analisi di espressione genica di un topo modello di tumore Helicobacter pylori-infettate e alto contenuto di sale dieta trattati gastrico: identificazione di CD177 come un fattore prognostico romanzo in pazienti con cancro gastrico

analisi di espressione genica di un pylori
-infected e alto contenuto di sale del mouse modello di tumore gastrico dieta trattati Helicobacter: identificazione di CD177 come un fattore prognostico romanzo in pazienti con carcinoma gastrico
Abstract
sfondo
Helicobacter pylori
(H. pylori
) l'infezione e l'eccessiva assunzione di sale sono noti come importanti fattori di rischio per il cancro allo stomaco negli esseri umani. Tuttavia, le interazioni di questi due fattori con profili di espressione genica durante la carcinogenesi gastrica rimangono poco chiari. In questo studio, abbiamo studiato l'espressione genica globale associata a carcinogenesi stomaco e la prognosi del cancro gastrico umano utilizzando un modello di topo.
Metodi
Per trovare geni coinvolti nella carcinogenesi stomaco, abbiamo in primo luogo costruito un mouse cancerogena indotta modello di tumore gastrico combinato con H. pylori
infezioni e dieta ad alto contenuto di sale. C57BL /6J sono stati dati N-metil-N

-nitrosourea nella loro acqua potabile e sacrificati dopo 40 settimane. Gli animali di un gruppo di combinazione sono stati inoculati con H. pylori
e nutriti con una dieta ad alto contenuto di sale. profili di espressione genica in ghiandolare dello stomaco dei topi sono stati studiati da oligonucleotide microarray. In secondo luogo, abbiamo esaminato una disponibilità del gene candidato come fattore prognostico per i pazienti umani. analisi immunoistochimica di CD177, uno dei geni up-regolati, è stata eseguita in avanzato campioni di cancro gastrico umano per valutare l'associazione con la prognosi.
Risultati
La molteplicità di tumore gastrico in topi trattati con sostanza cancerogena è stato significativamente aumentato di combinazione di H. pylori
infezioni e dieta ad alto contenuto di sale. Nell'analisi microarray, 35 e 31 più di due volte up-regolato e down-regolato geni, rispettivamente, sono stati rilevati in H. pylori
-infection e alto contenuto di sale dieta combinata gruppo rispetto agli altri gruppi. RT-PCR quantitativa ha confermato significativa sovra-espressione di due geni candidati, tra cui Cd177
e Reg3g
. Su analisi immunoistochimica di CD177 in avanzato campioni di cancro gastrico umano, sovra-espressione era evidente in 33 (60,0%) di 55 casi, in maniera significativa correlazione con una prognosi favorevole (P = 0,0294
). L'analisi multivariata compresi i fattori clinico-patologici come covariate rivelato alta espressione di CD177 essere un fattore prognostico indipendente per la sopravvivenza globale.
Conclusioni
Questi risultati suggeriscono che il nostro modello di topo combinato con H. pylori
infezioni e dieta ad alto contenuto di sale è utile per profili di espressione genica nella carcinogenesi gastrica, fornendo la prova che CD177 è un fattore prognostico romanzo per il cancro allo stomaco. Questo è il primo rapporto che mostra una correlazione tra l'espressione prognostica CD177 e il comportamento del tumore solido. Cancro
Parole
Cd177 gastrico Helicobacter pylori
microarray Salt Sfondo
Il cancro dello stomaco è il quarto cancro più comune e la seconda principale causa di morte per cancro in tutto il mondo [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) è ormai riconosciuto come un importante fattore di rischio per lo sviluppo di gastrite cronica e cancro allo stomaco [2]. Inoltre, i fattori ambientali e di accoglienza hanno anche dimostrato di influenzare carcinogenesi gastrica, e sale (cloruro di sodio, NaCl) e cibo salato sono di particolare importanza, sulla base di prove da una serie di studi epidemiologici e sperimentali [3-6]. Così, esposizione combinata di H. pylori
infezione e sale in eccesso sembra essere molto importante per lo sviluppo e la progressione dei tumori gastrici, anche se i meccanismi dettagliati, soprattutto in termini di profili di espressione genica, restano da chiarire.
