200 mesh kerätä vapaaseen yhden mahalaukun SMC. Solujen elinkelpoisuus mitattiin trypaanisinisen testi. Elävät solut olivat yli 95%, jonka tiheys on 10 6 solua /ml.
Eristetty SMC jaettiin satunnaisesti normaali seerumin ryhmä, ST.36 seerumin ryhmä, ja ei-acupoint seerumin ryhmä. SMC suspensiot (50 ui), jonka tiheys on 1,0 x 10 6 solua /ml pantiin 96-kuoppaisille levyille. Kukin seeruminäyte inaktivoitiin 30 minuutin ajan 56 ° C vesihauteessa, ja sitten laimennettiin 1: 2 HEPES. Seerumia (50 ui) peräisin eri ryhmien lisättiin SMC, sekoitetaan pipetillä 30 s, ja kiinnitettiin 30 ui 2,5% glutaarialdehydiä. Solun pituus arvioitiin kanssa tietokonetomografia Video Processing System (DP2-BSW), jota käytettiin laskettaessa prosentuaalinen kutistuminen. Solu kutistuminen prosentteina = (solujen pituus ennen hoitoa - cell pituus käsittelyn jälkeen) /kenno pituus ennen hoidon x 100%.
Tilastollinen analyysi
Tiedot ilmaistiin keskiarvona ± S.D. Yksisuuntainen varianssianalyysi, jota seuraa Bonferronin monivertailutesti levitettiin SPSS 10.0 ohjelmistolla. ACt-arvoja reaaliaikaista PCR, joita käytettiin laskettaessa kertamuutosta eroja (ilmaistaan ​​tässä prosentteina vertailusta), käytettiin myös tilastollista analyysiä. A s
-arvo < 0,05 tai kertamuutosta > 2 määriteltiin tilastollisesti merkitsevä kaikissa analyyseissä.
Tulokset
Vaikutukset EA mahan
EA ST.36 tuotetaan merkittäviä muutoksia itseisarvon keskiarvo huipun amplitudi ja taajuus kontrolliin verrattuna tai non-acupoint ryhmät (P
< 0,01). Sen sijaan, EA ei-acupoint ei aiheuttanut merkittäviä muutoksia mahan verrattuna kontrolliryhmään (Additional tiedosto 1: Kuva S1). Kahdenlaisia ​​mahalaukun moottorin kuvioita havaittiin varten ST.36 ryhmän 10 rotilla testattu keskimääräinen huippu: rotat, joilla on positiivinen keskimääräinen huippu arvioitiin edistämiseen malli, kun taas rotat negatiivisin keskimääräinen huippu arvosteltiin edistämiseen kuvio. Tulokset osoittivat 5 (50,0%) rotilla osoitti ST.36 edistää kuvio ja 5 (50,0%) rotilla osoitti ST.36 estävä kuvio. Rotilla kanssa ST.36 edistää malli, keskimääräinen huippu amplitudi ja taajuus arvot olivat 47,13 ± 0,44 ja 0,19 ± 0,06, tässä järjestyksessä. Rotilla kanssa ST.36 estävä kuvio, keskimääräinen huippu amplitudi ja taajuus arvot olivat -43,41 ± 0,62 ja 0,17 ± 0,03, vastaavasti (Additional tiedosto 2: Taulukko S1).
