Большее количество сайтов фосфорилирования хеликобактер пилори CagA EPIYA C повышает риск развития рака желудка, двенадцатиперстной кишки, но не ulcer

Большее число хеликобактерной
сайтов фосфорилирования CagA EPIYA C повышает риск развития рака желудка, но не язва двенадцатиперстной кишки
Аннотация
Фоновая
хеликобактерной
инфекция является одним из наиболее распространенных инфекций во всем мире и связано с раком желудка и язвенной болезни. Бактериальные факторы вирулентности, такие как CagA было показано, что повышает риск обоих заболеваний. Исследования показали причинную роль CagA EPIYA полиморфизмов в желудочном канцерогенезе, и было показано, что географически разнообразен. Мы изучали связь между H. Pylori
CagA EPIYA моделей и рака желудка и двенадцатиперстной кишки, в этнически смешанной западной популяции из Бразилии. CagA EPIYA определяли с помощью ПЦР и подтверждена путем секвенирования. В общей сложности 436 пациентов были включены, будучи 188 с раком желудка, 112 с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки и 136 с гастритом.
Результаты
Количество сегментов EPIYA C была в значительной степени связано с повышенным риском развития рака желудка (OR = 3,08, , 95% ДИ = 1,74 до 5,45, р &л; 10 -3), даже после корректировки по возрасту и полу. Большее число сегментов EPIYA С был также связан с желудочной атрофии (р = 0,04) и кишечной метаплазией (р = 0,007). Кроме того, пациенты, инфицированные CAG
A штаммы, обладающие более одного сегмента EPIYA C показали сниженные уровни сывороточного пепсиногена I по сравнению с теми, инфицированных штаммами, содержащими один или менее EPIYA C повторить. В противном случае число сегментов EPIYA C не связывалась с язвой двенадцатиперстной кишки.
Выводы
Наши результаты показывают, что инфицирование H.pylori,
Штаммы, содержащие более одного CagA EPIYA C мотив был явно связан с раком желудка, но не с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки.
Большее количество сегментов EPIYA C также была связана с желудочным предраковых поражений, как показано гистологическими желудка атрофических и метапластических изменений и снижение сывороточного уровня пепсиногена I.
Справочная информация
хеликобактерной <бр> колонизирует желудок более половины населения земного шара и связана с развитием осложнений, таких как язвенная болезнь, рак желудка и слизистой оболочки желудка-ассоциированной лимфомы лимфоидной ткани [1-4]. Факторы, которые приводят несколько индивидуума к развитию сопутствующих заболеваний, в то время как большинство инфицированных людей остаются бессимптомными, неизвестны, но они были предметом интенсивных исследований. Среди множества факторов, полиморфизм генов цитокинов было показано, что увеличивает риск развития рака желудка, в частности, IL1B
-31, IL1RN
и TNFA
-307 одиночных нуклеотидных полиморфизмов в европейских популяциях, и IL1RN
в бразильской популяции [5-9]. Возбудитель факторы штаммоспецифические были сильно исследованы. Среди них, белок CagA принимается как фактор риска как для язвенной болезни и рака желудка [5, 10-12]. В исследовании нашей группы, инфицированием H. Pylori CAG
A-положительные штаммы имели отношение шансов (OR) 11,9 для рака желудка, после корректировки на полиморфизмов хозяев и других переменных, в то время как самый сильный фактор хозяин был IL1RN
2 аллель, с ОШ 1,9 [5].
