Mayor número de sitios de fosforilación de Helicobacter pylori CagA EPIYA C aumenta el riesgo de cáncer gástrico, pero no úlcera duodenal

Mayor número de Helicobacter pylori
sitios de fosforilación de CagA EPIYA C aumenta el riesgo de cáncer gástrico, pero no duodenal úlcera
Abstract
Antecedentes
Helicobacter pylori
infección es una de las infecciones más comunes en todo el mundo y se asocia con el cáncer gástrico y úlcera péptica. factores de virulencia bacterianas tales como CagA se ha demostrado que aumentar el riesgo de ambas enfermedades. Los estudios han sugerido un papel causal para polimorfismos CagA EPIYA en la carcinogénesis gástrica, y se ha demostrado ser geográficamente diversos. Se estudiaron las asociaciones entre H. pylori CagA EPIYA
los patrones y el cáncer gástrico y úlcera duodenal, en una población étnicamente mezclada occidental de Brasil. CagA EPIYA se determinó por PCR y se confirmó por secuenciación. Se incluyeron un total de 436 pacientes, siendo 188 con cáncer gástrico, 112 con úlcera duodenal y 136 con la gastritis.
Resultados
El número de segmentos EPIYA C se asoció significativamente con el aumento del riesgo de carcinoma gástrico (OR = 3,08 , IC del 95% 5.45 a la RP = 1,74, p < 10 -3), incluso después de ajustar por edad y género. Mayor número de segmentos EPIYA C también se asoció con atrofia gástrica (p = 0,04) y metaplasia intestinal (p = 0,007). Por otra parte, los pacientes infectados por cepas cag
una que poseen más de un segmento EPIYA C mostraron niveles séricos disminuidos de pepsinógeno I en comparación con los infectados por cepas que contienen uno o menos de repetición EPIYA C. De lo contrario, el número de segmentos EPIYA C no se asoció con úlcera duodenal.
Conclusiones
Nuestros resultados demuestran que la infección por H. pylori
cepas que albergan más de un motivo CagA EPIYA C se asocia claramente con el cáncer gástrico, pero no con úlcera duodenal.
Mayor número de segmentos EPIYA C también se asoció con lesiones precancerosas gástricas como se demuestra por cambios atróficos y metaplasia gástrica histológicos y la disminución de los niveles séricos de pepsinógeno I. Antecedentes

Helicobacter pylori
coloniza el estómago de más de la mitad de la población mundial y se asocia con el desarrollo de complicaciones tales como la enfermedad de úlcera péptica, cáncer gástrico y linfoma del tejido linfoide asociado a la mucosa gástrica [1-4]. Los factores que llevan a algunos individuos a desarrollar las enfermedades asociadas, mientras que la mayoría de las personas infectadas permanecen asintomáticos, son desconocidos, pero que han sido objeto de intensa investigación. Entre los factores del huésped, se mostró que los polimorfismos de genes de citoquinas que aumentan el riesgo de cáncer gástrico, específicamente IL1B
-31, IL1RN
, y TNFA
-307 polimorfismos de nucleótido único en las poblaciones europeas, y IL1RN
en una población brasileña [5-9]. factores específicos de la cepa de patógenos han sido fuertemente investigado. Entre ellos, la proteína CagA es aceptada como un factor de riesgo tanto para la enfermedad de úlcera péptica y cáncer gástrico [5, 10-12]. En un estudio de nuestro grupo, la infección por H. pylori cag
cepas A-positivos tenían una odds ratio (OR) de 11,9 para el cáncer gástrico, después de ajustar por polimorfismos de acogida y otras variables, mientras que el factor del huésped más fuerte fue IL1RN
2 alelo, con una OR de 1,9 [5].
