Экспрессия генов анализ Helicobacter Pylori-инфицированных и модель опухоли высокой соли диета лечение мыши желудка: выявление CD177 в качестве нового прогностического фактора у больных с желудочной cancer

экспрессии гена анализа Helicobacter Pylori
-infected и высокой соли диета лечение мыши желудка модель опухоли: определение CD177 как новый прогностический фактор у больных раком желудка
Аннотация
Справочная информация
хеликобактерной
(H. Pylori
) инфекция и чрезмерная соль впускном известны как важные факторы риска развития рака желудка у людей. Тем не менее, взаимодействие этих двух факторов с профилями экспрессии генов во время желудочного канцерогенеза остаются неясными. В настоящем исследовании мы исследовали глобальное экспрессию гена, связанного с канцерогенеза желудка и прогнозирования рака желудка человека с использованием модели мыши.
Методы
Для поиска генов-кандидатов, участвующих в желудке канцерогенеза, мы во-первых, была построена канцероген-индуцированное мышь желудочная модель опухоли в сочетании с хеликобактерной
инфекции и высокой солевой диеты. C57BL /6J мыши получали N
-метил-N
-nitrosourea в питьевой воде и умерщвляли через 40 недель. Животные в группе комбинированной терапии были привиты с хеликобактерной
и кормили с высоким содержанием соли. профили экспрессии генов в железистого желудка мышей исследовали с помощью олигонуклеотидного микрочипа. Во-вторых, мы осматривали наличие гена кандидата в качестве прогностического фактора для больных людей. Иммуногистохимический анализ CD177, один из повышающей регуляции генов, проводили в желудочном передовых образцов рака человека, чтобы оценить связь с прогнозом.
Результаты
Множественность желудочной опухоли в канцероген мышей, обработанных испытуемым была значительно увеличена путем комбинации антихеликобактерной
инфекции и высокой солевой диеты. При анализе микрочипов, 35 и 31 более чем в два раза вверх и вниз регулируется-регулируемых генов, соответственно, были обнаружены в хеликобактерной
-infection и высоким содержанием соли в сочетании группы по сравнению с другими группами. Количественный RT-PCR подтвердили значительное избыточная экспрессия двух генов-кандидатов, в том числе Cd177
и Reg3g
. На иммуногистохимического анализа CD177 в передовых образцов рака желудка человека, избыточная экспрессия была очевидна в 33 (60,0%) из 55 случаев, значительно коррелируют с благоприятным прогнозом (P = 0.0294
). Многофакторный анализ, включая клинико-патологическими факторами, как ковариаты выявлено высокий уровень экспрессии CD177 является независимым прогностическим фактором для общей выживаемости. Выводы

