Poveikis elektroakupunktury stimuliacijos metu Zusanli acupoint (ST36) dėl skrandžio motorikos: galima per PKC ir MAPK signalo perdavime pathways

poveikis elektroakupunktury stimuliacijos metu Zusanli acupoint (ST36) dėl skrandžio motorikos: galima per PKC ir MAPK signalo perdavimo kelius pervežimas Anotacija
fone
elektroakupunktury (AE) stimuliacija buvo įrodyta, kad turime didelį gydomąjį potencialą gydyti virškinamojo trakto motoriką sutrikimai. Tačiau jokių įrodymų išaiškino mechanizmus prisidėti prie AE stimuliacijos poveikis tuo Zusanli acupoint (ST.36). Šis tyrimas buvo skirtas ištirti reguliuojamąją poveikį EA stimuliacija tuo ST.36 skrandžio motorikai ir ištirti galimus mechanizmus
metodai
Trisdešimt Sprague-Dawley žiurkės buvo atsitiktinai suskirstyti į tris grupes:. Į ST.36 grupę, kur ne-acupoint grupė, ir kontrolinė grupė. E. stimuliacija buvo nustatytas 2 Hz, nenutrūkstamu režimu ir 1 V 30 min. Dažnumas ir vidutinė didžiausia amplitudė skrandžio motorikos buvo matuojamas electrogastrography. Baltymų kinazės C (PKC) ir mitogenas aktyvuota baltymų kinazės (MAPK) signaliniai keliai buvo vertinamas naudojant realaus laiko PGR. Caldesmon (ESD) ir calponin (BŽŪP) baltymų ekspresija skrandžio antralinėje dalyje buvo aptikta Vakarų dėmės. Skaičiuojama vaizdo apdorojimo sistema buvo naudojama įvertinti morfologinius pokyčius lygiųjų raumenų ląstelių (SMCs) nuo skrandžio antralinėje dalyje.
Rezultatai
EA stimuliavimo ST.36 turėjo dvigubą poveikį dažnumą ir vidutinis smailių amplitudės. Be to, AE stimuliacija tuo ST.36 reguliuoja kai kurių į PKC ir MAPK signalo perdavimo kelių genų ekspresiją, ir ji reglamentuojama ESD ir BŽŪP baltymų ekspresiją. E. serumas sukeltas SMC susitraukimus. Skatinimas skrandžio motorikai gali būti siejamas su iki-reguliavimo MAPK6 (ERK3), MAPK13 ir Prostaglandinas-endoperoksido sintezės 2 (PTGS2) genas saviraiškos, ir žemyn reguliavimo kolageno, I, alfa 1 (COL1A1) geno ir CAD ir BŽŪP baltymų išraiška. Slopinimas skrandžio motorikai gali koreliuoja su žemyn reguliavimo interleukino-1 receptoriaus 2 tipo (IL1R2) ir matricos metaloproteinazės-9 (MMP9) genus, ir up-reguliavimo CAD ir BŽŪP baltymų išraiška.
Išvadas
EA stimuliacija tuo ST.36 reguliuoja skrandžio motoriką, ir poveikis buvo tiek skatinant ir slopina žiurkių. Galimos mechanizmai gali koreliuoja su PKC ir MAPK signalo perdavimo kelius.
Raktiniai žodžiai
elektroakupunktury Zusanli Skrandžio motorikos PKC MAPK faktai
Skrandžio motorikos yra vienas iš svarbiausių fiziologinių funkcijų žmogaus žarnyne. Be suderinto judrumas, virškinimo ir absorbcijos mitybos maistinių medžiagų negali vykti. Iš virškinamojo trakto motorikai reguliavimas yra sudėtingas ir apima lygiųjų raumenų ląstelių (SMCs) susitraukimą. Iš SMCs susitraukimo pirmiausia reglamentuoja pereinamųjų pokyčių ląstelėje Ca 2 + koncentracija [1]. Yra du pagrindiniai keliai įtraukti į šį mechanizmą, būtent, RhoA-Rho kinazės kelią ir baltymų kinazės C (PKC) reakcijų grandinei [2]. Calponin (BŽŪP), gerai žinomi In vitro
substratas signalizacijos baltymus PKC [3], tiesiogiai bendrauja su PKC [4]. Caldesmon (CAD) yra aktino ir Miozinas surišantis baltymas, kad egzistuoja dviejose izoformų, kurie gaunami alternatyvi sandūrų [5]. Daugėja įrodymų, kad antrinė keliu į lygiųjų raumenų susitraukimo reguliavimo matyti, kad yra PKC priklauso, ir tai kelias gali būti susijęs su dangteliu ir CAD aktyvavimo [6-9]. Mitogenu aktyvinto proteino kinazės (MAPK) signaliniai keliai taip pat buvo susijęs SMC susitraukimo [10]. Yra trys pagrindiniai grupės aiškiai reglamentuoja MAPKs kad sukelti pakitęs genų ekspresiją. Ekstraląstelinė signalo susijusių kinazės 1 ir 2 (ERK1 /2), C-birželis terminalas kinazės (JNK), ir p38 MAPK yra žinoma, kad vaidina svarbų vaidmenį ląstelėje signalizacijos atsakas į ekstraląstelinio dirgiklių [11]. Be to, BŽŪP gali padėti ERK priklausomas signalizacijos, todėl vaidina labai svarbų vaidmenį SMC susitraukimo [12] Reglamentas.