la tecnologia ad alta produttività microarray fornisce un potente strumento per l'analisi del gene completo, già applicato per valutare modelli di espressione genica in entrambi i campioni umani e modelli animali di disturbi gastrici [7-16]. Anche se molti ricercatori si sono concentrati sulla espressione genica in H. pylori
linee di cellule gastriche -treated [17-19], i risultati in coltura cellulare non necessariamente in correlazione con l'espressione di geni specifici nel vivo
microambiente in caratterizzati ospite immunitario le risposte e le interazioni stromali-epiteliale nei tumori. gerbilli mongoli cancerogeno trattati sono stati usati come un modello animale utile di H. pylori
-associated carcinogenesi gastrica [20-24], e abbiamo precedentemente riportato che una interazione sinergica tra H. pylori
infezioni e alto contenuto di sale assunzione accelera l'infiammazione cronica e lo sviluppo del tumore nello stomaco di questi animali [25, 26]. Purtroppo, ci sono poche informazioni disponibili per il genoma gerbillo, ostacolando l'analisi genetica e molecolare. Pertanto, l'attenzione si è concentrata su modelli murini [12, 13], e la creazione di un modello di topo per il cancro dello stomaco con il sale e non è necessaria H. pylori
esposizione per le indagini di targeting geni coinvolti nella carcinogenesi gastrica.
Precedenti studi di microarray utilizzando modelli di roditori non distinguere e caratterizzare i profili di espressione basati sull'interazione di H. pylori
infezione e l'assunzione di sale. Nel presente studio, abbiamo esaminato l'espressione genica nella mucosa gastrica in un H. pylori
-infected e alto contenuto di sale del mouse modello di tumore gastrico dieta-trattati con oligonucleotide microarray e abbiamo trovato due candidati up-regolate geni compresi Cd177
e Reg3g
. Abbiamo anche studiato l'espressione di CD177 in umani di cancro gastrico avanzato di immunoistochimica, e ottenuto la prova come un potenziale fattore prognostico per la carcinogenesi stomaco.
Metodi
inoculazione da H. pylori
H. pylori
è stato preparato con lo stesso metodo come precedentemente descritto [27, 28]. In breve, H. pylori
(Sydney ceppo 1) è stato inoculato su piastre di agar Brucella (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, USA) contenenti 7% (v /v) di siero fetale bovino inattivato al calore (FBS) e incubato a 37 ° C in condizioni microaerofili ad alta umidità per 2 giorni. Poi, batteri cresciuti su piastre sono state introdotte nel Brucella brodo (Becton Dickinson) supplementato con il 7% (v /v) di FBS e incubato nelle stesse condizioni per 24 h. Dopo 24 ore di digiuno, gli animali sono stati intra-via gastrica inoculato H. pylori
(1,0 × 10 8 unità formanti colonie). Prima di inoculazione, i brodi di coltura di H. pylori
sono stati controllati al microscopio a contrasto di fase per la forma batterica e la mobilità.
Animali e protocollo sperimentale
Cinquantasei specifici maschio senza patogeno, 5 o 6 settimane di vecchi C57BL /6J (CLEA Giappone, Tokyo, Giappone) sono stati utilizzati in questo studio. Tutti gli animali sono stati alloggiati in gabbie di plastica sulla biancheria da letto di legno duro-chip in una stanza rischio biologico con aria condizionata e un /12-h ciclo scuro luce 12 ore, e ha permesso il libero accesso a cibo e acqua in tutto. Il disegno sperimentale è stato approvato dal Comitato di cura degli animali del Research Institute di Aichi Cancer Center, e gli animali sono stati curati in conformità con le linee guida istituzionali e le Linee guida per la buona condotta di esperimenti sugli animali (Consiglio Scienza del Giappone, 1 giugno 2006 ).
