Analýza génovej expresie z Helicobacter pylori, infikované a diétne liečených myší žalúdočné nádorového modelu vysoko slaného: identifikácia CD177 ako nový prognostický faktor u pacientov s karcinómom žalúdka

Analýza génovej expresie z pylori
-infected a vysoko slaného diéta liečených myší žalúdočné nádorového modelu Helicobacter: identifikácia CD177 ako nový prognostický faktor u pacientov s karcinómom žalúdka
abstraktné
pozadia
Helicobacter pylori
(H. pylori
) infekcie a nadmerný príjem soli sú známe ako významné rizikové faktory pre vznik rakoviny žalúdka u ľudí. Avšak, interakcie týchto dvoch faktorov profilov génovej expresie v priebehu žalúdočnej karcinogenéze zostávajú nejasné. V tejto štúdii sme skúmali globálnej génovej expresie spojené s žalúdočnej karcinogenéze a prognózou ľudského karcinómu žalúdka za použitia myšieho modelu.
Metódy
preverili kandidátske gény zapojené do žalúdka karcinogenézy, sme najprv konštruovaný myš karcinogén indukovanej žalúdočné modelu nádoru v kombinácii s H. pylori
infekcie a high-soľ diétu. C57BL /6J myši dostali N-metyl-N
-nitrosourea v pitnej vode a usmrtia po 40 týždňoch. Zvieratá z kombinácie skupiny boli vrúbľovať s H. pylori stroje a privádza s vysokým obsahom soli stravy. Profily génovej expresie v žalúdočných žliaz myší boli skúmané pomocou oligonukleotidov mikročipu. Po druhé, sme sa zaoberali dostupnosťou kandidátskeho génu ako prognostický faktor u ľudských pacientov. Imunohistochemické analýza CD177, jeden z up-regulované gény, bola vykonaná v ľudských vzorkách pokročilým karcinómom žalúdka zhodnotiť spojenie s prognózou.
Výsledky
multiplicity žalúdočného tumoru karcinogén u myší ošetrených bola významne zvýšená kombináciou H. pylori
infekcie a high-soľ diétu. V microarray analýzy, 35 a 31 viac ako dvakrát up-regulované a down-regulovaných génov, v danom poradí, boli zistené v H. pylori
-infection a vysoko slaného diétou v kombinácii skupiny v porovnaní s ostatnými skupinami. Kvantitatívny RT-PCR potvrdila významné nadmerné expresie dvoch kandidátnych génov, vrátane Cd177 stroje a Reg3g
. Na imunohistochemické analýzu CD177 v ľudských pokročilých vzorkách s karcinómom žalúdka, nadmerná expresia bolo zrejmé u 33 (60,0%), v 55 prípadoch významne koreluje s priaznivou prognózou (P
= 0,0294). Analýza s mnohými premennými, vrátane klinicko faktoroch, ako kovariátov odhalil vysokú expresiu CD177 za nezávislý prognostický faktor pre celkové prežitie.
Závery
Tieto výsledky naznačujú, že náš model myš v kombinácii s H. pylori
infekcii a high-soľ diétu je užitočné pre expresiu génu profilovanie v žalúdočnej karcinogenéze, poskytujú dôkaz, že CD177 je nový prognostický faktor pre rakovinu žalúdka. Toto je prvá správa ukazujúca prognostické koreláciu medzi CD177 prejavu a pevným správanie nádoru. Rakovina
Kľúčové
Cd177 žalúdka Helicobacter pylori
Microarray Salt Pozadie
rakovina žalúdka je štvrtým najbežnejším typom rakoviny a druhou najčastejšou príčinou úmrtia na nádorové ochorenie na celom svete [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) je teraz rozpoznaný ako hlavný rizikový faktor pre rozvoj chronickej zápal žalúdka a žalúdočné rakoviny [2]. Okrem toho bolo tiež preukázané životného prostredia a hostiteľskej faktory, ktoré ovplyvňujú žalúdočné karcinogenéze a (chlorid sodný, chlorid sodný), soli a slané potraviny majú osobitný význam, na základe dôkazov z mnohých epidemiologických a experimentálnych štúdií [3-6]. Tak, v kombinácii vystavenie H. pylori infekcie stroje a nadmerný príjem soli sa zdá byť pre rozvoj a progresiu nádorov žalúdka veľmi dôležitá, aj keď podrobných mechanizmov, najmä pokiaľ ide o profilov génovej expresie, je potrebné ešte objasniť.