Vaikutukset EA PKC ja MAPK signalointireitteihin
EA ST.36 merkittävästi säädellä ilmentymistä joidenkin geenien PKC ja MAPK signalointireitteihin. Taulukossa 1 luetellaan tulokset microarray analyysin ST.36 edistää ryhmä (verrattuna kontrolliryhmään). Ilmentyminen monien geenien lisättiin sen jälkeen, kun EA stimulaation, kuten ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA, ja PTGS2. Muut geenit osoittivat vähentynyttä ilmentymistä jälkeen EA stimulaation, kuten IL1R2. Taulukossa 2 luetellaan tulokset microarray analyysin ST.36 estävä ryhmä (verrattuna kontrolliryhmään). Geeniekspressiota IL1R2 ja MMP-9 laskivat sen jälkeen EA stimulation.Table 1 Gene muutos vertaamalla EA edistää ryhmä kontrolliryhmään
Signal reitin
Gene
sivut
EA /ohjaus (fold change)
EA /ohjaus (Taita ylös- tai alaspäin-asetus)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Fold-muutos (2-ΔΔCt) on normalisoitu geenin ilmentymistä (2-ACt) testinäytteessä jaettuna normalisoitu geenin ilmentymistä (2-ACt) kontrollinäytteessä. Fold-asetus edustaa kertamuutosta johtaa biologisesti mielekkäällä tavalla. Fold-muutos arvo on suurempi kuin yksi osoittaa positiiviseen tai ylössäätö, ja kansi-asetus on sama kuin kertamuutosta. Fold-muutos arvot alle osoittaa kielteistä tai down-regulation, ja kansi-asetus on negatiivinen käänteistä kertamuutosta.
Taulukko 2 Gene muutos vertaamalla AE estävää ryhmää kontrolliryhmään
Signal polku

Gene
Sites
EA /ohjaus (kertaluokkamuutos)
EA /ohjaus (Taita ylä- tai down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Fold-muutos (2-ΔΔCt) on normalisoitu geenien ilmentymisen (2-ACt) testinäytteessä jaettuna normalisoitu geenien ilmentyminen (2-ACt) kontrolliryhmässä näytteessä. Fold-asetus edustaa kertamuutosta johtaa biologisesti mielekkäällä tavalla. kertamuutosta arvo on suurempi kuin yksi osoittaa positiiviseen tai ylössäätö, ja kansi-asetus on sama kuin kertamuutosta. kertamuutosta arvojen alle osoittaa kielteistä tai down-regulation, ja kansi -regulation on negatiivinen käänteinen kertamuutoksen.
taulukossa 3 luetellaan tulokset microarray analyysin ST.36 edistää ryhmä (verrattuna ei-acupoint ryhmä). ilmentyminen COL1A1-geenin lisääntynyt sen jälkeen, kun EA stimulaatiota. ilmentyminen IL1R2 ja SERPINE1 geenien pieneni, kun EA stimulaation. taulukossa 4 tulokset microarray analyysin ST.36 estävä ryhmä (verrattuna ei-acupoint ryhmä). Monet geenit osoitti väheni ilmaisun jälkeen EA stimulaation, kuten ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, ja PTGS2 geenejä. Ilmaus COL1A1-geenin lisääntynyt sen jälkeen, kun EA stimulation.Table 3 Gene muutos vertaamalla EA edistää ryhmä ei-acupoint ryhmä
Signal reitin
Gene
Sites
EA /Non-acupoint (fold change)
EA /Non-acupoint (Taita ylä- tai down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Fold-muutos (2-ΔΔCt) on normalisoitu geenien ilmentymisen (2-ACt) testinäytteessä jaettuna normalisoitu geenien ilmentyminen (2-ACt) kontrolliryhmässä näytteessä. Fold-asetus edustaa kertamuutosta johtaa biologisesti mielekkäällä tavalla. kertamuutosta arvo on suurempi kuin yksi osoittaa positiiviseen tai ylössäätö, ja kansi-asetus on sama kuin kertamuutosta. kertamuutosta arvojen alle osoittaa kielteistä tai down-regulation, ja kansi -regulation on negatiivinen käänteistä kertamuutosta.