CAG
А принадлежит к CAG
ИАП (патогенность остров), который кодирует систему секреции IV типа (T4SS), связанные с повышенной секрецией IL -8, очень сильный провоспалительный хемокин, который участвует в гастрита, вызванного H. Pylori
инфекции. T4SS также несет ответственность за вхождение CagA белка в эпителиальных клеток желудка, где CagA фосфорилируется на остатке тирозина в фосфорилирования мотивов в carboxi-концевую вариабельной области белка. Эти мотивы определяются как EPIYA (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala) А, В, С и D в соответствии с различными фланкирующих аминокислотах. CagA белок почти всегда имеет сегменты EPIYA А и В, которые следуют ни один, один, два или три сегмента С, штаммов, циркулирующих в западных странах, или сегмент D, в странах Восточной Азии. EPIYA C и D являются основными сайты для фосфорилирования CagA. Фосфорилированные CagA образует физический комплекс с ШП-2 фосфатазы и вызывает аномальные клеточные сигналы, приводящие к дерегулированию роста клеток, клетки к клетке контакта и миграции клеток, относительное удлинение эпителиальных клеток и увеличение оборота эпителиальных клеток, которые увеличивают риск поврежденных клеток к приобретают предраковые генетические изменения. Перенос типа D EPIYA или несколько C-повторов связано с повышением активности фосфатазы SHP-2, индуцированной CagA [13, 14], что повышает вероятность того, что инфекция CagA штаммы, обладающие более высоким числом сегментов EPIYA C предрасполагает к предраковых поражений и рака желудка.
на самом деле, эта гипотеза была проверена в восточных странах, но результаты исследования дискордантны. Адзума и др
. [15] обнаружили увеличение доли штаммов EPIYA D у больных с атрофическим гастритом и раком желудка, но другие авторы не смогли воспроизвести эти результаты [16, 17]. Аналогичным образом, в западных странах, значимая связь между раком желудка и повышенным количеством мотивов EPIYA С может быть продемонстрирована в двух исследованиях [18, 19], может быть либо с помощью небольшого числа пациентов, включенных в других исследованиях [20-22], или региональными /этники различия, как уже продемонстрировано для других H. Pylori
вирулентности маркеров [23, 24]. Кроме того, расхождения были также продемонстрированы в исследованиях, оценивающих число мотивов EPIYA C и двенадцатиперстной кишки [19, 25], который заслуживает в глубоких исследованиях, потому что язва двенадцатиперстной кишки и рак желудка являются взаимоисключающими H. Pylori
-associated заболевания.
Поэтому мы оценили ли увеличение числа CagA EPIYA C фосфорилирования мотивов связана с раком желудка и /или двенадцатиперстной кишки, включая большой серии пациентов, чтобы избежать предвзятости и позволить корректировку возраста и пола в западной популяции из Бразилии. Так как язва двенадцатиперстной кишки и желудка рак являются взаимоисключающими заболевания, и CAG
А является фактором риска для обоих условий, мы также оценивали количество сегментов EPIYA C штаммов, выделенных от больных с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки, отличаются ли от штаммов изолированы от больных раком желудка. Поскольку желудка атрофических и метапластические изменения - предраковых поражений - приводят к нарушению производства пепсиногена I (PGI) Вождем и слизистые клетки шеи в корпус и фундального желез, мы оценивали ли большее число мотивов EPIYA C было связано с сывороткой Баланс уровней пепсиногена.
