Genekspressionsanalyse af en Helicobacter pylori-inficerede og høj-salt kost-behandlede mus gastrisk tumor model: identifikation af CD177 som en ny prognostisk faktor i patienter med gastrisk cancer

Gen-ekspression analyse af en Helicobacter pylori
inficerede og high-salt kost-behandlede mus gastrisk tumor model: identifikation af CD177 som en ny prognostisk faktor hos patienter med mavekræft
Abstract
Baggrund
Helicobacter pylori Hotel (H. pylori
) infektion og overdreven indtagelse salt er kendt som vigtige risikofaktorer for mavekræft i mennesker. Men interaktioner mellem disse to faktorer med genekspressionsprofiler under gastrisk carcinogenese fortsat uklare. I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi den globale genekspression forbundet med mave carcinogenese og prognose af human gastrisk cancer under anvendelse af en musemodel. Salg Metoder
at finde kandidatgener involveret i maven carcinogenese, vi først konstrueret et carcinogen-induceret muse gastrisk tumor model kombineret med H. pylori
infektion og høj-salt kost. C57BL /6J mus fik N
methyl-N
-nitrosourea i deres drikkevand og aflivet efter 40 uger. Dyr af en kombination gruppe blev inokuleret med H. pylori
og fodret en høj-salt kost. Genekspressionsprofiler i kirtelmave af musene blev undersøgt ved oligonukleotid mikroarray. For det andet undersøgte vi en tilgængelighed af kandidat-genet som prognostisk faktor for humane patienter. Immunohistokemisk analyse af CD177, en af ​​de op-regulerede gener, blev udført i humane avancerede gastrisk cancer prøver at evaluere association med prognose. Search Results Salg Mangfoldigheden af ​​gastrisk tumor i carcinogen-behandlede mus var signifikant forhøjet ved kombination af H. pylori
infektion og høj-salt kost. I microarray analyse, 35 og 31 mere end to gange opreguleret og ned-regulerede gener henholdsvis blev påvist i den H. pylori
-Infektion og high-salt kost kombineret sammenlignet med de andre grupper. Kvantitativ RT-PCR bekræftede betydelig overekspression af to kandidatgener herunder Cd177
og Reg3g
. På immunhistokemisk analyse af CD177 i humane avancerede gastric cancer prøver, overekspression var tydelig i 33 (60,0%) af 55 sager, betydeligt korrelerer med en gunstig prognose (P
= 0,0294). Multivariat analyse, herunder klinisk-patologiske faktorer som kovariater afsløret høj ekspression af CD177 at være en uafhængig prognostisk faktor for den samlede overlevelse.
Konklusioner
Disse resultater tyder på, at vores musemodel kombineret med H. pylori
infektion og høj salt kost er nyttig til genekspression profilering i gastrisk carcinogenese, som godtgør, at CD177 er et hidtil ukendt prognostisk faktor for mavekræft. Dette er den første rapport, der viser en prognostisk sammenhæng mellem CD177 udtryk og solid tumor adfærd.
Nøgleord
Cd177 mavekræft Helicobacter pylori
Microarray Salt Baggrund
Mavekræft er den fjerde mest almindelige kræftform og anden hyppigste årsag af cancer-relaterede dødsfald på verdensplan [1]. Helicobacter pylori Hotel (H. pylori
) er nu anerkendt som en væsentlig risikofaktor for kronisk udvikling gastritis og mavekræft [2]. Desuden har miljø- og vært faktorer også vist sig at påvirke gastrisk carcinogenese og salt (natriumchlorid, NaCl) og salt fødevarer er af særlig betydning, baseret på dokumentation fra en række epidemiologiske og eksperimentelle undersøgelser [3-6]. Således kombineret udsættelse for H. pylori
infektion og overdreven indtagelse salt synes at være meget vigtig for udviklingen og progressionen af ​​gastriske tumorer, selv om de detaljerede mekanismer, især med hensyn til genekspressionsprofiler, mangler at blive afklaret.
