Efecto de la estimulación del punto de acupuntura electroacupuntura en Zusanli (ST36) sobre la motilidad gástrica: posible a través de PKC y MAPK vías de transducción de señales

Efecto de la estimulación del punto de acupuntura electroacupuntura en Zusanli (ST36) sobre la motilidad gástrica: posible a través de PKC y MAPK vías de transducción de señales
Resumen Antecedentes

estimulación electroacupuntura (EA) se ha demostrado que tiene un gran potencial terapéutico para el tratamiento gastrointestinal trastornos de la motilidad. Sin embargo, no hay evidencia ha aclarado los mecanismos que contribuyen a los efectos de la estimulación de EA en el punto de acupuntura Zusanli (ST.36). Este estudio fue diseñado para investigar el efecto regulador de la estimulación de EA en la ST.36 sobre la motilidad gástrica y para explorar sus posibles mecanismos
Métodos
Treinta ratas Sprague-Dawley fueron divididos aleatoriamente en tres grupos:. ST.36 de la grupo, el grupo sin fines de punto de acupuntura, y el grupo de control. estimulación EA se fijó en 2 Hz, modo continuo, y 1 V por 30 min. La amplitud y la frecuencia de pico promedio de la motilidad gástrica se midió por electrogastrografía. La proteína quinasa C (PKC) y la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK) vías de señalización se evaluaron mediante reacciones en cadena de la polimerasa en tiempo real. Caldesmón (CAD) y la expresión de proteínas calponin (PAC) en el antro gástrico se detectó en transferencias Western. Un sistema de procesamiento de vídeo computarizada se utilizó para evaluar los cambios morfológicos en las células musculares lisas (CML) del antro gástrico.
Resultados
estimulación EA en ST.36 tuvieron un doble efecto sobre la frecuencia y la amplitud de pico promedio. Además, la estimulación EA en ST.36 regula la expresión de algunos genes en las vías de señalización de PKC y MAPK, y regula la expresión de la CAD y proteínas Cap. suero EA indujo SMC contractilidad. Promoción de la motilidad gástrica puede correlacionar con la sobre regulación de MAPK6 (ERK3), MAPK13, y ptgs2 (PTGS2) la expresión génica, y la baja regulación del colágeno, alfa 1 gen de tipo I, (COL1A1) y CAD y la expresión de la proteína de la PAC. La inhibición de la motilidad gástrica puede correlacionar con la regulación a la baja del tipo de receptor de interleucina-1 2 (IL1R2) y 9 de metaloproteinasas de la matriz (genes MMP9), y sobre regulación de la EAC y el CaP expresión de la proteína
. Conclusiones
EA estimulación a ST.36 regula la motilidad gástrica, y los efectos fueron tanto promoviendo e inhibiendo en ratas. Los posibles mecanismos se pueden correlacionar con las vías de transducción de señal de la PKC y MAPK.
Palabras clave
electroacupuntura Zusanli la motilidad gástrica PKC MAPK Antecedentes
motilidad gástrica es una de las funciones fisiológicas más críticos del intestino humano. Sin motilidad coordinada, la digestión y absorción de nutrientes de la dieta no pueden tener lugar. La regulación de la motilidad gastrointestinal es complicado e implica la contracción de células de músculo liso (SMCs). La contracción de las SMC está regulado principalmente por cambios transitorios en la intracelular de Ca 2 + concentración [1]. Hay dos vías principales implicadas en este mecanismo, a saber, la ruta de la quinasa Rho-RhoA y de la vía de la proteína quinasa C (PKC) [2]. Calponin (CaP), un sustrato vitro
bien establecida en para la señalización de proteínas por PKC [3], interactúa directamente con PKC [4]. Caldesmon (CAD) es una proteína de unión a la actina y la miosina que existe en dos isoformas, que se generan por splicing alternativo [5]. Hay más pruebas de una vía secundaria en la regulación de la contracción del músculo liso que es dependiente de la PKC, y esta vía puede ser mediado por CAP y la activación CaD [6-9]. vías activadas por mitógenos proteína quinasa (MAPK) de señalización también se han implicado en SMC contracción [10]. Hay tres grupos principales de MAPKs claramente reguladas que conducen a la expresión de genes alterados. Las quinasas relacionadas señal extracelular 1 y 2 (ERK1 /2), la quinasa c-Jun terminal (JNK) y la MAPK p38 se sabe que juegan un papel importante en la respuesta de señalización intracelular a los estímulos extracelulares [11]. Además, CAP puede facilitar la señalización de ERK-dependiente, desempeñando así un papel importante en la regulación de la contracción de SMC [12].