cag
a pertenece a un cag PAI
(isla de patogenicidad) que codifica un sistema de secreción tipo IV (T4SS) asociado con un aumento de la secreción de IL -8, una muy fuerte de quimiocinas proinflamatorias que participa en la gastritis inducida por H. pylori
infección. El T4SS también es responsable de la entrada de la proteína CagA en las células epiteliales gástricas donde CagA es fosforilada en el residuo de tirosina dentro de los motivos de fosforilación de la región variable de carboxi-terminal de la proteína. Estos motivos se definen como EPIYA (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala) A, B, C y D de acuerdo con diferentes aminoácidos flanqueantes. proteína CagA casi siempre posee segmentos EPIYA A y B que son seguidos por ninguno, uno, dos o tres segmentos C, en cepas que circulan en los países occidentales, o un segmento D, en los países del este asiático. El EPIYA C y D son los principales sitios de fosforilación de CagA. Fosforilada CagA forma un complejo físico con SHP-2 fosfatasa y desencadena señales celulares anormales que conducen a la desregulación del crecimiento celular, célula para el contacto celular y la migración celular, la elongación de las células epiteliales y el aumento de la renovación de células epiteliales, que mejoran el riesgo de las células dañadas a adquirir cambios genéticos precancerosas. Llevar el tipo D EPIYA o múltiple C repeticiones se asocia con aumento de la actividad fosfatasa SHP-2 inducida por CagA [13, 14], lo que plantea la posibilidad de que la infección por CagA cepas que poseen mayor número segmentos EPIYA C predispone a lesiones precancerosas y cáncer gástrico.
de hecho, esta hipótesis ha sido probado en los países orientales, pero los resultados del estudio son discordantes. Azuma et al
. [15] encontró una mayor proporción de cepas EPIYA D en los pacientes con gastritis atrófica y cáncer gástrico, pero otros autores no han podido reproducir estos resultados [16, 17]. Del mismo modo, en la población occidental, asociación significativa entre el cáncer gástrico y el aumento del número de EPIYA C motivos se pudo demostrar en dos estudios [18, 19], tal vez sea por el pequeño número de pacientes incluidos en los otros estudios [20-22], o por /etnias regionales como ya demostraron diferencias para otros H. pylori
marcadores de virulencia [23, 24]. Además, las discrepancias también se han demostrado en estudios que evalúan el número de EPIYA C motivos y úlcera duodenal [19, 25], lo que merece en investigaciones profundas debido a la úlcera duodenal y cáncer gástrico son mutuamente exclusivos H. pylori
enfermedades -asociado.
por lo tanto, se evaluó si el aumento de número de CagA EPIYA C motivos de fosforilación se asocia con el cáncer gástrico y /o duodenal incluyendo una gran serie de pacientes para evitar el sesgo y para permitir el ajuste por edad y sexo en una población occidental de Brasil. Desde la úlcera duodenal y gástrica son enfermedades carcinoma mutuamente excluyentes, y cag
A es un factor de riesgo para ambas condiciones, también se evaluó si el número de segmentos EPIYA C de las cepas aisladas de pacientes con úlcera duodenal difería de la de las cepas aislado de pacientes con cáncer gástrico. Debido a los cambios atróficos y metaplasia gástrica - lesiones precancerosas - conducen a una alteración de la producción de pepsinógeno I (PGI) por el jefe y las células mucosas del cuello en el corpus y las glándulas fúndica, se evaluó si el mayor número de EPIYA C motivos se asoció con el suero los niveles de pepsinógeno.