høj throughput microarray teknologi giver et kraftfuldt værktøj til omfattende genanalyse, anvendes allerede til at vurdere genekspressionsmønstre i både humane prøver og dyremodeller for gastriske lidelser [7-16]. Selv om mange forskere har fokuseret på genekspression i H. pylori
-behandlede gastriske cellelinier [17-19], behøver resulterer i cellekultur ikke nødvendigvis korrelerer med ekspression af specifikke gener i in vivo
mikromiljø featuring værtsimmunsystem svar og stromale-epitel interaktioner i kræft. Kræftfremkaldende-behandlede mongolske hoppemus er blevet anvendt som en nyttig dyremodel af H. pylori-associeret gastrisk
carcinogenese [20-24], og vi tidligere rapporteret, at en synergistisk interaktion mellem H. pylori
infektion og høj salt indtag accelererer kronisk inflammation og tumor udvikling i maver af disse dyr [25, 26]. Desværre er der lidt information tilgængelig for gerbil genomet, hæmmer genetisk og molekylær analyse. Derfor har opmærksomheden fokuseret på musemodeller [12, 13], og etablering af en musemodel for mavekræft byder salt og der er behov for H. pylori
eksponering for undersøgelser rettet mod gener involveret i gastrisk carcinogenese.
Tidligere microarray undersøgelser hjælp gnavermodeller ikke skelne og karakterisere udtryk profiler baseret på interaktionen af ​​H. pylori
infektion og saltindtag. I den foreliggende undersøgelse undersøgte vi genekspression i maveslimhinden i en H. pylori
-inficerede og høj-salt kost-behandlede mus gastrisk tumor model ved oligonukleotid mikroarray og fundet to kandidat opregulerede gener herunder Cd177
og Reg3g
. Vi undersøgte også udtryk for CD177 i humane avancerede gastrisk kræft ved immunhistokemi, og opnåede beviser som en potentiel prognostisk faktor for maven carcinogenese.
Metoder
Podning med H. pylori
H. pylori
blev fremstillet ved den samme fremgangsmåde som beskrevet tidligere [27, 28]. Kort fortalt blev H. pylori
(Sydney stamme 1) inokuleret på Brucella agar plader (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, USA) indeholdende 7% (v /v) varmeinaktiveret føtalt bovint serum (FBS) og inkuberet ved 37 ° C under mikroaerofile betingelser ved høj fugtighed i 2 dage. Derefter blev bakterierne dyrket på pladerne indført i Brucella-bouillon (Becton Dickinson) suppleret med 7% (vol /vol) FBS og inkuberet under de samme betingelser i 24-h. Efter 24 timers faste, dyr var intra-gastrisk inokuleret H. pylori Salg (1,0 x 10 8 kolonidannende enheder). Før podning blev bouillon kulturer af H. pylori
kontrolleres under en fasekontrastmikroskop for bakteriel form og mobilitet.
Dyr og forsøgsprotokol
Fifty-seks SPF-mand, 5- eller 6 -Uge gamle C57BL /6J-mus (CLEA Japan, Tokyo, Japan) blev anvendt i denne undersøgelse. Alle dyr blev opstaldet i plast bure på hårdttræ-chip sengelinned på et airconditioneret biohazard værelse med en 12-timers lys /12-h mørke cyklus, og fri adgang til mad og vand hele vejen igennem. Det eksperimentelle design blev godkendt af Animal Care udvalg af Aichi Cancer Center Research Institute, og dyrene blev passet i overensstemmelse med de institutionelle retningslinjer samt retningslinjerne for korrekt afvikling af dyreforsøg (Science Council of Japan, 1 juni 2006 ).
eksperimentelle design er illustreret i figur 1A. Musene blev opdelt i 4 grupper (gruppe A-D); 21, 5, 15, og 15 mus blev tildelt til A, B, C, og D-grupper, henholdsvis ved begyndelsen af ​​eksperimentet. Dyr i gruppe B og D blev inokuleret med H. pylori
intra-gastrisk hver anden uge (i alt 7 gange), mens mus i de øvrige grupper blev inokuleret med Brucella-bouillon alene. Alle mus fik N
methyl-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA) i deres drikkevand ved en koncentration på 120 ppm på alternative uger (samlede eksponering var 5 uger) . Til dette formål MNU blev frisk opløst i destilleret vand tre gange om ugen. Mus fra gruppe C og D modtog CE-2 diæter (basal natriumindhold på 0,36%; CLEA Japan) indeholdende 10% NaCl. I perioden eksponering, et dyr af gruppe B, en af ​​gruppe C og seks af gruppe D døde eller blev døende, og de blev udelukket fra forsøget. På 40 uger blev forblev dyrene underkastet dyb anæstesi og laparotomi med udskæring af maven. Figur 1 Eksperimentel design og histopatologiske fund. A: Experimental design. Fem- til seks uger gamle C57BL /6J-mus blev inokuleret med H. pylori
SS1-stamme (B og D) eller Brucella-bouillon (gruppe A og C). Alle dyr blev indgivet 120 ppm MNU i deres drikkevand på alternative uger (samlet eksponering, 5 uger). Mus fra gruppe C og D blev givet basal diæt (CE-2) indeholdende 10% NaCl. B: histopatologiske fund for MNU-induceret mus gastriske tumorer. (A og b) Gastrisk adenom i pyloric region af et MNU-behandlede og H. pylori
-inficerede mus (gruppe B). (C og d) gastrisk adenocarcinom observeret i gruppe B. Bemærk høj celledensitet og cellulær og strukturel atypi. Bar = 200 (A og C) eller 100 um (B og D).