Acupuntura, que ha sido utilizado durante miles de años en China, se utiliza cada vez más en todo el mundo para la gestión de diversas enfermedades [13]. Se cree que la estimulación de un punto de acupuntura puede afectar directamente a los órganos y lograr el efecto de la terapia de acupuntura. EA es un procedimiento mixto que estimula un punto de acupuntura con estimulación eléctrica en lugar de con las manipulaciones manuales de agujas. Numerosos estudios han evaluado los efectos y mecanismos de EA sobre la motilidad gástrica [14-20]. Basado en la evidencia de estos estudios, la estimulación EA se ha demostrado que tiene un gran potencial terapéutico para el tratamiento de trastornos de motilidad gastrointestinal. El Zusanli (ST.36) es uno de los puntos de acupuntura más comúnmente utilizados para las enfermedades gastrointestinales. De acuerdo con la teoría de la Medicina Tradicional China (MTC), existe una relación entre ST.36 y la función del tracto gastrointestinal. Hasta la fecha, sin embargo, no hay evidencia ha aclarado los mecanismos exactos que contribuyen a los efectos de la estimulación de EA.
Por lo tanto, mediante el examen de los cambios morfológicos y la actividad mioeléctrica, el presente estudio tuvo como objetivo evaluar el efecto regulador de la estimulación de EA en la ST.36 punto de acupuntura sobre la motilidad gástrica en ratas y explorar sus posibles mecanismos.
Métodos
Animales y reactivos
Treinta ratas Sprague-Dawley macho adultas (SD) con un peso de 180-220 g se mantuvieron en un 12 horas de luz- ciclo de oscuridad a 25 ± 2 ° C y 60% de humedad con acceso libre a comida y agua. ratas SD se adquirieron desde el Centro de Experimentación Animal de la Cuarta Universidad Médica Militar. Todos los experimentos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales de la Cuarta Universidad Médica Militar para el cuidado y uso de animales de laboratorio. La aprobación del protocolo del estudio se obtuvo del Comité Ético de Investigación Animal, Cuarta Universidad Médica Militar, China. Los animales fueron asignados al azar en tres grupos:. ST.36 del grupo, el grupo no del punto de acupuntura, y el grupo control
colagenasa II, inhibidores de tripsina, ditiotreitol azúcar en alcohol, albúmina de suero bovino, sin calcio tampón fosfato salino (PBS ), glutaraldehído, y azul de tripano se adquirieron de Sigma Chemical Co. Kit El ARN total Extracción, superíndice III transcriptasa inversa, y SuperArray PCR Master Mix se compraron de Invitrogen Co. anti-cabra, anti-ratón y anti-conejo de anticuerpos se adquirido de Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co.
EA procedimiento de estimulación Francia el ST.36 se encuentra a unos 5 mm lateral a la fíbula de las extremidades traseras, mientras que el punto de acupuntura no se encuentra en la pata trasera al lado de la ST.36 abierto 5 mm [21]. Las agujas se insertan 5 mm de profundidad en la capa muscular del punto de acupuntura seleccionados y fueron estimuladas por EA a 2 Hz y 2 V usando un estimulador eléctrico (G6805-2A; Shanghai Huayi instrumento médico fábrica, Shanghai, China). Cada estimulación duró 20 min en modo continuo, y la estimulación se llevó a cabo 1 hora /día durante 5 días. Las ratas del grupo de control fueron sometidos a inmovilización solo sin estimulación durante 30 minutos a la misma hora cada día.