Akupunktūra, kuri buvo naudojama tūkstančius metų Kinijoje, vis dažniau naudojamas visame pasaulyje vadybos įvairių ligų [13]. Manoma, kad stimuliavimas yra acupoint gali tiesiogiai paveikti svarbius organus ir pasiekti akupunktūros terapijos poveikį. AE yra kombinuotas procedūra, kuri stimuliuoja su elektros stimuliacija, o ne su rankiniu manipuliacijų adatų acupoint. Daugybė tyrimų metu buvo įvertintas jų poveikis ir mechanizmų EA skrandžio motorikos [14-20]. Remiantis įrodymais iš šių tyrimų, AE stimuliacija buvo įrodyta, kad turime didelį gydomąjį potencialą gydyti virškinamojo trakto motoriką sutrikimai. Zusanli (ST.36) yra vienas iš dažniausiai naudojamų acupoints už virškinimo trakto ligų. Pasak tradicinės kinų medicinos (TCM) teorija, kad yra ryšys tarp ST.36 ir virškinimo trakto funkciją santykiai. Tačiau iki šiol jokių įrodymų, išaiškino tikslius mechanizmus prisidėti prie AE stimuliacijos poveikį.
Todėl nagrinėjant morfologinius pokyčius ir myoelectrical veiklą, dabartinė tyrimą, kurio tikslas įvertinti reguliuojamąją poveikį EA stimuliacija tuo ST.36 acupoint skrandžio motorikos žiurkėms ir ištirti galimus mechanizmus.
metodai
Gyvūnai ir reagentai
Trisdešimt suaugusiųjų Sprague-Dawley (SD) žiurkės, kurių masė 180-220 g išliko apie 12 h šviesą tamsos ciklas 25 ± 2 ° C ir 60% drėgmės laisvą prieigą prie maisto ir vandens. SD žiurkės buvo perkami iš eksperimentinių gyvūnų centras ketvirtosios Karo medicinos universitete. Visi bandymai su gyvūnais buvo atliekami pagal institucinius gairių ketvirtosios Karo medicinos universiteto slaugos ir naudojimo laboratoriniams gyvūnams. Patvirtinimas tyrimo protokolą buvo gauta iš etikos komiteto gyvūnų tyrimų Nes ketvirtosios Karo medicinos universitetas, Kinija. Gyvūnai buvo atsitiktinai paskirstyti į tris grupes:. ST.36 grupei, ne acupoint grupės ir kontrolinės grupės
kolagenazę II tripsino inhibitoriaus, DTT alkoholio cukraus, galvijų serumo albumino, kalcio-nemokamai fosfatinio buferio druskų tirpalu (PBS ), gliutaraldehido ir Trypan mėlyna buvo įsigytas iš "Sigma Chemical Co Total RNR ekstrakcijos rinkinio, viršuje III atvirkštinės transkriptazės ir SuperArray PGR pagrindinį mišinį buvo įsigytas iš Invitrogen Co. anti-ožką, anti-mouse, ir anti-triušio antikūnai perkamos iš Šanchajaus KangCheng Bio-Engineering Co
EA stimuliacijos procedūros Viesbutis The ST.36 buvo įsikūrusi maždaug 5 mm, šoninė prie užpakalinių galūnių šeivikaulio, o ne acupoint buvo įsikūrusi ant užpakalinės kojos kitą į ST.36 atidaryti 5 mm [21]. Adatos buvo įtrauktos 5 mm giliai į raumenų sluoksnis pasirinktos acupoint ir skatino ne 2 Hz ir 2 V EA naudojant elektros stimuliatorius (G6805-2A; Šanchajus Huayi Medical Instrument Factory, Šanchajus, Kinija). Kiekvienas stimuliacija truko 20 min nenutrūkstamu režimu, ir stimuliacija buvo atliktas 1 kartą /per dieną, 5 dienų. Į kontrolinės grupės žiurkių buvo pateikti vien imobilizacijos be stimuliacijos 30 min tuo pačiu metu kiekvieną dieną.