Эти результаты свидетельствуют о том, что наша модель мыши в сочетании с H. пилори инфекции
и высоким содержанием соли полезно для экспрессии гена профилированию в желудочном канцерогенезе, предоставляя доказательства того, что CD177 является новым прогностическим фактором рака желудка. Это первый отчет, показывающий корреляцию между прогностической экспрессии CD177 и твердого поведения опухоли.
Ключевые слова
Cd177 Рак желудка хеликобактер пилори
Microarray Соль фон
Рак желудка является четвертым наиболее распространенной формой рака и второй ведущей причиной от связанных с раком смерти во всем мире [1]. Helicobacter Pylori
(H. Pylori
) в настоящее время признается в качестве одного из основных факторов риска развития хронического гастрита и рака желудка [2]. Кроме того, экологические и принимающие факторы также было показано влияние желудочного канцерогенеза, и (хлорид натрия, NaCl) соли и соленой пищи имеют особое значение, на основе фактических данных из ряда эпидемиологических и экспериментальных исследований [3-6]. Таким образом, в сочетании воздействия хеликобактерной
инфекции и чрезмерное потребление соли, как представляется, очень важно для развития и прогрессирования опухолей желудка, хотя детальных механизмов, особенно с точки зрения профилей экспрессии генов, еще предстоит уточнить. <Бр> Высокая пропускная способность микрочипов технология обеспечивает мощный инструмент для комплексного анализа генов, уже применяется для оценки моделей экспрессии генов в обоих образцах человеческих и животных моделях заболеваний желудка [7-16]. Хотя многие исследователи сосредоточились на экспрессии генов в H. Pylori
-обработанной желудка клеточных линий [17-19], приводит к клеточной культуре не обязательно коррелирует с экспрессией специфических генов в естественных условиях
микросреды в отличая иммунным ответы и стромальных-эпителиального взаимодействия в раковых заболеваний. Канцерогена обработанных монгольских песчанок были использованы в качестве полезной модели животных антихеликобактерной
-associated желудка канцерогенез [20-24], и мы ранее сообщали, что синергетическое взаимодействие между H. инфекцией пилори
и высокой соли прием ускоряет хроническое воспаление и развитие опухоли в желудках этих животных [25, 26]. К сожалению, существует мало информации для песчанки генома, затрудняя генетический и молекулярный анализ. Поэтому внимание было сосредоточено на мышиных моделях [12, 13], а также создания мышиной модели рака желудка с участием соли и воздействие H. Pylori
необходим для исследований, ориентированных на гены, участвующие в желудочном канцерогенезе.
Предыдущие исследования микрочипов с использованием моделей грызун не различают и характеризуют профили экспрессии, основанные на взаимодействии H. Pylori
инфекции и потребление соли. В настоящем исследовании, мы исследовали экспрессию генов в слизистой оболочке желудка при аналогово H. Pylori
мыши модель желудка опухоли диета лечение -infected и высоким содержанием соли путем олигонуклеотидного микрочипа и нашел два кандидатов вверх-регулируемых генов, в том числе Cd177
и Reg3g
. Мы также исследовали экспрессию CD177 в человека передовых рака желудка с помощью иммуногистохимии, и полученные доказательства в качестве потенциального прогностического фактора для желудка канцерогенеза.
Методы
Прививка с хеликобактерной