Taulukko 4 Gene muutos vertaamalla AE estävää ryhmä ei-acupoint ryhmä
Signal polku
Gene
Sites

EA /Non-acupoint (kertaluokkamuutos)
EA /Non-acupoint (Taita ylös- tai alaspäin-asetus)
MAPK
MAPK6 (ERK3) B D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3) B D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK) B D08
0,39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1) B G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Fold-muutos (2-ΔΔCt) on normalisoitu geenien ilmentymisen (2-ACt) testinäytteessä jaettuna normalisoitu geenien ilmentyminen (2-ACt) kontrolliryhmässä näytteessä. Fold-asetus edustaa kertamuutosta johtaa biologisesti mielekkäällä tavalla. kertamuutosta arvo on suurempi kuin yksi osoittaa positiiviseen tai ylössäätö, ja kansi-asetus on sama kuin kertamuutosta. kertamuutosta arvojen alle osoittaa kielteistä tai down-regulation, ja kansi -regulation on negatiivinen käänteistä kertamuutosta.
vaikutukset EA CAD ja korkki proteiinin ilmentyminen
stimulaatio EA lisäsi merkittävästi CAD ja korkki proteiinin ilmentymistä ST.36 estämällä ryhmässä verrattuna ei-acupoint ryhmä, kun taas stimulaatio EA merkittävästi vähentynyt CAD ja korkki proteiinin ilmentymistä ST.36 edistämisessä ryhmässä verrattuna ei-acupoint ryhmä (kuvio 1A, B, C, D). Kuvio 1 Effects of EA stimulaation Caldesmon (CAD) ja Calponin (CAP) proteiinin tasot. A. ilmentäminen Caldesmon proteiinin tasot Western-blottauksella. B. Densitometri analyysi Caldesmon proteiinin tasot normalisoidaan β-aktiini; C. ilmentäminen Calponin proteiinin tasot Western-blottauksella; D Densitometri analyysi Calponin proteiinin tasot normalisoidaan β-aktiini. CAD: Caldesmon; CaP: calponin; 1: ei-acupoint ryhmä; 2-4: EA estävä ryhmä; 5-7: EA edistäminen ryhmä. * P < 0.05 compard ei-acupoint ryhmä.
Vaikutukset EA seerumin SMC kontraktiliteettiin
Kuten esitetään Additional tiedostoon 3: Kuva S2 ja Additional tiedosto 4: Taulukko S2, solumorfologiaan havaittiin valomikroskoopilla hoidon jälkeen eri tyyppisiä seerumin. Ei ollut eroja solujen pituus ennen kuin lisättiin seerumia (p > 0,05). ST.36 seerumissa kasvoi SMC supistumista (60,22 ± 3,84 um) verrattuna kontrolliseerumin (96,02 ± 6,24 um) tai ei-acupoint seerumia (97,33 ± 6,97 um). Supistuminen prosenttiosuus oli 41% stimulaation jälkeen ST.36 seerumi, kun taas supistuminen prosenttiosuudet olivat 7% ja 10% stimulaation jälkeen joko ei-acupoint seerumista tai kontrolliseerumia, vastaavasti.
Keskustelu
Tämä tutkimus osoitti että EA stimulaatiota ST.36 oli sääntelyä vaikutus mahan rotilla oli joko stimuloivia tai inhiboivia. Edistävä vaikutus EA voi toimia läpi PKC ja MAPK signalointireittejä.
Vaikutukset EA mahan on tutkittu laajasti sekä eläimillä että ihmisillä johtuen saatavuudesta elektrogastrografia. On tunnettua, että mahalaukun myoelectrical toiminta muodostuu hitaasti aaltojen ja piikkejä. Spikes liittyvät suoraan ulkonäkö supistukset. Hidas aallot eivät herättää ruoansulatuskanavan contractility, mutta ne määrittävät maksimitaajuus mahalaukun supistukset.
