Effekt af elektroakupunktur stimulation på Zusanli acupoint (ST36) på gastrisk motilitet: mulig gennem PKC og MAPK signaltransduktion pathways

Effekt af elektroakupunktur stimulation på Zusanli acupoint (ST36) på gastrisk motilitet: mulig gennem PKC og MAPK signaltransduktionsveje
Abstract
Baggrund
elektroakupunktur (EA) stimulation har vist sig at have en stor terapeutisk potentiale til behandling af gastrointestinale motilitetssygdomme. Imidlertid har ingen beviser afklaret de mekanismer, der bidrager til virkningerne af EA stimulation på Zusanli acupoint (ST.36). Denne undersøgelse blev designet til at undersøge den regulerende effekt af EA stimulation ved ST.36 på gastrisk motilitet og til at udforske dens mulige mekanismer
Metoder
Tredive Sprague-Dawley rotter blev tilfældigt inddelt i tre grupper:. Den ST.36 gruppe, den ikke-acupoint gruppe og kontrolgruppen. EA-stimulering blev sat til 2 Hz, kontinuerlig tilstand, og 1 V i 30 minutter. Frekvensen og gennemsnitlige maksimale amplitude af gastrisk motilitet blev målt ved electrogastrography. Den proteinkinase C (PKC) og mitogenaktiveret proteinkinase (MAPK) signalveje blev vurderet ved anvendelse realtid polymerasekædereaktioner. Caldesmon (CAD) og calponin (CaP) proteinekspression i den gastriske antrum blev påvist på Western blots. En Computed Video Processing System blev anvendt til at vurdere morfologiske ændringer i glatte muskelceller (SMC'er) fra gastrisk antrum.
Resultater
EA stimulation ved ST.36 havde en dobbelt effekt på skadesfrekvensen og de gennemsnitlige peak amplitude. Derudover EA stimulation ved ST.36 reguleres ekspressionen af ​​visse gener i PKC og MAPK signalveje, og det regulerede ekspressionen af ​​cad og cap-proteinerne. EA serum induceret SMC kontraktilitet. Fremme af gastrisk motilitet kan korrelere med opregulering af MAPK6 (ERK3), MAPK13, og prostaglandin-endoperoxid synthase 2 (PTGS2) genekspression og nedregulering af collagen, type I, alfa 1 (COL1A1) -gen og CAD og CaP proteinekspression. Inhibering af gastrisk motilitet kan korrelere med nedregulering af interleukin-1-receptor type 2 (IL1R2) og matrixmetalloproteinase-9 (MMP9) gener og
opregulering af CAD og CaP proteinekspression. Konklusioner
EA stimulation ved ST.36 reguleret gastrisk motilitet, og virkningerne blev både fremme og inhibering hos rotter. De mulige mekanismer kan korrelere med PKC og MAPK signaltransduktionsveje.
Nøgleord
elektroakupunktur Zusanli gastrisk motilitet PKC MAPK Baggrund
gastrisk motilitet er en af ​​de mest kritiske fysiologiske funktioner i den menneskelige tarm. Uden koordineret motilitet kan fordøjelse og optagelse af næringsstoffer i kosten ikke finde sted. Reguleringen af ​​gastrointestinal motilitet er kompliceret og involverer kontraktion af glatte muskelceller (SMC'er). Den sammentrækning af SMC'er er primært reguleret af forbigående ændringer i den intracellulære Ca 2 + koncentration [1]. Der er to primære veje i denne mekanisme, nemlig RhoA-Rho-kinase pathway og proteinet kinase C (PKC) pathway [2]. Calponin (CaP), en veletableret in vitro
substrat til signalering proteiner ved PKC [3], interagerer direkte med PKC [4]. Caldesmon (CAD) er en actin og myosin bindende protein, der findes i to isoformer, der genereres ved alternativ splejsning [5]. Der er akkumulerende beviser for en sekundær vej i reguleringen af ​​glat muskel sammentrækning, der er PKC afhængig, og denne vej kan medieres af CaP og CAD-aktivering [6-9]. Mitogenaktiveret proteinkinase (MAPK) signaling pathways har også været impliceret i SMC kontraktion [10]. Der er tre hovedgrupper af udpræget regulerede MAPK'er, der fører til ændret genekspression. De ekstracellulære signal relaterede kinaser 1 og 2 (ERK1 /2), c-Jun-terminal kinase (JNK) og p38 MAPK er kendt for at spille en vigtig rolle i intracellulær signalering respons på ekstracellulære stimuli [11]. Derudover kan CaP lette ERK-afhængig signalering, hvilket spiller en væsentlig rolle i reguleringen af ​​SMC sammentrækning [12].