Il disegno sperimentale è illustrato nella Figura 1A. I topi sono stati divisi in 4 gruppi (Gruppi A-D); 21, 5, 15, e 15 topi sono stati assegnati ai gruppi A, B, C, e D, rispettivamente, all'inizio dell'esperimento. Gli animali dei gruppi B e D sono state inoculate con H. pylori
intra-via gastrica a settimane alterne (totale 7 volte), mentre i topi degli altri gruppi sono state inoculate con Brucella brodo da solo. Tutti i topi sono stati dati N-metil-N

-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA) nella loro acqua potabile alla concentrazione di 120 ppm a settimane alterne (esposizione totale è stato di 5 settimane) . A questo scopo MNU era appena sciolto in acqua distillata tre volte alla settimana. I topi di gruppi C e D ha ricevuto CE-2 diete (contenuto di sodio basale del 0,36%; CLEA Giappone) contenente il 10% di NaCl. Durante il periodo di esposizione, un animale del gruppo B, uno del gruppo C e sei di gruppo D è morto o è diventato moribonda e sono stati esclusi dalla sperimentazione. A 40 settimane, gli animali rimasti sono stati sottoposti ad anestesia profonda e laparotomia con asportazione dello stomaco. Figura 1 Disegno sperimentale e reperti istopatologici. A: Disegno sperimentale. Cinque a sei settimane di età maschi C57BL /6J sono stati inoculati con H. pylori
SS1 ceppo (Gruppi B e D) o brodo Brucella (gruppi A e C). Tutti gli animali sono stati somministrati 120 ppm MNU nella loro acqua potabile a settimane alterne (esposizione totale, 5 settimane). Topi di gruppi C e D hanno dato dieta basale (CE-2) contenente il 10% di NaCl. B: reperti istopatologici per topi MNU indotta da tumori gastrici. (A e B) adenoma gastrico nella regione pilorica di un MNU trattati e H. pylori
topo -infected (gruppo B). (C, d) adenocarcinoma gastrico osservato nel gruppo B. Nota l'alta densità cellulare e atipia cellulare e strutturale. Bar = 200 (A e C) o 100 micron (B e D).
Istologico valutazione
Per l'esame istologico, stomaci sono stati fissati in formalina neutra tamponata al 10% per 24 ore, tranciato lungo l'asse longitudinale in strisce di uguale larghezza, e inclusi in paraffina. Quattro sezioni micron di spessore sono stati preparati e colorate con ematossilina e eosina (H & E) per l'osservazione istologica. I tumori sono stati classificati in adenoma e adenocarcinoma sulla base di atipie cellulari e morfologica e la crescita invasiva per sottomucosa come abbiamo riportato in precedenza [21].
Preparazione RNA e oligonucleotidi microarray analisi
RNA totale è stato estratto da tutta la mucosa gastrica che comprende sia del tumore e tessuti periferici utilizzando un RNeasy Mini Kit più (Qiagen, Hilden, Germania) e la sua qualità controllata con un sistema di microchip elettroforesi (i-chip SV1210; Hitachi Chemical, Tokyo, Giappone). campioni di alta qualità sono stati selezionati, e sommati per ogni gruppo di evitare differenze individuali per la valutazione oligonucleotide microarray (Gruppo A, n = 3; B, n = 4; C, n = 6; D, n = 7). Il CodeLink mouse Whole Genome Bioarray (microarray Applicata, Tempe, AZ, USA) contenente 35,587 sonda set per chip è stato utilizzato per analizzare i profili di espressione genica. Ibridazione, l'elaborazione e la scansione sono stati eseguiti da Filgen, Inc. (Nagoya, Giappone), immagini di dati di scansione di essere analizzati utilizzando un pacchetto software (microarray dati strumento di analisi, Filgen). Completa-linkage clustering gerarchico stato anche esaminato in quattro gruppi che usano un sottoinsieme della sonda qualificato (Filgen).