Vysoká priepustnosť mikročip technológia poskytuje účinný nástroj pre komplexnú analýzu génov, sa už používa na posúdenie génovej expresie vzoriek v oboch ľudských vzoriek a zvieracích modeloch ochorení žalúdka [7-16]. Hoci mnoho výskumných pracovníkov sa zameralo na génovú expresiu v H. pylori
-treated bunkové línie žalúdočné [17-19], vedie k bunkovej kultúre nemusia korelovať s expresie špecifických génov v in vivo
mikroprostredie predstavovať hostiteľa imunitný odpovede a stromálne-epitelu interakcie v nádorových ochorení. Karcinogén ošetrené mongolskej gerbils boli použité ako zvierací model užitočný H. pylori
-associated žalúdočné karcinogenéze [20-24], a my sme už skôr oznámil, že synergická interakcia medzi H. pylori infekcie a
vysoko slaného príjem urýchľuje chronický zápal a rozvoj nádoru v žalúdkoch týchto zvierat [25, 26]. Bohužiaľ, tam je k dispozícii pre Gerbil genómu, brzdí genetickej a molekulárnej analýza málo informácií. Preto sa pozornosť zamerala na myšiach modeloch [12, 13] a vytvorenie myšieho modelu rakoviny žalúdka predstavovať soli a H. pylori
expozície je potrebná pre vyšetrovanie zamerané na gény zapojené do žalúdka rakoviny.
Predchádzajúcimi štúdiami microarray použitím modeloch hlodavcov nerozlišovali a charakterizovať expresné profily založené na interakciu H. pylori
infekcie a príjem soli. V tejto štúdii sme skúmali expresiu génu v žalúdočnej sliznice sa v H. pylori
diétou liečených myší žalúdočné nádorového modelu -infected a vysoko slaného oligonukleotidom mikročipu a bolo zistené, dve kandidátne up-regulované gény vrátane Cd177
a Reg3g
. Tiež sme skúmali expresiu CD177 v ľudských pokročilých karcinómov žalúdka imunohistochemicky, a získať dôkazy ako potenciálny prognostický faktor pre žalúdočné rakoviny.
Metódy
Očkovanie H. pylori
H. pylori
sa pripraví rovnakým spôsobom s tým, ako bolo opísané skôr [27, 28]. Stručne povedané, H. pylori
(Sydney kmeň 1) sa naočkuje na Brucella agarové doštičky (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, USA) s obsahom 7% (v /v) tepelne inaktivované fetálne hovädzie sérum (FBS) a inkubované pri 37 ° C ° C za mikroaerofilní podmienok pri vysokej vlhkosti vzduchu počas 2 dní. Potom sa baktérie pestujú na doskách boli zavedené do Brucella bujóne (Becton Dickinson) s prídavkom 7% (objem /objem) FBS a inkubované za rovnakých podmienok po dobu 24-hodín. Po 24 h pôste, zvieratá boli intra-gastrically zaočkované H. pylori
(1,0 x 10 8 jednotiek tvoriacich kolónie). Pred očkovaním, vývaru kultúry H. pylori
bola kontrolovaná pod mikroskopom s fázovým kontrastom pre bakteriálnu tvar a pohyblivosť.
Zvieratá a experimentálne protokol
päťdesiat šesť špecificky prostého patogénov samca, 5- alebo 6 -week staré C57BL /6J (CLEA Japan, Tokyo, Japonsko) boli použité v tejto štúdii. Všetky zvieratá bola umiestnená v plastových klietkach na tvrdé drevo-chip posteľná bielizeň v klimatizovanom Biohazard miestnosti s 12-h svetlo /12 h tma, a ponechaný voľný prístup k potrave a vode po celú dobu. Experimentálne návrh bol schválený Výborom pre zvierat starostlivosť o Aichi Cancer Center Research Institute, a zvieratá boli postarané v súlade s inštitucionálnymi smernicami, ako aj pokyny pre riadny priebeh pokusov na zvieratách (vedeckej rady Japonska, 1. júna 2006 ).
