Genuttrykk analyse av en Helicobacter pylori-infisert og høy-salt diett-behandlede mus mage tumor modell: identifisering av CD177 som en roman prognostisk faktor hos pasienter med mage cancer

genuttrykk analyse av en Helicobacter pylori
-infected og high-salt diett-behandlede mus mage tumor modell: identifisering av CD177 som en roman prognostisk faktor hos pasienter med magekreft
Abstract
Bakgrunn
Helicobacter pylori product: (H. pylori
) infeksjon og høyt inntak av salt er kjent som viktige risikofaktorer for kreft i magesekken hos mennesker. Men interaksjoner av disse to faktorene med genuttrykk profil ved magekreft fortsatt uklare. I denne studien har vi undersøkt global genekspresjon forbundet med magekreftutvikling og prognose for human magekreft ved hjelp av en musemodell.
Metoder
For å finne kandidat gener som er involvert i mage karsinogenese, vi først bygget et carcinogen-indusert mus gastrisk tumormodell kombinert med H. pylori
infeksjon og høy-salt diett. C57BL /6J mus ble gitt N
metyl-N
-nitrosourea i drikkevannet og ofret etter 40 uker. Dyr av en kombinasjon gruppe ble inokulert med H. pylori Hotell og matet en høy-salt diett. Genuttrykk profiler i kjertelmagen av mus ble undersøkt av oligonukleotid microarray. For det andre, undersøkte vi en tilgjengelighet av kandidatens genet som prognostisk faktor for menneskelige pasienter. ble utført immunhistokjemisk analyse av CD177, en av de oppregulert gener i menneske avansert ventrikkelcancer prøver å vurdere tilknytning til prognosen. Search Results
mangfold av mage tumor i karsinogen-behandlede mus ble betydelig økt ved kombinasjon av H. pylori
infeksjon og høy-salt diett. I microarray analyse, 35 og 31 mer enn to ganger oppregulert og ned-regulert gener, henholdsvis, ble påvist i H. pylori
-infection og høy-salt diett kombinert gruppen sammenlignet med de andre gruppene. Kvantitativ RT-PCR bekreftet betydelig overuttrykk av to kandidatgener inkludert Cd177 Hotell og Reg3g
. På immunhistokjemisk analyse av CD177 i menneskelige avansert ventrikkelcancer eksemplarer, over-uttrykk var tydelig i 33 (60,0%) av 55 tilfeller betydelig korrelere med en gunstig prognose (P
= 0,0294). Multivariat analyse inkludert clinicopathological faktorer som kovariater åpenbart høyt uttrykk av CD177 å være en uavhengig prognostisk faktor for total overlevelse.
Konklusjoner
Disse resultatene tyder på at vår mus modell kombinert med H. pylori
infeksjon og høy-salt diett er nyttig for genuttrykk profilering i mage karsinogenese, som gir bevis for at CD177 er en roman prognostisk faktor for magekreft. Dette er den første rapporten som viser en prognostisk sammenheng mellom CD177 uttrykk og solid tumor atferd.
Nøkkelord
Cd177 Magekreft Helicobacter pylori
Microarray Salt Bakgrunn
Magekreft er den fjerde vanligste kreftformen og andre ledende årsak kreftrelaterte dødsfall på verdensbasis [1]. Helicobacter pylori product: (H. pylori
) er nå anerkjent som en viktig risikofaktor for kronisk gastritt og magekreft utvikling [2]. I tillegg har miljø og vertsfaktorer også vist seg å påvirke gastrisk karsinogenese, og salt (natriumklorid, NaCl) og salt mat er av spesiell viktighet, på grunnlag av bevis fra en rekke epidemiologiske og eksperimentelle studier [3-6]. Dermed kombinert eksponering for H. pylori
infeksjon og høyt inntak av salt synes å være svært viktig for utvikling og progresjon av mage svulster, selv om de detaljerte mekanismer, særlig i form av genuttrykk profiler, gjenstår å avklare.