Quantitativa real-time RT-PCR dei profili di espressione nei topi stomaco
relativa real-time RT-PCR quantitativa è stata eseguita utilizzando un StepOne Real-time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) con la specifica deidrogenasi-topo gliceraldeide-3-fosfato (GAPDH
) gene come controllo interno. Dopo il trattamento DNasi, primi cDNA Strand sono stati sintetizzati dalla RNA totale utilizzando un kit SuperScript VILO cDNA Synthesis (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). La PCR è stato realizzato fondamentalmente seguendo le istruzioni del costruttore, utilizzando un kit di QuantiTect SYBR Green PCR (Qiagen). Le sequenze dei primer per ogni gene sono elencati nella Tabella 1. Specificità delle reazioni di PCR è stata confermata usando un programma curva di melt fornito con il software StepOne ed elettroforesi dei campioni PCR 3% gel di agarosio. I livelli di espressione di mRNA sono stati normalizzati al livello di mRNA di GAPDH
e confrontati con i topi di controllo (Gruppo A) da parte dei ΔΔCT method.Table 1 sequenze primer per il parente quantitativa real-time RT-PCR
Gene

Sequenze
lunghezza del prodotto
adesione n.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
deidrogenasi gliceraldeide-3-fosfato, Reg3g
rigenerante isolotto-proteina derivata da 3 gamma, Muc13
mucina 13.
pazienti e campioni tumorali
un totale di 55 casi di cancro gastrico avanzato primaria, resezione chirurgica all'ospedale Cancer center di Aichi (Nagoya, Giappone) tra il 1995 e il 2002, sono stati indagati dopo aver ottenuto il consenso informato. Lo studio è stato approvato dal comitato etico di Aichi Cancer Center. I pazienti erano tutti maschi e l'età media e mediana periodo di follow-up sono stati 58,6 ± 10,2 anni e 83 settimane, rispettivamente. Nessuno aveva ricevuto chemioterapia preoperatoria o radioterapia. I carcinomi con tessuti della mucosa adiacente sono state fissate e inclusi in paraffina, sezionati e per la colorazione con H & E. Classificazione della stadiazione del tumore e la diagnosi di casi avanzati sono state fatte secondo la classificazione giapponese di gastrico carcinomi [29]. I tumori avevano invaso la muscolare propria (T2 per la classificazione TNM), il sottosierosa (T3), o la sierosa e la cavità peritoneale (T4a), a volte coinvolgendo organi adiacenti (T4B).
Immunoistochimica utilizzando tessuti cancro gastrico umano
Abbiamo esaminato l'espressione del CD177, per i quali un anticorpo primario commerciale era disponibile, in umani tessuti di cancro gastrico di immunoistochimica. Dopo l'inibizione dell'attività della perossidasi endogena mediante immersione in una soluzione di perossido di idrogeno /metanolo 3%, recupero dell'antigene è stata eseguita con 10 mM tampone citrato (pH 6,0) in un forno a microonde per 10 min a 98 ° C. Poi, le sezioni sono state incubate con un mouse anticorpo monoclonale anti-CD177 anticorpo (clone 4C4, diluito 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). Colorazione per CD177 è stata effettuata utilizzando un kit di Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) e il legame visualizzato con 0,05% 3,3 'Diaminobenzidina. I risultati di CD177 immunostaining nelle cellule neoplastiche sono stati classificati in quattro gradi; grado 0 (nessuno, 0-10% di cellule positive), di grado 1 (debole, 10-30%), di grado 2 (moderato, 30-60%), e di grado 3 (forte, oltre il 60%) sulla base di percentuale di cellule colorate, e casi che mostrano da moderata a forte colorazione sono stati considerati come positivi.
analisi statistica
Il test chi-quadro con correzione di Bonferroni è stato utilizzato per valutare l'incidenza di tumori gastrici. valori quantitativi compresi molteplicità di tumore e relativa espressione di mRNA sono stati rappresentati come media ± SD o SE, e le differenze tra i mezzi sono stati analizzati statisticamente mediante ANOVA o il test di Kruskal-Wallis seguito dal test di Tukey per confronti multipli. La sopravvivenza globale è stato stimato utilizzando il metodo di Kaplan-Meier e il log-rank test per i confronti. Le correlazioni tra espressione CD177 e fattori clinico-patologici sono stati analizzati mediante ANOVA o test del Chi-quadro. L'analisi multivariata è stata effettuata per verificare se CD177 sovra-espressione era un fattore prognostico indipendente utilizzando il proporzionale-pericoli modello di regressione di Cox. I valori P
di < 0,05 sono stati considerati statisticamente significativi.