experimentálny model je znázornený na obrázku 1A. Myši boli rozdelené do 4 skupín (skupiny A-D); 21, 5, 15, 15 a myši boli zaradené do skupín A, B, C, a D, v tomto poradí, na začiatku experimentu. Zvieratá skupiny B a D boli vrúbľovať s H. pylori
vnútri gastrically na alternatívne týždňov (celkom 7 krát), zatiaľ čo myši ostatných skupín sa naočkujú Brucella bujónu sám. Všetky myši dostali N-metyl-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA) v pitnej vode v koncentrácii 120 ppm na alternatívne týždňov (celková expozícia bola 5 týždňov) , Pre tento účel MNU bol čerstvo rozpustený v destilovanej vode, trikrát týždenne. Myšou skupiny C a D získal CE-2 diéty (bazálny obsah sodíka 0,36%, CLEA Japan) obsahujúcemu 10% NaCl. Počas doby expozície, jedno zviera zo skupiny B, jeden z skupiny C a šiestich zo skupiny D zomreli alebo sa stali umierajúce a boli z pokusu vyradené. Na 40 týždňov, zvyšná zvieratá boli hlboké anestézii a laparotómii s excíziou žalúdka. Obrázok 1 Experimentálne dizajn a histopatologické nálezy. A: Usporiadanie experimentu. Päť- až šesť týždňov starých samcov C57BL /6J myší boli vrúbľovať H. pylori
SS1 kmeňa (skupiny B a D) alebo Brucella bujónu (skupiny A a C). Všetky zvieratá bola podávaná 120 ppm MNU v pitnej vode na alternatívne týždňov (celková expozícia, 5 týždňov). Myšou skupiny C a D dostali bazálnej diétu (CE-2), obsahujúci 10% NaCl. B: histopatologické nálezy pre MNU vyvolanú myšou nádorov žalúdka. (A a B) Žalúdočné adenóm v pylorické regióne súčiastky MNU ošetreného a H. pylori
-infected myší (skupina B). (C a d) Adenokarcinóm žalúdka pozorovaných v skupine B. Všimnite si vysokú hustotu buniek a bunkovej a štrukturálne atypiu. Bar = 200 (A a C) alebo 100 um (b a d).
Histologické hodnotenie
pre histologické vyšetrenie, žalúdky boli fixované v 10% neutrálnom pufrovanom formalínu po dobu 24-hodín, plátky pozdĺž pozdĺžnej osi na prúžky rovnakej hrúbky, a vložené do parafínu. Štyri-um silné rezy boli pripravené a zafarbené hematoxylínom a eosínu (H &E) pre histologické sledovanie. Nádory boli rozdelené do adenómov a adenokarcinómov založená na bunkovej a morfologické atypiu a invazívne rásť do submukóze, tak ako bola opísaná skôr [21].
Príprava RNA a oligonukleotidové microarray, analýzy
Celková RNA bola extrahovaná z celého žalúdočnej sliznice, vrátane ako nádoru a periférne tkanivá pomocou RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Hilden, Nemecko) a jeho kvalitu skontrolovať mikročipy elektroforézy systému (i-chip SV1210; Hitachi Chemical, Tokyo, Japonsko). Vzorky kvalitné boli vybrané a zhromaždené pre každú skupinu, aby nedošlo k individuálnej rozdiel pre posúdenie oligonukleotid microarray (skupina A, n = 3, B, n = 4, C, n = 6, D, n = 7). CodeLink Mouse celého genómu Bioarray (Applied čipy, Tempe, AZ, USA) obsahujúci 35,587 sád sond na čipe bol použitý pre analýzu profilov génovej expresie. Hybridizácia, spracovanie a skenovanie boli vykonané Filgen, Inc. (Nagoya, Japonsko), skenovanie dátové obrazy boli analyzované pomocou softvérového balíka (Microarray analýza dát nástroj, Filgen). Kompletný-väzieb hierarchickej zhlukovaniu sa tiež skúmalo na štyri skupiny za použitia podmnožinu kvalifikovaný sondy (Filgen).
