análise de uma Helicobacter pylori infectadas e modelo de tumor de alta sal tratados com dieta rato gástrica expressão gênica: identificação de CD177 como um novo fator de prognóstico em pacientes com cancer

gástrica análise de uma Helicobacter pylori expressão do gene
infectado e alto-sal modelo de tumor tratados com dieta rato gástrica: identificação de CD177 como um novo fator de prognóstico em pacientes com câncer gástrico da arte abstracta
Fundo
Helicobacter pylori
(pylori
H.) infecção e sal excessiva ingestão são conhecidos como importantes fatores de risco para o câncer de estômago em humanos. No entanto, as interações desses dois fatores com perfis de expressão gênica durante a carcinogênese gástrica permanecem obscuros. No presente estudo, foi investigada a expressão gênica global associada a carcinogênese do estômago e prognóstico do cancro gástrico humano, utilizando um modelo de rato.
Métodos
Para encontrar genes candidatos envolvidos na carcinogênese do estômago, que, em primeiro lugar construído um rato induzida por substância cancerígena modelo de tumor gástrico combinado com H. pylori
infecção e dieta rica em sal. C57BL /6J foram dadas N-metil-N

-nitrosourea na água potável e sacrificados após 40 semanas. Os animais de um grupo de combinação foram inoculadas com H. pylori
e alimentados com uma dieta de alto teor salino. perfis de expressão de gene em estômago glandular de ratos foram investigados por microarranjo oligonucleótido. Em segundo lugar, examinamos a disponibilidade do gene candidato como o factor de prognóstico para pacientes humanos. A análise imuno-histoquímica de CD177, um dos genes regulados positivamente, foi realizada em amostras de cancro gástrico avançado humanos para avaliar a associação com o prognóstico.
Resultado
A multiplicidade de tumor gástrico em ratos tratados com substância cancerígena foi significativamente aumentada pela combinação de H. pylori
infecção e dieta rica em sal. Na análise de microarray, 35 e 31 mais de duas vezes supra-regulados e regulados negativamente genes, respectivamente, foram detectados na pylori
-infecção e de alto teor salino grupo de dieta combinada H. comparação com os outros grupos. RT-PCR quantitativo confirmou significativa sobre-expressão de dois genes candidatos, incluindo Cd177 Comprar e Reg3g
. Na análise imunohistoquímica de CD177 em amostras de cancro gástrico avançado humanos, a sobre-expressão foi evidente em 33 (60,0%) de 55 casos, significativamente correlacionando-se com um prognóstico favorável (P
= 0,0294). A análise multivariada incluindo fatores clínico-patológicos como co-variáveis ​​reveladas alta expressão de CD177 ser um fator prognóstico independente para sobrevida global.
Conclusões
Estes resultados sugerem que o nosso modelo de rato combinada com infecção por H. pylori Comprar e dieta rica em sal é útil para perfil de expressão gênica na carcinogênese gástrica, fornecendo evidências de que CD177 é um romance fator prognóstico para câncer de estômago. Este é o primeiro relatório que mostra uma correlação prognóstica entre a expressão de CD177 e comportamento do tumor sólido. Câncer
Palavras-chave
Cd177 gástrica Helicobacter pylori
Microarray Sal fundo
O câncer de estômago é o quarto tipo de câncer mais comum e segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) é hoje reconhecida como um importante fator de risco para o desenvolvimento de gastrite crônica e câncer de estômago [2]. Além disso, os factores ambientais e de acolhimento também têm sido mostrados para influenciar a carcinogénese gástrico, e (cloreto de sódio, NaCl) e sal de alimentos salgados são de particular importância, baseado em evidências a partir de um número de estudos epidemiológicos e experimentais [3-6]. Assim, a exposição combinada a infecção por H. pylori
e ingestão excessiva de sal parece ser muito importante para o desenvolvimento e progressão de tumores gástricos, embora os mecanismos detalhados, especialmente em termos de perfis de expressão de genes, devem ser esclarecidas.