resultados
las características de los pacientes se muestran en la Tabla 1. la presencia de H. pylori
específico de Ure
a y 16S rRNA
fue confirmada por PCR en éxito todas las cepas estudiadas y la cag
una PCR fueron positivos, por lo menos uno de los métodos utilizados, en todos los strains.Table 1 características de los pacientes y la distribución de genotipos CagA EPIYA acuerdo con H. pylori enfermedades -asociado


Gastritis 136 (%) guía empresas cáncer gástrico 188 (%)
La úlcera duodenal 112 (%)

edad media (DE)
52,5 (16,9)
62,3 (13,9)
43,5 (15,1)
sexo masculino
48 (35,3)
114 (60,6)
53 (47,3)
EPIYA-AB Estrellas: 3 (2.2) página 3 (1.6)
4 (3,6)
EPIYA-ABC
108 (79,4) 107
(56.9)
93 (83,0)
EPIYA-ABCC
21 (15,4)
65 (34,6)
15 (13,4)
EPIYA-ABCCC
4 (3,0) página 13 (6,9)
0 (0.0)
SD, desviación estándar
Determinación del patrón de CagA EPIYA
productos PCR amplificados a partir de todas las cepas cag
a-positivos mostraron patrones distintos en región variable de la 3 'de cag
A. un gel de electroforesis que representa los diferentes tipos CagA EPIYA se muestra en la Figura 1. los resultados de la PCR se confirmaron por secuenciación en setenta y cinco productos de PCR seleccionados al azar de los pacientes de cada grupo. Figura 1 La electroforesis de muestras representativas con cada uno de los tipos CagA EPIYA observados en los pacientes con H. pylori -asociado enfermedades. Columna 1: 100 estándar pb; Columna 2: EPIYA-AB; Las columnas 3, 8, 11, y 12: EPIYA-ABC; Columna 4: EPIYA-ABC + -ABCCC; Las columnas 5 y 13: EPIYA-ABCC; Columna 6: EPIYA ABCCC; Columna 7: EPIYA-ABCC + -ABCCC; Columna 9: EPIYA-ABC + + -ABCC -ABCCC; Columna 10:. EPIYA-ABC + -ABCC
Sin EPIYA D se encuentra en el H. pylori
cepas estudiadas. La distribución de los genotipos EPIYA se muestra en la tabla 1.
Asociación entre el número de segmentos EPIYA C y el cáncer gástrico y úlcera duodenal
colonización por H. pylori cepas
CagA-positivos que poseen dos o tres EPIYA se observó con mayor frecuencia C motivos (p < 10 -3) en el cáncer gástrico (78/188, 41,5%) que en la gastritis (25/136, 18,4%) pacientes. La asociación se mantuvo fuertemente significativa incluso después de ajustar por edad y sexo por medio de regresión logística (Tabla 2). La prueba de Hosmer-Lemeshow mostró un buen ajuste del modelo (Chi-cuadrado = 3,98, 8 grados de libertad, p = 0,86, con 10 pasos). De lo contrario, el número de segmentos EPIYA C no se asoció con úlcera duodenal (Tabla 2) Asociación .Tabla 2 entre el número de CagA EPIYA C motivos y H. pylori
enfermedades -asociado

análisis univariante
El análisis multivariado

p
O

95% IC
p
El cáncer gástrico CD - Aumento de la edad Hotel < 10-3
1,04
1.3 a 1.6 Hotel < 10-3 CD - El sexo femenino Hotel < 10-3
0,29
0,18 - 0,48 Hotel < 10-3 CD - de alto riesgo EPIYA (ABCC o ABCCC) Hotel < 10-3
3,08
1,74-5,45 Hotel < 10-3
La úlcera duodenal CD - Aumento de la edad Hotel < 10-3
1,03
01.02 a 01.05 Hotel < 10-3 CD - El sexo femenino
0,04 1,26

0,73 - 2.18 0.41
CD - de alto riesgo EPIYA (ABCC o ABCCC)
0,29 CD -
- - Ayuda los test de Hosmer-Lemeshow mostró un buen ajuste del modelo de cáncer gástrico (8 grados de libertad, p = 0,86, con 10 pasos) y úlcera duodenal (8 grados de libertad, p = 0,25, con 10 pasos).
Dado que ello podría especular que el número de EPIYA C: motivos aumenta con la edad, también construimos un modelo con el número de EPIYA C siendo la variable dependiente y la edad, el sexo y el H. pylori
-asociado enfermedades como covariables independientes. El aumento de segmentos EPIYA C no se asocian con la edad (p = 0,13), el sexo (p = 0,66) y la úlcera duodenal (p = 0,29), pero permaneció asociado con el cáncer gástrico (p < 10 -3, OR = 2,81; 95% IC = 1,64 -. 4,82) Asociación
entre la colonización de cepas mezcladas y enfermedades
se observó infección por una cepa mixta en 57 (13,08%) pacientes y fue significativamente más frecuente en los pacientes con cáncer gástrico (38/188, 20,2%) que en los de la gastritis (14/136, 10,3%) con un OR para el carcinoma gástrico de CI 2,21 (95% = 1,10 a la 4,50). De lo contrario, se observó una infección mixta con menor frecuencia en los pacientes con úlcera duodenal (5/112, 4,5%), con una tendencia a una asociación negativa (p = 0,09) Asociación.