Результаты
характеристик пациентов приведены в таблице 1. присутствие H. Pylori
-специфический Юр
а и 16S рРНК
была успешно подтверждена с помощью ПЦР в все исследованные штаммы и CAG
A ДЗП были положительными, по крайней мере, один из используемого метода, во всех strains.Table 1 характеристики пациентов и распределении CagA EPIYA генотипов в соответствии с H. Pylori
-associated заболеваний <бр> <й>
Гастрит 136 (%)

рак желудка (188%)

язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки 112 (%) <бр>
Средний возраст (SD)
52,5 (16,9)
62,3 (13.9)
43.5 (15.1)
Мужской пол
48 (35,3)
114 (60,6)
53 (47,3)
EPIYA-AB
3 (2.2)
3 (1.6)
4 (3.6)
EPIYA-ABC
108 (79,4) 107
(56,9) 93
(83,0)
EPIYA-ABCC
21 (15,4) 65
(34,6)
15 (13.4)
EPIYA-ABCCC
4 (3.0)
13 (6.9)
0 (0.0)
SD, стандартное отклонение
Определение шаблона CagA EPIYA
ПЦР-амплифицированных продуктов из всех CAG
A-положительных штаммов показали четкие закономерности в вариабельной области 3 'КАГ
A. гель-электрофорез, представляющий различные типы CagA EPIYA показана на рисунке 1. результаты ПЦР были подтверждены с помощью секвенирования в семидесяти пяти случайно выбранных продуктов ПЦР у пациентов каждой группы. Рисунок 1 Электрофорез репрезентативных выборок с каждым из типов CagA EPIYA наблюдается у пациентов с хеликобактерной -associated заболеваний. Колонка 1: стандартный 100 пар оснований; Колонка 2: EPIYA-AB; Колонки 3, 8, 11 и 12: EPIYA-ABC; Колонка 4: EPIYA-ABC + -ABCCC; Колонки 5 и 13: EPIYA-ABCC; Колонка 6: EPIYA ABCCC; Колонка 7: EPIYA-ABCC + -ABCCC; Колонка 9: EPIYA-ABC + -ABCC + -ABCCC; Колонка 10:. EPIYA-ABC + -ABCC
Нет EPIYA D был найден в H. Pylori
изученных штаммов. Распределение генотипов EPIYA показано в Таблице 1.
Ассоциация между количеством сегментов EPIYA C и рака желудка и двенадцатиперстной кишки
колонизация H. Pylori
CagA-позитивных штаммов, обладающих двумя или тремя EPIYA с мотивы чаще наблюдалось (р &лт; 10 -3) в рак желудка (78/188, 41,5%), чем в гастрита (25/136, 18,4%) пациентов. Ассоциация оставалась сильно значимым даже после корректировки по возрасту и полу с помощью логистической регрессии (таблица 2). Испытание Хосмер-Lemeshow показал хорошую пригодность модели (хи-квадрат = 3,98, 8 степеней свободы, р = 0,86, с 10 шагов). В противном случае, количество сегментов EPIYA C не связывали с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (таблица 2) .table 2 ассоциация между количеством мотивов CagA EPIYA C и H. Pylori
-associated заболевания
<СОР> <й>
анализ Одномерный

многомерный анализ

<й>
р


ИЛИ

95% ДИ

р


Желудочный
рак - Увеличение возраста
&л; 10-3
1,04
1,03 - 1,06
&л; 10-3
- Женский пол
&л; 10-3
0,29
0,18 - 0,48
&л; 10-3
- высокого риска EPIYA (ЦКА или ABCCC)
&л; 10-3
3,08
1,74 - 5,45
&л; 10-3
Язвенная болезнь двенадцатиперстной кишки
- увеличение возраста
&лт; 10-3
1,03
1,02 - 1,05
&л; 10-3
- Женский пол
0.04
1.26
0,73 - 2,18
0,41
- высокого риска EPIYA (ЦКА или ABCCC)
0,29
- <бр> -
-
испытание Хосмер-Lemeshow показал хорошую пригодность модели рака желудка (8 степеней свободы, р = 0,86, с 10 шагов) и двенадцатиперстной кишки (8 степеней свободы, р = 0,25, с 10 шагов).
Потому что это может быть предположение, что число EPIYA с мотивов возрастает с увеличением возраста, мы также построили модель с числом EPIYA C будучи зависимой переменной и возраст, пол и H. пилори <бр> -associated заболевания как независимые covariables. Увеличенные сегменты EPIYA C не связывали с возрастом (р = 0,13), пола (р = 0,66) и двенадцатиперстной кишки (р = 0,29), но оставались связанными с раком желудка (р &ЛТ; 10 -3, OR = 2,81; 95% ДИ = 1,64 - 4,82.)
ассоциации между смешанной колонизации штамма и болезней
смешанной инфекции штамма наблюдалась у 57 (13,08%) больных и достоверно чаще у больных раком желудка (38/188, 20,2%), чем у пациентов с гастритом (14/136, 10,3%) с или для желудка карциномы 2,21 (95% ДИ = 1,10 до 4,50). В противном случае, смешанная инфекция реже наблюдается у больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (5/112, 4,5%) с тенденцией к отрицательной ассоциации (р = 0,09).