Electrogastrografía
Electrogastrografía se aplicó usando la señal multicanal fisiológica Sistema de Adquisición y Procesamiento (modo RM-6280) después de la última estimulación en el quinto día. Después de una 12-h rápido (con acceso libre al agua) y 6 h sin bebida, las ratas se anestesiaron por vía intraperitoneal (i.p.) con 10% de uretano a una dosis de 1 g /kg de y luego inmovilizados. El primer electrodo se fija a la cola, y los electrodos guiadas se implantaron en la superficie serosa del estómago 0,3 - 0,5 cm por encima del píloro. Los electrodos se cubrieron con 37 ° C gasa solución salina normal, conectados con alambre. Los parámetros experimentales utilizados fueron los siguientes:. Frecuencia 400 Hz, filtro de 10 Hz, la velocidad de exploración de 2 s /división, sensibilidad 25 mV, el tiempo de corriente continua constante, y tiempo de grabación osciloscopio 1 h [18]
en tiempo real cadena de la polimerasa análisis (PCR) reacción
Después de la última estimulación con EA, se sacrificaron las ratas. Para el grupo control y el grupo no del punto de acupuntura, una rata fue seleccionado al azar, respectivamente. Para el grupo de EA, que primero dividimos en EA promoción de grupo y EA grupo inhibición de acuerdo con los resultados de la electrogastrografía. Y luego, las ratas fueron seleccionados al azar de ambos grupos. tejidos antro gástrico (desde el píloro 0,8 - 1 cm) se cortaron en trozos que fueron aproximadamente 0,3 cm x 0,5 cm de tamaño y se colocaron inmediatamente en nitrógeno -70 ° C líquido. muestras de ARN total se extrajeron usando TRIZOL de diferentes grupos de acuerdo con las instrucciones del fabricante. la calidad del ARN se evaluó espectrofotométricamente sobre la base de la relación A260 /A280. Las muestras de ARN se comprobó la integridad del RNA 18S y 28S mediante electroforesis en gel. El ARN total (1,5 g) se utilizó para generar ADNc de primera hebra con superíndice III transcriptasa inversa (1 l) a partir del ARN aislado. Las reacciones de PCR en tiempo real se realizaron en un SuperArray PCR Master Mix (Cat. No. PA-112), que contiene los genes de la ruta de señal de PKC y MAPK. Se añadió el cDNA diluido (102 l) a cada orificio que corresponde al chip PCR. A continuación, los chips de PCR se colocaron en el instrumento de tiempo real PCR para la reacción de PCR. Las condiciones de los ciclos eran las siguientes: 95 ° C durante 10 min, 60 ° C durante 15 s, y 60 ° C durante 1 min (40 ciclos). Las diferencias en la expresión génica, expresados ​​como factores de cambio, se calcularon utilizando la 2 -ΔΔCt método.
Transferencias Western de CAD y CaP
Los niveles de CAD y proteína de la cubierta fueron detectados por Western Blot. Después del tratamiento con EA, se sacrificaron las ratas. Las ratas fueron fijadas, seguido de la incisión de la piel abdominal y el peritoneo. Las vísceras se expusieron, y la tercera central del cuerpo gástrico se cortó en pequeñas piezas que fueron de aproximadamente 0,3 cm x 0,5 cm de tamaño. Las piezas fueron inmediatamente almacenados a -70 ° C en nitrógeno líquido. Brevemente, los extractos de células (30 g) de la parte superior tercio de la parte media del cuerpo gástrico se separaron por electroforesis en dodecil de sodio en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) y después se transfirieron a membranas de nitrocelulosa. Los filtros se bloquearon con solución salina tamponada con Tris (TBS) /5% de leche, seguido de incubación con anticuerpos policlonales contra el CAD (dilución 1: 3000), de cabeza (dilución 1: 3000), y β-actina (1: 10.000). Después las membranas se lavaron, se incubaron con anticuerpos conjugados con peroxidasa secundario diluido 1: 5000 en TBS con 0,01% de Tween 20. El sistema de detección de anticuerpos fue utilizada, y las membranas se expusieron a película de rayos X de acuerdo con las instrucciones del fabricante. preparación Serum
El suero se preparó como se describe previamente con modificaciones [22]. Después de la última estimulación con EA, se sacrificaron todas las ratas. A continuación, se tomaron 6 ml de sangre de la carótida de cada rata. La sangre se mantuvo todavía durante 1 h, y después se centrifugó a 3000 rpm durante 15 min. Se recogió el suero, se filtró para eliminar las bacterias, y 1,5 ml se empaquetó en un tubo de PE, que se almacenó a -70 ° C en nitrógeno líquido.