tecnologia de alta capacidade microarray fornece uma ferramenta poderosa para a análise genética abrangente, já aplicada para avaliar padrões de expressão gênica em ambas as amostras humanas e modelos animais de distúrbios gástricos [7-16]. Embora muitos pesquisadores têm-se centrado sobre a expressão gênica em H. pylori
linhas de células gástricas tenha sido tratada com [17-19], resulta em cultura de células não necessariamente se correlacionam com a expressão de genes específicos no in vivo
microambiente que caracterizam imune do hospedeiro respostas e interações do estroma-epiteliais em cancros. gerbilos da Mongólia tratada por carcinogénico têm sido usados ​​como um modelo animal útil de H. pylori
-associated carcinogénese gástrica [20-24], e que relataram anteriormente que uma interacção sinérgica entre a infecção por H. pylori
e de alto teor salino ingestão acelera inflamação crônica e desenvolvimento do tumor no estômago destes animais [25, 26]. Infelizmente, há pouca informação disponível para o genoma gerbil, dificultando a análise genética e molecular. Portanto, a atenção centrou-se em modelos de ratos [12, 13], e estabelecimento de um modelo de rato para câncer de estômago sal com e H. pylori
exposição é necessária para as investigações dirigidas genes envolvidos na carcinogênese gástrica.
Estudos de microarranjos anteriores usando modelos de roedores não distinguir e caracterizar os perfis de expressão baseado na interação de H. pylori
infecção e ingestão de sal. No presente estudo, examinamos a expressão do gene na mucosa gástrica em um H. pylori
modelo de tumor infectado e alto-sal tratados com dieta rato gástrica por microarray oligonucleotídeo e encontrou dois candidatos-regulada genes incluindo Cd177
e Reg3g
. Também foi investigada a expressão de CD177 em cânceres gástrico avançado humanos por imuno-histoquímica, e obteve provas como um potencial fator prognóstico para a carcinogênese de estômago.
Métodos
inoculação com H. pylori
H. pylori
foi preparado pelo mesmo método como descrito anteriormente [27, 28]. Resumidamente, o H. pylori
(Sydney estirpe 1) foi inoculada em placas de agar de Brucella (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, EUA) contendo 7% (v /v) de soro fetal de bovino inactivado pelo calor (FBS) e incubado a 37 ° C sob condições de microaerofilia em alta umidade durante 2 dias. Em seguida, as bactérias crescidas nas placas foram introduzidos em caldo Brucella (Becton Dickinson) suplementado com 7% (v /v) de FBS e incubadas sob as mesmas condições durante 24 h. Após 24 h de jejum, os animais foram inoculados intra-gastricamente H. pylori
(1,0 × 10 8 unidades formadoras de colónias). Antes da inoculação, as culturas de caldo de H. pylori
foram verificados sob um microscópio de contraste de fase para a forma bacteriana e mobilidade.
Animais e protocolo experimental
Cinquenta e seis do sexo masculino livre de patógenos específicos, 5 ou 6 -week de idade C57BL /6J (CLEA Japan, Tóquio, Japão) foram utilizados neste estudo. Todos os animais foram alojados em gaiolas de plástico na cama de madeira-chip em um quarto de risco biológico climatizado com um ciclo de luz escuro de 12 h /12 h, e permitiu o livre acesso a comida e água por toda parte. O delineamento experimental foi aprovado pelo Comitê de Cuidados Animal do Instituto de Pesquisa Aichi Cancer Center, e os animais foram tratados de acordo com as diretrizes institucionais, bem como as Diretrizes para a condução adequada de Experimentação Animal (Conselho de Ciência do Japão, 01 de junho de 2006 ).
O desenho experimental está ilustrada na Figura 1A. Os ratos foram divididos em 4 grupos (Grupos A-D); 21, 5, 15, e 15 os ratinhos foram atribuídos aos grupos A, B, C, e D, respectivamente, no início da experiência. Animais dos grupos B e D foram inoculadas com H. pylori
intra-gastricamente em semanas alternadas (total de 7 vezes), enquanto que os ratinhos de outros grupos foram inoculados com caldo de Brucella sozinho. Todos os ratinhos receberam
N-metil-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St. Louis, MO, EUA) na sua água potável na concentração de 120 ppm em semanas alternadas (exposição total foi de 5 semanas) . Para este efeito MNU foi dissolvido de fresco em água destilada, três vezes por semana. Os ratos dos Grupos C e D receberam as dietas CE-2 (teor de sódio basal de 0,36%; CLEA Japan) contendo NaCl a 10%. Durante o período de exposição, um animal do grupo B, um dos grupos C e seis do Grupo D morreram ou ficaram moribundas e foram excluídos da experiência. Com 40 semanas, os animais permaneceram foram submetidos a uma anestesia profunda e laparotomia com excisão do estômago. Figura 1 Delineamento experimental e histopatológicos. A: O delineamento experimental. De cinco a seis semanas de idade, machos C57BL /6J foram inoculadas com H. pylori
SS1 estirpe (Grupos B e D) ou caldo de Brucella (Grupos A e C). Todos os animais foram administrados 120 ppm MNU na água potável em semanas alternadas (exposição total, 5 semanas). Os ratos dos Grupos C e D receberam dieta basal (CE-2) contendo NaCl a 10%. B: resultados histopatológicos para tumores gástricos ratos induzida por MNU. (A e b) adenoma gástrico na região pilórica de uma H. ​​pylori
rato tratado com MNU e infectado (Grupo B). (C e d) o adenocarcinoma gástrico observado no Grupo B. Note-se a densidade celular elevada e atipia celular e estrutural. Bar = 200 (A e C) ou 100 m (b e d).