Histologisk evaluering
til histologisk undersøgelse, maverne blev fikseret i 10% neutral-pufret formalin i 24-h, skåret langs længdeaksen i strimler med ens bredde, og indlejret i paraffin. Fire um tykke snit blev fremstillet og farvet med hematoxylin og eosin (H &E) til histologisk observation. Tumorer blev klassificeret i adenom og adenocarcinom baseret på cellulær og morfologiske atypi og invasiv vækst til submucosa som vi tidligere rapporteret [21].
RNA-fremstilling og oligonucleotid microarray analyse
Totalt RNA blev ekstraheret fra hele maveslimhinden herunder både tumor og perifere væv under anvendelse af et RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) og dets kvalitet kontrolleres med en mikrochip elektroforesesystem (i-chip SV1210, Hitachi Chemical, Tokyo, Japan). prøver af høj kvalitet blev udvalgt, og puljet for hver gruppe for at undgå individuel forskel for oligonucleotid microarray vurdering (gruppe A, n = 3; B, n = 4; C, n = 6; D, n = 7). Den CodeLink Mouse Whole Genome Bioarray (Applied Microarrays, Tempe, AZ, USA) indeholdende 35,587 probesæt per chip blev anvendt til at analysere genekspression profiler. Hybridisering, forarbejdning, og scanning blev udført ved Filgen, Inc. (Nagoya, Japan), idet scanningsdata billeder analyseres med en softwarepakke (Microarray Data Analysis Tool, Filgen). Komplet-binding hierarkisk klyngedannelse blev også undersøgt på de fire grupper under anvendelse af en kvalificeret probe delmængde (Filgen).
Kvantitativ real-time RT-PCR af ekspressionsprofiler i mus mave
Relativ kvantitativ real-time RT-PCR blev udført ved anvendelse af en StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) med muse-specifikke glyceraldehyd-3-phosphatdehydrogenase (GAPDH
) genet som en intern kontrol. Efter DNase-behandling blev første streng cDNA'er syntetiseret fra totalt RNA under anvendelse af en SuperScript Vilo cDNA Synthesis Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). PCR blev udført stort set i overensstemmelse med producentens anvisninger under anvendelse af en QuantiTect SYBR Green PCR-kittet (Qiagen). Primersekvenserne for hvert gen er anført i tabel 1. Specificitet af PCR-reaktionerne blev bekræftet under anvendelse af en smelte kurve program forsynet med StepOne software og elektroforese af PCR prøver i 3% agarosegeler. Ekspressionsniveauerne af mRNA'er blev normaliseret til mRNA-niveauet af GAPDH
og sammenlignet med kontrolmusene (gruppe A) fra de ΔΔCT method.Table 1 Primersekvenser for relativ kvantitativ real-time RT-PCR
Gene

Sekvenser
Produkt længde
tiltrædelse nr.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
glyceraldehyd-3-fosfat dehydrogenase, Reg3g
regenererende ø-afledt protein 3 gamma, Muc13
mucin 13.
Patienter og tumor prøver
En alt 55 tilfælde af primær fremskreden mavekræft, kirurgisk resektion på Aichi cancer center Hospital (Nagoya, Japan) mellem 1995 og 2002, blev undersøgt efter at have indhentet informeret samtykke. Undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité i Aichi Cancer Center. Patienterne var alle mandlige og den gennemsnitlige alder og median opfølgningsperiode var 58,6 ± 10,2 år og 83 uger, hhv. Ingen havde modtaget præoperativ kemoterapi eller strålebehandling. Carcinomer med tilstødende mucosavæv blev fikseret og indlejret i paraffin, og snit til farvning med H &E. Klassificering af tumor staging og diagnosticering af fremskredne tilfælde blev foretaget ifølge den japanske klassifikation af gastriske carcinomer [29]. De kræftformer havde invaderet muscularis propria (T2 for TNM klassifikation), den subserosa (T3), eller serosa og bughulen (T4A), undertiden involverer tilstødende organer (T4B).