хеликобактерной <бр> был получен таким же способом, как описано ранее [27, 28]. Кратко, Н. Pylori
(Сидней штамм 1) высевали на Brucella агаром (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, США), содержащим 7% (об /об) инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (FBS), и инкубировали при 37 ° С при условиях микроаэрофилии при высокой влажности в течение 2-х дней. Затем, бактерии, выращенные на пластинах были введены в Brucella бульон (Becton Dickinson) с добавлением 7% (об /об) FBS и инкубировали в тех же условиях в течение 24-ч. После 24-часового голодания, животные были интра в желудок засевают H. Pylori
(1,0 × 10 8 колониеобразующих единиц). Перед посевом бульон культуры H. Pylori
были проверены под фазово-контрастным микроскопом для бактериальной формы и подвижности.
Животных и экспериментальный протокол
Пятьдесят шесть конкретного патогена мужчина, 5- или 6 -недельный-старые C57BL /6J (Clea Japan, Токио, Япония) были использованы в данном исследовании. Все животные были помещены в пластиковые клетки на лиственные микросхеме постельных принадлежностей в кондиционируемом помещении с биологической 12 ч свет /12-часового темного цикла, а также свободный доступ к пище и воде на всей территории. Экспериментальный проект был одобрен Animal Care комитета научно-исследовательского института Айти онкологического центра по и животных заботятся в соответствии с ведомственным руководящим принципам, а также рекомендации по правильному проведению экспериментов на животных (Научного совета Японии, 1 июня 2006 года ).
экспериментальный дизайн показан на рисунке 1А. Мыши были разделены на 4 группы (группы A-D); 21, 5, 15, и 15 мышей были отнесены к группам A, B, C, и D, соответственно, в начале эксперимента. Животные групп B и D были привиты с хеликобактерной
внутри gastrically на-дополнительные недели (всего 7 раз), в то время как у мышей из других групп были привиты с Brucella бульон в одиночку. Все мыши получали N-метил-
N
-nitrosourea (НММ, Sigma Chemical, Сент-Луис, штат Миссури, США) в питьевой воде в концентрации 120 частей на миллион на дополнительные недели (общее воздействие было 5 недель) , Для этого НММ был свеже растворяли в дистиллированной воде три раза в неделю. Мыши из групп C и D получили CE-2 диеты (базальный содержание натрия 0,36%; Clea Japan), содержащей 10% NaCl. В течение периода экспозиции, одно животное из группы В, одной из групп С и шесть из группы D, умерли или стали умирающим, и они были исключены из эксперимента. Через 40 недель, оставшиеся животные были подвергнуты глубокой анестезии и лапаротомии с иссечением желудка. Рисунок 1 Экспериментальный дизайн и гистопатологические результаты. A: Экспериментальный дизайн. Пяти- до шести недельных самцов C57BL /6J были привиты с хеликобактерной
SS1 штамма (группы B и D) или Brucella бульон (группы А и С). У всех животных вводили 120 частей на миллион MNU в питьевой воде на дополнительные недели (общей экспозиции, 5 недель). Мыши из групп C и D получали основной рацион (СЕ-2), содержащего 10% NaCl. B: Гистопатологические для НММ-индуцированных мышей опухолей желудка. (А и б) Желудочный аденома в привратника областью НММ обработанной и H. Pylori
-infected мыши (группа В). (С и d) аденокарциномы желудка наблюдается в группе В. Обратите внимание на высокую плотность клеток и клеточного и структурного атипию. Bar = 200 (а и в) или 100 мкм (б, г).
Гистологической оценки Китай для гистологического исследования, желудки фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине в течение 24 ч, нарезанных вдоль продольной оси на полоски одинаковой ширины, и заливали в парафин. срезы толщиной четыре мкм были подготовлены и окрашивали гематоксилином и эозином (H &Amp; E) для гистологического наблюдения. Опухоли были классифицированы в аденомы и аденокарциномы основанный на клеточном и морфологической атипии и инвазивного роста до подслизистой, как мы уже сообщали ранее [21].
Приготовление РНК и олигонуклеотид, микрочипов анализа
Суммарную РНК экстрагировали из всей слизистой оболочки желудка, включая как опухоль и периферических тканей с использованием набора RNeasy Plus Mini (Qiagen, Hilden, Германия) и его качество проверено с системой микрочипов электрофореза (I-чип SV1210; Hitachi Chemical, Токио, Япония). высококачественные образцы были отобраны и объединены для каждой группы, чтобы избежать индивидуальные различия для оценки олигонуклеотид микрочипов (группа А, п = 3; B, N = 4, C, N = 6; D, п = 7). CodeLink Mouse полного генома Bioarray (Applied Microarrays, Темпе, штат Аризона, США), содержащий 35,587 наборы пробником на чип был использован для анализа профилей экспрессии генов. Гибридизация, обработка и сканирование были выполнены Filgen, Inc. (Нагоя, Япония), сканирования изображения данных анализируются с помощью программного пакета (Microarray Data Analysis Tool, Filgen). Полная-связь иерархической кластеризации также исследовали на четыре группы с использованием квалифицированного пробника подмножества (Filgen).
Количественные в режиме реального времени ОТ-ПЦР профилей экспрессии у мышей желудка
Относительный количественный реальном времени RT-PCR проводили с использованием системы StepOne ПЦР в реальном времени (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) с помощью мыши конкретных глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH
) гена в качестве внутреннего контроля. После обработки ДНКазой, первой цепи кДНК синтезировали из тотальной РНК с использованием набора SuperScript VILO синтеза кДНК (Invitrogen, Carlsbad, CA, США). ПЦР осуществляли в основном в соответствии с инструкциями изготовителя с использованием набора QuantiTect SYBR Green PCR (Qiagen). Последовательности праймеров для каждого гена, приведены в таблице 1. Специфичность ПЦР-реакций, была подтверждена с помощью программы кривой плавления, поставляемый с программным обеспечением StepOne и электрофореза образцов ПЦР в 3% -ном агарозном геле. Уровни экспрессии мРНК были нормированы на уровне мРНК GAPDH
и по сравнению с контрольными мышами (группа А) с помощью праймера последовательностей ΔΔCT method.Table 1 для относительной количественной в реальном времени RT-PCR
Gene <бр>
последовательностях