Kvantitatívne real-time RT-PCR expresných profilov u myší žalúdka
relatívna kvantitatívnej real-time RT-PCR bola vykonaná použitím StepOne real-time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) s myšou špecifické pre glyceraldehyd-3-fosfátdehydrogenázy (GAPDH
) génu ako internou kontrolou. Po ošetrení DNázy, First Strand cDNA boli syntetizované z celkovej RNA za použitia Superscript VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). PCR bola vykonaná v podstate podľa pokynov výrobcu za použitia SYBR Green QuantiTect PCR Kit (Qiagen). Tieto sekvencie primérov pre každý gén, sú uvedené v tabuľke 1. Špecifickosť PCR reakcia bola potvrdená za použitia krivky taveniny programu dodávaného s StepOne softvér a elektroforéza vzoriek PCR na 3% agarosovém gélu. Hladiny expresie mRNA boli normalizované na úrovni mRNA GAPDH
a v porovnaní s kontrolnými myšami (skupina A) od ΔΔCT method.Table 1 Primer sekvencie pre relatívnu kvantitatívne real-time RT-PCR
Gene

Sekvencia
dĺžka výrobku
prístupové č.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenázy, Reg3g
regeneračné ostrovček odvodený proteín 3 gama, Muc13
mucín 13.
pacienti a nádorové vzorky
celkom 55 prípadov primárnej pokročilou rakovinou žalúdka, chirurgicky resekcii Cancer Center Hospital Aichi (Nagoya, Japonsko) v rokoch 1995 a 2002 boli skúmané po získaní informovaného súhlasu. Štúdia bola schválená etickou komisiou Aichi Cancer Center. Pacienti boli všetci muži a priemerný vek a priemerné sledovanie v 58,6 ± 10,2 rok a 83 týždňov, v danom poradí. Žiadny z nich dostal predoperačnú chemoterapiu alebo rádioterapiu. Karcinómy s priľahlou slizničné tkanivá boli fixované a vložené do parafínu a narezané na farbenie H &E. Klasifikácia nádoru predstavovať a diagnostike pokročilých prípadov boli vyrobené podľa japonskej klasifikácie žalúdočné karcinómov [29]. Nádory napadol muscularis propria (T2 klasifikácia TNM), ktorého subserosa (T3), alebo serózne blany a peritoneálnej dutiny (T4a), niekedy zahŕňajúce okolitých orgánov (T4b).
Imunohistochemické za použitia rakovina žalúdka tkanivo
Sledovali sme expresiu CD177, pre ktorý bol k dispozícii komerčné primárnej protilátka, vo rakovina žalúdka u ľudí tkanivách imunohistochemicky. Po inhibíciu endogénnej aktivity peroxidázy ponorením do 3% roztoku peroxidu vodíka /metanol, sprístupnenie antigénu bola vykonaná s 10 mM citrátového pufru (pH 6,0) v mikrovlnnej rúre po dobu 10 minút pri 98 ° C. Potom boli rezy inkubované s myšou monoklonálnou anti-CD177 protilátka (klon 4C4, zriedený 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). Farbenie pre CD177 bola vykonaná za použitia Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) a väzba zviditeľnená 0,05% 3,3'-Diaminobenzidine. Výsledky CD177 imunobarvení v nádorových buniek boli rozdelené do štyroch stupňov; trieda 0 (žiadny, 0-10% pozitívnych buniek), stupeň 1 (slabý, 10 - 30%), stupeň 2 (stredná, 30 až 60%) a stupeň 3 (silný, viac ako 60%) na základe pomeru zafarbené bunky, a prípady ukazujú mierne až silné farbenie boli považované za pozitívne.
Štatistická analýza
Chi-kvadrát test s korekciou Bonferroniho bol použitý na posúdenie výskyt žalúdočného nádoru. Kvantitatívne hodnoty vrátane väčšieho počtu nádorov a relatívnej expresie mRNA boli zastúpené priemer ± SD alebo SE, a rozdiely medzi prostriedkami, boli štatisticky analyzované pomocou ANOVA alebo na test Kruskal-Wallis nasleduje test Tukom pre viacnásobné porovnávanie. Celkové prežívanie sa odhadla pomocou metódy Kaplan-Meiera a log-rank testu pre porovnanie. Korelácia medzi CD177 prejavu a klinicko-faktory boli analyzované pomocou ANOVA alebo Chi-kvadrát test. Viacrozmerná analýza bola vykonaná skúmať, či CD177 nadmerné expresie bol nezávislý prognostický faktor pomocou Cox proporcionálneho nebezpečnosť regresného modelu. P
hodnoty < 0,05 boli považované za štatisticky významné.