Risultati
L'incidenza e la molteplicità di tumori gastrici
Il numero effettivo di topi e l'incidenza e le molteplicità di tumori gastrici osservati sono riassunti nella tabella 2. I tumori sviluppati nella mucosa gastrica di tutti i gruppi trattati MNU (gruppi AD) (Figura 1B). In alto contenuto di sale dieta trattati gruppi (gruppi C e D), l'incidenza di tumore gastrico nel gruppo D (H. pylori
-infected; 100%) era significativamente superiore a quella nel gruppo C (non infetti; 50.0 %) (P
< 0,05). In basali dieta gruppi (gruppi A e B), l'incidenza è stata aumentata da H. pylori
-infection (Gruppo A, il 61,9% e il Gruppo B, 100%), anche se senza significatività statistica. Le molteplicità di tumori totali in entrambi i gruppi di H. pylori
-infected (Gruppo B, 3.3 ± 1.0 tumori /mouse e Gruppo D, 2.6 ± 1.1) erano nettamente superiori a quelli in gruppi non-infetti (Gruppo A, 0,9 ± 0,8 e il Gruppo C, 1.0 ± 1.2) (P
< 0,05). La molteplicità di adenocarcinoma gastrico nel gruppo D (2.1 ± 1.4) è stato leggermente superiore a quella nel gruppo B (1.8 ± 1.0) e significativamente aumentato rispetto al valore di gruppo C (0.8 ± 1.0) (P
< 0,05). Al contrario, le molteplicità di adenomi nei gruppi A e D (rispettivamente 0,1 ± 0,4 e 0,4 ± 0,5,) erano significativamente più bassi rispetto al gruppo B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 e 0,01) .table 2 Incidenza e la molteplicità dei tumori gastrici in numero
efficace topi MNU trattati
Gruppo
Trattamento
Incidenza (%)
molteplicità (n. di tumore /mouse)
Adenoma
Carcinoma
totale tumore
Adenoma
Carcinoma
tumore totale


a 21
MNU
3 (14.3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0,4
0,8 ± 0,7
0.9 ± 0.8
B 4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1.8 ± 1.0
3.3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% di NaCl Pagina 2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0.2 ± 0.6
0.8 ± 1.0
1.0 ± 1.2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% di NaCl Pagina 4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0.4 ± 2.1 ± 0.5e
1.4D
2.6 ± 1.1d
valori per la molteplicità sono espressi come media ± SD. Incidenze erano generalmente valutati dal test del Chi-quadro, seguita da analisi a due a due con la correzione di Bonferroni. Molteplicità erano generalmente analizzati mediante ANOVA, seguita dal test di Tukey per comparazione multipla. aP
< 0.01 vs
Gruppo B, BP
< 0.01 vs
Gruppo A, CP
< 0.05 vs
Gruppo A, dP
< 0.05 vs
Gruppo C, eP
< 0,05 vs
Gruppo B.