Akupunktur, som har været anvendt i tusinder af år i Kina, der i stigende grad anvendes i hele verden til forvaltning af forskellige sygdomme [13]. Det menes, at stimulering af en acupoint direkte kan påvirke relevante organer og opnå effekten af ​​akupunktur behandling. EA er en kombineret procedure, der stimulerer en acupoint med elektrisk stimulation i stedet for med manuelle manipulationer af nåle. Talrige undersøgelser har evalueret effekten og mekanismer EA på gastrisk motilitet [14-20]. Baseret på beviser fra disse studier har EA stimulation blevet vist at have en stor terapeutisk potentiale til behandling af gastrointestinale motilitetssygdomme. Den Zusanli (ST.36) er en af ​​de mest almindeligt anvendte akupunkter for gastrointestinale sygdomme. Ifølge teorien for traditionel kinesisk medicin (TCM), der er en sammenhæng mellem ST.36 og funktionen af ​​mavetarmkanalen. Til dato har imidlertid ingen beviser afklaret de nøjagtige mekanismer, der bidrager til virkningerne af EA stimulation.
Derfor ved at undersøge morfologiske ændringer og myoelectrical aktivitet, nærværende undersøgelse havde til formål at vurdere regulative effekt af EA stimulation ved ST.36 acupoint på gastrisk motilitet i rotter og at udforske dens mulige mekanismer.
Metoder
Dyr og reagenser
Tredive voksne Sprague-Dawley (SD) rotter med en vægt 180-220 g blev opretholdt på en 12-h lys- mørke-cyklus ved 25 ± 2 ° C og 60% luftfugtighed med fri adgang til foder og vand. SD rotter blev købt fra Experimental Animal Center den fjerde Military Medical University. Alle eksperimenter dyr blev udført i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer i fjerde Military Medical University til pleje og anvendelse af forsøgsdyr. Godkendelse af forsøgsprotokollen blev opnået fra den etiske komité for Animal Research, fjerde Military Medical University, Kina. Dyr blev vilkårligt inddelt i tre grupper:. Den ST.36 gruppe, den ikke-acupoint gruppe, og kontrolgruppen
Collagenase II, trypsininhibitor dithiothreitol alkohol sukkeropløsninger bovint serumalbumin, calcium-frit phosphatbufret saltvand (PBS ), blev glutaraldehyd og trypanblå indkøbt fra Sigma Chemical Co. Det totale RNA Extraction Kit, SuperScript III revers transkriptase, og SuperArray PCR Master Mix blev erhvervet fra Invitrogen Co. anti-ged anti-mus og anti-kanin antistoffer var købt fra Shanghai Kangcheng Bio-Engineering Co
EA stimulationsprocessen
ST.36 lå ca. 5 mm lateralt for fibula af bagbenene, mens de ikke-acupoint blev placeret på den bagben ved siden af ST.36 åbne 5 mm [21]. Nålene blev indsat 5 mm dybt ind i musklen lag af den valgte acupoint og blev stimuleret af EA ved 2 Hz og 2 V ved hjælp af en elektrisk stimulator (G6805-2A; Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Shanghai, Kina). Hver stimulering varede 20 min i kontinuerlig tilstand, og stimulering blev udført 1 gang /dag i 5 dage. Rotterne i kontrolgruppen blev forelagt immobilisering alene uden stimulation i 30 min på samme tidspunkt hver dag.