Histológica
avaliação para exame histológico, os estômagos foram fixados em formalina a 10% neutra tamponada para 24 h, cortada ao longo do eixo longitudinal em tiras de largura igual, e embebido em parafina. Quatro mícrons de espessura foram preparadas e coradas com hematoxilina e eosina (H & E) para observação histológica. Os tumores foram classificados em adenoma e adenocarcinoma baseado em atipia celular e morfologia e crescimento invasivo de submucosa como relatado anteriormente [21].
Preparação de RNA e análise de microarray oligonucleótido
O ARN total foi extraído a partir de toda a mucosa gástrica, incluindo tanto tumores e tecidos periféricos utilizando um RNeasy Mini Kit Além disso (Qiagen, Hilden, Alemanha) e a sua qualidade verificada com um sistema de electroforese em microchip (I-chip SV1210; Hitachi Chemical, Tóquio, Japão). amostras de alta qualidade foram seleccionadas, e reunidas para cada grupo para evitar diferença individual para avaliação oligonucleótido de microarray (Grupo A, n = 3; B, n = 4; C, n = 6; D, n = 7). O CodeLink mouse Whole Genome Bioarray (Microarrays Aplicadas, Tempe, AZ, EUA) contendo 35,587 conjuntos de sondas por chip foi usado para analisar os perfis de expressão gênica. Hibridação, processamento e varredura foram realizadas por Filgen, Inc. (Nagoya, Japão), imagens de dados de digitalização que está sendo analisado usando um pacote de software (Ferramenta de análise de dados de microarranjos, Filgen). Completa-ligação agrupamento hierárquico também foi examinada com as quatro grupos utilizando uma sonda subconjunto qualificado (Filgen).
Quantitativo em tempo real de RT-PCR do perfil de expressão em ratinhos estômago
Relativa quantitativo em tempo real de RT-PCR foi realizada usando um sistema em tempo real StepOne PCR (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) com o desidrogenase-ratinho específico de gliceraldeído-3-fosfato (GAPDH
) gene como um controlo interno. Após tratamento com DNase, ADNc de primeira cadeia foram sintetizados a partir de ARN total utilizando um kit de síntese de ADNc SuperScript VILO (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA). A PCR foi realizada essencialmente seguindo as instruções do fabricante utilizando um kit de QuantiTect SYBR Green PCR (Qiagen). As sequências dos iniciadores para cada gene estão listados na Tabela 1. Especificidade das reacções de PCR foi confirmada utilizando um programa de curva de fusão fornecido com o software StepOne e electroforese das amostras de PCR em géis de agarose a 3%. Os níveis de expressão de mRNAs foram normalizados para o nível de ARNm de GAPDH
e comparados com os ratos de controlo (Grupo A) por as sequências de iniciadores para ΔΔCT method.Table 1 quantitativo em tempo real de RT-PCR em relação
Gene

Sequências
comprimento do produto
Adesão não.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
da desidrogenase do gliceraldeído-3-fosfato, Reg3g
regenerar derivado de proteína 3 ilhota gama, Muc13
mucina 13.
pacientes e amostras tumorais
Um total de 55 casos de cancro gástrico avançado primária, cirurgicamente ressecados em Aichi cancer Center Hospital (Nagoya, Japão) entre 1995 e 2002, foram investigados após a obtenção do consentimento informado. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética de Aichi Cancer Center. Os pacientes eram todos do sexo masculino ea idade média e mediana de seguimento foram 58,6 ± 10,2 anos e 83 semanas, respectivamente. Nenhum tinha recebido quimioterapia pré-operatória ou radioterapia. Os carcinomas com tecido de mucosa adjacente foram fixadas e incluídas em parafina, seccionado e para coloração com H & E. Classificação de estadiamento do tumor e diagnóstico de casos avançados foram feitas de acordo com a classificação japonesa de gástrico carcinomas [29]. Os cânceres tinham invadido a muscular própria (T2 para a classificação TNM), o subserosa (T3), ou serosa e na cavidade peritoneal (T4a), às vezes envolvendo órgãos adjacentes (T4B).