Immunhistokemi under anvendelse af humant gastrisk cancer væv
Vi undersøgte ekspression af CD177, for hvilke en kommerciel primært antistof var tilgængelig, i humane gastrisk cancer væv ved immunohistokemi. Efter inhibering af endogen peroxidaseaktivitet ved nedsænkning i 3% hydrogenperoxid /methanol-opløsning, blev antigen-genvinding udført med 10 mM citratpuffer (pH 6,0) i en mikrobølgeovn i 10 minutter ved 98 ° C. Derefter blev snit inkuberet med et monoklonalt muse-anti-CD177-antistof (klon 4C4, fortyndet 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). Farvning for CD177 blev udført under anvendelse af et Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) og binding visualiseret med 0,05% 3,3'-diaminobenzidin. Resultaterne af CD177 immunofarvning i neoplastiske celler blev klassificeret i fire grader; grad 0 (none, 0-10% af positive celler), grad 1 (svag, 10-30%), grad 2 (moderat, 30-60%), og grad 3 (stærk, over 60%) baseret på andelen af farvede celler, og sager, der viser moderat til stærk farvning blev betragtet som positive.
Statistisk analyse
Chi-square test med Bonferroni korrektion blev anvendt til at vurdere forekomsten af ​​gastrisk tumor. Kvantitative værdier herunder mangfoldighed af tumor og relative ekspression af mRNA var repræsenteret som middelværdi ± SD eller SE, og forskelle mellem organer blev statistisk analyseret ved ANOVA eller Kruskal-Wallis test efterfulgt af Tukey testen for multiple sammenligninger. Samlet overlevelse blev estimeret ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden og log-rank test for sammenligninger. Korrelationer mellem CD177 udtryk og klinisk-patologiske faktorer blev analyseret af ANOVA eller Chi-square test. Multivariat analyse blev udført for at undersøge, om CD177 overekspression var en uafhængig prognostisk faktor ved hjælp af Cox proportional-farer regressionsmodel. P
værdier af < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant.
Resultater
Forekomsten og mangfoldigheder af gastriske tumorer
Det faktiske antal mus og de observerede forekomster og mangfoldigheder af gastriske tumorer er sammenfattet i tabel 2. Tumorer udviklet i maveslimhinden af alle MNU-behandlede grupper (AD) (figur 1B). I high-salt kost-behandlede grupper (gruppe C og D), var forekomsten af ​​gastrisk tumor i gruppe D (H. pylori
inficerede, 100%) var signifikant højere end i gruppe C (ikke-inficeret; 50,0 %) (P
< 0,05). I basal diæt grupper (gruppe A og B), blev forekomsten også forøget med H. pylori
-Infektion (gruppe A, 61,9% og gruppe B, 100%), dog uden statistisk signifikans. De mangfoldigheder af de samlede tumorer i både H. pylori
inficerede grupper (gruppe B, 3,3 ± 1,0 tumorer /mus og Gruppe D, 2,6 ± 1,1) var markant højere end i ikke-inficerede grupper (gruppe A, 0,9 ± 0,8 og gruppe C, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). Mangfoldigheden af ​​gastrisk adenocarcinom i gruppe D (2,1 ± 1,4) var lidt højere end i gruppe B (1,8 ± 1,0) og steg betydeligt i den Gruppe C-værdi (0,8 ± 1,0) (P
< 0,05). I modsætning hertil mangfoldigheder af adenomer i gruppe A og D (0,1 ± 0,4 og 0,4 ± 0,5 henholdsvis) var signifikant lavere end i gruppe B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 og 0,01) .table 2 Forekomst og mangfoldighed af gastriske tumorer i MNU-behandlede mus
Group
Effektiv nummer
Behandling
Forekomst (%)
mangfoldighed (nr. af tumor /mus)
Adenom
Carcinoma
Total tumor
Adenom
Carcinoma
Samlet tumor

A
21
MNU
3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0,4 A
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
b
4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1.8 ± 1,0
3,3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% NaCl
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0
1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% NaCl
4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2,1 ± 1.4D
2,6 ± 1.1d
Værdier for mangfoldighed er udtrykt som middelværdi ± SD. Forekomsten blev generelt vurderet af Chi-square test, efterfulgt af parvise analyse med Bonferroni korrektion. Multipliciteter blev generelt analyseret ved ANOVA efterfulgt af Tukey testen for multiple sammenligninger. aP
< 0.01 vs.