Výsledky
incidencie a multiplicity z nádorov žalúdka
efektívny počet myší a pozorovaných výskytu a multiplicities žalúdočných nádorov sú zhrnuté v tabuľke 2. tumorov vyvinuté v žalúdočnej sliznici všetkých MNU liečených skupín (skupiny AD) (obrázok 1B). V high-soľ diétu liečených skupín (skupiny C a D), bol výskyt žalúdočného nádoru v skupine D (H. pylori
-infected 100%) bola významne vyššia ako v skupine C (non-infikovaný; 50,0 %) (P Hotel < 0,05). V bazálnych diétnych skupín (skupiny A a B) bol výskyt bola tiež zvýšená H. pylori
-infection (skupina A, 61,9% a zo skupiny B, 100%), avšak bez štatistickej významnosti. Tieto multiplicity z celkového počtu nádorov v oboch H. pylori
-infected skupín (skupina B, 3,3 ± 1,0 nádory /myš a skupiny D, 2,6 ± 1,1), boli významne vyššie ako v neinfikovaných skupín (skupina A, 0,9 ± 0,8 a skupina C, 1,0 ± 1,2) (P Hotel < 0,05). Multiplicity adenokarcinóme žalúdka v skupine D (2,1 ± 1,4), bola o niečo vyššia ako v skupine B (1,8 ± 1,0), a výrazne zvyšuje nad hodnotu skupiny C (0,8 ± 1,0) (P
menšie ako 0,05). Na rozdiel od toho multiplicity adenómu v skupinách A a D (0,1 ± 0,4 a 0,4 ± 0,5, v danom poradí) boli výrazne nižšie ako v skupine B (1,5 ± 0,6) (P Hotel &0,05 a 0,01) .Table 2 Incidencia a väčší počet nádorov žalúdka v
efektívny počet MNU myší ošetrených
skupiny
Treatment
spoločností výskytu (%)
mnohosti (č. zo nádor /myš)
adenóm
Karcinóm
Celkom nádor
adenóm
Karcinóm
Celkom nádor

21
MNU Sims 3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0,4A
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
b
4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0
3,3 ± 1.0cm
C
14
MNU + 10% NaCl
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0 1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% NaCl
4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2,1 ± 1.4D
2,6 ± 1.1D
hodnôt pre multiplicity sú vyjadrené ako priemer ± SD. Incidencia boli všeobecne Chi-kvadrát test, nasledované analýzou párového s Bonferroniho korekcie. Multiplicity boli všeobecne analyzované pomocou ANOVA, nasledované testu Tukom pre viacnásobné porovnávanie. aP Hotel < 0,01 vs.
skupiny B, BP Hotel < 0,01 vs.
skupina A, CP Hotel < 0,05 vs.
skupiny A, dP Hotel < 0,05 verzus
skupina C, EP Hotel &0,05 vs.
skupiny B.