Electrogastrography
Electrogastrography blev anvendt ved hjælp af Multichannel Fysiologisk Signal Køb og Processing System (tilstand RM-6280) efter den sidste stimulation på femtedagen. Efter en 12 timers faste (med fri adgang til vand) og 6 timer uden drikke blev rotterne bedøvet intraperitonealt (i.p.) med 10% urethan ved en dosis på 1 g /kg legemsvægt og derefter immobiliseres. Den første elektrode blev fastgjort til halen, og styrede elektroder blev implanteret på serøse overflade af maven 0,3 - 0,5 cm over pylorus. Elektroderne blev belagt med 37 ° C normalt saltvand gaze, forbundet med ledning. De eksperimentelle parametre, der anvendes var som følger:. Frekvens 400 Hz, filter 10 Hz, scanningshastighed 2 s /division, følsomhed 25 mV, tidskonstant jævnstrøm, og oscilloskop optagetid 1 time [18]
realtid polymerasekædereaktion (PCR) analyse
Efter den sidste stimulering med EA blev rotterne aflivet. For kontrolgruppen og ikke-acupoint gruppe blev en rotte tilfældigt udvalgte hhv. For EA gruppe, vi først delt det op i EA fremme gruppe og EA hæmmende gruppe i henhold til resultaterne af electrogastrography. Og så var der rotter tilfældigt udvalgt fra begge grupper. Gastric antrum væv (fra pylorus 0,8 - 1 CM) blev skåret i stykker, der var ca. 0,3 cm x 0,5 cm i størrelse og øjeblikkeligt anbragt i -70 ° C flydende nitrogen. Total RNA-prøver blev ekstraheret ved anvendelse TRIZOL fra forskellige grupper i overensstemmelse med producentens anvisninger. RNA kvalitet blev vurderet spektrofotometrisk på basis af A260 /A280-forhold. RNA-prøver blev undersøgt for integritet af 18S og 28S RNA ved gelelektroforese. Totalt RNA (1,5 ug) blev anvendt til at generere første streng cDNA med SuperScript III revers transkriptase (1 pi) fra det isolerede RNA. Real-time PCR-reaktioner blev fremstillet under anvendelse af en SuperArray PCR Master Mix (katalog nr. PA-112) indeholdende PKC og MAPK signal pathway-gener. Den fortyndede cDNA (102 pi) blev tilsat til hvert hul svarende til PCR chip. Derefter PCR chips blev anbragt i real-time PCR instrument for PCR-reaktionen. Cykliseringsbetingelserne var som følger: 95 ° C i 10 min, 60 ° C i 15 s, og 60 ° C i 1 min (40 cyklusser). Forskelle i genekspression, udtrykt som fold-changes, blev beregnet under anvendelse af 2 -ΔΔCt metode.
Western blots af CAD og CaP
CAD og CaP proteinniveauer blev påvist ved Western blotting. Efter behandling med EA blev rotterne aflivet. Rotterne blev derefter fikseret, efterfulgt af indsnit i den abdominale hud og bughinden. Organerne blev udsat, og den centrale 1/3 af mavens krop blev skåret i små stykker, der var ca. 0,3 cm x 0,5 cm i størrelse. Stykkerne blev straks opbevaret ved -70 ° C i flydende nitrogen. Kort fortalt blev celleekstrakter (30 ug) fra den øvre 1/3 af den midterste af mavens legeme adskilt ved natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) og derefter overført til nitrocellulosemembraner. Filtrene blev blokeret med Tris-bufret saltvand (TBS) /5% mælk, efterfulgt af inkubation med polyklonale antistoffer mod CAD (1: 3000 fortynding), hætten (1: 3000 fortynding), og β-actin (1: 10000). Efter membranerne blev vasket, blev de inkuberet med sekundære peroxidasekonjugerede antistoffer fortyndet 1: 5000 i TBS med 0,01% Tween 20. Antistof påvisningssystem anvendtes, og membranerne blev eksponeret for røntgenfilm i overensstemmelse med producentens anvisninger.