Electrogastrography
Electrogastrography buvo taikomas naudojant Daugiakanalis Physiologic signalo gavimas ir apdorojimas sistema (režimas RM-6280) po paskutinio stimuliacija penktą dieną. Po 12-H greita (nemokamą patekimą į vandenį) ir 6 h be gėrimo, žiurkės buvo anestezuoti į pilvo ertmę (i.p.) su 10% uretano esant 1 g /kg kūno dozės ir tada imobilizuotas. Pirmasis elektrodas buvo susietas su uodegos, ir atvirame ore elektrodai buvo implantuoti į serosal paviršiaus skrandžio 0,3 - 0,5 cm virš fazė prievartyje. Elektrodai buvo padengta 37 ° C fiziologinio tirpalo marlę, susijusi su viela. Eksperimentiniai parametrai buvo naudojamos taip:. Dažnis 400 Hz, filtras 10 Hz skenavimas greitis 2 s /padalinys, jautrumas 25 mV, laiko konstanta srovė, ir osciloskopu įrašymo laikas 1 val [18]
Realaus laiko polimerazės grandinės reakcija (PGR) analizė
Po paskutinio stimuliacijos EA, žiurkės buvo paaukotos. Dėl kontrolinės grupės ir ne acupoint grupės, viena žiurkė buvo atsitiktinai parinkti atitinkamai. Už EA frakcijos, mes pirmiausia yra padalijamas jį į AE skatinti grupę ir AE slopinimui grupę pagal prie electrogastrography rezultatus. Ir tada, ten žiurkės buvo atsitiktinai atrinkti iš abiejų grupių. Skrandžio Ertmė audiniai (iš prievarčio 0,8 - 1 cm) buvo supjaustyti į gabalus, kurie buvo maždaug 0,3 cm × 0,5 cm dydžio ir iš karto dedamas į -70 ° C temperatūros skysto azoto. Iš viso RNR mėginiai buvo paimti naudojant TRIZOL iš skirtingų grupių pagal gamintojo instrukcijas. RNR kokybės buvo įvertintas spektrofotometriniu dėl A260 /A280 santykis pagrindu. RNR mėginiai buvo patikrinta vientisumą 18S ir 28S RNR pagal gelyje. Iš viso RNR (1,5 mikrogramų) buvo naudojamas generuoti pirmos grandies kDNR su viršuje III atvirkštinės transkriptazės (1 pl) nuo izoliuoto RNR. Realaus laiko PGR reakcijos buvo parengta naudojant SuperArray PGR pagrindinį mišinį (Kat. Nr PA-112), kuriame yra PKC ir MAPK signalo kelią genus. Praskiesto kDNR (102 mikrol) buvo įtraukta į kiekvieną skylę, atitinkančią PGR lustą. Tada PGR skiedros buvo dedamas į realaus laiko PGR priemonę, skirtą PGR reakcijos. Minantis sąlygos buvo taip: 95 ° C temperatūroje 10 min, 60 ° C temperatūroje 15 s, ir 60 ° C temperatūroje 1 min (40 ciklų). Skirtumai genų ekspresiją, išreikštas sulankstomomis pokyčius, buvo apskaičiuotas naudojant 2 -ΔΔCt metodą.
Vakarų dėmės CAD ir BŽŪP Viesbutis The CAD ir BŽŪP baltymo koncentracija buvo aptikta imunoblotingo. Po gydymo su EA, žiurkės buvo paaukotos. tada žiurkės buvo nustatyti, o po to pjūvį pilvo odos ir pilvaplėvės. Vidaus organus buvo veikiami, o centrinė 1/3 skrandžio kūnas buvo supjaustytas į mažus gabalus, kurie buvo maždaug 0,3 cm × 0,5 cm dydžio. Gabalai buvo nedelsiant saugomi -70 ° C temperatūroje ° C skystame azote. Trumpai, ląstelių ekstraktų (30 mikrogramų) nuo viršutinio 1/3 skrandžio kūno vidurio buvo atskirti natrio dodecilsulfato-poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) ir tada perkelti ant nitroceliuliozės membranos. Filtrai buvo blokuotos tri-buferio druskų tirpalu (TBS) /5% pieno, o po to inkubacijos su polikloninius antikūnus prieš CAD (1: 3000 praskiedimo), dangtelis (1: 3000 praskiedimo), ir beta-aktino (1: 10000). Po to, kai Membranos buvo plaunamos, jie buvo inkubuojamos su antrinių peroksidaze konjuguotų antikūnų, praskiestas santykiu 1: 5000 TBS su 0,01% Tween 20. Antikūnas aptikimo sistema buvo naudojamas, ir membranos buvo veikiami rentgeno juostą pagal gamintojo instrukcijas.
Serumas paruošimas
serumas buvo parengtas anksčiau aprašyti pakeitimo [22]. Po paskutinio stimuliacijos EA, visi žiurkės buvo paaukota. Be to, 6 ml kraujo buvo paimtas iš kiekvieno žiurkių miego arterijos. Kraujo buvo laikomi dar 1 valandą, o, ir tada centrifuguojamas esant 3000 apsisukimų per minutę 15 min. Serumas buvo surinkti, filtruotas pašalinti bakterijas ir 1,5 ml buvo supakuotas į EP vamzdelį, kuris buvo saugomas bent -70 ° C skystame azote.