profilovania génovej expresie v žliaz žalúdku oligonukleotid microarray
oligonukleotidom mikročipov, v porovnaní s non-infikovaných a bazálnej strava ošetrené skupine (skupina a), 34 génov bola up-regulovaná a 169 boli down-regulované viac ako dvojnásobne v H. pylori
-infected myší (skupina B), 56 up-regulované a 129 nadol -regulated vo vysoko slaného stravy liečených myší (skupina C), a 69 up-regulované a 214 down-regulované v kombinovanej skupine (skupina D), (obrázok 2A). Dohromady, ako je uvedené v tabuľke 3, sme zistili, že 35 génov bola up-regulovaná a 31 gény boli down-regulované viac ako dvojnásobok iba kombináciou H. pylori infekcie a
vysoko slaného stravy. Okrem toho, analýza hierarchickej zhlukovaniu bola vykonaná na základe štyroch skupín s celkom 303 kvalifikovaných sond algoritmom kompletnú-väzobnú clustering (obrázok 3). Tridsaťjeden sondy vrátane Cd177
Reg3g stroje a Muc13
bolo potvrdené, že v rámci klastra sond up-regulované iba v skupine D. následnej analýze v tejto štúdii bol zameraný na týchto génov, pretože to sa za to, že gény, v ktorých bola expresia meniť iba v kombinovanej skupine môže byť spojené so žalúdočnou karcinogenéze a progresie u ľudí. Obrázok 2 globálna analýza génu v žalúdočných žliaz o MNU myší liečených za použitia oligonukleotidového mikročipu. A: Počet génov up- alebo down-regulované viac ako dvojnásobne v žalúdku MNU ošetrených myší. V Venn diagramu, kruhy označujú Up- (vľavo) alebo down-regulované (vpravo) génov v žalúdku MNU liečených myší s H. pylori infekcie,
vysoko slaného diéty alebo ich kombinácie. Sivá oblasť predstavuje up- alebo down-regulované gény viac ako dvakrát iba kombináciou. B: kvantitatívne real-time RT-PCR analýza troch vybraných up-regulovaných génov (Cd177
, Reg3g stroje a Muc13
) v žalúdkoch MNU-ošetrených myší. Hladiny expresie génov v každej vzorke boli normalizované GAPDH
ako vnútornej kontroly metódou ΔΔCT. Relatívna hladiny expresie boli zastúpené v X-násobnom zmena oproti skupine A (pevné ako 1.0). Štatistická analýza bola vykonaná pomocou testu Kruskal-Wallis pre všeobecné analýzu a Tukom testu pre viacnásobné porovnávania. Bary, SE; *, P Hotel < 0,01 vs.
skupiny A a < 0,05 vs.
skupina C; †, P Hotel < 0.01 vs.
Skupiny C.
Tabuľka 3 Regulované gény podľa kombinácie H. pylori infekcie a vysoko slaného stravy v myšiam žalúdočnej sliznice
prístupové č.
Symbol

gény /proteíny
fold zmeny
up-regulovaná gény
XM_357640
IgK V8
imunoglobulínu kappa reťazca a variabilné 8 (V8)
14.4
XM_001472541
Ighg
ťažkého reťazca imunoglobulínu (gama polypeptid)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 antigén
7,3
NM_011260
Reg3g
regeneračné ostrovček odvodený 3 gama
6,1
NM_023137
UBD
ubikvitin D
4.3
XM_144817
IgK-V34
imunoglobulínu kappa reťazca a variabilné 34 (V34)
4,1
NM_007675
Ceacam10
karcinoembryonální bunkový adhézny molekulou antigén súvisiaci s 10
3,7
NM_183322
Khdc1a
KH doménu obsahujúce 1A
3,3
NM_011475
Sprr2i
Small proline-bohaté bielkoviny 2I
3.2
NM_175165
Tprg
súvisiace Transformácia proteín 63 regulovaná
3,2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPázy, H + prepravovanie , lysozomálnej V0 podjednotky D2
3,0
NM_009703
Arafat
v-raf myší sarkóm 3611 vírusový onkogén homológov
2,6
NM_026822
Lce1b
Late zrohovatenej obálok 1B
2,5
NM_016958
Krt14
keratínu 14
2,5
NM_212487
Krt78
keratín 78
2,4
NM_009807
Casp1
Caspase 1
2,4
NM_146037
Kcnk13
draselný kanál, podčeľaď K, člen 13
2,4
NM_019450
Il1f6
interleukínu 1 rodina, člen 6
2,3
NM_008827
PGF
placentárnu rastový faktor
2,3
XM_893506
Klk12
kalikreín príbuzné peptidázy-12
2,3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2,3
NM_029360
Tm4sf5
transmembránový 4 nadčeľade člen 5
2,2
NM_172301
Ccnb1
cyklín B1
2,2
NM_010739
Muc13
mucín 13, epitelové transmembránový
