l'analyse de l'expression génique d'un Helicobacter pylori-infectées et modèle de tumeur riche en sel alimentaire traité souris gastrique: identification de CD177 comme facteur pronostique roman chez les patients avec cancer

gastrique analyse de l'expression génique d'un Helicobacter pylori
infecté par et de haute-sel modèle de régime alimentaire traité souris gastrique tumeur: identification de CD177 comme facteur pronostique roman chez les patients atteints de cancer gastrique
Résumé de l'arrière-plan
Helicobacter pylori
(H. pylori
) l'infection et le sel apport excessif sont connus comme des facteurs de risque importants pour le cancer de l'estomac chez l'homme. Cependant, les interactions de ces deux facteurs avec des profils d'expression génique au cours de la cancérogenèse gastrique restent floues. Dans la présente étude, nous avons étudié l'expression globale des gènes associés à la carcinogenèse de l'estomac et le pronostic du cancer de l'estomac humain en utilisant un modèle de souris.
Méthodes
Pour trouver des gènes candidats impliqués dans la carcinogenèse de l'estomac, nous avons tout d'abord construit une souris induite par carcinogène modèle de tumeur gastrique associée à H. pylori
infection et alimentation riche en sel. C57BL /6J ont reçu N
-méthyl-N
-nitrosourea dans leur eau potable et sacrifiés après 40 semaines. Les animaux d'un groupe de combinaison ont été inoculés avec H. pylori
et nourris avec un régime riche en sel. les profils d'expression génique dans l'estomac glandulaire de souris ont été étudiées par l'oligonucléotide microréseau. En second lieu, nous avons examiné une disponibilité du gène candidat en tant que facteur de pronostic pour les patients humains. L'analyse immunohistochimique du CD177, l'un des gènes régulés à la hausse, a été réalisée dans des échantillons humains de cancer gastrique avancé pour évaluer l'association avec le pronostic.
Résultats
La multiplicité de tumeur gastrique chez la souris carcinogène traitées a été significativement augmentée par la combinaison de H. pylori
infection et alimentation riche en sel. Dans l'analyse des microréseaux, 35 et 31 plus de deux fois régulés à la hausse et le bas-réglementés gènes, respectivement, ont été détectés dans le pylori
groupe de régime combiné -infection et riche en sel H. par rapport aux autres groupes. RT-PCR quantitative a confirmé significative sur-expression de deux gènes candidats dont CD177
et Reg3g
. Sur l'analyse immunohistochimique de CD177 dans des échantillons humains de cancer gastrique avancé, sur-expression était évidente dans 33 (60,0%) des 55 cas, en corrélation significative avec un pronostic favorable (P = 0,0294
). L'analyse multivariée y compris les facteurs clinicopathologiques comme covariables révèlent une forte expression de CD177 être un facteur pronostique indépendant pour la survie globale.
Conclusions
Ces résultats suggèrent que notre modèle de souris associé à H. pylori
infection et l'alimentation riche en sel est utile pour l'expression des gènes de profilage dans la carcinogenèse gastrique, fournissant la preuve que CD177 est un facteur pronostique roman pour le cancer de l'estomac. Ce rapport est le premier montrant une corrélation pronostique entre l'expression de CD177 et le comportement de tumeur solide. Cancer
Mots-clés
CD177 gastrique Helicobacter pylori
Microarray sel Contexte
cancer de l'estomac est le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause principale des décès liés au cancer dans le monde [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) est maintenant reconnu comme un facteur de risque majeur pour le développement gastrite chronique et de cancer de l'estomac [2]. En outre, les facteurs environnementaux et d'accueil ont également été montré pour influencer la carcinogenèse gastrique, et (chlorure de sodium, NaCl) le sel et les aliments salés sont d'une importance particulière, fondée sur des preuves à partir d'un certain nombre d'études épidémiologiques et expérimentales [3-6]. Ainsi, l'exposition combinée à H. pylori
infection et consommation excessive de sel semble être très important pour le développement et la progression des tumeurs gastriques, bien que les mécanismes détaillés, notamment en termes de profils d'expression génique, restent à clarifier.