Useimmin käytetty acupoint hoidettaessa maha-suolikanavan sairauksia on ST.36. On yleisesti uskotaan, että akupunktio voi käyttää edistämään ja estäviä vaikutuksia ruoansulatuskanavan motiliteettiin riippuen stimuloitujen acupoint. Ihmisillä on osoitettu, että EA stimulaatiota ST.36 oli kaksi vaikutuksia mahalaukun peristaltiikkaa, jotka ovat joko helpottavan tai estävän [15, 23]. Vaikka potilaat kärsivät ruoansulatuskanavan sairauksien ovat hyötyneet soveltamisesta akupunktio at ST.36, mutta tarkka molekyylitason mekanismit ovat vielä epäselviä. Koirilla, EA ST.36 lisäsi säännöllisyys mahalaukun hitaan aaltojen [24, 25]. Tajuissaan rotilla, EA stimulaatiota ST.36 aiheuttama kaksoistehosteita, jotka olivat joko helpottavan tai estävän, on mahan [26, 27]. Lisäksi Tutkimus osoitti, että stimuloiva vaikutus välittyy kolinergisen polkuja, kun taas estävä vaikutus on riippumaton sympaattisen reitin [28]. Yleinen teoria akupunktio lääketieteen lähtökohtana on käsite Yin ja Yang, ja akupunktio uskotaan muuttaa epätasapainossa Yin ja Yang. Vaikutukset akupunktion tasapainottamiseen Yin ja Yang voidaan välittyvät vuorovaikutusta neurotransmissiota GABA ja glutamaatti aivorungon.
Nykyisessä paperi, EA stimulaatiota ST.36 oli tehokas säätämään mahan, kuten on osoitettu jonka merkittävä kasvu huippu amplitudi ja taajuus. Lisäksi, ei ole tällaisen vasteen, kun sama stimulaatio suoritettiin ei-acupoint oli osoittaa spesifisyyttä tämän vaikutuksen. Mukaan huippuun amplitudi ja taajuus, ST.36 ryhmä jaettiin edelleen edistää ja estävä kuvioita, koska EA osoitti kaksinainen vaikutus. Tutkimaan edelleen mekanismeja, joilla EA säätelee mahan, me eristetty SMC mahasta ja havaittu vaikutus ST.36 seerumin SMC kontraktiliteettiin käyttäen serologisen farmakologisia testausmenetelmiä. Tulokset osoittivat, että ST.36 seerumin huomattavasti SMC contractility; kun taas tuottamat vaikutukset normaaliin tai ei-acupoint seerumin eivät olleet ilmeisiä.
Viimeaikaiset tutkimukset ehdotti, että vaikutukset EA stimulaation välittyvät opioidi-järjestelmän [29] tai sen stimuloiva vaikutus vagaalisia toimintaa [30]; kuitenkin, tarkka mekanismeja, joilla EA vaikuttaa mahalaukun motiliteetin ei täysin ymmärretä. Edelliset havainnot osoittivat myös, että PKC kohoamiseen stimulaation jälkeen EA [31]. Siksi valitsimme PKC ja MAPK väyliä kohteina välittävä stimuloivia vaikutuksia EA mahalaukun liikkuvuutta. Lisäksi korkki ja CAD voi olla rooli säätelyssä suoliston toimintaa aikana fysiologisia ja patologisia muutoksia. Säätely ylöspäin korkki ja CAD ilmaisu estyy suoliston toimintaa, ja alas-säätely korkki ja CAD ilmaisun edistää suoliston toimintaa [32, 33]. ERK1 /2, jäsen MAPK perhe, on osoitettu olevan merkittävä rooli sääntelyn sileän lihaksen supistumisen [34]. Saamiemme microarray tulosten edistäminen mahan voi korreloida säätely ylöspäin MAPK6 (ERK3), MAPK13, ja PTGS2 geenien ilmentyminen, ja alas-säätely COL1A1 geenin ilmentymisen. Esto mahalaukun motiliteetin voi korreloida alas-säätely IL1R2 ja MMP-9-geenin ilmentymisen. Western blotit osoittivat säätely ylöspäin CAD ja korkki proteiinin ilmentyminen estyy mahan, kun taas alas-säätely CAD ja korkki proteiinin ilmentyminen edisti mahan. Nämä tulokset osoittavat, että CAD ja korkki voi olla rooli säätelyssä suoliston toimintaa aikana fysiologisia ja patologisia muutoksia.