Imuno-histoquímica usando tecido de cancro gástrico humano
Foram examinados expressão de CD177, para o qual um anticorpo primário comercial estava disponível, em tecidos de câncer gástrico humano por imuno-histoquímica. Depois de inibição da actividade da peroxidase endógena por imersão numa solução de peróxido de hidrogénio /metanol a 3%, a recuperação de antigénio foi efectuada com tampão de citrato 10 mM (pH 6,0) em um forno de microondas durante 10 min a 98 ° C. Em seguida, as secções foram incubadas com um anticorpo anti-CD177 de rato monoclonal (clone 4C4, diluído a 1: 100, Abnova, Taipei, Taiwan). A coloração para CD177 foi realizada utilizando um Kit Vectastain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA) e ligação visualizada com 0,05% de 3,3'-diaminobenzidina. Os resultados de imunocoloração de CD177 nas células neoplásicas foram classificados em quatro graus; grau 0 (nenhum, 0-10% de células positivas), no grau 1 (fraco, 10-30%), grau 2 (moderada, 30-60%), e o grau 3 (forte, mais de 60%) com base na proporção de de células marcadas, e os casos que mostram moderada a forte coloração foram considerados positivos.
análise estatística
O teste do qui-quadrado com correção de Bonferroni foi utilizado para avaliar a incidência de tumor gástrico. valores quantitativos, incluindo multiplicidade de tumor e de expressão relativa de mRNA foram representados como médias ± SD ou SE, e as diferenças entre as médias foram analisados ​​estatisticamente pelo ANOVA ou o teste de Kruskal-Wallis seguido pelo teste de Tukey para comparações múltiplas. A sobrevida global foi estimada pelo método de Kaplan-Meier eo teste de log-rank para comparações. As correlações entre a expressão CD177 e fatores clínico-patológicos foram analisados ​​por ANOVA ou o teste do qui-quadrado. A análise multivariada foi realizada para examinar se CD177 sobre-expressão foi um fator prognóstico independente, utilizando o modelo de regressão de riscos proporcionais de Cox. Os valores de P <
; 0,05 foram considerados como sendo estatisticamente significativo. Resultados

Incidências e as multiplicidades de tumores gástricos
O número efectivo dos ratinhos e as incidências e as multiplicidades de tumores gástricos observados estão resumidos na Tabela 2. Os tumores desenvolvidos na mucosa gástrica de todos os grupos tratados com MNU (grupos A a D) (Figura 1B). Nos grupos tratados com dieta rica em sal (Grupos C e D), a incidência de tumor gástrico no Grupo D (H. pylori
infectado; 100%) foi significativamente maior do que no Grupo C (não-infectados; 50,0 %) (P
< 0,05). Em grupos de dieta basal (Grupos A e B), a incidência também foi aumentada por H. pylori
-infecção (Grupo A, 61,9% e o grupo B, 100%), ainda que sem significância estatística. As multiplicidades de tumores totais em ambos os H. pylori
grupos infectados (Grupo B, 3,3 ± 1,0 tumores /mouse e Grupo D, 2,6 ± 1,1) foram significativamente maiores do que aqueles em grupos não-infectados (grupo A, 0,9 ± 0,8 e o Grupo C, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). A multiplicidade de adenocarcinoma gástrico do Grupo D (2,1 ± 1,4) era ligeiramente mais elevado do que no grupo B (1,8 ± 1,0) e aumentou significativamente em relação ao valor do Grupo C (0,8 ± 1,0) (P
< 0,05). Em contraste, as multiplicidades de adenomas nos Grupos A e D (0,1 ± 0,4 e 0,4 ± 0,5, respectivamente) foram significativamente menores do que no Grupo B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 e 0,01) .table 2 Incidência e multiplicidade de tumores gástricos em número
eficaz ratos tratados com MNU
Grupo
Tratamento
Incidência (%)
multiplicidade (no. de tumor /mouse)
Adenoma
Carcinoma
tumor total
Adenoma
Carcinoma
tumor total

A
21
MNU Sims 3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0.4A
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
b 4
MNU + H. pylori
4 (100) b página 4 (100) página 4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0
3,3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% NaCl
2 (14,3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0
1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% NaCl
4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2,1 ± 1.4d
2,6 ± 1.1d
Valores para a multiplicidade são expressos em média ± SD. Incidências eram geralmente avaliada pelo teste do qui-quadrado, seguido de análise de pares com correção de Bonferroni. Multiplicidades foram geralmente analisados ​​por ANOVA, seguido pelo teste de Tukey para comparações múltiplas. aP Art < 0,01 vs.