длина изделия

Присоединение нет.

GAPDH

5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177

5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g <бр>
5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13

5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы, Reg3g
регенерирующий островок производных белка 3 гамма, Muc13
муцина 13.
Пациенты и опухолевые образцы
в общей сложности 55 случаев первичного раком желудка, хирургически удаленных в Айти Cancer Center Hospital (Нагоя, Япония) в период между 1995 и 2002 годами, были исследованы после получения информированного согласия. Исследование было одобрено этическим комитетом Айти онкологического центра. Все пациенты были мужского пола, средний возраст и средний период наблюдения были 58,6 ± 10,2 лет и 83 недель, соответственно. Никто из них не получил предоперационной химиотерапии или лучевой терапии. Карциномы с прилегающей слизистой ткани фиксировали и заливали в парафин, и срезы для окрашивания H &Amp; E. Классификация постановки опухоли и диагностики сложных случаев были сделаны в соответствии с японской классификации желудочных карцином [29]. Раковые вторгся в Propria (мышечный T2 для классификации TNM), то subserosa (T3), или серозной и брюшную полость (T4a), иногда с участием соседних органов (T4b).
Иммуногистохимии с помощью желудочного ткань рака человека <бр> Мы исследовали экспрессию CD177, для которого коммерческое первичное антитело было доступно, в человеческих тканях желудка рака с помощью иммуногистохимии. После того, как ингибирование эндогенного пероксидазной активности путем погружения в 3% -ный раствор перекиси водорода, /метанол, извлечение антигена проводили с 10 мМ цитратного буфера (рН 6,0), в микроволновой печи в течение 10 мин при 98 ° С. Затем срезы инкубировали с мышиными моноклональными анти-CD177 антителом (клон 4C4, разведенной 1: 100, Abnova, Тайбэй, Тайвань). Окрашивание для CD177 проводили с использованием набора Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) и связывание визуализировали с 0,05% 3,3'-диаминобензидина. Результаты CD177 иммунным окрашиванием в опухолевые клетки были разделены на четыре градуса; класс 0 (нет, 0-10% положительных клеток), сорт 1 (слабый, 10-30%), 2-й степени (умеренное, на 30-60%), и 3-й степени (сильный, более 60%) на основании доли окрашенных клеток, а также случаи, показывающие умеренной до сильной окраски рассматривались как положительные.
Статистический анализ
тест хи-квадрат с коррекцией Бонферрони была использована для оценки числа случаев желудка опухоли. Количественные значения, включая множественность опухоли и относительной экспрессии мРНК были представлены в виде среднее значение ± SD или SE, и различия между средствами статистически анализировали с помощью ANOVA или теста Крускала-Уоллиса с последующим испытанием Тьюки для множественных сравнений. Общая выживаемость оценивали с помощью метода Каплана-Мейера и тест лог-рангового для сравнения. Корреляция между экспрессией CD177 и клинико-патологическими факторами были проанализированы с помощью дисперсионного анализа или критерий хи-квадрат. Многофакторный анализ был проведен для изучения сверхэкспрессии ли CD177 был независимым прогностическим фактором с использованием пропорционального риска регрессионной модели Кокса. P
значения &ЛТ; 0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
Падения и множественность опухолей желудка
Эффективное число мышей и наблюдаемых числа случаев и кратностей опухолей желудка приведены в таблице 2. Опухоли, разработанные в слизистой оболочке желудка всех НММ обработанных групп (группы AD) (Рисунок 1В). В странах с высоким содержанием соли обработанных групп (группы C и D), частота желудочной опухоли в группе D (H. Pylori
-infected; 100%) была значительно выше, чем в группе С (неинфицированных; 50,0 %) (Р &
л; 0,05). В основной рацион групп (группы А и В), заболеваемость также была увеличена на хеликобактерной
-infection (группа А, 61,9% и группы В, 100%), хотя и без статистической значимости. Кратности общих опухолей в обоих H. Pylori
-infected групп (группа В, 3,3 ± 1,0 опухоли /мышь и Группа D, 2,6 ± 1,1) были заметно выше, чем в неинфицированных групп (группа А, 0,9 ± 0,8 и группы C, 1,0 ± 1,2) (P &
л; 0,05). Множественность аденокарциномы желудка в группе D (2,1 ± 1,4) была несколько выше, чем в группе В (1,8 ± 1,0) и значительно увеличилась по сравнению со значением группы С (0,8 ± 1,0) (P &
л; 0,05). В отличие от этого, кратности аденом в группах А и D (0,1 ± 0,4 и 0,4 ± 0,5, соответственно), были значительно ниже, чем в группе В (1,5 ± 0,6) (P &
л; 0,05 и 0,01) .table 2 Заболеваемость и множественность опухолей желудка в НММ-обработанных мышей
Группы