Efectos de EA suero sobre la contractilidad SMC
cinco ratas normales SD eran ip anestesiado con 10% de uretano a una dosis de peso corporal 1 g /kg. Después de ser anestesiado, la piel abdominal y el peritoneo se practicará una incisión, y las vísceras se expusieron. Todo el estómago fue cortada, y se aislaron los tejidos antro gástrico e inmediatamente colocado en oxígeno saturado PBS con penicilina (100 U /ml) y estreptomicina (100 mg /ml) a 4 ° C. Después del enjuague, los tejidos se transfirieron a HEPES saturada de oxígeno, se extendió y se fijaron sobre una placa de gel de sílice con una aguja fina. La capa mucosa se cortó con cuidado, la exposición de la mucosa circular, que se recorta en 9 - 10 tiras de músculo (1 mm x 4 mm), colocados en solución de Tyrode, y se mantiene a 4 ° C en el refrigerador durante aproximadamente 15 min. Las tiras de músculo se sometieron a digestión en 1% de colagenasa tipo II, 0,05% de inhibidor de tripsina, azúcar alcohol ditiotreitol 0,05%, y la enzima albúmina de suero bovino 0,2% en un baño de agua durante 25 min a 36 ° C. Después de la digestión, la mezcla se lavó con HEPES libre de la enzima, se incubaron durante 30 min, y se filtró con una malla de 200 pantalla para recoger los SMCs gástricos individuales libres. La viabilidad celular se midió con la prueba de azul de tripano. Las células vivas fueron más de 95% a una densidad de 10 6 células /ml.
Las SMCs aislados se dividieron aleatoriamente en el grupo normal de suero, suero grupo ST.36, y el grupo de suero no del punto de acupuntura. suspensiones SMCs (50 l) a una densidad de 1,0 × 10 6 células se colocaron /ml en placas de 96 pocillos. Cada muestra de suero se inactivó después de 30 min en un baño de agua C 56 °, y después se diluyó 1: 2 con HEPES. se añadió suero (50 l) de los diferentes grupos de las SMC, se mezcló con una pipeta durante 30 s, y se fija con 30 l 2,5% de glutaraldehído. longitud celular se evaluó con un sistema de computarizada Video Processing (DP2-BSW), que se utilizó para calcular el porcentaje de contracción. El porcentaje de contracción celular = (longitud de la célula antes del tratamiento - Longitud de células después del tratamiento). /Longitud de la célula antes del tratamiento × 100%
El análisis estadístico
datos se expresaron como media ± S. D. Una forma de análisis de varianza seguido de la prueba de comparación múltiple de Bonferroni se aplicó con el software SPSS 10.0. Los valores de Ct obtenidos en la PCR en tiempo real, que se utiliza para calcular las diferencias factor de cambio (expresadas aquí como porcentaje de control), también se utilizaron para el análisis estadístico. A p-valor
< 0,05 o un factor de cambio > 2 se definió como estadísticamente significativo para todos los análisis.