Entre el número de segmentos EPIYA C y los niveles de PGI en suero
El pepsinógeno I séricos fueron significativamente mayores (p = 0,01) en la úlcera duodenal (media de 161,67 ± 102,36 g /L) que en gastritis (100,37 ± 70,85 g /L).
Los pacientes infectados por cepas CagA que posee dos o tres segmentos EPIYA C mostraron una disminución de los niveles de PGI en comparación con aquellos con infección por cepas CagA poseer ≤ 1 segmento EPIYA C (úlcera duodenal: 179,67 ± 83,30 vs 67,01 ± 34,30, respectivamente, p = 0,02 y la gastritis: 109.26 ± 85.61 vs. 57.55 ± 34.61, respectivamente, p = 0,01).
Asociación entre el número de repeticiones EPIYA C y alteraciones histológicas gástricos y la clasificación de tumores
Aumento del número de segmentos EPIYA C se asoció con la presencia de lesiones precancerosas, ya sea la atrofia ( p = 0,04) o metaplasia intestinal (p = 0,007), pero no con los otros parámetros histológicos. Además, la infección por cepas portadoras aumento EPIYA C no se asoció con el tipo de tumor intestinal o difuso (p = 0,34).
Discusión
En este estudio, mediante la evaluación de una serie amplia de pacientes, hemos demostrado que las personas infectadas por cepas CagA positivas H. pylori
que poseen más de un motivo EPIYA C se encuentran en tres veces veces mayor riesgo de desarrollar cáncer gástrico. Los puntos fuertes de nuestro estudio incluyen el tamaño adecuado de la muestra, la identificación de las cepas mediante PCR con la confirmación por secuenciación y el ajuste por factores de confusión mediante análisis de regresión logística.
CagA se considera que es un importante factor de virulencia bacteriana asociada tanto con adenocarcinoma gástrico y úlcera duodenal enfermedad [2, 5, 11, 12, 26]. El número y el patrón de motivos de fosforilación parecen estratificar aún más el riesgo asociado con cepas individuales [18, 27].
Se ha demostrado que los patrones de H. pylori
CagA EPIYA tienen una variabilidad geográfica significativa y seguir de cerca los patrones de migraciones humanas históricas. EPIYA D es un patrón característico de Asia EPIYA que prácticamente no se produce en el Oeste de H. pylori
cepas [28]. Los brasileños forman una población occidental único porque, a pesar de los múltiples orígenes y la consiguiente gran diversidad de apariencia fenotípica, se ha producido un importante grado de cría entre los grupos étnicos y por lo tanto la mayoría de las personas no puede ser atribuido a cualquiera de los grupos fundadores sobre la base de antecedentes genéticos, sino que llevan alrededor del 33% de los genes de cada una de las carreras más importantes que históricamente componen el país (caucásicos, africanos y amerindios) [29]. Con estos antecedentes, se esperaría encontrar alguna CagA EPIYA D en nuestro H. pylori
cepas, ya que se ha detectado entre los amerindios (de acuerdo con la teoría de que inicialmente las personas procedentes de Asia poblaron las Américas que migran desde el Este de Asia ), pero que no detectó ninguna EPIYA D en nuestra población.
por desgracia, hay pocos estudios con respecto a la asociación entre el número de EPIYA C y H. pylori enfermedades servicios asociados en la población occidental con resultados discordantes entre ellos. Basso et al
. [19] mostró que el aumento de número de segmentos EPIYA C se asoció con carcinoma gástrico en una población caucásica de Italia, de manera similar a los resultados de Yamaoka et al
. [18] la evaluación de pacientes americanos de Texas. De lo contrario, no se observó asociación cuando los pacientes colombianos se evaluaron en el estudio de la Yamaoka [18] de acuerdo con los resultados obtenidos por Acosta et al
. [22], mientras que Sicinschi et al
. [21] observaron asociaciones entre el aumento de los segmentos EPIYA C y lesiones precancerosas. Asimismo, los resultados no concluyentes publicadas por Argent et al
. [20] la evaluación de 44 cepas de pacientes africanos los autores mostraron tendencia de asociación entre CagA con dos o más segmentos EPIYA C y cáncer gástrico.