espressione genica nello stomaco ghiandolare di oligonucleotidi microarray
Con microarray di oligonucleotidi, rispetto al non-infetti e basale dieta gruppo trattato (gruppo a), 34 geni erano up-regolati e 169 sono stati down-regolato più di due volte in H. pylori
topi -infected (gruppo B), 56 up-regolati e 129 verso il basso -regulated nei topi trattati con dieta ad alto contenuto di sale (gruppo C), e 69 up-regolati e 214 down-regolato nel gruppo combinato (gruppo D) (Figura 2A). Presi insieme, come mostrato nella Tabella 3, abbiamo trovato che 35 geni erano up-regolati e 31 geni erano down-regolati più di due volte solo dalla combinazione di H. pylori
infezione e dieta ad alto contenuto di sale. Inoltre, l'analisi gerarchica raggruppamento è stata eseguita sui quattro gruppi con un totale di 303 sonde qualificati utilizzando l'algoritmo di clustering completa-linkage (Figura 3). Trentuno sonde tra cui Cd177
, Reg3g
e Muc13
erano confermato di essere all'interno di un cluster di sonde up-regolati solo nel Gruppo D. L'analisi successiva nel presente studio è stato focalizzato su questi geni, perché è ritenuto che i geni in cui l'espressione è stata alterata solo nel gruppo combinato potrebbero essere associati a carcinogenesi gastrica e la progressione negli esseri umani. Figura 2 analisi del gene globale nello stomaco ghiandolare di topi MNU-trattati con oligonucleotide microarray. A: Numero di geni up- o down-regolato più di due volte nello stomaco di topi MNU-trattati. Nel diagramma di Venn, i cerchi indicano a monte (a sinistra) o down-regolato (a destra) i geni nello stomaco di topi MNU trattati con H. pylori
infezione, dieta ad alto contenuto di sale o la loro combinazione. L'area ombreggiata rappresenta i geni l'alto o verso il basso regolamentati più di due volte solo con la combinazione. B: quantitativa real-time RT-PCR dei tre selezionati geni up-regolati (Cd177
, Reg3g
, e Muc13
) nello stomaco di topi MNU-trattati. I livelli di espressione dei geni in ogni campione sono stati normalizzati per GAPDH
controllo come interno utilizzando il metodo ΔΔCT. I livelli di espressione relativi sono stati rappresentati come X-fold cambiamento relativo al gruppo A (fissati come 1.0). L'analisi statistica è stata effettuata con il test di Kruskal-Wallis per analisi generale e test di Tukey per comparazione multipla. Bar, SE; *, P
< 0.01 vs
Gruppo A e < 0.05 vs
Gruppo C; †, P
< 0.01 vs
Gruppo C.
Tabella 3 regolamentato geni tramite la combinazione di infezione da H. pylori e la dieta ad alto contenuto di sale in topo mucosa gastrica
adesione n.
Simbolo

geni /proteine ​​

piega modifiche
geni up-regolati
XM_357640
IGK-V8
variabile catena immunoglobuline kappa 8 (V8)
14,4
XM_001472541
Ighg
immunoglobuline a catena pesante (gamma polipeptide)
9.2
NM_026862
Cd177
CD177 antigene
7.3
NM_011260
Reg3g
Rigenerante isolotto di derivazione 3 gamma
6.1
NM_023137
Ubd
ubiquitina D
4.3
XM_144817
IGK-V34
immunoglobuline kappa catena variabile 34 (V34)
4.1
NM_007675
Ceacam10
carcinoembrionario molecola di adesione delle cellule antigene-correlate 10
3.7
NM_183322
Khdc1a
KH dominio contenente 1A
3.3
NM_011475
Sprr2i
piccola proteina ricca di prolina 2I
3.2
NM_175165
Tprg
correlate Trasformazione proteina 63 regolato
3.2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPasi, H + trasporto , lisosomiale V0 subunità D2
3.0
NM_009703
Araf
v-raf murino sarcoma 3611 virale omologo oncogene
2.6
NM_026822
Lce1b
tardo busta corneo 1B
2,5
NM_016958
Krt14
cheratina 14
2.5
NM_212487
Krt78
cheratina 78
2.4
NM_009807
CASP1
caspasi 1
2.4
NM_146037
Kcnk13
canale del potassio, sottofamiglia K, membro 13
2.4
NM_019450
Il1f6
interleuchina 1, membro 6
2.3
NM_008827
PGF
fattore di crescita placentare
2.3
XM_893506
Klk12
Kallikrein correlate-peptidasi 12
2.3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2.3
NM_029360
Tm4sf5
transmembrana 4 membro superfamiglia 5
2.2
NM_172301
Ccnb1
ciclina B1