Gruppe B, BP
< 0.01 vs.
Gruppe A, cP
< 0.05 vs.
Gruppe A, dP
< 0.05 vs.
Gruppe C, eP
< 0,05 vs.
gruppe B.
Genekspression profilering i glandulær maver ved oligonukleotid microarray
Med oligonucleotid mikroarrays, sammenlignet med den ikke-inficerede og basal diæt-behandlede gruppe (gruppe A), 34 gener var opreguleret og 169 blev nedreguleret mere end to gange i H. pylori
-inficerede mus (gruppe B), 56 opreguleret og 129 ned -regulated i høj saltkost-behandlede mus (gruppe C), og 69 opreguleret og 214 nedreguleres i den kombinerede gruppe (gruppe D) (figur 2A). Tilsammen som vist i tabel 3, fandt vi, at 35 gener var kun opreguleret og 31 gener blev nedreguleret mere end to-fold ved kombinationen af ​​H. pylori
infektion og høj-salt kost. Desuden blev hierarkisk clustering analyse udført på de fire grupper med i alt 303 kvalificerede prober under anvendelse af komplet-binding clustering algoritme (figur 3). Enogtredive sonder herunder Cd177
, Reg3g
og Muc13
blev bekræftet til at være inden for en klynge af sonder kun opreguleret i gruppe D. Efterfølgende analyse i nærværende undersøgelse var fokuseret på disse gener, fordi det fandtes det, at generne i hvilke ekspression blev kun ændres i den kombinerede gruppe kan være forbundet med gastrisk carcinogenese og progression hos mennesker. Figur 2 Global genanalyse i kirtelmaven af ​​MNU-behandlede mus under anvendelse af oligonukleotid mikroarray. A: antal gener op- eller nedreguleret mere end to gange i maven på MNU-behandlede mus. I Venns diagram, cirklerne angiver op- (venstre) eller nedregulerede (til højre) gener i maven på MNU-behandlede mus med H. pylori
infektion, høj-salt diæt eller deres kombination. Det skraverede område repræsenterer kun de op- eller ned-regulerede gener mere end to gange i kombination. B: Kvantitativ real-time RT-PCR-analyse af tre udvalgte up-regulerede gener (Cd177
, Reg3g
, og Muc13
) i maver af MNU-behandlede mus. Ekspressionsniveauer af generne i hver prøve blev normaliseret ved GAPDH
som intern kontrol ved hjælp ΔΔCT metode. Relative ekspressionsniveauer var repræsenteret X-fold ændring i forhold til gruppe A (fast som 1,0). Statistisk analyse blev udført ved Kruskal-Wallis test for generel analyse og Tukey test for multipel sammenligning. Barer, SE; *, P
< 0.01 vs.
Gruppe A og < 0,05 over
gruppe C; †, P
< 0,01 vs.
Group C.
Tabel 3 Reguleret gener ved kombination af H. pylori infektion og høj salt kost i mus maveslimhinden
Tiltrædelse nr.