la technologie à haut débit de microréseaux fournit un outil puissant pour l'analyse complète du gène, déjà appliquée pour évaluer les profils d'expression des gènes dans les deux échantillons humains et des modèles animaux de troubles gastriques [7-16]. Bien que de nombreux chercheurs se sont concentrés sur l'expression des gènes dans H. pylori
lignées de cellules gastriques traités par [17-19], les résultats en culture cellulaire ne correspondent pas nécessairement à l'expression de gènes spécifiques mettant en vedette hôte immunitaire dans le vivo
microenvironnement les réponses et les interactions stroma-épithéliales dans les cancers. gerbilles de Mongolie Cancérogène traités ont été utilisés comme un modèle animal utile de H. pylori
-Associated carcinogenèse gastrique [20-24], et nous l'avons déjà signalé qu'une interaction synergique entre H. pylori
infection et riche en sel l'apport d'accélérer l'inflammation chronique et le développement de tumeurs dans les estomacs de ces animaux [25, 26]. Malheureusement, il y a peu d'information disponible pour le génome de la gerbille, ce qui entrave l'analyse génétique et moléculaire. Par conséquent, l'attention a porté sur des modèles de souris [12, 13], et l'établissement d'un modèle de souris pour le cancer de l'estomac avec le sel et l'exposition de H. pylori est nécessaire pour les enquêtes ciblant les gènes impliqués dans la carcinogenèse gastrique. PRECEDENT études de microréseaux en utilisant des modèles de rongeurs n'a pas distinguer et de caractériser des profils d'expression basés sur l'interaction de l'infection par H. pylori
et la consommation de sel. Dans la présente étude, nous avons examiné l'expression des gènes dans la muqueuse gastrique et infecté par le haut de sel alimentaire traité souris gastrique tumeur modèle d'un H. pylori par oligonucléotide microarray et trouvé deux candidats régulés à la hausse des gènes dont CD177
et Reg3g
. Nous avons également étudié l'expression de CD177 dans les cancers gastriques avancés humains par immunohistochimie, et obtenu des preuves en tant que facteur pronostique potentiel carcinogène de l'estomac.
Méthodes
Inoculation par H. pylori
H. pylori
a été préparé par le même procédé que celui décrit précédemment [27, 28]. En bref, H. pylori
(souche 1 Sydney) a été inoculée sur Brucella agar plaques (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, USA) contenant 7% (v /v) de sérum inactivé à la chaleur fœtal bovin (FBS) et incubé à 37 ° C dans des conditions microaérophiles à une humidité élevée pendant 2 jours. Ensuite, les bactéries cultivées sur les plaques ont été introduits dans un bouillon Brucella (Becton Dickinson) supplémenté avec 7% (v /v) de FBS et incubés dans les mêmes conditions pendant 24 heures. Après 24 h de jeûne, les animaux étaient intra-gastrique inoculée H. pylori
(1,0 x 10 8 unités formant des colonies). Avant l'inoculation, les cultures de bouillon de H. pylori
ont été vérifiés au microscope à contraste de phase pour la forme et la mobilité bactérienne.
Animaux et protocole expérimental
Cinquante-six hommes spécifiques sans pathogène, 5 ou 6 -Week C57BL /6J (CLEA Japan, Tokyo, Japon) ont été utilisés dans cette étude. Tous les animaux ont été logés dans des cages en plastique sur une litière de feuillus puce dans une salle de biohazard climatisée avec une lumière /12 h cycle d'obscurité de 12 h, et a permis l'accès libre à la nourriture et de l'eau tout au long. La conception expérimentale a été approuvé par le Comité de l'Institut de recherche Aichi Cancer Center Animal Care, et les animaux ont été pris en charge conformément aux directives institutionnelles, ainsi que les lignes directrices pour bonne conduite des expériences sur animaux (Conseil scientifique du Japon, le 1er Juin, 2006 ).