Serum forberedelse
Serum blev fremstillet som tidligere beskrevet med modifikation [22]. Efter den sidste stimulering med EA blev alle rotterne aflivet. Derefter blev 6 ml blod taget fra carotis af hver rotte. Blodet blev holdt stadig i 1 time og derefter centrifugeret ved 3000 rpm i 15 min. Serummet blev opsamlet, filtreret for at fjerne bakterier, og 1,5 ml blev pakket i en EP rør, som blev opbevaret ved -70 ° C i flydende nitrogen.
Effekter af EA serum på SMC kontraktilitet
Fem normale SD-rotter blev bedøvet ip med 10% urethan ved en dosis på 1 g /kg legemsvægt. Efter at være blevet bedøvet, blev den abdominale hud og bughinden indsnit, og indvoldene blev blotlagt. Hele mave blev skåret ud, og de gastriske antrum væv blev isoleret og øjeblikkeligt anbragt i oxygen mættet PBS med penicillin (100 U /ml) og streptomycin (100 ug /ml) ved 4 ° C. Efter at være blevet skyllet, blev vævene overført til oxygen mættet HEPES, fordelt og fikseret på en silicagelplade med en fin-nål. Den mucosale lag blev omhyggeligt afskåret, og udsætter den cirkulære slimhinde, som blev klippet i 9 - 10 muskelstrimler (1 mm x 4 mm), som er tilføjet i Tyrodes opløsning, og holdt ved 4 ° C i køleskab i ca. 15 min. Musklen strimler blev spaltet i 1% collagenase type II, 0,05% trypsin inhibitor, 0,05% dithiothreitol alkohol sukker og 0,2% bovint serumalbumin enzym i et vandbad i 25 min ved 36 ° C. Efter fordøjelse blev blandingen skyllet med enzym-fri HEPES, inkuberet i 30 min og filtreret med en 200 mesh for at indsamle de frie enkelt gastriske SMC'er. Cellelevedygtighed blev målt med Trypan blå test. De levende celler var mere end 95% ved en densitet på 10 6 celler /ml.
De isolerede SMC'er blev tilfældigt inddelt i normalt serum gruppen, ST.36 serum gruppe, og ikke-acupoint serum gruppe. SMC'er suspensioner (50 pi) ved en densitet på 1,0 x 10 6 celler /ml blev anbragt i plader med 96 brønde. Hver serumprøve blev inaktiveret efter 30 min i en 56 ° C vandbad, og derefter fortyndet 1: 2 med HEPES. Serum (50 pi) fra de forskellige grupper blev sat til SMC'er, blandet med en pipette i 30 s, og fikseret med 30 pi 2,5% glutaraldehyd. Celle længde blev vurderet med en Computed Video Processing System (DP2-BSW), som blev anvendt til at beregne den krympning procent. Cellen svind procent = (celle længde før behandling - celle længde efter behandling). /Celle længde før behandling × 100%
Statistisk analyse
Data blev udtrykt som middel ± S.D. Envejs variansanalyse efterfulgt af Bonferronis multiple sammenligningstest blev påført med SPSS 10.0 software. De ACt værdier opnået fra real-time PCR, som blev anvendt til at beregne fold-change forskelle (udtrykt her som procent af kontrol), blev også anvendt til den statistiske analyse. En p
-værdi < 0,05 eller en fold-ændring > 2 blev defineret som statistisk signifikant for alle analyser.