Poveikis EA serumo ant SMC susitraukimo
Penki normalus SD žiurkės anestezuoti IP su 10% uretano, esant 1 g /kg kūno svorio dozę. Po to, kai nuskausminama, pilvo odos ir pilvaplėvės buvo įpjauti, o vidaus organai buvo veikiami. Visas skrandžio buvo iškirpti, ir skrandžio Ertmė audiniai buvo išskirti ir iš karto dedamas į deguonies prisotintu PBS su penicilino V (100 V /ml) ir streptomicino (100 mikrogramų /ml), esant 4 ° C temperatūroje. Po to, kai skalaujami, audiniai buvo perkelti į deguonies prisotintas HEPES, skleisti ir pritvirtinti ant silikagelio plokštelės su smulkiais adata. Gleivinės sluoksnis buvo kruopščiai nupjauti, kad matytųsi apskritas gleivinę, kuris buvo sutrumpintas į 9 - 10 raumenų juostų (1 mm x 4 mm), sudėti į Tyrode tirpalo, ir laikomas 4 ° C temperatūroje, šaldytuve maždaug 15 min. Raumenų juostos buvo supūdytos 1% kolagenazės II tipo, 0,05% tripsino inhibitoriaus, 0,05% ditiotreitolo alkoholio cukraus, ir 0,2% galvijų serumo albumino fermentą vandens vonioje 25 min 36 ° C temperatūroje. Po to, kai virškinimo, mišinys buvo skalaujamas fermentų be HEPES, inkubuojami 30 min, ir filtruojamas su 200 sieto tinklelio surinkti mokesčio pavieniai skrandžio SMCs. Ląstelių gyvybingumas buvo matuojamas Trypan mėlyna testą. Gyvenantys ląstelės buvo daugiau nei 95%, esant 10 6 ląstelių /ml tankiui.
Izoliuoti SMCs buvo atsitiktinai suskirstyti į įprastą serume grupės ST.36 serume grupei, ir ne acupoint serume grupei. SMCs suspensijos (50 pl) esant tankiui 1,0 × 10 6 ląstelių /ml patenka į 96-duobučių lėkštelėse. Kiekvienas serumo mėginys buvo inaktyvuota po 30 min greičiu 56 ° C temperatūros vandens vonelėje, ir po to atskiesti 1: 2 su HEPES. Serumas (50 pl) iš skirtingų grupių buvo įtraukta į SMCs, sumaišyti su 30 s pipete ir pritvirtinamas 30 mikrol 2,5% gliutaraldehidu. Mobilusis ilgis buvo įvertintas su kompiuterinės vaizdo apdorojimo sistemos (DP2 BSW), kuri buvo naudojama apskaičiuoti susitraukia. Ląstelių susitraukia = (ląstelių ilgis iki gydymo - ląstelių ilgio po gydymo). /Ląstelių ilgis iki gydymo × 100%
Statistinė analizė
duomenys buvo pateikti kaip vidurkis ± Š.D. Vienpusis dispersinė analizė po Bonferroni anketa kelių palyginimo bandymas buvo taikoma su SPSS 10.0 programa. Į ΔCt vertės, gautos iš realiojo laiko PGR, kuri buvo naudojama apskaičiuoti kartų kaita skirtumus (čia išreikštas procentais kontrolės), taip pat buvo naudojamas statistinės analizės. Psl
-Pridėtinės < 0,05 arba sulankstoma pokytis > 2 buvo apibrėžtas kaip statistiškai reikšmingas visiems analizės.