Resultados
Efectos de la EA sobre la motilidad gástrica
EA en ST.36 producido cambios significativos en el valor absoluto de la amplitud de pico media y la frecuencia en comparación con el control o grupos no puntos de acupuntura (P
< 0,01). Por el contrario, en la EA no del punto de acupuntura no indujo cambios significativos en la motilidad gástrica en comparación con el grupo control (archivo adicional 1: Figura S1). Se observaron dos tipos de patrones motores gástricos para el grupo ST.36 en las 10 ratas probado de acuerdo con el pico promedio: ratas con media de pico positivo fueron juzgados a la promoción de patrón, mientras que las ratas con pico promedio negativo fueron juzgados a la promoción de patrones. Los resultados mostraron 5 (50,0%) ratas mostraron la ST.36 promover patrón y 5 (50,0%) ratas mostraron el patrón de inhibición de ST.36. En ratas con el patrón ST.36 promoción, los valores promedio de amplitud y frecuencia pico fueron 47,13 ± 0,44 y 0,19 ± 0,06, respectivamente. En ratas con el patrón de inhibición de ST.36, los valores promedio de amplitud de pico y frecuencia fueron -43,41 ± 0,62 y 0,17 ± 0,03, respectivamente. (Archivo adicional 2: Tabla S1)
Efectos de la EA en la PKC y vías de señalización MAPK
EA en ST.36 regulados significativamente la expresión de algunos genes en la PKC y vías de señalización de MAPK. Tabla 1 enumera los resultados de los análisis de microarrays del grupo ST.36 promover (en comparación con el grupo control). La expresión de muchos genes se incrementó después de la estimulación EA, incluyendo ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA, y PTGS2. Otros genes mostraron disminución de la expresión después de la estimulación EA, incluyendo IL1R2. Tabla 2 lista los resultados de los análisis de microarrays del grupo ST.36 inhibición (en comparación con el grupo control). La expresión génica de IL1R2 y MMP9 se redujo después del cambio de EA stimulation.Table 1 génica comparando EA grupo promotor con el grupo de control
señal vía
génica
Sitios
EA /control (cambio veces) guía empresas EA /de control (doble la altura o baja regulación) guía empresas MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Factor de cambio (2-ΔΔCt) es la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de ensayo dividida por la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de control. Fold-regulación representa los resultados factor de cambio en una forma biológicamente significativos. Pliegue de cambio los valores superiores a uno indican una positiva o regulación, y el pliegue-regulación es igual al factor de cambio. Pliegue de cambio los valores inferiores a uno indican una negativa o baja regulación, y el pliegue-regulación es la inversa negativa del factor de cambio.
Tabla 2 compara el cambio de genes grupo inhibidor de EA con el grupo de control
vía de señal
Gene
Sitios
EA /de control (cambio) guía empresas EA /control (Doblar hacia arriba o hacia down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Cambio de tapa (2-ΔΔCt) es la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de ensayo dividido por la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de control. Fold-regulación representa los resultados factor de cambio en un biológicamente de manera significativa. pliegue del cambio de los valores superiores a uno indican una positiva o regulación, y el pliegue-regulación es igual al factor de cambio. pliegue del cambio de valores de menos de un negativo o indican una regulación a la baja, y el pliegue -Reglamento es la inversa negativa del factor de cambio.
Tabla 3 muestra los resultados de los análisis de microarrays del grupo ST.36 de la promoción (en comparación con el grupo sin puntos de acupuntura). se aumentó la expresión del gen COL1A1 EA después de la estimulación. la expresión de los genes IL1R2 y SERPINE1 se redujeron después de la estimulación de EA. la Tabla 4 enumera los resultados del análisis de microarrays del grupo ST.36 de la inhibición (en comparación con el grupo sin puntos de acupuntura). Muchos de los genes mostraron una disminución expresión después de la estimulación EA, incluyendo el ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, y los genes Ptgs2. La expresión del gen COL1A1 se incrementó después de EA stimulation.Table cambio 3 génica comparando EA grupo promotor con el grupo no del punto de acupuntura
señal vía
génica
Sitios
EA /no del punto de acupuntura (cambio veces) guía empresas EA /no del punto de acupuntura (Doblar hacia arriba o hacia down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Cambio de tapa (2-ΔΔCt) es la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de ensayo dividido por la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de control. Fold-regulación representa los resultados factor de cambio en un biológicamente de manera significativa. pliegue del cambio de los valores superiores a uno indican una positiva o regulación, y el pliegue-regulación es igual al factor de cambio. pliegue del cambio de valores de menos de un negativo o indican una regulación a la baja, y el pliegue -Reglamento es la inversa negativa del factor de cambio.