Høy gjennomstrømming microarray-teknologi gir et kraftig verktøy for omfattende genet analyse, allerede søkt å vurdere genutrykksmønster i både humane prøver og dyremodeller av mage lidelser [7-16]. Selv om mange forskere har fokusert på genuttrykk i H. pylori
behandlede mage cellelinjer [17-19], har resultatene i cellekultur ikke nødvendigvis i samsvar med uttrykket av spesifikke gener i in vivo
mikromiljø med vertens immun svar og stromale-epitelial interaksjoner i kreft. Carcinogen-behandlede mongolske ørkenrotter har blitt brukt som et nyttig dyremodell av H. pylori
-associated gastrisk karsinogenese [20-24], og vi tidligere har rapportert at en synergistisk interaksjon mellom Helicobacter pylori-infeksjon og
høy-salt inntak akselererer kronisk betennelse og tumor utvikling i magen på disse dyrene [25, 26]. Dessverre er det lite informasjon tilgjengelig for hamsteren genom, hindre genetisk og molekylær analyse. Derfor har oppmerksomheten rettet mot musemodeller [12, 13], og etablering av en musemodell for magekreft med salt og H. pylori
eksponering er nødvendig for undersøkelser rettet mot gener involvert i magekreftutvikling.
Tidligere microarray studier bruker gnagermodeller ikke skille og karakterisere uttrykk profiler basert på samspillet mellom H. pylori
infeksjon og saltinntaket. I denne studien undersøkte vi genuttrykk i mageslimhinnen i en H. pylori
-infected og høy-salt diett-behandlede mus mage tumor modell av oligonukleotid microarray og fant to kandidat oppregulert gener inkludert Cd177
og Reg3g
. Vi har også undersøkt uttrykk for CD177 i humane avanserte mage kreft ved immunhistokjemi, og fått bevis som en potensiell prognostisk faktor for magekreftutvikling.
Metoder
Inoculation med H. pylori
H. pylori
ble fremstilt ved den samme fremgangsmåte som tidligere beskrevet [27, 28]. I korthet ble H.pylori plakater (Sydney stamme 1) inokulert på Brucella agar plater (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, USA) inneholdende 7% (v /v) varmeinaktivert føtalt bovint serum (FBS) og inkubert ved 37 ° C under mikroaerofile betingelser ved høy fuktighet i 2 dager. Deretter ble bakterier dyrket på platene innføres i Brucella buljong (Becton Dickinson) supplert med 7% (v /v) FBS og inkubert under de samme betingelser i 24 timer. Etter 24-timers faste, dyrene var intra-gastrisk inokulert H. pylori plakater (1,0 × 10 8 kolonidannende enheter). Før inokulering ble buljongkulturer av H. pylori
sjekket under et fasekontrastmikroskop for bakteriell form og bevegelighet.
Dyr og forsøksprotokoll
femtiseks spesifikke patogen-frie hann, 5- eller 6 -week gamle C57BL /6J-mus (CLEA Japan, Tokyo, Japan) ble anvendt i denne studien. Alle dyr ble plassert i plastmerder på hard-chip sengetøy i en luftkondisjonerte biohazard rom med en 12-timers lys /12-h mørk syklus, og fri tilgang til mat og vann gjennom. Den eksperimentell design ble godkjent av Animal Care komité i Aichi Cancer Center Research Institute, og dyrene var ivaretatt i henhold til institusjonelle retningslinjer samt retningslinjer for forsvarlig gjennomføring av dyreforsøk (Science Council of Japan, 1 juni 2006 ).
Det eksperimentelle oppsettet er vist i figur 1A. Musene ble delt i 4 grupper (gruppe A-D); 21, 5, 15, og 15 mus ble tildelt A, B, C, og D-grupper, henholdsvis, ved begynnelsen av forsøket. Dyrene i gruppe B og D ble inokulert med H. pylori
intra-gastrisk på alternative uker (totalt 7 ganger), mens mus av de andre gruppene ble inokulert med Brucella buljong alene. Alle mus ble gitt N
metyl-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St Louis, MO, USA) i drikkevannet i en konsentrasjon på 120 ppm på alternative uker (total eksponering var 5 uker) . For dette formål MNU var ferskt oppløst i destillert vann tre ganger per uke. Mus av gruppe C og D fikk CE-2 dietter (basal natriuminnhold på 0,36%; CLEA Japan) som inneholder 10% NaCl. I løpet av eksponeringstiden, ett dyr av gruppe B, en av gruppe C og seks av Gruppe D døde eller ble døende og de ble ekskludert fra forsøket. På 40 uker ble dyrene forble utsatt for dyp anestesi og laparotomi med fjerning av magen. Figur 1 Forsøksplanlegging og histopatologiske funn. A: Eksperimentell design. Fem til seks uker gamle hann C57BL /6J-mus ble inokulert med H. pylori
SS1 stamme (gruppe B og D) eller Brucella buljong (gruppene A og C). Alle dyr ble administrert 120 ppm MNU i drikkevannet på alternative uker (total eksponering, 5 uker). Mus av gruppe C og D ble gitt basal diett (CE-2) inneholdende 10% NaCl. B: histopatologiske funn for MNU-indusert mus mage svulster. (A og b) Gastrisk adenom i pylorus-regionen til en MNU-behandlede og H. pylori
-infected mus (gruppe B). (C og d) Gastric adenokarsinom observert i gruppe B. Merk høy celletetthet og cellulær og strukturell atypi. Bar = 200 (a og c) eller 100 um (b og d).