Resultater
Effekter af EA på gastrisk motilitet
EA på ST.36 produceret væsentlige ændringer i den absolutte værdi af den gennemsnitlige peak amplitude og frekvens sammenlignet med kontrolgruppen eller ikke-acupoint grupper (P
< 0,01). I modsætning hertil EA på det ikke-acupoint fremprovokere betydelige ændringer i gastrisk motilitet sammenlignet med kontrolgruppen (Yderligere fil 1: Figur S1). To typer af gastrisk motoriske mønstre blev observeret for ST.36 gruppen i de 10 rotter testet i henhold den gennemsnitlige peak: rotter med positiv gennemsnitlig peak blev bedømt til at fremme mønster, mens rotter med negativ gennemsnitlig peak blev bedømt til at fremme mønster. Resultaterne viste 5 (50,0%) rotter viste ST.36 fremme mønster og 5 (50,0%) rotter viste ST.36 inhiberende mønster. Hos rotter med ST.36 fremme mønster, de gennemsnitlige peak amplitude og frekvens værdier var 47,13 ± 0,44 og 0,19 ± 0,06 hhv. Hos rotter med ST.36 hæmmende mønster, de gennemsnitlige peak amplitude og frekvens værdier var -43,41 ± 0,62 og 0,17 ± 0,03, henholdsvis. (Yderligere fil 2: Tabel S1)
Effekter af EA på PKC og MAPK signalveje
EA på ST.36 betydeligt reguleret ekspression af nogle gener i PKC og MAPK signalveje. Tabel 1 viser resultaterne fra microarray analyse af ST.36 fremme gruppe (sammenlignet med kontrolgruppen). Udtrykket af mange gener blev forøget efter EA stimulation, herunder ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA, og PTGS2. Andre gener viste reduceret ekspression efter EA stimulering, herunder IL1R2. Tabel 2 viser resultaterne fra microarray analyse af ST.36 inhiberende gruppe (sammenlignet med kontrolgruppen). Genet udtryk for IL1R2 og MMP9 blev nedsat efter EA stimulation.Table en Gene ændring sammenligne EA fremme gruppe med kontrolgruppen
Signal vej
Gene
steder
EA /kontrol (Fold ændring)
EA /kontrol (Fold op- eller nedregulering)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Fold-ændring (2-ΔΔCt) er den normaliserede genekspression (2-ACt) i analyseprøven divideret med den normaliserede genekspression (2-ACt) i kontrolprøven. Fold-regulering repræsenterer fold-ændring medfører en biologisk meningsfuld måde. Fold-ændring værdier større end en indikerer en positiv-eller opregulering, og folden-regulering er lig med fold-change. Fold-change værdier mindre end én indikerer en negativ eller nedregulering, og fold-forordningen er den negative inverse af fold-ændringen.
Tabel 2 Gene ændring sammenligne EA hæmmende gruppe med kontrolgruppen
Signal vej

Gene
steder
EA /kontrol (Fold ændring)
EA /kontrol (Fold op- eller down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Fold-ændring (2-ΔΔCt) er den normaliserede genekspression (2-ACt) i prøven divideret med den normaliserede genekspression (2-ACt) i kontrolprøven. Fold-regulering repræsenterer fold-ændring medfører en biologisk meningsfuld måde. fold-change værdier større end en indikerer en positiv-eller opregulering, og fold-forordningen er lig med fold-ændringen. fold-ændre værdier mindre end en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -regulering er den negative inverse af fold-change.
tabel 3 angiver resultaterne fra microarray analyse af ST.36 fremme gruppe (sammenlignet med den ikke-acupoint gruppe). ekspressionen af ​​COL1A1-genet blev forøget efter EA stimulering. ekspressionen af ​​IL1R2 og SERPINE1 gener blev nedsat efter EA stimulering. tabel 4 anfører resultater fra microarray analyse af ST.36 inhiberende gruppe (sammenlignet med den ikke-acupoint gruppe). Mange af generne viste formindsket ekspression efter EA stimulering, herunder ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2, MYC, PRKCA, og PTGS2 gener. Udtrykket af COL1A1 genet blev forøget efter EA stimulation.Table 3 Gene ændring sammenligne EA fremme gruppe med ikke-acupoint gruppe
Signal vej
Gene
steder
EA /Non-acupoint (Fold ændring)
EA /Non-acupoint (Fold op- eller down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Fold-ændring (2-ΔΔCt) er den normaliserede genekspression (2-ACt) i prøven divideret med den normaliserede genekspression (2-ACt) i kontrolprøven. Fold-regulering repræsenterer fold-ændring medfører en biologisk meningsfuld måde. fold-change værdier større end en indikerer en positiv-eller opregulering, og fold-forordningen er lig med fold-ændringen. fold-ændre værdier mindre end en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -forordning er den negative inverse af fold-ændringen.