La conception expérimentale est illustrée à la figure 1A. Les souris ont été divisées en 4 groupes (groupes A-D); 21, 5, 15 et 15 souris ont été affectées à des groupes A, B, C et D, respectivement, au début de l'expérience. Les animaux des groupes B et D ont été inoculées par H. pylori
intra-gastrique toutes les deux semaines (un total de 7 fois), alors que les souris des autres groupes ont été inoculés avec du bouillon Brucella seul. Toutes les souris ont reçu N
-méthyl-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St Louis, MO, USA) dans leur eau potable à la concentration de 120 ppm sur deux semaines (exposition totale était de 5 semaines) . A cet effet, MNU a été fraîchement dissous dans de l'eau distillée trois fois par semaine. Les souris des groupes C et D a reçu CE-2 régimes (teneur en sodium de base de 0,36%; CLEA Japon) contenant 10% de NaCl. Au cours de la période d'exposition, un animal du groupe B, l'un des groupe C et six du groupe D est mort ou est devenue moribonde et ils ont été exclus de l'expérience. A 40 semaines, les animaux restés ont été soumis à une anesthésie profonde et laparotomie avec excision de l'estomac. Figure 1 de conception expérimentale et les résultats histopathologiques. A: conception expérimentale. Cinq à six semaines vieux mâles C57BL /6J ont été inoculés avec H. pylori
SS1 souche (groupes B et D) ou de bouillon Brucella (groupes A et C). Tous les animaux ont été administrés 120 ppm MNU dans leur eau potable sur deux semaines (exposition totale, 5 semaines). Les souris des groupes C et D ont reçu le régime alimentaire de base (CE-2) contenant 10% de NaCl. B: les résultats histopathologiques pour les tumeurs gastriques souris MNU-induite. (A et b) adénome gastrique dans la région du pylore d'un et H. pylori
souris infecté par le MNU traité (groupe B). (C et d) un adénocarcinome gastrique observée dans le groupe B. Notez la densité cellulaire élevée et une atypie cellulaire et structurale. Bar = 200 (a et c) ou 100 um (b et d).
Évaluation histologique
Pour l'examen histologique, les estomacs ont été fixés dans 10% de formaline tamponnée neutre à 24 h, découpé en tranches le long de l'axe longitudinal en bandes de largeur égale et inclus dans la paraffine. Quatre sections um d'épaisseur ont été préparées et colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine (H & E) pour l'observation histologique. Les tumeurs ont été classées en adénomes et adénocarcinomes basé sur une atypie cellulaire et de morphologie et de croissance invasive pour la sous-muqueuse comme nous l'avons signalé précédemment [21] L'ARN total de l'ARN et préparation oligonucléotide puces à ADN L'analyse. On a extrait la totalité de la muqueuse gastrique, y compris les deux tumeurs et les tissus périphériques à l'aide d'un kit RNeasy Mini plus (Qiagen, Hilden, Allemagne) et sa qualité vérifiée avec un système d'électrophorèse sur micropuce (i puce SV1210, Hitachi Chemical, Tokyo, Japon). des échantillons de grande qualité ont été sélectionnés et mis en commun pour chaque groupe afin d'éviter les différences individuelles d'évaluation de puces à ADN oligonucleotide (groupe A, n = 3, B, n = 4; C, n = 6; D, n = 7). Le CodeLink Souris Whole Genome BioArray (microarrays appliquées, Tempe, AZ, USA) contenant 35,587 ensembles de sondes par puce a été utilisée pour analyser les profils d'expression des gènes. Hybridation, le traitement et l'analyse ont été effectuées par Filgen, Inc. (Nagoya, Japon), les images de données d'analyse en cours d'analyse à l'aide d'un logiciel (Microarray outil d'analyse de données, Filgen). -Liaison complète regroupement hiérarchique a également été examinée dans les quatre groupes en utilisant un sous-ensemble de sonde qualifiée (Filgen).