2.2
NM_010739
Muc13
mucina 13, epiteliale transmembrana
2.2
NM_011165
Prl4a1
famiglia prolattina 4, sottofamiglia un, membro 1
2.2
NM_010162
Ext1
Esostosi (multipli) 1
2.2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1
2.1
NM_011082
Pigr
polimerico recettore immunoglobulina
2.1
NM_007769
Dmbt1
eliminati nei tumori maligni al cervello 1
2.1
NM_022984
RETN
resistina
2.1
NM_173037
TMCO 7
transmembrana e coiled-coil dominio 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
ciclina B2
2.1
NM_001081060
Slc9a3
famiglia vettore soluto 9 (sodio /idrogeno scambiatore), membro 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
recettore olfattivo 1030
2,0
down-regolato geni
NM_008753
Oaz1
decarbossilasi antizyme 1
0,31
NM_027126
Hfe2
tipo emocromatosi 2 (giovanile) (omologo umano)
0,33
NM_053206
Magee2
Melanoma antigene, la famiglia E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
Nicotinamide N-metiltransferasi
0.41
NM_026260
Tctn3
Tectonic membro della famiglia 3
0.41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0,43
NM_008312
Htr2c
5-idrossitriptamina (serotonina) recettore 2C
0.43
NM_146667
Olfr740
olfattiva recettore 740
0.44
NM_007550
Blm
Bloom sindrome omologo (umana)
0.44
NM_011243
Rarb
retinoico recettore, beta
0.44
NM_184052
Igf1
Insulin-like growth factor 1
0.45
NM_013893
Reg3d
rigenerante isolotto di derivazione 3 delta
0.46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0.46
NM_029550
Keg1
Rene espresso gene 1
0.46
NM_019388
CD86
CD86 antigene
0.46
NM_011316
Saa4
siero amiloide A 4
0.47
NM_007811
CYP26A1
citocromo P450, famiglia 26, sottofamiglia un polipeptide 1
0.47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0.48
NM_011086
Pip5k3
fosfatidilinositolo-3-fosfato /phosphatidylinositol 5-chinasi, tipo III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, citoscheletro proteina associata
0.48
NM_007858
Diap1
Diaphanous omologo 1 (Drosophila)
0.48
NM_053271
Rims2
esocitosi regolazione membrana sinaptica 2
0.48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -dipendente proteina attivatore per la secrezione 2
0.49
NM_007541
Bglap1
Bone gamma di proteine ​​carboxyglutamate 1
0.49
NM_031871
Ghdc
dominio GH3 contiene
0.49
NM_025545
APTX
Aprataxin
0.49
NM_177322
Agtr1a
del recettore dell'angiotensina II, tipo 1a
0.49
NM_026872
Ubap2
proteina ubiquitina-associata 2
0.49
NM_028045
ERV3
endogena sequenza retrovirale 3
0.49
NM_011641
Trp63
proteine ​​correlate Trasformazione 63
0.49
Figura 3 gerarchica analisi raggruppamento di quattro gruppi sperimentali di topi MNU-trattati. dati di espressione da 303 sonde qualificato (a sinistra). I quattro gruppi sperimentali sono stati classificati in due gruppi (Gruppi A /C) e (Gruppi B /D) in base alle somiglianze nei modelli di espressione. Ogni riga rappresenta una sonda e ogni colonna rappresenta un gruppo sperimentale (Gruppi A-D). Come mostrato nella barra di colore, il verde indica up-regulation; rosso indica down-regulation; e nero indica nessun cambiamento. Trentuno sonde costituito un gruppo di sonde up-regolata solo nel gruppo D (a destra).
Gli interi risultati di questa analisi microarray sono state presentate e sono facilmente recuperabili dal database pubblico NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) con il numero di accesso GSE29444 (numero del campione: GSM728857-60).
quantitativa in tempo reale, l'analisi RT-PCR dei profili di espressione genica in MNU-trattato topo stomaci
relativa analisi in tempo reale RT-PCR quantitativa dei tre selezionati a monte geni regolati (Cd177
, Reg3g
, e Muc13
) a H. pylori
-infected e alto contenuto di sale topi trattati con dieta confermato aumentata espressione di Cd177
e Reg3g
, come mostrato in figura 2B, con differenze significative. Anche se il livello di espressione di Muc13
nel Gruppo D era superiore a tutti gli altri gruppi, non vi era alcuna significatività statistica tra di loro (P = 0,0712
vs
Gruppo C).