Histologisk evaluering
for histologisk undersøkelse, magene ble fiksert i 10% nøytral buffret formalin for 24-h, skiver langs lengdeaksen i strimler av lik bredde, og innstøpt i parafin. Fire-mikrometer tykke seksjoner ble utarbeidet og farget med hematoxylin og eosin (H & E) for histologisk observasjon. Svulster ble klassifisert i adenom og adenokarsinom basert på mobilnettet og morfologiske atypia og invasiv vekst til submucosa som vi rapporterte tidligere [21].
RNA forberedelse og oligonukleotid microarray analyse
Total RNA ble ekstrahert fra hele mageslimhinnen inkludert både svulst og perifert vev ved hjelp av en RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Hilden, Tyskland) og dens kvalitet sjekket med en microchip elektroforese system (i-chip SV1210, Hitachi Chemical, Tokyo, Japan). Høykvalitets prøver ble utvalgt og slått sammen for hver gruppe for å unngå individuell forskjell for oligonukleotid microarray vurdering (gruppe A, n = 3; B, n = 4; C, n = 6; D, n = 7). Den Code Mouse Whole Genome Bioarray (Applied Mikromatriser, Tempe, AZ, USA) som inneholder 35,587 probe sett per chip ble brukt til å analysere genuttrykk profiler. Hybridisering, behandling og skanning ble utført av Filgen, Inc. (Nagoya, Japan), blir skanningsdatabilder analysert ved hjelp av en programvarepakke (Microarray Data Analysis Tool, Filgen). Komplett-kobling hierarkisk clustering ble også undersøkt om de fire gruppene med en kvalifisert probe undergruppe (Filgen).
Kvantitativ real-time RT-PCR av uttrykk profiler i mus magen
Relativ kvantitativ real-time RT-PCR ble utført ved hjelp av en StepOne real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) med musen spesifikke glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase (GAPDH
) genet som en intern kontroll. Etter DNase-behandling, ble første tråd cDNA syntetisert fra total RNA ved hjelp av en Super VILO cDNA Synthesis Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). PCR ble utført i utgangspunktet følge produsentens instruksjoner ved hjelp av en QuantiTect SYBR Grønn PCR Kit (Qiagen). Primersekvensene for hvert gen er angitt i tabell 1. Spesifisiteten av PCR-reaksjonene ble bekreftet ved anvendelse av en smeltekurve program som følger med StepOne programvare og elektroforese av PCR-prøvene i 3% agarosegeler. Uttrykket nivåer av mRNA ble normalisert til mRNA-nivået av GAPDH
og sammenlignet med kontrollmusene (gruppe a) med den ΔΔCT method.Table 1 primersekvenser for relativ kvantitativ sanntids RT-PCR
Gene

Sekvenser
Produktlengde lengde~~POS=HEADCOMP
Tiltredelse nei.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
glyseraldehyd-3-fosfat dehydrogenase, Reg3g
regenererende holme-avledet protein 3 gamma, Muc13
mucin 13.
pasienter og vevsprøver, En totalt 55 tilfeller av primær avansert magekreft, kirurgisk resected ved Aichi Cancer Center Hospital (Nagoya, Japan) mellom 1995 og 2002, ble undersøkt etter å ha innhentet informert samtykke. Studien ble godkjent av etisk komité av Aichi Cancer Center. Pasientene var alle mannlige og gjennomsnittsalderen og median oppfølgingsperiode var 58,6 ± 10,2 år og 83 uker, henholdsvis. Ingen hadde fått preoperativ kjemoterapi eller strålebehandling. Kreftsvulster med tilstøtende mucosavev ble fikset og dyppet i parafin, og seksjonert for farging med H & E. Klassifisering av svulst iscenesettelse og diagnostisering av avanserte tilfeller ble gjort i henhold til den japanske Klassifisering av Gastric Kreftsvulster [29]. Kreft hadde invadert muscularis propria (T2 for TNM klassifisering), den subserosa (T3), eller serosa og bukhulen (T4a), noen ganger som involverer tilstøtende organer (T4B).