Quantitative en temps réel RT-PCR des profils d'expression chez les souris estomac
relative quantitative en temps réel RT-PCR a été réalisée en utilisant un système StepOne Real-Time PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) avec le glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase spécifique de la souris (Gapdh
) gène comme un contrôle interne. Après traitement à la DNase, premiers brins d'ADNc ont été synthétisés à partir de l'ARN total en utilisant un kit SuperScript VILO de synthèse d'ADNc (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). La PCR a été réalisée essentiellement en suivant les instructions du fabricant en utilisant un kit QuantiTect SYBR Green PCR (Qiagen). Les séquences d'amorces pour chaque gène sont indiqués dans le tableau 1. La spécificité des réactions de PCR a été confirmée à l'aide d'un programme de courbe de fusion fourni avec le logiciel StepOne et l'électrophorèse des échantillons de PCR dans 3% de gels d'agarose. Les niveaux d'expression d'ARNm ont été normalisés au niveau de Gapdh
d'ARNm et comparées aux souris témoins (groupe A) du ΔΔCT 1 method.Table séquences d'amorces pour quantitative en temps réel par rapport RT-PCR Gene


Sequences
longueur du produit
accession no.
Gapdh
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
CD177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase de de Gapdh, Reg3g
régénération des îlots-protéines dérivées 3 gamma, Muc13
mucine 13.
les patients et les échantillons de tumeurs
Un total de 55 cas de cancer gastrique avancé primaire, chirurgicalement réséquées à Aichi cancer Hospital Center (Nagoya, Japon) entre 1995 et 2002, ont été étudiés après avoir obtenu le consentement éclairé. L'étude a été approuvée par le comité d'éthique de Aichi Cancer Center. Les patients étaient tous des hommes et l'âge moyen et médian période de suivi étaient de 58,6 ± 10,2 années et 83 semaines, respectivement. Aucun avait reçu une chimiothérapie ou une radiothérapie préopératoire. Carcinomes avec le tissu de la muqueuse adjacente ont été fixées et noyées dans de la paraffine et sectionnés pour la coloration avec du H & E. Classification de la mise en scène de la tumeur et le diagnostic des cas avancés ont été faites selon la classification japonaise de carcinomes gastrique [29]. Les cancers avaient envahi la musculeuse (T2 pour la classification TNM), le sous-séreuse (T3), ou la séreuse et la cavité péritonéale (T4a), impliquant parfois les organes adjacents (T4b).
Immunohistochimie en utilisant des tissus de cancer gastrique humain
Nous avons examiné l'expression de CD177, pour laquelle un anticorps primaire commercial était disponible, dans les tissus du cancer de l'estomac humain par immunohistochimie. Après l'inhibition de l'activité de peroxydase endogène par immersion dans une solution de peroxyde d'hydrogène /méthanol à 3%, la récupération de l'antigène a été effectuée avec 10 mM de tampon citrate (pH 6,0) dans un four à micro-ondes pendant 10 min à 98 ° C. Ensuite, les sections ont été incubées avec un anticorps anti-CD177 monoclonal de souris (clone 4C4, dilué à 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). Coloration pour CD177 a été réalisée en utilisant un kit Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) et la liaison visualisées avec 0,05% 3,3'-diaminobenzidine. Les résultats de CD177 immunocoloration dans les cellules néoplasiques ont été classées en quatre degrés; grade 0 (aucun, 0-10% de cellules positives), de grade 1 (faible, 10-30%), grade 2 (modérée, 30-60%), et de grade 3 (forte, plus de 60%) sur la base de la proportion de cellules colorées, et des cas montrant modérée à forte coloration ont été considérés comme positifs.
analyse statistique
Le test du chi carré avec correction de Bonferroni a été utilisé pour évaluer l'incidence de tumeur gastrique. Des valeurs quantitatives, y compris la multiplicité de la tumeur et l'expression relative de l'ARNm étaient représentés comme moyen ± SD ou SE, et les différences entre les moyennes ont été analysées statistiquement par ANOVA ou le test de Kruskal-Wallis suivie par le test de Tukey pour des comparaisons multiples. La survie globale a été estimée en utilisant la méthode de Kaplan-Meier et le test du log-rank pour les comparaisons. Les corrélations entre l'expression CD177 et les facteurs clinicopathologiques ont été analysées par ANOVA ou test du chi carré. L'analyse multivariée a été réalisée pour examiner si CD177 sur-expression était un facteur pronostique indépendant en utilisant le risques proportionnels modèle de régression de Cox. valeurs de < P
0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.