Ассоциации между количеством сегментов EPIYA C и сывороточные уровни PGI <бр> The пепсиногена I сывороточные уровни были значительно выше (р = 0,01) в язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (в среднем 161,67 ± 102,36 мкг /л), чем в гастрита (100,37 ± 70,85 мкг /л).
пациенты, инфицированные CagA штаммы, обладающие двумя или три сегмента EPIYA C показали снижение уровня PGI по сравнению с теми, с инфекцией CagA штаммы, обладающие ≤ 1 EPIYA C сегмент (язвенной болезни двенадцатиперстной кишки: 179,67 ± 83,30 против 67,01 ± 34,30, соответственно, р = 0,02 и гастрит: 109,26 ± 85,61 против 57,55 ± 34,61, соответственно, р = 0,01).
ассоциация между количеством повторов EPIYA с и желудочных гистологических изменений и классификации опухоли
Увеличение числа сегментов EPIYA C было связано с наличием предраковых поражений, либо атрофии ( р = 0,04) или кишечная метаплазия (р = 0,007), но не с другими гистологическими параметрами. Кроме того, инфекция штаммов, несущих повышенные мотивы EPIYA C не ассоциируется с кишечной или диффузного типа опухоли (р = 0,34).
Обсуждение
В этом исследовании, оценивая большой цикл пациента, мы показали, что те зараженные с помощью CagA-позитивных штаммов H. пилори
обладающих более одного EPIYA C мотив находятся в трижды раза увеличить риск развития рака желудка. Сильные стороны нашего исследования включают адекватный размер выборки, идентификацию штаммов с помощью ПЦР с подтверждением с помощью секвенирования и корректировки на искажающих факторов с помощью логистического регрессионного анализа.
CagA считается важным фактором бактериальной вирулентности, связанный как с аденокарциномой желудка и болезнь двенадцатиперстной кишки [2, 5, 11, 12, 26]. Число и структура фосфорилирования мотивов, кажется, далее стратифицировать риск, связанный с отдельными штаммами [18, 27].
Было показано, что паттерны H. пилори CagA
EPIYA имеют значительную географическую изменчивость и внимательно следить за модели исторические человека миграций. EPIYA D представляет собой характерный рисунок Азии EPIYA, что практически не встречается в западной H. Pylori
штаммов [28]. Бразильцы образуют уникальную западную популяцию, так как, несмотря на множественные происхождения и, как следствие, широкое разнообразие фенотипического внешнего вида, наблюдается значительная степень межэтнической разведения и, таким образом, большинство людей не могут быть отнесены к какой-либо из основателей группы на основе генетический фон, а они несут около 33% генов от каждого из основных рас, которые исторически сложенных страну (кавказцев, африканцев и америнды) [29]. На этом фоне можно было бы ожидать, чтобы найти некоторые CagA EPIYA D штаммов нашей H. Pylori
, так как она была обнаружена среди америндами (в соответствии с теорией, что первоначально люди из Азии, населенной Америку, мигрирующие из Восточной Азии ), но мы не обнаружили каких-либо EPIYA D в нашей популяции.
к сожалению, существует мало исследований в отношении связи между числом EPIYA C и H. пилори
ассоциированных заболеваний в западных популяциях с разноголосых результатов среди них. Бассо и др
. [19] показали, что большее количество сегментов EPIYA C был связан с раком желудка в кавказской популяции из Италии, по аналогии с результатами Ямаока и др
. [18] оценки американских пациентов из Техаса. В противном случае, не было обнаружено никакой связи, когда колумбийские пациентов были оценены в исследовании Ямаока [18], в соответствии с результатами, полученными Акосты и др
. [22], в то время как Sicinschi и др
. [21] наблюдали ассоциации между увеличением сегментов EPIYA C и предраковых поражений. Кроме того, не окончательные результаты, опубликованные Argent и др
. [20] оценка 44 штаммов из африканских пациентов авторы показали тенденцию ассоциации между CagA с двумя или более сегментов EPIYA C и рака желудка.