Immunhistokjemi under anvendelse av human magekreft vev
Vi undersøkte ekspresjon av CD177, for hvilke en kommersiell primært antistoff var tilgjengelige, i humane magecancer vev ved immunohistokjemi. Etter inhibering av endogen peroksydase-aktivitet ved neddykking i 3% hydrogenperoksid /metanol-oppløsning ble det antigen gjenfinning utført med 10 mM citratbuffer (pH 6,0) i en mikrobølgeovn i 10 minutter ved 98 ° C. Deretter seksjoner ble inkubert med en mus monoklonalt anti-CD177 antistoff (klon 4C4, fortynnet 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). Farging for CD177 ble utført ved hjelp av en Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) og binding visualisert med 0,05% 3,3'-diaminobenzidin. Resultatene av CD177 immunofarging i neoplastiske celler ble klassifisert i fire grader; klasse 0 (ingen, 0-10% av positive celler), klasse 1 (svak, 10-30%), klasse 2 (moderat, 30-60%), og klasse 3 (sterk, over 60%) basert på andelen av fargede celler, og saker som viser moderat til sterk farging ble ansett som positivt.
Statistisk analyse
Chi-kvadrat test med Bonferroni korreksjon ble brukt for å vurdere forekomst av mage svulst. Kvantitative verdier inkludert mangfold av tumor og relative ekspresjon av mRNA ble fremstilt som gjennomsnitt ± SD eller SE, og forskjeller mellom middel ble statistisk analysert ved ANOVA eller den Kruskal-Wallis test etterfulgt av Tukey-test for multiple sammenligninger. Total overlevelse ble beregnet ved hjelp av Kaplan-Meier metoden og log-rank test for sammenligninger. Sammenhenger mellom CD177 uttrykk og clinicopathological faktorer ble analysert ved ANOVA eller Chi-kvadrat test. Multivariat analyse ble utført for å undersøke om CD177 overuttrykk var en uavhengig prognostisk faktor ved hjelp av Cox proporsjonal farer regresjonsmodell. P
verdier av < 0,05 ble ansett for å være statistisk signifikant.
Resultater
Forekomst og multiplicities av mage svulster
effektive antall mus og de observerte forekomst og multiplicities av mage svulster er oppsummert i tabell 2. Svulster utviklet i mageslimhinnen av alle MNU-behandlede grupper (grupper AD) (figur 1B). I høy-salt diett-behandlede grupper (gruppe C og D), var insidensen av mage svulst i gruppe D (H. pylori
-infected; 100%) var signifikant høyere enn i gruppe C (ikke-infisert, 50,0 %) (P
< 0,05). I basal diett grupper (gruppe A og B), ble forekomsten også økt med H. pylori
-infection (Gruppe A, 61,9% og gruppe B, 100%), dog uten statistisk signifikans. De multiplicities av totalt svulster i begge H. pylori
-infected grupper (gruppe B, 3,3 ± 1,0 svulster /mus og gruppe D, 2,6 ± 1,1) var markert høyere enn i ikke-infiserte grupper (gruppe A, 0,9 ± 0,8 og gruppe C, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). Mangfoldet av adenokarsinom i gruppe D (2,1 ± 1,4) var noe høyere enn i gruppe B (1,8 ± 1,0) og betydelig økt over gruppe C-verdi (0,8 ± 1,0) (P
< 0,05). I motsetning til dette multiplisiteter av adenomer i gruppene A og D (henholdsvis 0,1 ± 0,4 og 0,4 ± 0,5,) var betydelig lavere enn i gruppe B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 og 0,01) .table 2 Insidens og mangfold av mage svulster i MNU-behandlede mus
Gruppe
Effektiv antall
Behandling
Forekomst (%)
mangfold (nr. av svulst /mus)
Adenom
Carcinoma
Total svulst
Adenom
Carcinoma
Total svulst

A
21
MNU
3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0.4a
0,8 ± 0,7
0.9 ± 0.8
B
4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0
3,3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% NaCl
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0
1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% NaCl
fire (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2.1 ± 1.4D
2,6 ± 1.1d
verdier for mangfold er uttrykt som gjennomsnitt ± SD. Forekomst ble generelt vurdert av Chi-kvadrat test, etterfulgt av parvise analyse med Bonferroni korreksjon. Multiplisiteter ble vanligvis analysert ved hjelp av ANOVA, etterfulgt av Tukey-test for en multippel sammenligning. aP
< 0,01 vs.