Grupo B, a BP Art < 0,01 vs.
Grupo A, cP Art < 0,05 vs.
Grupo A, DP Art < 0,05 vs.
Grupo C, EP Art < 0,05 vs.
Grupo B.
perfil de expressão gênica nos estômagos glandulares por oligonucleotídeo microarray
Com microarrays de oligonucleotídeos, em comparação com os não-infectados e grupo tratado com dieta basal (grupo a), 34 genes foram regulados positivamente e 169 foram regulados negativamente mais de duas vezes em H. pylori
ratos infectado (grupo B), 56-regulada e 129 para baixo -regulated em ratinhos tratados com dieta rica em sal (grupo C), e 69-regulada e 214 sub-regulada no grupo combinado (grupo D) (Figura 2A). Tomados em conjunto, como mostrado na Tabela 3, verificou-se que 35 genes foram supra-regulados e 31 genes foram regulados negativamente mais do que duas vezes apenas pela combinação da infecção por H. pylori e
dieta de alto teor salino. Além disso, a análise de agrupamento hierárquico foi realizada em quatro grupos com um total de 303 sondas qualificados, usando o algoritmo de agrupamento completa-ligação (Figura 3). Trinta e um sondas incluindo Cd177
, Reg3g Comprar e Muc13
foram confirmados para estar dentro de um conjunto de sondas-regulada apenas em Análise subsequente Grupo D. no presente estudo incidiu sobre estes genes, porque foi considerado que os genes em que a expressão foi alterada somente no grupo combinado pode ser associada com a carcinogénese gástrica e progressão em seres humanos. Figura 2 Análise do gene global no estômago glandular de ratos tratados com MNU utilizando o oligonucleótido de microarray. A: Número de genes para cima ou para baixo-regulado de forma mais do que duas vezes no estômago dos ratos tratados com MNU. No diagrama de Venn, os círculos indicam para cima (à esquerda) ou para baixo-regulado (direita) genes no estômago dos ratos tratados com MNU com pylori
infecção por H., dieta rica em sal ou sua combinação. A área sombreada representa os genes para cima ou para baixo-regulado de forma mais do que duas vezes apenas por a combinação. B: quantitativo em tempo real análise de RT-PCR de três selecionados genes up-regulamentados (Cd177
, Reg3g
e Muc13
) nos estômagos dos ratos tratados com MNU. Os níveis de expressão dos genes em cada amostra foram normalizados por GAPDH como controlo interno
usando o método ΔΔCT. os níveis de expressão relativa foram representados como a variação X vezes em relação ao grupo A (fixados como 1,0). A análise estatística foi realizada pelo teste de Kruskal-Wallis para a análise geral e teste de Tukey para comparações múltiplas. Bares, SE; *, P Art < 0,01 vs.
Grupo A e < 0,05 vs.
Grupo C; †, P Art < 0.01 vs.
Grupo C.
Tabela 3 regulamentado genes por combinação de infecção por H. pylori e dieta rica em sal na mucosa gástrica do rato
Adesão não.