Tabla 4 cambio en el gen inhibidor comparando grupo EA con el grupo no del punto de acupuntura
señal vía
génica
Sitios

EA /no del punto de acupuntura (doble cambio) guía empresas EA /no del punto de acupuntura (doble la altura o baja regulación) guía empresas MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18 -5,67

MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0.42 -2.40

MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0.39 -2.58

MAPK
MAPK13
D10
0,28 -3,58

MAPK
mapk3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Cambio de tapa (2-ΔΔCt) es la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de ensayo dividido por la expresión génica normalizada (2-Ct) en la muestra de control. Fold-regulación representa los resultados factor de cambio en un biológicamente de manera significativa. pliegue del cambio de los valores superiores a uno indican una positiva o regulación, y el pliegue-regulación es igual al factor de cambio. pliegue del cambio de valores de menos de un negativo o indican una regulación a la baja, y el pliegue -Reglamento es la inversa negativa del factor de cambio.
Efectos de la EA en la EAC y la expresión de la proteína CaP
la estimulación con EA aumentado significativamente CAD y expresión de la proteína de la PAC en el grupo inhibir ST.36 en comparación con la no del punto de acupuntura grupo, mientras que la estimulación con EA disminuyó significativamente la expresión de proteínas de CAD y la gorra en la promoción de ST.36 grupo en comparación con el grupo sin punto de acupuntura (Figura 1 a, B, C, D). Figura 1 Efectos de la estimulación de EA en Caldesmon (CAD) y calponin (PAC), los niveles de proteína. A. Expresión de caldesmón niveles de proteína por transferencia Western. los niveles de proteína B. densitométrico análisis caldesmón normalizados por β-actina; C. Expresión de calponin los niveles de proteína por Western Blot; D Densitométricas análisis calponin los niveles de proteína normalizado por β-actina. CaD: Caldesmon; CAP: calponin; 1: grupo sin fines de punto de acupuntura; 2-4: EA grupo inhibición; 5-7: EA promoción de grupo. * P < 0,05 compard con el grupo no del punto de acupuntura
Efectos de EA suero sobre la contractilidad SMC
Como se muestra en el archivo adicional 3:. Figura S2 y archivo adicional 4: Tabla S2, se observó la morfología celular bajo el microscopio óptico después del tratamiento con diferentes tipos de suero. No hubo diferencias en la longitud de la célula antes de la adición de suero (p > 0,05). suero ST.36 aumentó SMC contractilidad (60,22 ± 3,84 micras), en comparación con el suero de control (96,02 ± 6,24 micras) o el suero no del punto de acupuntura (97,33 ± 6,97 micras). El porcentaje de contracción fue del 41% después de la estimulación con suero ST.36, mientras que los porcentajes de contracción fueron 7% y 10% después de la estimulación ya sea con el suero no del punto de acupuntura o suero de control, respectivamente.
Discusión
El presente estudio demostró que la estimulación de EA en ST.36 tuvo un efecto regulador sobre la motilidad gástrica en ratas que era o estimulador o inhibidor. El efecto estimulante de la EA puede actuar a través de las vías de señalización de PKC y MAPK.