gruppe B, BP
< 0,01 vs.
gruppe A, cP
< 0,05 vs.
gruppe A, dP
< 0,05 vs.
gruppe C, EP
< 0,05 vs.
gruppe B.
Gene expression profilering i kjertel magen av oligonukleotid microarray
Med oligonukleotid-mikromatriser, sammenlignet med ikke-infisert og basal diett-behandlede gruppen (gruppe A), 34 gener ble oppregulert og 169 ble nedregulert mer enn to ganger i H. pylori
-infected mus (gruppe B), 56 oppregulert og 129 ned -regulated i høy-salt-diett-behandlede mus (gruppe C), og 69 oppregulert og 214 nedregulert i den kombinerte gruppen (gruppe D) (figur 2A). Tatt sammen, som vist i tabell 3, har vi funnet at 35 genene var oppregulert og 31 genene ble nedregulert mer enn bare to ganger ved kombinasjonen av H. pylori-infeksjon og
høy saltfattig kost. I tillegg ble det utført hierarkisk klyngeanalyse på de fire gruppene med totalt 303 kvalifiserte prober ved hjelp av den komp-bindingen clustering algoritme (figur 3). Trettien sonder inkludert Cd177
, Reg3g Hotell og Muc13
ble bekreftet å være innenfor en klynge av sonder oppregulert bare i Gruppe D. påfølgende analyse i denne studien var fokusert på disse genene, fordi det ble ansett at genene hvor ekspresjon ble endret bare i den kombinerte gruppen kan være forbundet med gastrisk karsinogenese og progresjon hos mennesker. Figur 2 Global genet analyse i kjertelmagen av MNU-behandlede mus bruker oligonukleotid microarray. A: Antall gener opp- eller nedregulert mer enn to ganger i magen av MNU-behandlede mus. I Venn s diagram, sirklene viser opp- (venstre) eller nedregulert (høyre) gener i magen av MNU-behandlede mus med H. pylori
infeksjon, høy-salt diett eller deres kombinasjon. Det skraverte området representerer opp- eller ned-regulerte gener mer enn bare to ganger av kombinasjonen. B: Kvantitativ real-time RT-PCR analyse av tre utvalgte oppregulert gener (Cd177
, Reg3g
, og Muc13
) i magen på MNU-behandlede mus. Expression nivåer av genene i hver prøve ble normalisert ved GAPDH
som intern kontroll ved hjelp ΔΔCT metode. Relative uttrykk nivåer var representert som X-ganger endring i forhold til gruppe A (fast som 1.0). Statistisk analyse ble utført ved Kruskal-Wallis test for generell analyse og Tukey test for en multippel sammenligning. Barer, SE; *, P
< 0,01 vs.
gruppe A og < 0,05 vs.
Gruppe C; †, P
< 0,01 vs.
Gruppe C.
Tabell 3 regulert gener ved kombinasjon av H. pylori infeksjon og høy-salt diett i mus mageslimhinnen
Tiltredelse nei.