Rezultatai
poveikis EA skrandžio motorikos pervežimas EA ne ST.36 gaminami reikšmingų pokyčių absoliučiosios vertės vidutinį piko amplitudės ir dažnio, lyginant su kontrole arba ne-acupoint grupės (P
< 0,01). Priešingai, AE tuo ne acupoint nesukėlė didelių pokyčių skrandžio motorikai, palyginti su kontroline grupe (Papildoma failų 1: S1 paveiksle). buvo pastebėta, kad ST.36 grupės 10 žiurkių išbandyti pagal vidutinį piko dviejų tipų skrandžio variklinių modelių: žiurkės, kurių teigiamas vidutinis smailės buvo nuspręsta, kad skatinant modelį, o žiurkės su neigiamu vidutinis smailės buvo nuspręsta, kad skatinant modelis. Rezultatai parodė, 5 (50,0%) žiurkės parodė ST.36 skatinantį modelį ir 5 (50,0%) žiurkėms parodė ST.36 slopina modelis. Žiurkėms su ST.36 skatinti modelis, vidutinis smailių amplitudės ir dažnio reikšmės buvo 47.13 ± 0,44 ir 0,19 ± 0,06, atitinkamai. Žiurkėms su ST.36 slopinančiu modelis, vidutinis smailių amplitudės ir dažnio reikšmės buvo -43.41 ± 0,62 ir 0,17 ± 0,03, atitinkamai. (Papildoma failą 2: Lentelė S1)
poveikis EA dėl PKC ir MAPK signalizacijos keliai
EA ne ST.36 žymiai reglamentavo kai kurių PKC genų ir MAPK signalizacijos būdus išraiška. 1 lentelėje pateikiami rezultatus iš mikrogardelių sistemoje analizės ST.36 skatinti grupės (kaip, palyginti su kontroline grupe). Daugelio genų ekspresija buvo padidinta po EA stimuliacijos, įskaitant ERK3, MAPK13, IL1R1, PRKCA ir PTGS2. Kitos genai parodė sumažėjo išraišką po EA stimuliacijos, įskaitant IL1R2. 2 lentelėje pateikiami rezultatus iš mikrogardelių sistemoje analizės ST.36 slopinimui grupės (kaip, palyginti su kontroline grupe). Genų ekspresija IL1R2 ir MMP9 sumažėjo po AE stimulation.Table 1 Genų pokyčiai lyginant EA skatinti grupę su kontroline grupe
Signal keliu
Gene
svetainės
AE /kontrolė (Fold pakeitimas)
AE /kontrolė (Sulenkite aukštyn arba žemyn reguliavimą)
MAPK
MAPK6 (ERK3)
D02
2.39
2.39
MAPK
MAPK13
D10
2.86
2.86
PKC
IL1R1
F08
2.18
2.18
PKC
PRKCA
G01
2.40
2.40
PKC
PTGS2
G02
2.72
2.72
PKC
IL1R2
F09
0.26
-3.85
Sulenkite permainos (2-ΔΔCt) yra normalizuotas genų ekspresijos (2-ΔCt) bandinyje padalinus iš normalizuotas genų ekspresiją (2-ΔCt) kontrolinės imties. Sulenkite reguliavimas atstovauja kartų kaita rezultatų biologiškai prasmingai. Sulenkite kaitos vertės didesnės nei vienas rodo priverstinio arba iki reguliavimą, o atlenkiamas reguliavimas yra lygus kartų kaita. Sulenkite kaitos vertina mažiau nei rodo neigiama arba žemyn reguliavimą, o atlenkiamas reglamentas yra neigiamas atvirkštinė iš karto kaita.
2 lentelė geno lyginant EA slopina grupę su kontroline grupe
Signal keliu

Genų

Sklypai
EA /valdymo (Sulenkite kaitą)
EA /valdymo (Sulenkite aukštyn arba down-regulation)

PKC
IL1R2
F09
0.24
-4.26
PKC
MMP9
F11
0.21
-4.68
Sulenkite permainos (2-ΔΔCt) yra normalizuotas genų ekspresijos (2-ΔCt) bandinyje padalinus iš normalizuotas genų ekspresiją (2-ΔCt) kontrolinės imties. Sulenkite reguliavimas atstovauja kartų kaita rezultatų biologiškai prasmingai. Sulenkite kaitos vertės didesnės nei vienas gautoji priverstinio arba iki reguliavimą, o atlenkiamas reguliavimas yra lygus kartų kaita. Sulenkite-kaitos vertybes mažiau nei rodo neigiama ar žemyn reglamentą ir kartų -regulation yra neigiamas atvirkštinė iš karto kaita.
3 lentelė sąrašai rezultatus iš mikrogardeliq analizės ST.36 skatinti grupės (palyginti su ne acupoint grupėje). buvo padidintas iš COL1A1 geno raiška po EA stimuliacijos. iš IL1R2 ir SERPINE1 genų ekspresijos 4 lentelėje pateikiami rezultatai sumažėjo po EA stimuliacijos. iš mikrogardeliq analizės ST.36 slopina grupės (palyginti su ne acupoint grupės). Daugelis genų parodė sumažėjo išraiška po EA stimuliacijos, įskaitant ERK3, JNK3, p38bMAPK, MAPK13, p38MAPK, ERK1, FGF2, IL1R1, IL1R2 myc, PRKCA ir PTGS2 genuose. Iš COL1A1 geno ekspresija buvo padidinta po AE stimulation.Table 3 Gene pokyčių lyginant EA skatinti grupę su ne acupoint GROUP UAB Signalo kelyje
Genų
svetainės
AE /Ne acupoint (Fold pakeitimas)
AE /Ne acupoint (Sulenkite aukštyn arba down-regulation)

PKC
COL1A1
F05
3.60
3.60
PKC
IL1R2
F09
0.39
-2.54
PKC
SERPINE1
G04
0.48
-2.07
Sulenkite permainos (2-ΔΔCt) yra normalizuotas genų ekspresijos (2-ΔCt) bandinyje padalinus iš normalizuotas genų ekspresiją (2-ΔCt) kontrolinės imties. Sulenkite reguliavimas atstovauja kartų kaita rezultatų biologiškai prasmingai. Sulenkite kaitos vertės didesnės nei vienas gautoji priverstinio arba iki reguliavimą, o atlenkiamas reguliavimas yra lygus kartų kaita. Sulenkite-kaitos vertybes mažiau nei rodo neigiama ar žemyn reglamentą ir kartų -regulation yra neigiamas atvirkštinė iš karto kaita.