Los efectos de la EA en la motilidad gástrica se han estudiado ampliamente en animales y seres humanos, debido a la disponibilidad de electrogastrografía. Es bien conocido que la actividad mioeléctrica gástrica consiste en ondas lentas y picos. Los picos están directamente asociados con la aparición de contracciones. ondas lentas no evocan la contractilidad gastrointestinal, pero que determinan la frecuencia máxima de las contracciones gástricas. comentario El punto de acupuntura más utilizado en el tratamiento de trastornos gastrointestinales es la ST.36. Comúnmente se cree que la acupuntura puede ejercer la promoción y los efectos sobre la motilidad gastrointestinal en función del punto de acupuntura estimulada inhibición. En los seres humanos, se ha demostrado que la estimulación EA en ST.36 tuvo efectos duales en peristalsis gástrica que son o bien de facilitación o inhibidor [15, 23]. Aunque los pacientes que sufren de enfermedades gastrointestinales se han beneficiado de la aplicación de la acupuntura en el ST.36, pero los mecanismos moleculares exactos aún no están claros. En los perros, EA al ST.36 aumenta la regularidad de las ondas lentas gástrico [24, 25]. En ratas conscientes, la estimulación de EA en ST.36 indujo efectos duales, que eran ya sea facilitador o inhibidor, sobre la motilidad gástrica [26, 27]. El estudio adicional reveló que el efecto estimulador está mediada a través de las vías colinérgicas, mientras que el efecto inhibidor es independiente de la vía simpática [28]. La teoría general de la medicina la acupuntura se basa en el concepto de Yin y Yang, y se cree que la acupuntura para modificar el desequilibrio entre el Yin y el Yang. Los efectos de la acupuntura sobre el equilibrio de Yin y Yang pueden ser mediados a través de la interacción entre la neurotransmisión de GABA y glutamato en el tronco cerebral.
En el presente trabajo, la estimulación de EA en ST.36 fue eficaz en la regulación de la motilidad gástrica, como se ha demostrado por el aumento significativo de la amplitud de pico y frecuencia. Además, la falta de una respuesta tan cuando la misma estimulación se realizó en el punto de acupuntura no era indicativo de la especificidad de este efecto. De acuerdo con la amplitud de pico y la frecuencia, el grupo ST.36 se divide además en la promoción y inhibitorios patrones, desde EA mostró un efecto dual. Para explorar más a fondo los mecanismos por los que EA regula la motilidad gástrica, aislamos las SMC desde el estómago y observamos el efecto del suero ST.36 sobre la contractilidad SMC utilizando métodos de ensayo farmacológicos serológicos. Los resultados mostraron que el suero aumentó significativamente ST.36 SMC contractilidad; ., Mientras que los efectos producidos por el suero normal o no del punto de acupuntura no eran evidentes
investigaciones recientes sugieren que los efectos de la estimulación EA están mediados a través del sistema de opioides [29] o a través de su efecto estimulante sobre la actividad vagal [30]; sin embargo, los mecanismos precisos por los que EA afecta a la motilidad gástrica no se entienden completamente. resultados anteriores también indican que los niveles de PKC se incrementaron después de la estimulación con EA [31]. Por lo tanto, se seleccionaron las vías PKC y MAPK como objetivos para la mediación de los efectos estimulantes de la EA en la movilidad gástrica. Por otra parte, CAP y CAD pueden desempeñar un papel en la regulación de la motilidad gastrointestinal durante la adaptación fisiológica y patológica. Sobre regulación de la tapa y la expresión CaD inhibido la motilidad gastrointestinal, y la baja regulación de la tapa y la expresión CaD promovido la motilidad gastrointestinal [32, 33]. ERK1 /2, un miembro de la familia MAPK, se ha demostrado que desempeñan un papel importante en la regulación de la contracción del músculo liso [34]. De acuerdo con nuestros resultados de microarrays, la promoción de la motilidad gástrica puede correlacionar con la sobre regulación de MAPK6 (ERK3), MAPK13, y la expresión génica PTGS2, y la baja regulación de la expresión génica de COL1A1. La inhibición de la motilidad gástrica puede correlacionar con la baja regulación de la expresión génica IL1R2 y MMP9. Las transferencias Western mostraron sobre regulación de la expresión de la proteína CAD y CaP inhibe la motilidad gástrica, mientras que la baja regulación de la expresión de proteínas de CAD y CaP promovió la motilidad gástrica. Estos resultados demuestran que el CAD y el tapón puede desempeñar un papel en la regulación de la motilidad gastrointestinal durante la adaptación fisiológica y patológica.