Résultats
Incidences et multiplicités des tumeurs gastriques
Le nombre effectif de souris et les incidences et les multiplicités des tumeurs gastriques observées sont résumées dans le tableau 2. Les tumeurs développées dans la muqueuse gastrique de tous les groupes MNU-traités (groupes AD) (figure 1B). Dans les groupes de régime traités riches en sel (groupes C et D), l'incidence de tumeur gastrique dans le groupe D (H. pylori
infecté par; 100%) était significativement plus élevée que dans le groupe C (non-infectés; 50,0 %) (P
< 0,05). Dans les groupes de régime de base (groupes A et B), l'incidence a également été augmentée par H. pylori
-infection (Groupe A, 61,9% et le groupe B, 100%), mais sans signification statistique. Les multiplicités de tumeurs au total dans les deux pylori
groupes infectés par H. (Groupe B, 3,3 ± 1,0 tumeurs /souris et le groupe D, 2,6 ± 1,1) étaient nettement plus élevés que ceux des groupes non-infectées (groupe A, 0,9 ± 0,8 et le groupe C, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). La multiplicité des adénocarcinome gastrique dans le groupe D (2,1 ± 1,4) était légèrement plus élevé que dans le groupe B (1,8 ± 1,0) et une augmentation significative de la valeur du groupe C (0,8 ± 1,0) (P
< 0,05). En revanche, les multiplicités des adénomes dans les groupes A et D (0,1 ± 0,4 et 0,4 ± 0,5, respectivement) étaient significativement plus faibles que dans le groupe B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 et 0,01) .Table 2 Incidence et la multiplicité des tumeurs gastriques en nombre
efficace du groupe de souris MNU-traitées
Traitement
incidence (%)
multiplicité (no. de tumeur /souris)
adénome
Carcinome
tumeur totale
adénome
Carcinome
tumeur total


21
MNU
3 (14.3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0,8 0.4a
± 0,7
0,9 ± 0,8
b 4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0 3,3 ±
1.0c
C
14
MNU + 10% de NaCl
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6 0,8 ± 1,0

1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% de NaCl
4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0,5e
2,1 ± 1.4d
2,6 ± 1.1d
Valeurs pour la multiplicité sont exprimés en moyenne ± SD. Les cas ont généralement été évalués par le test du chi carré, suivie d'une analyse par paires avec correction de Bonferroni. Les multiplicités sont généralement analysées par analyse de variance suivie par le test de Tukey pour des comparaisons multiples. aP
< 0,01 vs.
Groupe B, bP
< 0,01 vs.
Groupe A, cP
< 0,05 vs.
Groupe A, dP
< 0,05 vs.
Groupe C, eP
< 0,05 vs.
Groupe B.