Эффективное число

Treatment

заболеваемость (%) завод
кратностью (нет. из опухоль /мышь)

Аденома

карцинома

Total опухоль

Аденома

карцинома

Общая опухоль <бр>
управлением
21
МНУ
3 (14,3)
13 (61,9) 13
(61,9) 0,1 ±
0.4A
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
B 4
МНУ + H. Pylori

4 (100) б
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0 3,3 ±
1.0c
C
14
МНУ + 10% NaCl
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6 0,8 ±
1,0
1,0 ± 1,2
D
9
МНУ + H. Pylori
+ 10% NaCl
4 (44,4) <бр> 8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2,1 ± 1.4D
2,6 ± 1.1d
значения для кратности выражены как среднее значение ± SD. Падения, как правило, оценивали критерий хи-квадрат, а затем путем парного анализа с коррекцией Бонферрони. Кратность, как правило, анализируют с помощью ANOVA, с последующим испытанием Тьюки для множественного сравнения. аР
&л; 0,01 по сравнению с
Группа B, Б.П.
&л; 0,01 по сравнению с
Группа A, сП
&л; 0,05 по сравнению с
Группа A, Д.П.
&л; 0,05 по сравнению с
Группа C, Э.П.
&л; 0,05 по сравнению с
группы В.
экспрессии генов профилирование в железистых желудков олигонуклеотид микрочипов с услугой олигонуклеотидных микрочипов, по сравнению с неинфицированных и базальных диеты обработанной группы (группа а), 34 генов были повышающей регуляции и 169 были вниз регулируется более чем в два раза в H. Pylori
-infected мышей (группа B), 56 до регулируемых и 129 вниз -regulated в высокой соли диета обработанных мышей (группа с), и 69 повышающей регуляции и 214 вниз регулируется в группе, получавшей комбинированную (группа D) (рис 2А). Взятые вместе, как показано в таблице 3, мы обнаружили, что 35 генов были повышающей регуляции и 31 генов подавляется более чем в два раза только за счет комбинации H. инфекции пилори
и высоким содержанием соли. Кроме того, иерархический кластерный анализ проводили на четырех группах в общей сложности 303 квалифицированных зондов с использованием алгоритма кластеризации полного сшивани (рисунок 3). Тридцать один зонды включая Cd177
, Reg3g
и Muc13
были подтверждены в пределах кластера зондов вверх регулируется только в группе D. Последующий анализ в данном исследовании было сосредоточено на этих генах, потому что считалось, что гены, в которых экспрессия была изменена только в объединенной группе может быть связано с желудочным канцерогенеза и прогрессии в организме человека. Рисунок 2 Глобальный анализ генов в железистого желудка МНУ-обработанных мышей с использованием олигонуклеотидных микрочипов. A: Количество генов вверх или вниз регулируется более чем в два раза в желудке МНУ-обработанных мышей. На диаграмме Венна, круги указывают вверх (влево) или вниз регулируется (справа) генов в желудке МНУ-обработанных мышей с H. пилори инфекции
, с высоким содержанием соли или их комбинации. Заштрихованная область представляет вверх или вниз регулируемых генов более чем в два раза только за счет комбинации. B: Количественные в режиме реального времени RT-PCR анализ трех выбранных вверх-регулируемых генов (Cd177
, Reg3g
и Muc13
) в желудках МНУ-обработанных мышей. Уровни экспрессии генов в каждом образце нормализовали по GAPDH
в качестве внутреннего контроля с использованием метода ΔΔCT. Относительные уровни экспрессии были представлены как изменение относительно X-кратном к группе А (фиксированный, как 1,0). Статистический анализ проводили с помощью теста Крускала-Уоллиса для общего анализа и теста Тьюки для множественного сравнения. Бары, SE; *, P &
л; 0,01 по сравнению с
Группа А и &л; 0,05 по сравнению с
Группа C; †, P
&л; 0,01 по сравнению с
группы С.
Таблица 3 регулируемых генов путем сочетания инфекции H. пилори и высоким содержанием соли в слизистой оболочке желудка мыши
Присоединение нет.