2,2
NM_011165
Prl4a1
prolaktínu rodiny 4, podčeľaď a, člen 1
2,2
NM_010162
EXT1
exostóza (viac) 1
2,2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1
2,1
NM_011082
pigra
Polymérna imunoglobulín receptor
2,1
NM_007769
Dmbt1
Odstránené malígnych nádorov mozgu 1
2,1
NM_022984
retenčné
Resistin
2,1
NM_173037
TMCO 7
transmembránových a stočený-coil domény 7
2,1
NM_009100
Rptn
Repetin
2,1
NM_007630
Ccnb2
cyklín B2
2,1
NM_001081060
Slc9a3
solu nosič rodinné 9 (sodíka /vodík výmenník), člen 3
2,0
NM_146588
Olfr1030
čuchový receptor 1030
2,0
down-regulované gény
NM_008753
Oaz1
ornitindekarboxyláza antizyme 1
0,31
NM_027126
HFE2
typ Hemochromatosis 2 (juvenilná) (ľudský homolog)
0,33
NM_053206
Magee2
Melanóm antigén, rodina E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
nikotínamid N-metyltransferázy
0,41
NM_026260
Tctn3
Tectonic člen rodiny 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0,43
NM_008312
Htr2c
5-hydroxytryptamín (serotonín) receptora 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
čuchový receptor 740
0,44
NM_007550
BLM
Bloom syndróm homológov (ľudský)
0,44
NM_011243
R aR b
receptoru kyseliny retinovej, beta
0,44
NM_184052
IGF1
inzulínu podobný rastový faktor 1
0,45
NM_013893
Reg3d
regenerujúce ostrovček odvodený od 3 Delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0,46
NM_029550
Keg1
obličky vyjadril gén 1
0,46
NM_019388
CD86
CD86 antigén
0,46
NM_011316
Saa4
sérový amyloid A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
Cytochróm P450, rodinné 26, podčeľaď a, polypeptid 1
0,47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
fosfatidylinozitol-3-phospate /fosfatidylinozitol 5-kinázy, typ III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, cytoskeletu spojené proteín
0,48
NM_007858
Diap1
Priesvitné homológov 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
Regulácia synaptickej membrány Exocytóza 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -dependentní aktivátor proteín pre sekréciu 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Bone gamma karboxyglutamát bielkovín 1
0,49
NM_031871
Ghdc
doména GH3 obsahujúce
0,49
NM_025545
aptX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
receptorov angiotenzínu II, typ 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
ubikvitin-proteín spojený 2
0,49
NM_028045
Erv3
Endogénne retrovirálne sekvencia 3
0,49
NM_011641
Trp63
súvisiace Transformácia proteín 63
0,49
Obrázok 3 Hierarchické analýza zhlukovaniu štyroch pokusných skupín MNU-ošetrených myší. Expresné dáta z 303 kvalifikovaných sond (vľavo). Štyri experimentálne skupiny boli rozdelené do dvoch modulov (skupiny A /C) a (skupiny B /D) na základe podobnosti v expresných vzorov. Každý riadok predstavuje sondu a každý stĺpec predstavuje experimentálnu skupinu (skupiny A-D). Ako je uvedené v pruhu farieb, zelená znamená, up-regulácia; červená indikuje down-reguláciu; a čierne označuje žiadnu zmenu. Tridsaťjeden sondy predstavovalo zhluk sond up-regulované iba v skupine D (vpravo).
Kompletné výsledky tejto analýzy mikročipov boli podané a sú ľahko vyhľadateľné z verejnej databázy NCBI génovej expresie Omnibus (GEO) s prístupové číslo GSE29444 (vzorka číslo: GSM728857-60).
kvantitatívne real-time RT-PCR analýzu profilov génovej expresie v MNU liečených pod myši žalúdky
relatívna kvantitatívnej real-time RT-PCR analýza troch vybraných up- regulované gény (Cd177
, Reg3g stroje a Muc13
) v H. pylori
-infected a high-soľ diétu liečených myší potvrdený zvýšenú expresiu Cd177 stroje a Reg3g
ako je znázornené na obrázku 2B, s významnými rozdielmi. Aj keď úroveň expresie Muc13
v skupine D bola vyššia ako vo všetkých ostatných skupín, neexistuje štatistická významnosť medzi nimi (P = 0,0712 vs.
skupina C).