profil d'expression génique dans l'estomac glandulaire par oligonucléotide microarray
Avec microréseaux d'oligonucléotides, par rapport à la non-infectées et basale groupe de régime traité (groupe A), 34 gènes étaient régulés à la hausse et 169 ont été plus de deux fois régulé à la baisse chez H. pylori
souris infecté par (groupe B), 56 régulés à la hausse et 129 vers le bas régulés chez les souris de régime traités riches en sel (groupe C), et 69 régulés à la hausse et 214 régulée à la baisse dans le groupe combiné (groupe D) (figure 2A). Pris dans leur ensemble, comme le montre le tableau 3, nous avons constaté que 35 gènes étaient régulés à la hausse et 31 gènes ont été régulés à la baisse de plus de deux plier uniquement par la combinaison d'une infection à H. pylori
et une alimentation riche en sel. En outre, l'analyse de classification hiérarchique a été réalisée sur les quatre groupes avec un total de 303 sondes qualifiées en utilisant l'algorithme de clustering complet-liaison (Figure 3). Trente et une des sondes dont CD177
, Reg3g
et Muc13
ont été confirmés pour être dans un groupe de sondes régulés à la hausse que dans le Groupe D. Une analyse ultérieure dans la présente étude a été axée sur ces gènes, car elle a été considéré que les gènes dont l'expression a été modifié que dans le groupe combiné pourraient être associés à la carcinogenèse gastrique et la progression chez les humains. Figure 2 Analyse génétique globale dans l'estomac glandulaire de souris MNU-traitées à l'aide de l'oligonucléotide microarray. A: Nombre de gènes en amont ou régulé à la baisse de plus de deux fois dans l'estomac de souris MNU-traitées. Dans le diagramme de Venn, les cercles indiquent amont (à gauche) ou (à droite) des gènes régulés à la baisse dans l'estomac de souris MNU traités avec H. pylori
infection, régime riche en sel ou leur combinaison. La zone ombrée représente les gènes en amont ou en bas réglementés plus de deux fois seulement par la combinaison. B: Quantitative analyse en temps réel RT-PCR de trois gènes sélectionnés régulés à la hausse (CD177
, Reg3g
et Muc13
) dans l'estomac de souris MNU-traités. les niveaux des gènes dans chaque échantillon d'expression ont été normalisés par commande interne Gapdh en utilisant la méthode ΔΔCT. les niveaux d'expression relatifs ont été représentés comme étant la variation de X fois par rapport au groupe A (fixée à 1,0). L'analyse statistique a été effectuée par le test de Kruskal-Wallis pour l'analyse générale et test de Tukey pour la comparaison multiple. Bars, SE; *, P
< 0,01 vs.
Groupe A et < 0,05 vs.
Groupe C; †, P
< 0,01 vs.
Groupe C.
Tableau 3 gènes régulés par combinaison de l'infection à H. pylori et l'alimentation riche en sel dans la muqueuse gastrique de la souris
adhésion no.
Symbole

gènes /protéines de
Plié changements
gènes régulés à la hausse
XM_357640
immunoglobuline kappa variable de chaîne 8 (V8)
Igk-V8
14.4
XM_001472541
Ighg
Immunoglobulin chaîne lourde (gamma polypeptide)
9.2
NM_026862
CD177
CD177 antigène
7.3
NM_011260
Reg3g
régénérant îlot dérivé 3 gamma
6.1
NM_023137
Ubiquitin D Ubd
4.3
XM_144817
Igk-V34
immunoglobuline kappa variable de chaîne 34 (V34)
4.1
NM_007675
carcino molécule d'adhésion cellulaire liés antigène de Ceacam10 10
3.7
NM_183322
Khdc1a
KH domaine contenant 1A
3.3
NM_011475
Petite protéine riche en proline de Sprr2i 2I
3.2
NM_175165
TPRG
transformation protéine apparentée 63 réglementée
3.2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPase, H + transport , sous-unité lysosomale V0 D2
3.0
NM_009703
Araf de v-raf sarcome murin 3611 homologue oncogène viral
2.6
NM_026822
Lce1b
enveloppe cornified Late 1B
2.5
NM_212487
Krt78 de> 2,5
NM_016958
KRT14 78
2.4
NM_009807
CASP1
Caspase 1
2.4
NM_146037
Kcnk13
canal de potassium, K Sous, membre 13
2.4
NM_019450
Il1f6
interleukine 1 famille, membre 6
2.3
NM_008827
PGF
facteur de croissance placentaire
2.3
XM_893506
kallicréine liés à peptidase de KLK12 12
2.3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2.3
NM_029360
Tm4sf5
transmembranaire 4 membres de la superfamille 5