Symbol

Genes /proteiner

brett endringer
oppregulert gener
XM_357640
IGK-V8
immunoglobulin kappa kjede variabel 8 (V8)
14.4
XM_001472541
Ighg
immunoglobulin tung kjede (gamma polypeptid)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 antigen
7,3
NM_011260
Reg3g
regenererende holme-avledet tre gamma
6,1
NM_023137
UBD
Ubiquitin D
4,3
XM_144817
IGK-V34
immunoglobulin kappa kjede variabel 34 (V34)
4,1
NM_007675
Ceacam10
carcinoembryonic antigen relaterte celleadhesjonsmolekyl 10
3,7
NM_183322
Khdc1a
KH domene som inneholder 1A
3,3
NM_011475
Sprr2i
Small prolinrikt protein 2I
3,2
NM_175165
Tprg
Transformation relatert protein 63 regulert
3,2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPase, H + transport ,
lysosomal V0 subenheten D2 3,0
NM_009703
Araf
v-raf muse sarkom 3611 viral onkogen homolog
2,6
NM_026822
Lce1b
Late forhomede konvolutt 1B
2,5
NM_016958
Krt14
Keratin 14
2,5
NM_212487
Krt78
Keratin 78
2,4
NM_009807
Casp1
caspase 1
2,4
NM_146037
Kcnk13
Kalium kanal, underfamilien K, medlem 13
2,4
NM_019450
Il1f6
interleukin en familie, medlem 6
2,3
NM_008827
PGF
Morkakevekstfaktor
2,3
XM_893506
Klk12
Kallikrein relatert-peptidase 12
2,3
NM_016887
Cldn7
claudin 7
2,3
NM_029360
Tm4sf5
transmembran fire super medlem 5
2,2
NM_172301
Ccnb1
Cyclin B1
2,2
NM_010739
Muc13
mucin 13, epitelial trans
2,2
NM_011165
Prl4a1
Prolaktin familie 4, underfamilien en, medlem 1
2,2
NM_010162
EXT1
Exostoses (flere) 1
2,2
NM_011704
Vnn1
Vanin en
2.1
NM_011082
Pigr
Polymer immunglobulin reseptoren
2.1
NM_007769
Dmbt1
Slettet i ondartede hjernesvulster 1
2.1
NM_022984
retn
Resistin
2.1
NM_173037
Tmco 7
transmembran og coiled-spole domene 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
Cyclin B2
2.1
NM_001081060
Slc9a3
oppløst stoff carrier familie ni (natrium /hydrogen leren), medlem 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
olfactory reseptor 1030
2,0
nedregulert gener
NM_008753
Oaz1
ornitindekarboksylase antizyme en
0,31
NM_027126
Hfe2
hemochromatosis type 2 (juvenile) (human homolog)
0,33
NM_053206
Magee2
melanoma antigen, familie E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
nikotinamid N-metyltransferase
0,41
NM_026260
Tctn3
Tectonic familiemedlem 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin en
0,43
NM_008312
Htr2c
5-hydroxytryptamine (serotonin) reseptoren 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
olfactory reseptoren 740
0,44
NM_007550
Blm
Bloom syndrom homolog (human)
0,44
NM_011243
R R
retinsyrereseptor, beta
0,44
NM_184052
IGF1
Insulin-like growth factor 1
0,45
NM_013893
Reg3d
Regenerering holme-avledet tre delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin en
0,46
NM_029550
Keg1
Nyre uttrykt gen 1
0,46
NM_019388
CD86
CD86 antigen
0,46
NM_011316
Saa4
Serum amyloid A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
Cytokrom P450, familie 26, underfamilien en, polypeptid en
0,47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
phosphatidylinositol-3-fosfat /phosphatidylinositol 5-kinase, type III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, cytoskeletal assosiert protein
0,48
NM_007858
Diap1
Diaphanous homolog 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
Regulering synaptiske membran eksocytose 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -avhengig aktivator protein for sekresjon 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Bone gamma carboxyglutamate protein 1
0,49
NM_031871
Ghdc
GH3 domene som inneholder
0,49
NM_025545
APTX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
Angiotensin II reseptor, type 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
Ubiquitin-assosiert protein 2
0,49
NM_028045
Erv3
Endogene retroviral sekvens 3
0,49
NM_011641
Trp63
Transformation relatert protein 63
0,49
Figur 3 hierarkisk clustering analyse av fire eksperimentelle grupper av MNU-behandlede mus. Expression data fra 303 kvalifiserte sonder (til venstre). De fire forsøksgruppene ble klassifisert i to klynger (gruppe A /C) og (gruppe B /D) basert på likheter i uttrykk mønstre. Hver rad representerer en sonde, og hver kolonne representerer en eksperimentell gruppe (gruppe A-D). Som vist på fargelinjen, indikerer grønt oppregulering; rødt indikerer nedregulering; og svart indikerer ingen endring. Trettien sonder utgjorde en klynge av sonder oppregulert bare i Gruppe D (høyre).