Espressione immunoistochimica di CD177 in umana tumori gastrici avanzati e correlazione con i fattori clinico-patologici recensioni sul analisi immunoistochimica dei tessuti di cancro gastrico umano, CD177 è stata osservata non solo nelle membrane e citoplasma dei neutrofili infiltrati, ma anche in cellule di cancro gastrico sia adenocarcinomi benessere e scarsamente differenziati ( Figura 4A). Le cellule tumorali di tipo cellulare ad anello con castone (2 casi) sono risultati negativi per CD177. Tra 55 casi di cancro gastrico, da moderata a forte espressione del CD177 è stata osservata in 33 (60,0%) (Tabella 4). Figura 4 immunoistochimica per CD177 nei tumori umani avanzata gastrica e correlazione con il tasso di sopravvivenza globale. A: L'analisi immunoistochimica di espressione CD177 nel tessuto cancro gastrico umano. (A e B) colorazione negativa (nessuno a debole) per CD177 in un adenocarcinoma gastrico. espressione CD177 è presente solo ad infiltrarsi neutrofili mentre le cellule neoplastiche di ben differenziato (a) o scarsamente differenziato (b) il carcinoma sono negativi. ingrandimento originale, × 100 (inserto, × 400). (C e D) positivo (da moderata a forte) espressione per CD177 in ben differenziato (c) o mal dissociati (d) cellule di cancro gastrico. ingrandimento originale, × 100 (inserto, × 400). B:. Confronto tra le curve di sopravvivenza di Kaplan-Meier cumulativa per i casi di cancro gastrico negativi e positivi CD177
Tabella 4 CD177 espressione nel carcinoma gastrico e la sua correlazione con i fattori clinico-patologici
caso non
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenocarcinomi
55
18
15
17
5
Età
anni (media ± SD)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8.13
59,8 ± 11.0
60,4 ± 13,0
0,5039
istologica classificazione
Bene /tipo moderatamente differenziato *
21
6
9 Pagina 4 2
0,1904
scarsamente differenziato tipo di cellule /anello con castone **
34
12
6
13 3
profondità dell'invasione †
T1-3
27
5 10
10 2
0,2011
T4
26
11
5
7 3
Lymph metastasi linfonodali
N0
6
1 2 Pagina 2
1 0,7869
N1-3
49
17
13
15 4
* tipo intestinale di Lauren, ** tipo diffuso di Lauren, numero † caso è stata ridotta al cinquanta-tre perché la profondità di invasione non è stata classificata in due casi, sono state eseguite ‡ ANOVA e il test chi-quadrato per età e altri fattori, rispettivamente.
Il periodo di follow-up dei pazienti variava da 9 a 606 settimane (mediana = 83 settimane). I tassi di sopravvivenza a cinque anni per CD177-positivi e negativi erano 39,4% e 18,2%, rispettivamente. Dall'analisi curva di sopravvivenza di Kaplan-Meier, espressione CD177-positivi è stata associata con una migliore sopravvivenza generale (P = 0,0294
, log-rank test) (Figura 4B). Non c'era alcuna correlazione statisticamente significativa di espressione CD177 con l'età, la classificazione istologica, la profondità di invasione e metastasi linfonodali (Tabella 4)
. L'analisi multivariata per la sopravvivenza globale dei casi di cancro gastrico umano
Utilizzando il modello dei rischi proporzionali di Cox , analisi multivariata delle variabili clinico-patologici, tra cui l'età del paziente, il tumore classificazione istologica, la profondità di invasione, metastasi linfonodali, e l'espressione CD177 (Tabella 5), ​​ha rivelato l'ultimo ad essere un fattore indipendente per la sopravvivenza globale (p = 0,0323
) . Tutti gli autori hanno letto e approvato il manoscritto finale.

• La curcumina migliora espressione di SCF /c-kit attraverso attenuare lo stress ossidativo e l'attivazione di NF-kB nei tessuti gastrici di diabetica curcumina gastroparesi rats
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