2.2
NM_172301
CCNB1
cycline B1
2.2
NM_010739
Muc13
mucine 13, transmembranaire épithéliale
2.2
NM_011165
Prl4a1
prolactine famille 4, sous-famille a, 1 membre
2.2
NM_010162
EXT1 de Exostoses (multiples) 1
2.2
NM_011704
VNN1
Vanin 1
2.1
NM_011082
pIGR
récepteur d'immunoglobuline polymérique
2.1
NM_007769
DMBT1
Deleted dans les tumeurs cérébrales malignes 1
2.1
NM_022984
Retn de résistine
2.1
NM_173037
TMCo 7
transmembranaire et superhélice domaine 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
cycline B2
2.1
NM_001081060
Slc9a3 de famille de support en soluté 9 (sodium /hydrogène de échangeur), membre 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
récepteurs olfactifs 1030
2.0
bas réglementés gènes
NM_008753
Oaz1
décarboxylase ornithine antizyme 1
0,31
NM_027126
HFE2
type hémochromatose 2 (juvénile) (homologue humain)
0,33
NM_053206
Magee2
antigène mélanome, la famille E, 2
0,33
NM_010924
NNMT
nicotinamide N-méthyltransférase
0,41
NM_026260
Tctn3
membre de la famille Tectonic 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0,43
NM_008312
HTR2C
5-hydroxytryptamine (sérotonine) récepteur 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
olfactive récepteur 740
0,44
NM_007550
Blm
Bloom syndrome homolog (humain)
0,44
NM_011243
RARB
rétinoïque acid receptor, bêta
0,44
NM_184052
IGF1
facteur de croissance 1
0,45
NM_013893
Reg3d
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin de Régénération îlot dérivé 3 delta 1
0,46 NM_029550
KEG1
Kidney exprimé le gène 1
0,46
NM_019388
CD86
antigène CD86
0,46
NM_011316
Saa4
sérum amyloïde A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
cytochrome P450, famille 26, sous-famille a, polypeptide 1
0,47
NM_011538
TBX6
T-box 6
0,48 <> NM_011086
Pip5k3
phosphatidylinositol-3-phosphate /phosphatidylinositol 5-kinase br, le type III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, protéine associée du cytosquelette
0,48
NM_007858
Diap1
homolog Diaphane 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
exocytose de régulation de la membrane synaptique 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + dépendante protéine activatrice pour la sécrétion 2
0,49
NM_007541
Bglap1
os gamma protéine carboxyglutamate 1
0,49
NM_031871
Ghdc
domaine GH3 contenant
0,49
NM_025545
APTX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
Angiotensin II récepteur, de type 1a
0,49
NM_026872 la protéine ubiquitine-associé
Ubap2 2
0,49
NM_028045
ERV3
endogène séquence rétrovirale 3
0,49
NM_011641
Trp63
transformation related protein 63
0,49
Figure 3 hiérarchique d'analyse de la concentration de quatre groupes expérimentaux de souris MNU-traitées. les données d'expression de 303 sondes qualifiées (à gauche). Les quatre groupes expérimentaux ont été classés en deux groupes (groupes A /C) et (Groupes B /D) en fonction des similitudes dans les modes d'expression. Chaque ligne représente une sonde et chaque colonne représente un groupe expérimental (Groupes A-D). Comme le montre la barre de couleur, le vert indique la régulation; rouge indique la régulation; et noir indique aucun changement. Trente et un des sondes constituaient un groupe de sondes régulée à la hausse que dans le groupe D (à droite).
Les résultats entiers de cette analyse des microréseaux ont été soumis et sont facilement accessibles à partir de la base de données publique NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) avec le numéro d'accession GSE29444 (numéro d'échantillon: GSM728857-60).
analyse en temps réel RT-PCR quantitative des profils d'expression génique dans MNU-traité relative analyse en temps réel RT-PCR quantitative de souris estomacs de trois sélectionné amont gènes régulés (CD177
, Reg3g
et Muc13
) à H. pylori
infecté par et riche en sel souris alimentaire traité a confirmé une expression accrue de CD177
et Reg3g
, comme le montre la figure 2B, avec des différences significatives. Bien que le niveau de Muc13
dans le Groupe D de l'expression était plus élevé que tous les autres groupes, il n'y avait pas de signification statistique parmi eux (P = 0,0712
vs.