Símbolo

genes /proteínas
Fold mudanças
genes regulados positivamente
XM_357640
IGK-V8
variável cadeia de imunoglobulina kappa 8 (V8)
14,4
XM_001472541
Ighg
cadeia pesada de imunoglobulina (polipeptídeo gama)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 antígeno
7,3
NM_011260
Reg3g
regenerando derivados do ilhéu 3 gamma
6.1
NM_023137
UBD
ubiquitina D
4.3
XM_144817
IGK-V34
imunoglobulina kappa variável de cadeia 34 (V34)
4.1
NM_007675
Ceacam10
molécula de adesão celular relacionados com antígeno carcinoembrionário 10
3,7
NM_183322
Khdc1a
KH domínio contendo 1A
3,3
NM_011475
Sprr2i
pequeno proteína rica em prolina 2I
3.2
NM_175165
Tprg
relacionadas Transformação de proteína 63 regulada
3.2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPase, H + transporte , subunidade lisossômico V0 D2
3.0
NM_009703
Araf
sarcoma murino 3611 viral homólogo oncogene v-raf
2,6
NM_026822
Lce1b
tarde envelope córneo 1B
2,5
NM_016958
KRT14
queratina 14
2,5
NM_212487
Krt78
queratina 78
2,4
NM_009807
Casp1
Caspase 1
2,4
NM_146037
Kcnk13
canal de potássio, subfamília K, membro 13
2,4
NM_019450
Il1f6
interleucina 1 família, membro 6
2.3
NM_008827
PGF
fator de crescimento placentário
2.3
XM_893506
Klk12
calicreína relacionadas com a peptidase 12
2.3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2.3
NM_029360
Tm4sf5
transmembrana 4 membro da superfamília 5
2.2
NM_172301
CCNB1
ciclina B1
2.2
NM_010739
Muc13
mucina 13, transmembrana epitelial
2.2
NM_011165
Prl4a1
prolactina família 4, subfamília um, membro 1 | 2.2
NM_010162
Ext1
Exostoses (múltiplos) 1
2.2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1 | 2.1
NM_011082
plgR
receptor de imunoglobulina polimérica
2.1
NM_007769
Dmbt1
Deleted em tumores cerebrais malignos 1 | 2.1
NM_022984
RETN
resistina
2.1
NM_173037
Tmco 7
transmembrana e de hélice enrolada domínio 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
ciclina B2
2.1
NM_001081060
Slc9a3
família portadora de soluto 9 (sódio /hidrogénio trocador), membro 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
receptor olfativo 1030
2,0
regulada genes
NM_008753
Oaz1
ornitina descarboxilase antizyme 1 | 0,31
NM_027126
Hfe2
tipo hemocromatose 2 (juvenil) (homólogo humano)
0,33
NM_053206
Magee2
antígeno melanoma, família E, 2
0,33
NM_010924
NNMT
nicotinamida N-metiltransferase
0,41
NM_026260
Tctn3
membro da família Tectonic 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1 | 0,43
NM_008312
HTR2C
5-hidroxitriptamina receptor (serotonina) 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
Olfativo receptor 740
0,44
NM_007550
Blm
Bloom síndrome homólogo (humana)
0,44
receptor de ácido NM_011243
R a R b
retinóico, beta
0,44
NM_184052
IGF1
Insulin-like growth factor 1 | 0,45
NM_013893
Reg3d
Regenerar derivados do ilhéu 3 delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1 | 0,46
NM_029550
Keg1
Kidney expressa gene 1 | 0,46
NM_019388
CD86
antígeno CD86
0,46
NM_011316
SAA4
soro amilóide A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
citocromo P450, família 26, subfamília um, polipeptídeo 1 | 0,47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
fosfatidilinositol-3-fosfato /fosfatidilinositol 5-quinase, tipo III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, proteína associada citoesqueleto
0,48
NM_007858
Diap1
homólogo diáfano 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
exocitose Reguladora membrana sináptica 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + dependente de proteína ativadora para a secreção de proteínas 2 carboxyglutamate
0,49
NM_007541
Bglap1
osso gama 1
0,49
NM_031871
Ghdc
domínio GH3 contendo
0,49
NM_025545
APTX
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
receptor de angiotensina II, tipo 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
proteína associada a ubiquitina 2
0,49
NM_028045
Erv3
endógena sequência retroviral 3
0,49
NM_011641
Trp63
relacionadas Transformação de proteínas 63
0,49
Figura 3 análise de agrupamento hierárquico de quatro grupos experimentais de ratinhos tratados com MNU. dados de expressão de 303 sondas qualificados (esquerda). Os quatro grupos experimentais foram classificados em dois grupos (Grupos A /C) e (Grupos B /D), com base em similaridades nos padrões de expressão. Cada linha representa uma sonda e cada coluna representa um grupo experimental (Grupos A-D). Como mostrado na barra de cores, verde indica-se-regulação; vermelho indica a infra-regulação; e preto indica nenhuma mudança. Trinta e um sondas constituído um conjunto de sondas-regulada apenas no Grupo D (direita).