Hubo algunas limitaciones en el presente estudio que deben ser mencionados. En primer lugar, que no investigó si los inhibidores de PKC y MAPK podrían afectar o bloquear el efecto regulador de la estimulación de EA en ST.36 sobre la movilidad gástrica. serán necesarios más estudios para investigar la influencia de los inhibidores de PKC y MAPK. En segundo lugar, las futuras investigaciones se centrarán en comprender plenamente las funciones de cada cambio en la expresión de genes en la regulación de la movilidad gástrica.
Conclusiones
En resumen, nuestros resultados demuestran que la estimulación de EA en ST.36 regula la motilidad gástrica. estimulación de EA en ST.36 ejerce efectos duales sobre la motilidad gástrica que eran o estimulador o inhibidor. Además, la regulación de la motilidad gástrica puede correlacionar con las vías de transducción de señal de la PKC y MAPK.
Notas
Qi Yang, Yan-Dong Xie contribuyeron igualmente a este trabajo.
Declaraciones
Agradecimientos Esta
estudio fue apoyado por becas de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Nº 30801487): perfil del material complementario Electrónico
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc archivo adicional 1:. Figura S1: Efectos de la estimulación de EA en la motilidad gástrica. la motilidad gástrica se midió por electrogastrografía. A. Control, B. ST.36, C. no del punto de acupuntura. La estimulación con EA en ST.36 aumento de la amplitud de pico media y frecuencia. ondas gástricas mostraron cambios duales en el grupo ST.36 en comparación con el grupo control o no del punto de acupuntura. Los valores se expresan como la media ± S. D. (N
= 10). * P Hotel < 0,05, ** p <
; 0,01 vs
. grupo de control. #p Hotel < 0,05, ## p Hotel < 0,01 frente al grupo no
punto de acupuntura. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc archivo adicional 2: Tabla S1: Efectos de la EA sobre la actividad mioeléctrica gástrica. El grupo ST.36 se divide además en la promoción de EA y EA grupos de acuerdo a la inhibición de las olas gástricas. Los valores se expresan como media ± S.D. (n = 5
). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc disposición 3: Figura S2: Efectos de la estimulación gástrica EA sobre la contractilidad SMC. Se observó la morfología celular utilizando un microscopio óptico (x200 aumentos). La longitud de la célula y el porcentaje de contracción se midió con un Sistema de Análisis de Imagen de ordenador. O. SMC; A. SMC + suero de control; B. suero + CML ST.36; C. SMC + suero no del punto de acupuntura. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc archivo adicional 4: Tabla S2: Efectos del suero sobre la contractilidad SMC. Según la evaluación realizada por el Sistema de procesamiento de vídeo computarizada, suero Zusanli resultó en la contractilidad significativo en las CML. Los resultados se expresan como la media ± S.D. (n
= 10). * P Hotel < 0,05 ** p <
; 0,01 frente al grupo
suero de control. #p Hotel < 0,05, ## p Hotel < 0,01 frente
no del punto de acupuntura suero. (DOC 28 KB) de los autores originales presentados archivos para imágenes
A continuación se presentan los enlaces a los archivos de los autores presentados original para imágenes. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff autores archivo original para la figura 1 Conflicto de intereses México La autores declaran que no tienen intereses en competencia.
Autores de las contribuciones
QY llevaron a cabo los estudios de genética molecular, participó en la secuencia de alineación y redactó el manuscrito. YDX, MXZ, BH lleva a cabo los inmunoensayos. CZ, HYLI, RZ participó en la secuencia de alineación. MQ, YXH participado en el diseño del estudio y realizó el análisis estadístico. JJW concebido del estudio, y participó en su diseño y la coordinación y la ayudó a redactar el manuscrito. Todos los autores leído y aprobado el manuscrito final.

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