Эти различия могут быть объяснены различными конструкциями исследования, размер выборки, популяций и географического разнообразия H . пилори
маркеры патогенности, в отношении к образцу CagA EPIYA, что подчеркивает необходимость изучения различных географических регионов.
результаты этого исследования показали, что большее количество сегментов EPIYA C связано с раком желудка и с предварительно -malignant поражения, атрофия и кишечная метаплазия слизистой оболочки мозолистого в группе пациентов с гастритом. В соответствии с этими данными, мы также показали, что концентрация в сыворотке крови PGI была в два раза уменьшилась у пациентов, инфицированных CAG
A-положительных штаммов с двумя или тремя мотивами EPIYA C. Поскольку PGI секретируется главных клеток и клеток слизистой шейки в корпусе и фундального желез, сывороточные уровни PGI отражают функциональное и морфологическое состояние oxyntic слизистой оболочки желудка; Таким образом, желудка атрофических /метапластические изменения приводят к снижению уровня в сыворотке крови PGI [30, 31]. Хотя Corpus слизистая пациентов с H. пилори
язва двенадцатиперстной кишки, связанные либо слабо или не воспалена, сывороточные уровни PGI также снижались в язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, инфицированных штаммов, содержащих большее количество сегментов EPIYA C.
Результаты настоящего исследования усилить потенциальную роль CagA полиморфизма в развитии рака желудка в согласии с результатами предыдущих исследований [18, 19]. Тем не менее, мы не можем исключить возможность того, что генетическая конституция принимающей страны, больше, чем штамм бактерии, может предрасполагают к атрофический гастрит, а H. Pylori
штаммов, несущих все большее число повторов EPIYA C будет иметь преимущество по сравнению с другими штаммами в колонизировать новую среду желудка или в качестве альтернативы более сложное взаимодействие обоих механизмов.
в отношении язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, а также результаты исследований дискордантны [19, 25]. Наши результаты согласуются с теми, сообщает Basso и др
. [19], которые также не нашли связи между заболеванием и числом сегментов EPIYA C в итальянском населения. Примечательно, что ни один пациент с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки нашей когорте была колонизирована CagA, обладающая тремя сегментами EPIYA C. Как было предложено Ямаока и др
. [18], возможно, что штаммы с более высоким числом сегментов EPIYA C может быть менее устойчивым к кислоте [18].
Мы также оценили ли колонизация различных штаммов (смешанная инфекция) может быть связано с последующим развитием заболевания. Мы обнаружили, что у больных раком желудка значительно чаще колонизирована смешанных штаммов, в то время как у пациентов с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки имела тенденцию к менее смешанной колонизации штамма. Одна возможность состоит в том, что у пациентов с раком желудка будет иметь участки слизистой оболочки желудка, показывающие раковой трансформации, чередующихся с участками атрофии, кишечной метаплазии, дисплазии и нормальной слизистой оболочке, каждая из которых представляет микросреды, которые будут селективно выгодно смешанных инфекций [32, 33 ].
Выводы
в заключение, мы обнаружили, что инфекция H. Pylori
CagA-позитивных штаммов, несущих несколько EPIYA с повторами связана с желудочным предраковых поражений и рака желудка, но не с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки в этнически разнообразны, примешивают, западное население.
Хотя инфекцией H. Pylori CAG
A-положительных штаммов является фактором риска для взаимоисключающих заболеваний, рака желудка и двенадцатиперстной кишки, штаммы CagA, обладающих наибольшим количеством сегментов EPIYA C были связанные с раком желудка, но не с язвой двенадцатиперстной кишки.
Большее количество сегментов EPIYA с также был связан с желудочным предраковых поражений, как показано с помощью гистологических желудка атрофических и метапластических изменений и снижение сывороточных уровней пепсиногена I.