Symbol

Genes /proteiner myHotelVideo.com: Fold ændringer
Up-regulerede gener
XM_357640
IgK-V8
immunglobulin kappa kæde variable 8 (V8)
14.4
XM_001472541
Ighg
Immunoglobulin tung kæde (gamma polypeptid)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 antigen
7,3
NM_011260
Reg3g
Regenerating ø-afledte 3 gamma
6,1
NM_023137
UBD
Ubiquitin D
4,3
XM_144817
IgK-V34
immunglobulin kappa kæde variabel 34 (V34)
4,1
NM_007675
Ceacam10
Carcinoembryonalt antigen-relateret celleadhæsionsmolekyle 10
3.7
NM_183322
Khdc1a
KH domæne indeholdende 1A
3,3
NM_011475
Sprr2i
Lille prolin-rige protein 2I
3.2
NM_175165
Tprg
Transformation relateret protein 63 reguleret
3,2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPase, H + transport , lysosomale V0 subunit D2
3,0
NM_009703
Araf
v-raf murine sarkom 3611 viral onkogen homolog
2,6
NM_026822
Lce1b
Late forhornede konvolut 1B
2,5
NM_016958
Krt14
Keratin 14
2,5
NM_212487
Krt78
Keratin 78
2.4
NM_009807
Casp1
Caspase 1
2.4
NM_146037
Kcnk13
Kalium kanal, underfamilie K, medlem 13
2.4
NM_019450
Il1f6
Interleukin 1 familie, medlem 6
2.3
NM_008827
PGF
placenta vækstfaktor
2.3
XM_893506
Klk12
Kallikrein relaterede-peptidase 12
2.3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2.3
NM_029360
Tm4sf5
transmembrant 4 superfamilie medlem 5
2.2
NM_172301
CCNB1
cyclin B1
2.2
NM_010739
Muc13
mucin 13, epitelial transmembrane
2,2
NM_011165
Prl4a1
Prolaktin familie 4, underfamilie et, medlem 1
2,2
NM_010162
EXT1
Exostoses (flere) 1
2.2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1
2.1
NM_011082
Pigr
Polymer immunglobulin receptor
2,1
NM_007769
Dmbt1
Slettet i maligne hjernetumorer 1
2,1
NM_022984
Retn
resistin
2,1
NM_173037
Tmco 7
transmembrant og coiled-coil domæne 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2,1
NM_007630
Ccnb2
cyclin B2
2,1
NM_001081060
Slc9a3
opløst stof luftfartsselskab familie 9 (natrium /brint veksler), medlem 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
Lugtesansen receptor 1030
2,0
Down-regulerede gener
NM_008753
Oaz1
ornithindecarboxylase antizyme 1
0,31
NM_027126
Hfe2
hemokromatose type 2 (juvenile) (humane homolog)
0,33
NM_053206
Magee2
melanom antigen, familie E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
Nicotinamid N-methyltransferase
0,41
NM_026260
Tctn3
Tectonic familiemedlem 3
0,41
NM_181039
Lphn1
latrophilin 1
0,43
NM_008312
Htr2c
5-hydroxytryptamin (serotonin) receptor 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
Lugtesansen receptor 740
0,44
NM_007550
BLM
Bloom syndrom homolog (human)
0,44
NM_011243
RaRb
retinsyrereceptor, beta
0,44
NM_184052
IGF1
Insulin-lignende vækstfaktor 1
0,45
NM_013893
Reg3d
Regenerating holm-afledte 3 delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0,46
NM_029550
Keg1
Nyre udtrykte gen 1
0,46
NM_019388
CD86
CD86 antigen
0,46
NM_011316
Saa4
Serum amyloid A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
cytochrom P450, familie 26, underfamilie en, polypeptid 1
0,47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
phosphatidylinositol-3-phosphat /phosphatidylinositol 5-kinase, type III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, cytoskeletale protein
0,48
NM_007858
Diap1
Diaphanous homolog 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
Regulering synaptisk membran exocytose 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -afhængige aktivator protein for sekretion 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Bone gamma carboxyglutamat protein 1
0,49
NM_031871
Ghdc
GH3 domæne indeholdende
0,49
NM_025545
aptX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
Angiotensin II receptor, type 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
Ubiquitin-associeret protein 2
0,49
NM_028045
Erv3
Endogen retroviral sekvens 3
0,49
NM_011641
Trp63
Transformation relateret protein 63
0,49
Figur 3 Hierarkisk klyngedannelse analyse af fire forsøgsgrupper af MNU-behandlede mus. Expression data fra 303 kvalificerede prober (til venstre). De fire forsøgsgrupper blev klassificeret i to grupper (gruppe A /C) og (gruppe B /D) baseret på ligheder i ekspressionsmønstre. Hver række repræsenterer en probe og hver kolonne repræsenterer en forsøgsgruppe (gruppe A-D). Som vist i farven bar, grøn indikerer opregulering; rød indikerer nedregulering; og sort angiver ingen ændring. Enogtredive sonder udgjorde en klynge af sonder opreguleret kun i gruppe D (til højre).