Hele Resultatene av denne microarray analyse har blitt sendt og er lett gjenfinnes fra den offentlige databasen NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) med sjonsnummer GSE29444 (prøvenummer: GSM728857-60).
kvantitativ real-time RT-PCR analyse av genuttrykk profiler i MNU-behandlede mus mager
Relativ kvantitativ real-time RT-PCR analyse av tre utvalgte opp- regulerte gener (Cd177
, Reg3g
, og Muc13
) i H. pylori
-infected og høy-salt diett-behandlede mus bekreftet økt uttrykk av Cd177 Hotell og Reg3g
, som vist i figur 2B, med betydelige forskjeller. Selv om uttrykket nivået av Muc13
i gruppe D var høyere enn alle andre grupper, var det ingen statistisk signifikans blant dem (P
= 0,0712 vs.
gruppe C).
Immunhistokjemisk uttrykk for CD177 i menneskelig avanserte gastrisk kreft og korrelasjon med clinicopathological faktorer
på immunohistokjemisk analyse av humane magecancer vev, CD177 ble observert ikke bare i membraner og cytoplasms av infiltrerte nøytrofiler, men også i magecancerceller både brønn og dårlig differensierte adenokarsinomer ( Figur 4A). Kreftceller av signetring celletype (2 tilfeller) var negative for CD177. Blant 55 magekrefttilfeller, moderat til sterk ekspresjon av CD177 ble observert i 33 (60,0%) (tabell 4). Figur 4 Immunhistokjemi for CD177 i menneskelig avansert magekreft og korrelasjon med total overlevelsesrate. A: Immunhistokjemisk analyse av CD177 uttrykk i menneskelig magekreft vev. (A og b) Negativ farging (ingen til svak) for CD177 i et adenokarsinom i ventrikkel. CD177 uttrykk er til stede bare i den infiltrerende neutrofiler mens neoplastiske celler av godt differensiert (a) eller dårlig differensiert (b) carcinoma er negative. Original forstørrelse, × 100 (innfelt, × 400). (C og d) Merk positive (moderat til sterk) uttrykk for CD177 i godt differensiert (c) eller dårlig differensierte (d) mage kreftceller. Original forstørrelse, × 100 (innfelt, × 400). B:. Sammenligning av Kaplan-Meier kumulativ overlevelseskurver for CD177 negative og positive magekrefttilfeller
Tabell 4 CD177 uttrykk i mage karsinomer og dens korrelasjon med clinicopathological faktorer
Sak nr
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenokarsinomer
55
18
15
17
5
Alder
år (gjennomsnitt ± SD)
55,3 ± 10,4
60.2 ± 8.13
59.8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0,5039
Histologisk klassifikasjon
Vel /moderat differensiert type *
21
6
9
4
2
0,1904
Dårlig differensiert /Signet-ring celletype **
34
12
6
13
3
Dybde invasjon †
T1-3
27
5
10
10
2
0,2011
T4
26
11
5
7
3
Lymfe metastaser
N0
6
1 2
2
1 0,7869
N1-3
49
17
13
15
4 product: * Lauren intestinal type ** Lauren diffuse typen, † Saksnummer ble redusert til femtitre fordi dybden av invasjonen ikke ble klassifisert i to tilfeller, ‡ ANOVA og Chi-kvadrat test ble utført for alder og andre faktorer, henholdsvis.
oppfølgingsperioden av pasientene varierte fra 9 til 606 uker (median = 83 uker). Fem års overlevelse for CD177-positive og negative var 39,4% og 18,2%, henholdsvis. Fra Kaplan-Meier overlevelseskurve analyse, ble CD177-positive uttrykk forbundet med bedre total overlevelse (P
= 0,0294, log-rank test) (figur 4B). Det var ingen statistisk signifikant korrelasjon på CD177 uttrykk med alderen, histologisk klassifisering, dybden av invasjonen, og lymfeknutemetastase (tabell 4).
Multivariatanalyse for total overlevelse av menneskelige mage krefttilfeller
Bruke Cox modell , multivariat analyse av clinicopathological variabler, blant annet pasientens alder, tumor histologisk klassifisering, invasjon dybde, lymfeknutemetastase, og CD177 uttrykk (tabell 5), avslørte den siste til å være en faktor for total overlevelse (P
= 0,0323) . Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• Curcumin forbedrer uttrykk for SCF /c-kit gjennom demping oksidativt stress og NF-kB aktivering i mage vev av diabetiske gastroparese rotter
• Ernæring mangel øker risikoen for magekreft dødelighet