способов <Ьг> Пациенты
Мы включили 436 пациентов, инфицированных CAG
A-положительные штаммы H. Pylori
(188 с раком желудка, 112 с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки и 136 с гастритом), среди тех, кто был представлен к эндоскопии выяснить происхождение симптомов, связанных с верхних отделов желудочно-кишечного тракта или желудка, которые перенесли операцию по удалению рака желудка в университетской больнице /UFMG, Luxemburgo и MARIO Пенна больницы, в Белу-Оризонти, Бразилия. Большинство включенных лиц (> 80%) имели низкий социально-экономический уровень с аналогичными культурными традициями, и все они были родом из Минас-Жерайс с тем же этнического происхождения, около 33% португальцев, 33% индейцах и 33% африканских родословной, гомогенно присутствует в каждом субъекте [29].
исследование было одобрено институциональными комитетами по этике и информированное согласие было получено от всех пациентов. Транспорта, культуры и микробиологические идентификации бактериальных изолятов осуществляли, как описано ранее [34, 35].
Гистологии
В группе гастрита и язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, эндоскопические биоптатов антрального отдела и oxyntic слизистой оболочки желудка были получены для гистологического и микробиологического исследования. Антральных и oxyntic Образцы биопсии фиксировали в 10% формалине и заливали в парафин, и 4 мкм толщиной Гистологические срезы окрашивали карболфуксином для H. Pylori
исследовании [35] и hematoxycilin и эозином для гистологической оценки в соответствии с обновлена ​​система Sydney [36]. В группе больных раком желудка, фрагменты были получены из желудка удаляют путем резекции желудка после его открытия вдоль большой кривизны в течение одного часа резекции. Опухоль была классифицирована в соответствии с Lauren [37].
Извлечение бактериальной ДНК
бактерию ДНК, полученной из 60 мм роста чашки Петри экстрагировали с помощью QIAmp (Qiagen, Hilden, Германия) комплект в соответствии с рекомендациями производителя с незначительными изменениями , Дистиллированную воду использовали в качестве контроля реакции. Концентрацию ДНК определяли спектрофотометрически с использованием NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Уилмингтон, штат Северная Каролина) и хранили при -20 ° С до использования.
Amplification антихеликобактерной
-специфические URE
A и 16S рРНК <бр> генов
наличие специфических URE
A и 16S рРНК
генов оценивали в соответствии с Clayton и др.
[38] и Фокс и др
. [39] соответственно. Для стандартного Tx30a H. Pylori
штамм использовали в качестве положительного контроля, и кишечной палочки штамма
и дистиллированную воду и использовали в качестве отрицательного контроля.
Амплификаторе GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City , CA) использовали для всех реакций. Усиленные продукты подвергали электрофорезу в 2% агарозном геле, окрашивали бромистым этидием, и анализировали в ультрафиолетовом свете просвечивания.
Амплификация CAG
Ген
КГП
Ген амплифицировали с помощью из двух описанных выше пар праймеров [40, 41]. H. Pylori
штамм из нашей коллекции (1010-95), как известно, CAG
A-положительный, был использован в качестве положительного контроля, и Tx30a H. Pylori
штамм отсутствует CAG
и дистиллированную воду и использовали в качестве отрицательного контроля. считались CAG
A-положителен пилори
штаммы H., когда по меньшей мере, один из двух реакций был положительным.
Амплификация вариабельной области 3 'CAG
A для
ПЦР-амплификации вариабельной области 3 'КГП
гена (который содержит последовательности EPIYA), от 20 до 100 нг ДНК были добавлены в 1% растворе полимераза Taq ДНК-буфером (KCl, 50 мМ и трис-HCl 10 мМ), 1,5 мМ MgCl <югу> 2, 100 мкМ каждого дезоксинуклеотид, 1,0 U Платиновый Taq ДНК-полимеразы (Invitrogen, Сан-Паулу, Бразилия), и 10 пмоль каждого праймера, для общего объема раствора 20 мкл. Праймеры, использованные ранее были описаны Ямаоки и др
. [27]. Условия реакции: 95 ° С в течение 5 минут, а затем 35 циклов при 95 ° С в течение 1 минуты, 50 ° С в течение 1 минуты и 72 ° С в течение 1 минуты, оканчивающиеся на 72 ° С в течение 7 минут. Усиленные продукты подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле, который был окрашен бромидом этидия и анализировали в ультрафиолетовом диапазоне просвечивания. Реакционный выход продуктов от 500 до 850 пар оснований в соответствии с количеством EPIYA C. Эта методика также позволяет детектировать микстинфекцией.