Symbol
<бр> гены /белки

Fold изменения

Up-регулируемые гены

XM_357640
ИГК-V8
Иммуноглобулин каппа переменная цепь 8 (V8)
14.4
XM_001472541
Ighg
Иммуноглобулин тяжелой цепи (гамма-полипептид)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 антиген
7.3
NM_011260
Reg3g
Восстанавливающий островок производных 3 гамма
6.1
NM_023137
UBD
Ubiquitin D
4.3
XM_144817
ИГК-V34
Иммуноглобулин каппа-цепи переменной 34 (V34) <бр> 4.1
NM_007675
Ceacam10
карциноэмбриональный антиген связанных молекулы клеточной адгезии 10
3,7
NM_183322
Khdc1a
KH область, содержащая 1A
3.3
NM_011475 <бр> Sprr2i
Малый пролина богатых белком 2I
3.2
NM_175165
Tprg
Трансформация белок, связанный с 63 регулируемую
3.2
NM_175406
Atp6v0d2
АТФазы, H + транспортирование , лизосомальная V0 субъединица D2
3,0
NM_009703
Араф
v-Raf мышиный саркома 3611 вирусный онкоген гомолога
2.6
NM_026822
Lce1b
Поздний ороговевший 1B <бр> 2,5
NM_016958
Krt14
кератина 14
2.5
NM_212487
Krt78
кератина 78
2,4
NM_009807
Casp1
каспазы 1
2,4
NM_146037
Kcnk13
калиевых каналов, подсемейство K, член 13
2,4
NM_019450
Il1f6
интерлейкин 1, член 6
2,3
NM_008827
PGF
плацентарного фактора роста
2.3
XM_893506
Klk12
калликреин-пептидазы связанных 12
2,3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7 <бр> 2,3
NM_029360
Tm4sf5
трансмембранного 4 член суперсемейства 5
2,2
NM_172301
Ccnb1
циклин В1
2,2
NM_010739
Muc13
муцин 13, эпителиальные трансмембранный
2.2
NM_011165
Prl4a1
пролактин семьи 4, подсемейства а, член 1
2,2
NM_010162
ext1
экзостозы (несколько) 1
2,2
NM_011704
Vnn1
Ванин 1
2.1
NM_011082
Pigr
рецептора полимерного иммуноглобулина
2.1
NM_007769
Dmbt1
удалён в злокачественных опухолях головного мозга 1
2.1
NM_022984
RETN
резистин
2.1
NM_173037
Tmco 7
трансмембранного и биспиральных домена 7
2.1 <бр> NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
циклин В2
2.1
NM_001081060
Slc9a3
семьи Растворенный водило 9 (натрий /водород теплообменник), элемент 3
2,0
NM_146588
Olfr1030
обонятельный рецептор 1030
2,0
понижающей регуляции генов