Imunohistochemické expresie CD177 v človeka pokročilých karcinómov žalúdka a korelácia s klinicko-faktormi
na imunohistochemické analýzu ľudských nádorových tkanív žalúdka, CD177 bola pozorovaná nielen v membránach a cytoplazme infiltrovaných neutrofilov, ale aj v žalúdočných rakovinových bunkách oboch zámožných a zle diferencované adenokarcinómy ( obrázok 4A). Rakovinové bunky typu Signet-ring buniek (2 prípady) boli negatívne pre CD177. Medzi 55 prípadov karcinómu žalúdka, stredne silnej expresie CD177 bola pozorovaná u 33 (60,0%) (tabuľka 4). Obrázok 4 Imunohistochémia pre CD177 v ľudskom pokročilou rakovinou žalúdka a koreláciu s celkovou mierou prežitia. A: Imunohistochemické analýza expresie CD177 v ľudskej žalúdočnej rakoviny tkaniva. (A a B) Negatívne farbenie (nikto, kto by slabý) pre CD177 v adenokarcinómom žalúdka. CD177 výraz je prítomný iba v infiltrácie neutrofily, zatiaľ čo nádorové bunky dobre diferencovaného (a) alebo zle diferencovaný (b) Karcinóm sú negatívne. Pôvodný zväčšenie, × 100 (vložka, × 400). (C a d) Poznámka: pozitívny (stredne silné) výrazu pre CD177 v dobre diferencovaným (C) alebo zle diferencovaných (d) žalúdočné rakovinové bunky. Pôvodný zväčšenie, × 100 (vložka, × 400). B :. Porovnanie Kaplan-Meier kumulatívne krivky prežitia pre CD177 negatívnych a pozitívnych prípadov rakoviny žalúdka
Tabuľka 4 CD177 výraz v žalúdočných karcinómov a jeho korelácia s klinicko-faktormi
prípade nie
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenokarcinómov
55
18
15
17
5
Age
rokov (stredná hodnota ± SD)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8,13
59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0.5039
Histologické klasifikáciu
Well /stredne diferencovaného typu *
21
6
9
4
2
0,1904
Zle diferencovaný /Signet-ring bunkový typ **
34
12
6
13 Sims 3
Hĺbka invázie †
T1-3
27
5
10
10
2
0.2011
T4
26
11
5
7 Sims 3
lymfy uzlín
N0
6
1
2
2 foto 1
0,7869
N1-3
49
17
13
15
4
* črevnej typ Lauren, ** typ difúzna Lauren, počet † Prípad bol znížený na päťdesiat tri, pretože hĺbka invázie nebola klasifikovaná v dvoch prípadoch, ‡ boli vykonané ANOVA a Chi-kvadrát test na veku a ďalších faktoroch, resp.
follow-up perióda pacientov sa pohyboval od 9 do 606 týždňov (medián = 83 týždňov). prežitie päťročné pre CD177-pozitívne a negatívne bol 39,4% a 18,2%, resp. Z analýzy krivky prežitia Kaplan-Meier, CD177-pozitívna expresia bola spojená s lepšie celkové prežívanie (P = 0,0294
, log-rank test) (Obrázok 4B). Nebol žiadny štatisticky významná korelácia CD177 výrazu s vekom, histologické klasifikácie, hĺbkou invázie a lymfatických uzlín (tabuľka 4).
Analýze s viacerými premennými pre celkového prežitia ľudských prípadov rakoviny žalúdka
Použitie Coxovho modelu proporcionálneho rizika , viacrozmerné analýza klinicko-premenných, vrátane veku pacienta, nádoru histologické klasifikácie, hĺbkou invázie, lymfatických uzlín a CD177 výrazu (tabuľka 5), ​​odhalila posledný ako nezávislý faktor pre celkové prežitie (P
= 0,0323) , Všetci autori čítať a schválená konečná rukopis.

• Kurkumín zlepšuje expresia SCF /c-kit cez tlmiace oxidačný stres a aktiváciu NF-kB v žalúdočných tkanivách diabetickej gastroparézy rats
• Nedostatok výživy zvyšuje riziko úmrtnosti na rakovinu žalúdka