Estas diferencias pueden explicarse por los diferentes diseños de estudio, tamaño de la muestra, la población y la diversidad geográfica de H pylori.
marcadores de patogenicidad, en relación con el patrón de CagA EPIYA, poniendo de relieve la necesidad de estudiar las diferentes regiones geográficas.
los resultados de este estudio mostraron que un mayor número de segmentos EPIYA C se asocia con el cáncer gástrico y con pre lesiones -malignant, atrofia y metaplasia intestinal de la mucosa corpus en el grupo de pacientes con gastritis. De acuerdo con estos resultados, también hemos demostrado que la concentración sérica de PGI se redujo dos veces en los pacientes infectados por cepas cag
A-positivos con dos o tres motivos EPIYA C. Debido a PGI es secretada por las células principales y células mucosas del cuello en las glándulas corpus y fúndica, los niveles de PGI en suero reflejan el estado funcional y morfológica de la mucosa gástrica oxíntica; por lo tanto, los cambios de metaplasia gástrica atrófica /conducen a la disminución de los niveles séricos de PGI [30, 31]. A pesar de la mucosa corpus de los pacientes con H. pylori servicios asociados úlcera duodenal es ya sea leve o no inflamado, los niveles séricos IGP también se vieron reducidos en pacientes con úlcera duodenal infectados por cepas que contienen mayor número de segmentos EPIYA C. Los resultados
del presente estudio fortalecer el papel potencial de CagA polimorfismo en el desarrollo de cáncer gástrico, de acuerdo con los resultados de los estudios anteriores [18, 19]. Sin embargo, no podemos excluir la posibilidad de que la constitución genética del huésped, más que la cepa de bacterias, podría predisponer a la gastritis atrófica y el H. pylori
cepas portadoras de un creciente número de repeticiones EPIYA C tendría una ventaja sobre otras cepas en la colonización de la nueva medio gástrico o, alternativamente, una interacción más compleja de ambos mecanismos.
con respecto a la úlcera duodenal, también los resultados de los estudios son discordantes [19, 25]. Nuestros resultados están de acuerdo con lo señalado por Basso et al
. [19] que tampoco se encontró asociación entre la enfermedad y el número de segmentos EPIYA C en una población italiana. Cabe destacar que ninguno de pacientes con úlcera duodenal de nuestra cohorte fue colonizada por CagA que posee tres segmentos EPIYA C. Según lo sugerido por Yamaoka et al
. [18], es posible que las cepas con mayor número de segmentos EPIYA C pueden ser menos resistentes al ácido [18].
También se evaluó si la colonización por diferentes cepas (infección mixta) podría estar asociado con resultados de la enfermedad. Se encontró que los pacientes con cáncer gástrico fueron significativamente más a menudo colonizados por cepas mixtas, mientras que los pacientes con úlcera duodenal tenían una tendencia hacia la colonización cepa menos mezclada. Una posibilidad es que los pacientes con cáncer gástrico tendrían áreas de mucosa gástrica que muestran transformación de cáncer, alternando con áreas de atrofia, metaplasia intestinal, displasia, y mucosa normal, cada uno de ellos representa microambientes que serían selectivamente ventajoso infecciones mixtas [32, 33 ].
Conclusiones
en conclusión, se encontró que la infección por H. pylori
cepas CagA positivas que albergan múltiples EPIYA C se repite se asocia con lesiones precancerosas y cáncer gástrico, pero no con úlcera duodenal en un étnicamente diversa, se mezcló, población occidental.
Aunque la infección por H. pylori cag
cepas a-positivos es un factor de riesgo para las enfermedades que se excluyen mutuamente, cáncer gástrico y duodenal, cepas CagA que poseen mayor número de segmentos EPIYA C eran asociado con el cáncer gástrico, pero no con úlcera duodenal.