NM_008753
Oaz1
орнитиндекарбоксилазной antizyme 1
0,31
NM_027126
Hfe2
тип Hemochromatosis 2 (ювенильный) (человеческий гомолог)
0,33
NM_053206
Magee2
Меланома антиген, семейство E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
никотинамид N-метилтрансферазы
0,41
NM_026260
Tctn3
Тектонические член семьи 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0,43
NM_008312
Htr2c
5-гидрокситриптамина (серотонина) рецептора 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
обонятельный рецептор 740
0,44
NM_007550
BLM
Блум синдром гомолог (человек)
0,44
NM_011243
рарб
рецептор ретиноевой кислоты, бета
0,44
NM_184052
IGF1 <бр> инсулиноподобный фактор роста 1
0,45
NM_013893
Reg3d
регенерирующим островковых происхождения 3 Дельта
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0,46
NM_029550
Keg1
почки выразил ген 1
0,46
NM_019388
CD86
CD86 антигена
0,46
NM_011316
Saa4
сывороточный амилоид A 4
0,47
NM_007811
cyp26a1
цитохрома Р450, семья 26, подсемейства а, полипептид 1
0,47
NM_011538
Tbx6
T-бокс 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
фосфатидилинозитол-3-фосфат /фосфатидилинозитол 5-киназа, тип III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, цитоскелета ассоциированный белок
0,48
NM_007858
DIAP1
Diaphanous гомолог 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
Регулирующий экзоцитоза синаптических мембран 2
0,48 <бр> NM_153163
Cadps2
Са2 + -зависимая активатор белка для секреции 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Кость гамма карбоксиглутамат белка 1
0,49
NM_031871
Ghdc
домен GH3, содержащий
0,49
NM_025545
APTX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
рецепторов ангиотензина II, типа 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
Ubiquitin-ассоциированный белок 2
0,49
NM_028045
Erv3
эндогенного ретровирусного 3
0,49
NM_011641
Trp63
Трансформация белок, связанный с 63
0,49
Рисунок 3 Иерархический кластерный анализ четырех экспериментальных групп МНУ-обработанных мышей. Экспрессия данные из 303 квалифицированных зондов (слева). Четыре экспериментальные группы были разделены на две группы (группы А /С) и (группы B /D) на основе сходства паттернов экспрессии. Каждая строка представляет собой зонд, а каждый столбец представляет собой экспериментальную группу (группы A-D). Как показано на цветной полосе, зеленый указывает на регулирование; красный цвет указывает вниз регулирования; и черный не означает отсутствие изменений. Тридцать один зонды представляют собой скопление зондов до регулируемого только в группе D (справа).
Целые результаты этого анализа микрочипов были представлены и легко извлекаемый из базы данных NCBI общественности экспрессии генов Омнибус (ГСО) с инвентарный номер GSE29444 (номер образца: GSM728857-60).
количественные в режиме реального времени RT-PCR анализ профилей экспрессии генов в НММ-обработанных желудков мышь,
Относительное количественное в режиме реального времени RT-PCR анализ трех выбранных вверх регулируемых генов (Cd177
, Reg3g
и Muc13
) в H. Pylori
-infected и высоким содержанием соли обработанных мышей подтвердили повышенную экспрессию Cd177
и Reg3g
, как показано на фигуре 2В, со значительными различиями. Хотя уровень экспрессии Muc13
в группе D была выше, чем во всех других группах, не было никакой статистической значимости среди них (P
= 0,0712 против
Группа C).
Иммуногистохимического выражение CD177 в человеке передовые рака желудка и корреляция с клинико-патологическими факторами
на иммуногистохимического анализа желудочного раковых тканей человека, CD177 наблюдали не только в мембранах и цитоплазме из проникших нейтрофилов, но и в желудочном раковых клетках обоих хорошо и слабо дифференцированной аденокарциномы ( Рисунок 4A). Раковые клетки типа печатка кольцо клетки (2 случая) были отрицательными для CD177. Среди 55 случаев рака желудка, от умеренной до сильной экспрессии CD177 наблюдалась у 33 (60,0%) (таблица 4). Рисунок 4 иммуногистохимии для CD177 в человеческом раком желудка и корреляции с общей выживаемости. A: иммуногистохимический анализ экспрессии CD177 в желудочном раковой ткани человека. (А и б) Отрицательное окрашивание (не имеет к слабым) для CD177 в аденокарциномы желудка. выражение CD177 присутствует только в инфильтрации нейтрофилов в то время как опухолевые клетки хорошо дифференцированной (а) или слабо дифференцированной (б) карциномы являются отрицательными. Оригинальное увеличение, × 100 (вставка, × 400). (В, г) Примечание положительный (от умеренной до сильной) выражение для CD177 в хорошо дифференцированной (с) или слабо дифференцированной (г) клеток рака желудка. Оригинальное увеличение, × 100 (вставка, × 400). B:. Сравнение кривых выживаемости кумулятивная Каплана-Мейера для CD177 отрицательных и положительных случаев рака желудка
Таблица 4 CD177 выражение в желудочных карцином и его взаимосвязь с клинико-патологическими факторами