Oli joitakin rajoituksia esillä olevassa tutkimuksessa, joka pitäisi mainita. Ensinnäkin, emme tutkia, inhibiittorit PKC ja MAPK voivat vaikuttaa tai estää sääntelyn vaikutusta EA stimulaatiota ST.36 mahalaukun liikkuvuutta. Lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään vaikutteita PKC ja MAPK estäjiä. Toiseksi, jatkotutkimukset keskittyy täysin ymmärtämään roolit jokaisen muutoksen geenien ilmentyminen, kun sääntelyä mahalaukun liikkuvuutta.
Johtopäätökset
Yhteenvetona havaintomme osoittavat, että EA stimulaatiota ST.36 säädellään mahan. EA stimulaatiota ST.36 kohdistuu dual vaikutukset mahan, jotka olivat joko stimuloivia tai inhiboivia. Lisäksi sääntely mahan voi korreloida PKC ja MAPK signaalintransduktioreitteihin.
Huomautuksia
Qi Yang, Yan-Dong Xie vaikuttanut yhtä tähän työhön.
Julistukset
Kiitokset
tutkimuksen tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (nro 30801487).
Elektroninen oheismateriaali
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Additional tiedosto 1: Kuva S1: Effects of EA stimulaation mahan. Mahalaukun motiliteetin mitattiin elektrogastrografia. A. Ohjaus, B. ST.36, C. Non-acupoint. Stimulaatio EA ST.36 lisäsivät keskimääräistä huippuun amplitudi ja taajuus. Mahalaukun aallot osoitti dual muutoksia ST.36 ryhmässä verrattuna kontrolliin tai ei-acupoint ryhmä. Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± S.D. (N
= 10). * P
< 0,05, ** p
< 0,01 vs
. kontrolliryhmään. #p
< 0,05, ## s
< 0,01 vs.
ei acupoint ryhmä. (DOC 1 Mt) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Muita tiedosto 2: Taulukko S1: Effects of EA mahalaukun myoelectrical toimintaa. ST.36 ryhmä jaettiin edelleen EA edistämiseen ja EA estämällä ryhmiin mahalaukun aaltoja. Arvot ilmaistaan ​​keskiarvona ± S.D (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Muita tiedosto 3: Kuva S2: Effects of EA stimulaation mahalaukun SMC kontraktiliteettiin. Solujen morfologia havaittiin valomikroskoopilla (x 200 suurennos). Pituus solun ja supistuminen prosenttiosuus mitattiin Computer Image Analysis System. O. SMC; A. SMC + kontrolliseerumi; B. SMC + ST.36 seerumi; C. SMC + ei-acupoint seerumia. (DOC 1 Mt) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Muita tiedosto 4: Taulukko S2: Vaikutukset seerumin SMC kontraktiliteettiin. Arvioinnin tekee Tietokonetomografia Video Processing System, Zusanli seerumin aiheutti merkittäviä contractility in SMC. Tulokset ilmaistaan ​​keskiarvona ± S.D (n
= 10). * P
< 0,05 ** p
< 0,01 vs.
kontrolliseerumin ryhmä. #p
< 0,05, ## s
< 0,01 vs.
ei-acupoint seerumia. (DOC 28 KB) Tekijät "alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 Kilpailevat edut
Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.
Tekijät osuudet
QY suorittaa molekyylitasolla geneettiset tutkimukset, osallistui sekvenssirinnastukseen ja laatinut käsikirjoitus. YDX, MXZ, BH suorittaa immunomäärityksissä. CZ, HYLi, RZ osallistui sekvenssin kohdistuksen. MQ, YXH osallistui tutkimuksen suunnittelu ja suorittaa tilastollisen analyysin. JJW raskaaksi tutkimuksen ja osallistui sen suunnittelu ja koordinointi ja auttoi laatimaan käsikirjoituksen. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Yksivaiheinen kirurginen korjaus hengitysteiden mahafistula jälkeen esophagectomy
• Tutkimus antimikrobisen toiminnan, välitön myrkyllisyys ja cytoprotective vaikutus polyherbal otteen rotan etanoli-HCl mahahaava model