4 lentelė Genų pokyčiai lyginant EA slopina grupę su ne acupoint GROUP UAB signalo kelyje
Genų
svetainės pervežimas
EA /ne acupoint (Sulenkite kaitą)
EA /ne acupoint (Sulenkite aukštyn arba žemyn reguliavimą) pervežimas pervežimas MAPK pervežimas MAPK6 (ERK3)
D02
0,18
-5,67
MAPK
MAPK10 (JNK3)
D07
0,42
-2,40
MAPK
MAPK11 (p38bMAPK)
D08
0,39
-2,58
MAPK
MAPK13
D10
0,28
-3,58
MAPK
MAPK3 (ERK1)
G11
0,26
-3,83
MAPK
MAPK14 (p38MAPK)
D11
0.47
-2.13
PKC
FGF2
F07
0.37
-2.67
PKC
IL1R1
F08
0.30
-3.31
PKC
IL1R2
F09
0.36
-2.81
PKC
MMP9
F11
0.22
-4.48
PKC
MYC
F12
0.39
-2.59
PKC
PRKCA
G01
0.23
-4.27
PKC
PTGS2
G02
0.19
-5.36
PKC
COL1A1
F05
4.81
4.81
Sulenkite permainos (2-ΔΔCt) yra normalizuotas genų ekspresijos (2-ΔCt) bandinyje padalinus iš normalizuotas genų ekspresiją (2-ΔCt) kontrolinės imties. Sulenkite reguliavimas atstovauja kartų kaita rezultatų biologiškai prasmingai. Sulenkite kaitos vertės didesnės nei vienas gautoji priverstinio arba iki reguliavimą, o atlenkiamas reguliavimas yra lygus kartų kaita. Sulenkite-kaitos vertybes mažiau nei rodo neigiama ar žemyn reglamentą ir kartų -regulation yra neigiamas atvirkštinė iš karto kaita.
poveikis EA ant CAD ir BŽŪP baltymų raiškos pervežimas stimuliacijos AE smarkiai padidėjo CAD ir BŽŪP baltymų ekspresijos į ST.36 slopinančiu grupėje, palyginti su ne acupoint grupė, o stimuliacijos EA gerokai sumažėjo CAD ir BŽŪP baltymų ekspresiją ST.36 skatinti grupę palyginti su ne acupoint grupės (pav 1A, B, C, d). 1 pav effects EA stimuliacijos ant Caldesmon (ESD) ir Calponin (BŽŪP) baltymų kiekis. A. išraiška Caldesmon baltymų koncentracijos Imunoblotingo metodu. B. Densitometric analizė Caldesmon baltymo koncentracija normalizavosi beta-aktino; C. išraiška Calponin baltymų koncentracijos Imunoblotingo metodu; D Densitometric analizė Calponin baltymo koncentracija normalizavosi beta-aktino. CAD: Caldesmon; BŽŪP: calponin; 1: ne acupoint grupė; 2-4: E. slopina grupė; 5-7: E. skatinti grupę. * P < 0,05 compard ne-acupoint GROUP UAB poveikis EA serumo ant SMC contractility
Kaip parodyta papildomų failų 3:. Pav S2 ir papildomų failų 4: Lentelė S2 ląstelių morfologija buvo stebima šviesos mikroskopu po gydymo skiriasi serumo tipai. Nebuvo jokių ląstelių ilgio skirtumai prieš serume to (p > 0,05). ST.36 serume padidėjo SMC kontraktilumui (60,22 ± 3,84 mkm), palyginti su kontroliniu serumu (96,02 ± 6,24 mikronų) arba ne acupoint serumas (97,33 ± 6,97 mkm). Susitraukimo procentas buvo 41%, po stimuliacijos ST.36 serume, o susitraukimo procentas buvo 7% ir 10% po stimuliacijos arba ne acupoint serume ar kontrolinio serumo, atitinkamai.
Diskusija Viesbutis The šiuo tyrimas parodė, kad AE stimuliacija tuo ST.36 turėjo reguliuojamąją poveikį skrandžio motorikos žiurkių, kad buvo arba stimuliuoti arba slopinantis. Skatinamąjį poveikį EA gali veikti per PKC ir MAPK signalizacijos būdus.