Mayor número de segmentos EPIYA C también se asoció con lesiones precancerosas gástricas como se demuestra por cambios atróficos y metaplasia gástrica histológicos y la disminución de los niveles séricos de pepsinógeno I. Métodos

los pacientes
se incluyeron 436 pacientes infectados con cag
a-positivas cepas de H. pylori gratis (188 con cáncer gástrico, 112 con úlcera duodenal y 136 con la gastritis), entre los que fueron sometidos a endoscopia para aclarar el origen de los síntomas relacionados con el tracto gastrointestinal superior o que se sometieron a cirugía gástrica para eliminar el carcinoma gástrico en el hospital Universitario /UFMG, Luxemburgo, Hospitales y Mario Penna, en Belo Horizonte, Brasil. La mayoría de los individuos incluidos (> 80%) eran de bajo nivel socio-económico con los hábitos culturales similares, y todos eran nativos del estado de Minas Gerais con el mismo origen étnico, aproximadamente el 33% de los portugueses, el 33% de amerindios y el 33% de los africanos ascendencia, homogéneamente presentes en cada sujeto [29]. Francia El estudio fue aprobado por los comités de ética y el consentimiento informado se obtuvo de todos los pacientes. El transporte, la cultura, y la identificación microbiológica de las cepas bacterianas se realizó como se describió anteriormente [34, 35].
Histología
En el grupo de gastritis y pacientes con úlcera duodenal, las muestras de biopsia endoscópica de la mucosa gástrica antral y oxínticas se obtuvieron para estudio histológico y microbiológico. muestras de biopsia antrales y oxínticas se fijaron en 10% de formalina y embebidos en cera de parafina, y 4-m de espesor secciones histológicas se tiñeron con carbolfucsina para H. pylori
investigación [35] y hematoxycilin y eosina para la evaluación histológica de acuerdo con el Sistema de Sydney actualizada [36]. En el grupo de pacientes con cáncer gástrico, los fragmentos se obtuvieron del estómago eliminado por gastrectomía después de la apertura a lo largo de la curvatura mayor dentro de una hora de la resección. El tumor se clasificó de acuerdo a Lauren [37].
Extracción de ADN bacteriano
ADN Bacteria obtenida de 60 mm de crecimiento placa de Petri se extrajo utilizando el kit QIAmp (QIAGEN, Hilden, Alemania) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante con modificaciones menores . El agua destilada se utiliza como control de la reacción. La concentración de ADN se determinó por espectrofotometría utilizando NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, Carolina del Norte) y se almacenó a -20 ° C hasta su uso.
Amplificación de H. pylori
específico de Ure
A y 16S rRNA
genes
La presencia de Ure específica
a y 16S rRNA genes
se evaluó de acuerdo con Clayton et al.
[38] y Fox et al
. [39], respectivamente. El estándar Tx30a H. pylori
cepa se utilizó como control positivo, y un Escherichia coli cepa
y agua destilada se utiliza tanto como controles negativos.
El termociclador GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City , CA) se utilizó para todas las reacciones. Los productos amplificados se sometieron a electroforesis en gel de agarosa al 2%, se tiñeron con bromuro de etidio, y se analizaron en un transiluminador de luz ultravioleta.
La amplificación del gen cag
un comentario El cag
Un gen fue amplificado por los medios de dos pares de cebadores descritos anteriormente [40, 41]. Una cepa de H. pylori
de nuestra colección (1010-1095), conocido por ser CAG
A positivo, se utilizó como control positivo, y Tx30a H. pylori cepa carente de
cag A
y agua destilada se utiliza tanto como controles negativos. Se consideraron los pylori
cepas de H. ser CAG
A-positivo cuando al menos una de las dos reacciones fue positiva.