Дело не

. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric аденокарциномы
55
18
15
17 страница 5 Age
лет (средние значения ± SD) 55,3 ±
10,4
60,2 ± 8,13 59,8
± 11,0
60,4 ± 13,0
0.5039
гистологической классификации
Well /умеренно дифференцированной типа
* 21
6
9 4
2
0,1904
слабо дифференцированной /перстень тип клеток **
34
12
6
13 страница 3 Глубина вторжения †
T1-3 <бр> 27 страница 5 из 10
10 страница 2 0.2011
T4
26
11 страница 5 из 7 страница 3 Лимфы узел метастаз

6 N0
1 страница 2 страница 2 1
0,7869
N1-3
49
17
13 <бр> 15 4
* кишечная тип Лорена, ** тип диффузного Лорен, число † Случай был сокращен до пятидесяти трех, потому что глубина инвазии не была классифицирована в двух случаях, ‡ ANOVA и хи-квадрат были выполнены возраста и других факторов, соответственно.
период наблюдения пациентов колебался от 9 до 606 недель (медиана = 83 недель). Пять-летняя выживаемость для CD177-положительные и отрицательные были 39,4% и 18,2%, соответственно. Из анализа кривых выживаемости Каплана-Мейера, CD177-позитивных выражение было связано с улучшением общей выживаемости (P = 0.0294
, лог-ранговый тест) (Рисунок 4B). Там не было выявлено статистически значимой корреляции экспрессии CD177 с возрастом, гистологической классификации, глубина вторжения и метастазов в лимфатических узлах (таблица 4).
Многомерный анализ общей выживаемости желудка случаев рака человека
Использование модели пропорциональных рисков Кокса , многомерный анализ клинико-патологическими переменных, включая возраст пациента, опухоли гистологической классификации, глубина вторжения, метастазов в лимфатических узлах, и экспрессии CD177 (таблица 5), показало последнее является независимым фактором для общей выживаемости (P = 0,0323
) , Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

• Куркумин улучшает экспрессию SCF /C-набора через ослабляя окислительный стресс и активацию NF-кВ в желудочных тк…
• Дефицит питания увеличивает риск смертности от рака желудка