EA poveikį skrandžio motorikos buvo plačiai tiriamas tiek gyvūnams ir žmonėms, nes iš electrogastrography prieinamumą. Ji yra gerai žinoma, kad skrandžio myoelectrical veikla susideda iš lėtai bangų ir spindulių. Kapliukai yra tiesiogiai susijęs su susitraukimai išvaizdą. Lėtai bangos neturi sukelti virškinimo susitraukimus, tačiau jie nustato maksimalų dažnį skrandžio susitraukimai.
Dažniausiai naudojamas acupoint gydant virškinimo trakto sutrikimai yra ST.36. Tai paprastai manoma, kad akupunktūra gali daryti skatinant ir slopina poveikį virškinamojo trakto motorikai, priklausomai nuo priverstinės acupoint. Žmonėms, buvo įrodyta, kad AE stimuliacija tuo ST.36 turėjo dvigubą poveikį skrandžio peristaltiką, kurie yra arba sudarant palankesnes sąlygas arba slopinantis [15, 23]. Nors pacientai kenčia nuo virškinimo trakto ligų naudos iš akupunktūros taikymą ne ST.36, tačiau tikslios molekuliniai mechanizmai dar neaišku. Šunims AE ne ST.36 padidėjo skrandžio lėtai bangų [24, 25] tvarkingumą. Be sąmoningų žiurkių EA stimuliacija tuo ST.36 sukeltas dvigubą poveikį, kurie buvo arba sudarant palankesnes sąlygas arba slopinantis, skrandžio motorikos [26, 27]. Dar viename tyrime buvo nustatyta, kad stimuliuoti poveikis yra sąlygotas per cholinerginių kelius, o slopinantis poveikis yra nepriklausoma nuo simpatinės keliu [28]. Bendras teorija akupunktūra vaistą prielaida apie Yin ir Yang sąvoka ir akupunktūra, manoma, keisti tarp yin ir yang pusiausvyros. Akupunktūros poveikis balansavimo yin ir yang gali būti tarpininkaujant per tarp GABA nervinių impulsų perdavimą ir glutamato į smegenų kamiene sąveika.
Dabartiniame darbe, AE stimuliacija tuo ST.36 buvo veiksmingas reguliavimo skrandžio motoriką, kaip parodė pagal gerokai padidinti piko amplitudės ir dažnio. Be to, tokio atsakas nepakankamas, kai tas pats stimuliacija buvo atliktas prijungtas prie ne-acupoint buvo įrodymas, kad šio poveikio specifiškumo. Pasak piko amplitudės ir dažnio, The ST.36 grupė toliau skirstoma į skatina ir slopinamasis modelių, nes AE parodė dvigubą poveikį. Toliau tirti mechanizmus, pagal kuriuos AE reguliuoja skrandžio motoriką, mes izoliuoti SMCs iš skrandžio ir stebėjo ST.36 serumo poveikį SMC susitraukimo naudojant serologiniai farmakologinių bandymų metodus. Rezultatai parodė, kad ST.36 serume reikšmingai padidėjo SMC susitraukimus; . O poveikis pagaminti normalaus ar ne acupoint serume nebuvo akivaizdu
Naujausi tyrimai rodo, kad EA stimuliacijos poveikis tarpininkaujant per opioidų sistema [29] arba per savo stimuliuojantis poveikis nervo klajoklio veiklos [30]; Tačiau tikslių mechanizmų, kuriuos AE pasireiškia skrandžio motoriką nebuvo visiškai suprantama. Ankstesnės išvados taip pat nurodė, kad PKC koncentracija buvo padidinta po stimuliacijos su EA [31]. Todėl mes pasirinkome PKC ir MAPK kelius, kaip tikslus, tarpininkauti stimuliavimo poveikį EA skrandžio mobilumą. Be to, BŽŪP ir CAD gali vaidinti vaidmenį virškinamojo trakto motorikai reguliavimo metu fiziologinių ir patologinių pritaikymo. Iki-reguliavimo dangtelis ir CAD išraiškos slopina virškinimo trakto judrumą ir žemyn reguliavimo dangtelis ir CAD išraiškos skatino virškinamojo trakto motoriką [32, 33]. ERK1 /2, priklausanti MAPK šeimos narys, buvo įrodyta, kad svarbų vaidmenį lygiųjų raumenų susitraukimą [34] Reglamentas. Pagal mūsų microarray rezultatų, skatinti skrandžio motorikai gali būti siejamas su iki-reguliavimo MAPK6 (ERK3), MAPK13 ir PTGS2 genų ekspresiją, ir žemyn reguliavimo COL1A1 genų ekspresiją. Slopinimas skrandžio motorikai gali koreliuoja su žemyn reguliavimo IL1R2 ir MMP9 genų ekspresiją. Vakarų dėmės parodė reguliavimą CAD ir BŽŪP baltymų raiškos slopina skrandžio motoriką, o žemyn reguliavimas CAD ir BŽŪP baltymų raiškos skatinama skrandžio motoriką. Šie rezultatai rodo, kad CAD ir BŽŪP gali vaidinti vaidmenį virškinamojo trakto motorikai reguliavimo metu fiziologinių ir patologinių pritaikymo.