tabel 4 Gene ændring sammenligne EA hæmmende gruppe med ikke-acupoint gruppe
Signal vej
Gene
steder i
EA /Non-acupoint (Fold ændring)
EA /Non-acupoint (Fold op- eller nedregulering)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Fold-ændring (2-ΔΔCt) er den normaliserede genekspression (2-ACt) i prøven divideret med den normaliserede genekspression (2-ACt) i kontrolprøven. Fold-regulering repræsenterer fold-ændring medfører en biologisk meningsfuld måde. fold-change værdier større end en indikerer en positiv-eller opregulering, og fold-forordningen er lig med fold-ændringen. fold-ændre værdier mindre end en indikerer en negativ eller nedregulering, og folden -forordning er den negative inverse af fold-ændringen.
effekter af EA på CAD og CaP proteinekspression
Stimulation med EA signifikant øget CAD og CaP proteinekspression i ST.36 hæmmende gruppe sammenlignet med den ikke-acupoint gruppe, mens stimulation med EA faldt betydeligt CAD og CaP proteinekspression i ST.36 fremme gruppen sammenlignet med den ikke-acupoint gruppe (figur 1A, B, C, D). Figur 1 Virkninger af EA stimulation på Caldesmon (CAD) og Calponin (CAP) protein niveauer. A. Ekspression af Caldesmon protein niveauer ved Western blotting. B. Densitometrisk analyse Caldesmon proteinniveauer normaliseret ved β-actin; C. Ekspression af Calponin protein niveauer ved Western blotting; D Densitometrisk analyse Calponin proteinniveauer normaliseret ved β-actin. CAD: Caldesmon; CaP: calponin; 1: ikke-acupoint gruppe; 2-4: EA inhiberende gruppe; 5-7: EA fremme gruppe. * P < 0,05 compard til ikke-acupoint gruppe
Effekter af EA serum på SMC kontraktilitet
Som vist i supplerende fil 3:. Figur S2 og Supplerende fil 4: Tabel S2, cellemorfologi blev observeret under lysmikroskop efter behandling med forskellige typer af serum. Der var ingen forskel i celle længde før tilsætning af serum (p 0,05). ST.36 serum øget SMC kontraktilitet (60,22 ± 3,84 um) sammenlignet med kontrolgruppen serum (96,02 ± 6,24 um) eller ikke-acupoint serum (97,33 ± 6,97 um). Den sammentrækning procent var 41% efter stimulering med ST.36 serum, mens Sammentrækningsprocenterne var 7% og 10% efter stimulering med enten ikke-acupoint serum eller kontrolserum henholdsvis.
Diskussion
Den foreliggende undersøgelse viste at EA stimulation ved ST.36 havde en regulativ virkning på gastrisk motilitet i rotter, der var enten stimulerende eller inhiberende. Den stimulerende virkning af EA kan handle gennem PKC og MAPK signalveje.
Virkningerne af EA på gastrisk motilitet er blevet grundigt undersøgt i både dyr og mennesker på grund af tilgængeligheden af ​​electrogastrography. Det er velkendt, at gastrisk myoelectrical aktivitet består af langsomme bølger og pigge. Spikes er direkte forbundet med fremkomsten af ​​sammentrækninger. Langsomme bølger ikke fremkalde mave-kontraktilitet, men de bestemmer den maksimale frekvens af gastriske sammentrækninger.