Groupe C).
Expression immunohistochimique de CD177 chez l'homme les cancers gastriques avancés et les facteurs de corrélation avec clinicopathological
a l'analyse immunohistochimique de tissus de cancer gastrique humain, CD177 a été observée non seulement dans les membranes et les cytoplasmes des neutrophiles infiltrés, mais aussi dans les cellules cancéreuses gastriques des deux adénocarcinomes bien et mal différenciées ( La figure 4A). Les cellules cancéreuses de type cellulaire chevalière anneau (2 cas) ont été négatifs pour CD177. Parmi 55 cas de cancer gastrique, modérée à forte expression de CD177 a été observée dans 33 (60,0%) (tableau 4). Figure 4 immunohistochimie pour CD177 dans le cancer gastrique avancé humain et corrélation avec les taux de survie globale. A: Analyse immunohistochimique de l'expression de CD177 dans les tissus du cancer gastrique humain. (A et b) coloration négative (aucun à faible) pour CD177 dans un adénocarcinome gastrique. expression CD177 est présente uniquement dans l'infiltration de neutrophiles tandis que les cellules néoplasiques du bien différencié (a) ou (b) un carcinome mal différencié sont négatifs. grossissement original, × 100 (encart, × 400). (C et d) note positive (modérée à forte) expression de CD177 dans bien différencié (c) ou (d) les cellules cancéreuses gastriques mal différenciées. grossissement original, × 100 (encart, × 400). B:. Comparaison de Kaplan-Meier courbes de survie cumulative pour les cas de cancer gastrique négatifs et positifs CD177
Tableau 4 CD177 expression dans les carcinomes gastriques et sa corrélation avec des facteurs clinicopathologiques
Cas n °
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adénocarcinomes
55
18
15
17
5
l'âge de Years (moyenne ± SD)
55,3 ± 10,4 60,2 ± 8,13

59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0,5039
classification histologique
Well /Type modérément différencié *
21
6
9
4 2
0,1904
mal différenciés /chevalière type cellulaire **
34
12
6
13 3
Profondeur d'invasion †
T1-3
27
5
10
10 2
0,2011
26
11
5
7 3
la lymphe de T4 métastases ganglionnaires
N0
6 1
2
2 1
0,7869
N1-3
49
17
13
15 4
* type intestinal de Lauren, ** type diffus de Lauren, le nombre † de cas a été réduit à cinquante-trois parce que la profondeur de l'invasion n'a pas été classée dans deux cas, ‡ ANOVA et test du chi carré ont été effectuées pour l'âge et d'autres facteurs, respectivement.
La période des patients suivi variait de 9 à 606 semaines (médiane = 83 semaines). Les taux de survie à cinq ans pour CD177-positives et négatives étaient de 39,4% et 18,2%, respectivement. De Kaplan-Meier analyse de la courbe de survie, l'expression CD177 positif a été associé à une meilleure survie globale (P = 0,0294
, log-rank test) (figure 4B). Il n'y avait aucune corrélation statistiquement significative de l'expression CD177 avec l'âge, la classification histologique, profondeur de l'invasion et métastases ganglionnaires (tableau 4) l'analyse multivariée de. Pour la survie globale des cas de cancer gastriques humaines
Utilisation de la Cox modèle des risques proportionnels , analyse multivariée des variables clinicopathologiques, y compris l'âge du patient, la tumeur classification histologique, la profondeur d'invasion, métastase ganglionnaire, et l'expression de CD177 (tableau 5), a révélé le dernier à être un facteur indépendant de la survie globale (P
= 0,0323) . Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

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