La amplificación de la región variable de 3 'del cag
Un
Para la amplificación por PCR de la región variable de la 3 'de la cag
Un gen (que contiene las secuencias EPIYA), de 20 a 100 ng de DNA se añadieron a solución de tampón de ADN polimerasa Taq 1% (KCl 50 mM y Tris-HCl 10 mM), 1,5 mM de MgCl 2, 100 mM de cada desoxinucleótido, 1,0 U de Taq ADN polimerasa Platinum (Invitrogen, Sao Paulo, Brasil), y 10 pmol de cada cebador, para un volumen total de solución de 20 mL. Los cebadores usados ​​fueron descritos previamente por Yamaoka et al
. [27]. Las condiciones de reacción fueron: 95 ° C durante 5 minutos, seguido por 35 ciclos de 95 ° C durante 1 minuto, 50 ° C durante 1 minuto, y 72 ° C durante 1 minuto, terminando con 72 ° C durante 7 minutos. Los productos amplificados se sometieron a electroforesis en gel de agarosa al 1,5% que se tiñó con bromuro de etidio, y se analizó en un transiluminador de luz ultravioleta. La reacción produjo productos de 500 Para de 850 pb de acuerdo con el número de EPIYA C. Esta metodología también permite la detección de infección mixta.
La secuenciación de la región variable de 3 'del cag
Un
Un subconjunto importante de muestras (alrededor de 75 pacientes de cada grupo) se seleccionaron al azar para la secuenciación, con el fin de confirmar los resultados de la PCR. Los productos de PCR fueron purificados con el SV Gel y PCR Asistente de Limpieza del sistema (Promega, Madison, MI) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Los productos purificados se secuenciaron utilizando un BigDye ® Terminator v3.1 Ciclo de Secuenciación Kit en un ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). Las secuencias obtenidas fueron alineadas utilizando el programa de secuencia de montaje CAP3 (disponible en: http:... //PBIL Univ-Lyon1 fr /cap3 php). Después de la alineación, las secuencias de nucleótidos fueron transformados en secuencias de aminoácidos utilizando el programa Blastx (disponible en: http:..... //NCBI BLAST NLM NIH gov /cgi explosiva) y se compararon con las secuencias depositadas en la GenBank. (http:.... //www NCBI NLM NIH gov /GenBank /)
Determinación de los niveles de suero de PGI México la concentración sérica de PGI se determinaron en los pacientes con gastritis y úlcera duodenal por un ELISA específico (Biohit, Helsinki, Finlandia) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
el análisis estadístico
un tamaño de muestra de al menos 112 sujetos en cada grupo, con el fin de mostrar una diferencia del 15% entre los grupos con una potencia de 80%, alfa del 5%, y el intervalo de confianza del 95% se calculó con la versión del programa Epi Info 3.5.1 (Centros para el control y Prevención de Enfermedades, Atlanta, GA).
asociación entre el número de EPIYA C motivos y cáncer gástrico se evaluó inicialmente en el análisis univariado, y las variables con un valor de p inferior a 0,2 se incluyeron en el modelo final de regresión logística, controlando por las influencias de la edad y el sexo. También se evaluó el efecto del sexo y la edad en el número de segmentos EPIYA C en un modelo con el número de EPIYA C siendo la variable dependiente y la edad, el sexo y el H. pylori
enfermedades -asociado covariables independientes. El modelo de la aptitud logística se evaluó con la prueba de Hosmer-Lemeshow. Debido a que los niveles del PGI no se distribuyen normalmente el registro de datos transforma y se normalizó. Las asociaciones fueron, por lo tanto, evaluado mediante la prueba t de Student (media ± desviación estándar). La asociación entre el número de segmentos EPIYA C y el grado de inflamación gástrica, atrofia y metaplasia intestinal hecho por la prueba de Mann-Whitney de dos colas. El nivel de significación se fijó en un valor de p ≤ 0,05.
Declaraciones
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por becas del CNPq, FAPEMIG y INCT, Brasil.
DMM, Queiroz es financiado a través del VI Programa marco de la Unión Europea, el contenido del proyecto (INCO-CT-2006-032.136).
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• La falta de acuerdo entre tonométrico y el jugo gástrico dióxido de carbono parcial tension
• Regulación a la baja del factor de crecimiento de tejido conjuntivo inhibe el crecimiento y la invasión de células de cáncer gástrico y atenúa peritoneal regulación a la baja dissemination