Секвенирование из вариабельной области 3 'CAG
управлением
существенное число образцы (около 75 пациентов из каждой группы) был случайным образом выбран для секвенирования, чтобы подтвердить результаты ПЦР. ПЦР-продукты очищали с помощью мастера С. В. Gel и ПЦР очистку системы (Promega, Madison, MI) в соответствии с рекомендациями завода-изготовителя. Очищенные продукты секвенировали с использованием BigDye ® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit в ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Полученные последовательности были приведены в соответствие с использованием Программы CAP3 последовательности сборки (можно приобрести: HTTP:... //Pbil Univ-lyon1 FR /cap3 PHP). После выравнивания, нуклеотидные последовательности были преобразованы в аминокислотными последовательностей с использованием программы BLASTX (можно приобрести: HTTP:..... //Взрыв NCBI NLM NIH гов /Blast ГИК) и по сравнению с последовательностями, вложенной в GenBank. (HTTP:.... //WWW NCBI NLM NIH гов /Genbank /)
Определение уровней сывороточного PGI
концентрации в сыворотке крови PGI определяли у больных с гастрит и язва двенадцатиперстной кишки с помощью специфического ELISA (Biohit, Хельсинки, Финляндия) в соответствии с рекомендациями производителя.
Статистический анализ
размер выборки, по меньшей мере, 112 испытуемых в каждой группе, чтобы показать разницу в 15% между группами с мощностью 80%, альфа 5%, и доверительный интервал 95% рассчитывалась с версией программы Epi Info 3.5.1 (Центры по контролю и профилактике заболеваний, Атланта, Джорджия).
ассоциации между числом EPIYA C мотивы и рак желудка был первоначально оценен в однофакторного анализа, а также переменные с р-значение меньше, чем 0,2, были включены в окончательную модель логистической регрессии, контроль за влиянием возраста и пола. Мы также оценивали влияние пола и возраста в ряде сегментов EPIYA C в модели с числом EPIYA C является зависимой переменной, а возраст, пол и H. Pylori
-associated заболевания как самостоятельные covariables. Логистическая модель пригодности была оценена с помощью теста Хосмер-Lemeshow. Поскольку уровни PGI не были нормально распределены журнал данные трансформируются и стали нормальными. Ассоциации были, таким образом, оценивали критерия Стьюдента (среднее ± стандартное отклонение). Ассоциация среди числа сегментов EPIYA C и степени воспаления желудка, атрофии и кишечной метаплазии было сделано двумя хвостами Манна-Уитни. Уровень значимости был установлен при значении ар ≤ 0,05.
Декларациях
Благодарности
Эта работа была поддержана грантами CNPq, FAPEMIG и INCT, Бразилия.
DMM, Кейруш финансируется в рамках шестой Рамочная программа Европейского союза, проект СОДЕРЖАНИЕ (ИНКО-CT-2006-032136).
Авторы "оригинал представлены файлы для изображений изображения Ниже приведены ссылки на авторов оригинала, представленных файлов для изображений. 'Исходный файл для фигурного 1 12866_2010_1347_MOESM2_ESM.pdf Авторского 12866_2010_1347_MOESM1_ESM.pdf авторов исходного файла для исходного файла Рисунок 2 12866_2010_1347_MOESM3_ESM.pdf Авторского на рисунке 3

• Отсутствие согласия между тонометрического и напряжения двуокиси углерода частичного желудочного сока
• Подавление фактора роста ткани соединительной препятствует росту и инвазии клеток рака желудка и затухает п…