Oftest anvendte acupoint i behandling af gastrointestinale lidelser er ST.36. Det er almindeligt antaget, at akupunktur kan udøve fremme og hæmme virkninger på gastrointestinal motilitet afhængigt af stimuleret acupoint. Hos mennesker er det blevet vist, at EA stimulation ved ST.36 havde dobbelt virkning på gastrisk peristaltik, der enten befordrende eller hæmmende [15, 23]. Selv patienter med mave-tarmsygdomme har nydt godt af anvendelsen af ​​akupunktur på ST.36, men de nøjagtige molekylære mekanismer er stadig uklart. Hos hunde, EA på ST.36 øgede formelle gastrisk langsomme bølger [24, 25]. I vågne rotter, EA stimulation ved ST.36 inducerede dobbelte effekter, som enten var befordrende eller hæmmende på gastrisk motilitet [26, 27]. Yderligere undersøgelser afslørede, at den stimulerende virkning medieres via cholinerge veje, mens den inhibitoriske virkning er uafhængig af det sympatiske pathway [28]. Den generelle teori om akupunktur medicin bygger på den begrebet Yin og Yang, og akupunktur menes at modificere ubalance mellem Yin og Yang. Virkningerne af akupunktur på at balancere Yin og Yang kan medieres via interaktion mellem neurotransmissionen af ​​GABA og glutamat i hjernestammen.
I den nuværende papir, EA stimulation ved ST.36 var effektive til at regulere gastrisk motilitet, som påvist af den betydelige stigning i peak amplitude og frekvens. Desuden manglen på en sådan reaktion, når den samme stimulation blev udført ved den ikke-acupoint tydede på specificiteten af ​​denne virkning. Ifølge peak amplitude og frekvens blev ST.36 gruppen yderligere opdelt i fremme og hæmmende mønstre, da EA viste en dobbelt effekt. For yderligere at udforske de mekanismer, som EA regulerer gastrisk motilitet, vi isoleret SMC'er fra maven og observerede effekten af ​​ST.36 serum på SMC kontraktilitet hjælp serologiske farmakologiske testmetoder. Resultaterne viste, at ST.36 serum signifikant forøget SMC kontraktilitet; . Hvorimod de produceres af normalt eller ikke-acupoint serum virkninger var ikke indlysende Nyt undersøgelser antydet, at virkningerne af EA stimulering medieres gennem opioid-systemet [29] eller gennem dens stimulerende virkning på vagus aktivitet [30]; dog blev de præcise mekanismer, som EA påvirker gastrisk motilitet ikke fuldt forstået. Tidligere fund oplyste også, at PKC niveauer blev forøget efter stimulering med EA [31]. Derfor valgte vi PKC og MAPK veje som mål for at mediere de stimulerende virkninger af EA på gastrisk mobilitet. Desuden kan CaP og CAD spille en rolle i reguleringen af ​​gastrointestinal motilitet under fysiologisk og patologisk tilpasning. Opregulering af CaP og CAD udtryk hæmmede gastrointestinal motilitet, og nedregulering af CaP og CAD udtryk fremmet gastrointestinal motilitet [32, 33]. ERK1 /2, et medlem af MAPK familien, har vist sig at spille en væsentlig rolle i reguleringen af ​​glat muskel kontraktion [34]. Ifølge vores microarray resultater, kan fremme af gastrisk motilitet korrelerer med opregulering af MAPK6 (ERK3), MAPK13, og PTGS2 genekspression, og nedregulering af COL1A1 genekspression. Inhibering af gastrisk motilitet kan korrelere med nedregulering af IL1R2 og MMP9 genekspression. Western blots viste opregulering af CAD og CaP proteinekspression hæmmede gastrisk motilitet, mens nedregulering af CAD og CaP proteinekspression fremmet gastrisk motilitet. Disse resultater viser, at CAD og CaP kan spille en rolle ved reguleringen af ​​gastrointestinal motilitet i fysiologisk og patologisk tilpasning.