Inteiras Os resultados desta análise microarray foram apresentados e são facilmente recuperáveis ​​a partir do banco de dados público Gene Expression Omnibus NCBI (GEO) com o número de acesso GSE29444 (número da amostra: GSM728857-60).
análise em tempo real quantitativa de RT-PCR de perfis de expressão de gene em MNU-tratada estômagos rato
Relativa análise em tempo real quantitativa de RT-PCR de três para cima seleccionado genes regulados (Cd177
, Reg3g
e Muc13
) em H. pylori
infectado e de alta sal ratos tratados com dieta confirmou a expressão aumentada de Cd177 Comprar e Reg3g
, como mostrado na Figura 2B, com diferenças significativas. Embora o nível de Muc13
no Grupo D expressão era maior do que todos os outros grupos, não houve significância estatística entre si (P = 0,0712
vs.
Grupo C).
Expressão imuno-histoquímica de CD177 em humanos cancros gástricos avançados e correlação com fatores clínico-patológicos
na análise imunohistoquímica de tecidos de câncer gástrico humano, CD177 foi observada não só nas membranas e citoplasma de neutrófilos infiltrados, mas também nas células cancerosas gástricas de ambos os adenocarcinomas bem- e mal diferenciadas ( Figura 4A). As células cancerosas do tipo de células em anel de sinete (2 casos) foram negativas para CD177. Entre os 55 casos de cancro gástrico, moderada a forte expressão de CD177 foi observada em 33 (60,0%) (Tabela 4). Figura 4 Imuno-histoquímica para CD177 no câncer gástrico avançado humana e correlação com a taxa de sobrevida global. A: Análise imuno-histoquímica da expressão de CD177 em tecido de cancro gástrico humano. (A e b) coloração negativa (nenhum para fraco) para CD177 em um adenocarcinoma gástrico. expressão CD177 apenas está presente na infiltração de neutrófilos enquanto que as células neoplásicas de (a) ou pobremente diferenciadas (b) o carcinoma bem diferenciado são negativos. ampliação original, × 100 (inserir, × 400). (C, d) Nota positiva (moderada a forte) expressão de CD177 em bem diferenciado (c) ou (d) células cancerosas pobremente diferenciadas gástricas. ampliação original, × 100 (inserir, × 400). B:. Comparação de Kaplan-Meier curvas de sobrevida cumulativa para CD177 casos negativos e positivos com câncer gástrico
Tabela 4 CD177 expressão em carcinomas gástricos e sua correlação com fatores clínico-patológicos
Caso não
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenocarcinomas
55
18
15
17
5
Idade
anos (média ± SD)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8,13
59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0,5039
classificação histológica
Bem tipo /moderadamente diferenciado *
21
6
9 4
2
0,1904
mal diferenciadas tipo de célula /Signet-anel **
34
12
6
13 Sims 3
profundidade de invasão †
T1-3
27
5
10
10 Página 2
0,2011
T4
26
11
5
7 Sims 3
linfa metástase
N0
6
1 | 2 Página 2
1 | 0,7869
N1-3
49
17
13
15 4
* tipo intestinal de Lauren, ** tipo difuso de Lauren, número † caso foi reduzida a cinquenta e três, porque a profundidade de invasão não foi classificada em dois casos, ‡ análise de variância e teste qui-quadrado foram realizados para a idade e outros fatores, respectivamente.
O período de acompanhamento dos pacientes variou de 9 a 606 semanas (mediana = 83 semanas). as taxas de sobrevivência de cinco anos para CD177-positivo e negativo foram de 39,4% e 18,2%, respectivamente. A partir da análise da curva de sobrevida de Kaplan-Meier, expressão CD177 positivo foi associada com melhor sobrevida geral (P
= 0,0294, teste log-rank) (Figura 4B). Não houve correlação estatisticamente significativa de expressão CD177 com a idade, classificação histológica, profundidade de invasão e metástases em linfonodos (Tabela 4).
Análise multivariada para a sobrevida global dos casos de câncer gástrico humano
Usando o modelo de riscos proporcionais de Cox , análise multivariada das variáveis ​​clínico-patológicas, incluindo a idade do paciente, tumor classificação histológica, profundidade de invasão, metástase de linfonodos e expressão CD177 (Tabela 5), ​​revelou o último a ser um fator independente para a sobrevida global (P
= 0,0323) . Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.

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