Būta šiame tyrime apribojimai, kurie turėtų būti paminėta. Pirma, mes netyrė, ar PKC ir MAPK inhibitoriai gali paveikti arba blokuoti reguliavimo poveikio EA stimuliavimo ST.36 skrandžio mobilumą. Tolesni tyrimai bus reikalaujama ištirti PKC ir MAPK inhibitorių įtaka. Antra, ateities tyrimai bus sutelkti į visiškai suprasti kiekvienos genų ekspresiją ant skrandžio mobilumo keisti reglamentą vaidmenis.
Išvadas
Apibendrinant, mūsų duomenys rodo, kad AE stimuliacija tuo ST.36 reguliuoja skrandžio motoriką. E. stimuliacija tuo ST.36 darė dvigubą poveikį skrandžio motorikai, kurie buvo arba stimuliuoti arba slopinantis. Be to, reguliavimas skrandžio motorikai gali koreliuoja su PKC ir MAPK signalo perdavimo kelius.
Notes
Qi Yang Yan-Dong Xie prisidėjo vienodai prie šio darbo.
Deklaracijų
Padėkos
Tai tyrimas parėmė dotacijas iš nacionalinio Gamtos mokslo fondo Kinijos (Nr 30.801.487)
elektroninės papildomą medžiagą
12906_2013_1722_MOESM1_ESM.doc Papildoma failą 1:. S1 paveiksle: Poveikis EA stimuliacijos skrandžio motorikai. Skrandžio-žarnyno buvo matuojamas pagal electrogastrography. A. Valdymo B. ST.36 C. Ne acupoint. Stimuliavimas su EA ne ST.36 padidėjo vidutinis smailių amplitudę ir dažnį. Skrandžio bangos parodė dvigubą pokyčius ST.36 grupėje, lyginant su kontrole ar ne acupoint grupei. Vertės yra išreiškiamos kaip vidurkis ± Š.D. (N
= 10). * P
< 0,05, ** p
< 0,01 vs
. kontrolinė grupė. #p
< 0,05, ## psl
< 0,01 vs
ne acupoint grupė. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM2_ESM.doc Papildoma failą 2: Lentelė S1: Poveikis EA skrandžio myoelectrical veikla. ST.36 grupė toliau skirstoma į AE skatinti ir AE slopina grupes pagal skrandžio bangas. Vertės išreiškiamos kaip vidurkis ± S.D (N
= 5). (DOC 26 KiB) 12906_2013_1722_MOESM3_ESM.doc Papildoma failą 3: S2 pav poveikis EA stimuliacijos skrandžio SMC susitraukimo. Ląstelių morfologija buvo stebimas naudojant šviesos mikroskopu (× 200 priartinimas). Šios kameros ir susitraukimo procentą ilgis buvo matuojamas su kompiuteriu vaizdo analizės sistema. O. SMCs; A. SMCs + kontrolinis serumas; B. SMCs + ST.36 serume; C. SMCs + ne acupoint serume. (DOC 1 MB) 12906_2013_1722_MOESM4_ESM.doc Papildoma failas 4: Lentelė S2 Poveikis serumo ant SMC susitraukimo. Kaip vertina kompiuterinės vaizdo apdorojimo sistema, Zusanli serumas sukėlė didelę susitraukimo metu SMCs. Rezultatai išreiškiami kaip vidurkis ± S.D (N
= 10). * P
< 0,05 ** p
< 0,01 vs
kontrolinis serumas grupė. #p
< 0,05, ## psl
< 0,01 vs
ne acupoint serume. (DOC 28 KiB) Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų. 12906_2013_1722_MOESM5_ESM.tiff Autorių originalus failas 1 pav konkuruojančių interesų Viesbutis The autoriai deklaruoja, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.
Autorių įmokos
QY atlikti molekulinius genetinius tyrimus, dalyvavo sekos suderinimo ir parengė rankraštis. YDX, MXZ, įranga BH atliko imunomėginiais. CZ, HYLi, RZ dalyvavo sekos suderinimo. Mq, YXH dalyvavo planuojant tyrimą ir atlikti statistinę analizę. JJW sumanyta Tyrimo ir dalyvavo jo sandarą ir koordinavimo ir padėjo parengti rankraštį. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Vieno etapo chirurginis remontas kvėpavimo takų skrandžio fistulė po esophagectomy
• Iš antimikrobinio aktyvumo, ūmaus toksiškumo ir apsaugančių poveikis yra polyherbal ekstrakto žiurkės etanolio-HCl skrandžio opa modelio tyrimas