Hele resultater af denne microarray analyse er blevet forelagt, og er let hentes fra den offentlige database NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) med deponeringsnummer GSE29444 (prøvenummer: GSM728857-60).
kvantitativ real-time RT-PCR-analyse af genekspressionsprofiler i MNU-behandlede mus maver Salg Relativ kvantitativ real-time RT-PCR-analyse af tre udvalgte up- regulerede gener (Cd177
, Reg3g
, og Muc13
) i H. pylori
inficerede og high-salt kost-behandlede mus bekræftede forøget ekspression af Cd177
og Reg3g
, som vist i figur 2B, med betydelige forskelle. Selvom udtryk niveau af Muc13
i gruppe D var højere end alle andre grupper, var der ingen statistisk signifikans blandt dem (P
= 0,0712 vs.
Gruppe C).
Immunhistokemisk udtryk for CD177 i humant avancerede gastrisk kræft og korrelation med klinisk-patologiske faktorer
på immunhistokemisk analyse af humane mavekræft væv, CD177 blev observeret ikke kun i de membraner og cytoplasmaer af infiltrerede neutrofiler, men også i gastriske kræftceller både vel- og dårligt differentierede adenocarcinomer ( Figur 4A). Kræftceller af signet-ring celletype (2 tilfælde) var negative for CD177. Blandt 55 gastriske cancertilfælde, moderat til stærk ekspression af CD177 blev observeret i 33 (60,0%) (tabel 4). Figur 4 Immunhistokemi for CD177 i human fremskreden mavekræft og korrelation med den samlede overlevelsesrate. A: immunhistokemisk analyse af CD177 ekspressionen i human gastrisk cancer væv. (A og b) Negativ farvning (ingen til svag) til CD177 i en gastrisk adenocarcinom. CD177 ekspression er kun til stede i infiltrerende neutrofiler, mens neoplastiske celler af veldifferentieret (a) eller dårligt differentierede (b) carcinom er negative. Original forstørrelse, × 100 (indsat, × 400). (C og d) Bemærk positive (moderat til stærk) udtryk for CD177 i veldifferentieret (c) eller dårligt differentierede (d) gastriske kræftceller. Original forstørrelse, × 100 (indsat, × 400). B:. Sammenligning af Kaplan-Meier kumulative overlevelseskurver for CD177 negative og positive tilfælde mavekræft
Tabel 4 CD177 udtryk i gastriske carcinomer og dets overensstemmelse med klinisk-patologiske faktorer
Sag nr
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenokarcinomer
55
18
15
17
5
Alder
Years (middel ± SD)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8,13
59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0,5039
Histologisk klassifikation
Well /moderat differentieret typen *
21
6
9
4
2
0,1904
Dårligt-opdelte /Signet-ring celletype **
34
12
6
13
3
dybde invasion †
T1-3
27
5
10
10
2
0,2011
T4
26
11
5
7
3
lymfeknuder node metastase
n0
6
1
2
2
1
0,7869
N1-3
49
17
13
15
4
* Laurens tarm type, ** Laurens diffuse type, † Sagsnummer blev reduceret til halvtreds-tre, fordi dybden af ​​invasionen ikke blev klassificeret i to tilfælde, ‡ ANOVA og Chi-square test blev udført for alder og andre faktorer, henholdsvis.
opfølgningsperiode af patienterne varierede fra 9 til 606 uger (median = 83 uger). Femårige overlevelsesrater for CD177-positive og negative var 39,4% og 18,2%, hhv. Fra Kaplan-Meier overlevelse kurve analyse blev CD177-positive udtryk forbundet med bedre samlet overlevelse (P
= 0,0294, log-rank test) (figur 4B). Der var ingen statistisk signifikant korrelation mellem CD177 udtryk med alderen, histologisk klassifikation, dybde invasion, og lymfeknude metastaser (tabel 4).
Multivariat analyse for samlet overlevelse af humane tilfælde mavekræft
Brug af Cox proportional hazards model , multivariat analyse af klinisk-patologiske variabler, herunder patientens alder, tumor histologisk klassifikation, invasion dybde, lymfeknude metastaser, og CD177 udtryk (tabel 5), afslørede den sidste til at være en uafhængig faktor for samlet overlevelse (P
= 0,0323) . Alle forfattere læst og godkendt den endelige manuskript.

• Curcumin forbedrer ekspression af SCF /c-kit gennem svækkende oxidativ stress og NF-KB-aktivering i gastriske væv af diabetisk gastroparese rats
• Ernæring mangel øger risikoen for mavekræft mortality