Der var nogle begrænsninger i den foreliggende undersøgelse, der bør nævnes. Først havde vi ikke undersøge, om hæmmere af PKC og MAPK kunne påvirke eller blokere den regulatoriske effekt af EA stimulation ved ST.36 på gastrisk mobilitet. Yderligere undersøgelser vil være forpligtet til at undersøge de påvirkninger af PKC og MAPK inhibitorer. For det andet, vil fremtidige undersøgelser fokusere på fuld forståelse roller hver ændring i genekspression på reguleringen af ​​gastrisk mobilitet.
Konklusioner
Sammenfattende vores resultater viser, at EA stimulation ved ST.36 reguleret gastrisk motilitet. EA stimulation ved ST.36 udøvede dobbelte virkninger på gastrisk motilitet, der enten stimulerende eller inhiberende. Desuden kan regulering af gastrisk motilitet korrelerer med PKC og MAPK signaltransduktion.
Notes
Qi Yang, Yan-Dong Xie bidraget ligeligt til dette arbejde.
Erklæringer
Tak
Dette undersøgelsen blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (nr 30.801.487) | Electronic supplerende materiale
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Yderligere fil 1:. Figur S1: effekter af EA stimulation på gastrisk motilitet. Gastrisk motilitet blev målt ved electrogastrography. A. Kontrol, B. ST.36, C. Ikke-acupoint. Stimulering med EA på ST.36 øgede gennemsnitlige peak amplitude og frekvens. Gastric bølger viste dobbelte ændringer i ST.36 gruppen sammenlignet med kontrolgruppen eller ikke-acupoint gruppe. Værdier er udtrykt som middelværdi ± S.D. (N
= 10). * P
< 0,05, ** p
< 0,01 vs
. kontrolgruppe. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 over
ikke-acupoint gruppe. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Yderligere fil 2: Tabel S1: Effekter af EA på gastrisk myoelectrical aktivitet. Den ST.36 gruppen blev yderligere opdelt i EA fremme og EA hæmmende grupper efter mavens bølger. Værdier er udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse (n
= 5). (DOC 26 KB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Yderligere fil 3: Figur S2: Effekter af EA stimulation på gastrisk SMC kontraktilitet. Cellemorfologi blev observeret ved anvendelse af et lysmikroskop (x 200 forstørrelse). Længden af ​​cellen og sammentrækning procentdel blev målt med en computer Image Analysis System. O. SMC'er; A. SMC'er + kontrolserum; B. SMC'er + ST.36 serum; C. SMC'er + non-acupoint serum. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Yderligere fil 4: Tabel S2: Effekter af serum på SMC kontraktilitet. Som vurderet af Computed Video Processing System, Zusanli serum resulterede i signifikant kontraktilitet i SMC'er. Resultater udtrykkes som middelværdi ± standardafvigelse (n
= 10). * P
< 0.05 ** p
< 0.01 vs.
kontrolserum gruppe. #p
< 0,05, ## p
< 0,01 over
ikke-acupoint serum. (DOC 28 KB) Forfattere 'originale indsendte filer til Images of Nedenfor er links til forfatternes oprindelige indsendte filer til billeder. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Forfatternes oprindelige fil til figur 1 Konkurrerende interesser
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende interesser.
Forfattere bidrag
QY foretaget de molekylære genetiske undersøgelser, deltog i sekvensalignment og udarbejdede manuskript. YDX, MXZ, BH udført immunoassays. CZ, HYLi, RZ deltog i sekvensalignment. MQ, YXH deltaget i udformningen af ​​undersøgelsen og udførte den statistiske analyse. JJW udtænkt af undersøgelsen, og deltog i sit design og koordinering og været med til at udarbejde manuskriptet. Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Single-fase kirurgisk reparation af luftveje gastrisk fistel efter esophagectomy
• En undersøgelse af antimikrobiel aktivitet, akut toksicitet og cytobeskyttende virkning af en polyherbal ekstrakt i en rotte ethanol-HCl mavesår model