A magasabb számú Helicobacter pylori CagA EPIYA C foszforilációs helyek növeli a gyomorrák, de nem duodenális ulcer

Magasabb számú Helicobacter pylori katalógusa CagA EPIYA C foszforilációs helyek növeli a gyomorrák, de nem nyombélfekély
Abstract
alapon
Helicobacter pylori
fertőzés az egyik leggyakoribb fertőzések világszerte, és kapcsolatban van a gyomorrák és a peptikus fekély. Bakteriális virulencia tényezők, mint a CagA kimutatták, hogy növeli a mindkét betegség. Tanulmányok javasolták okozati szerepet CagA EPIYA polimorfizmusok gyomor karcinogenezis, és bebizonyosodott, hogy a földrajzilag eltérő. Vizsgáltuk összefüggést a H. pylori katalógusa CagA EPIYA minták és a gyomorrák és nyombélfekély, etnikailag összekeverjük nyugati népesség Brazíliából. CagA EPIYA meghatározása PCR és szekvenálás megerősítette. Összesen 436 beteget vontak be, hogy 188 gyomorrák, 112 nyombélfekély és 136 gyomorgyulladáshoz. Katalógusa Eredmények katalógusa száma EPIYA C szegmens szignifikáns összefüggést a fokozott gyomorrák (OR = 3,08 95% CI = 1,74-5,45, p < 10 -3) után is az életkor és a nemek. Nagyobb számú EPIYA C szegmensben is társult gyomor atrófia (p = 0,04) és a bél metaplasia (p = 0,007). Továbbá, fertőzött betegek által CAG
Egy rendelkező törzsek több mint egy EPIYA C szegmens azt mutatta, csökkent szérum pepszinogén I összehasonlítva azokkal fertőzött törzsek, amelyek egy vagy kevesebb EPIYA C ismételje meg. Egyébként száma EPIYA C szegmens nem társítani nyombélfekély. Katalógusa Következtetések katalógusa Eredményeink azt mutatják, hogy a fertőzés a H. pylori törzsek megtelepedését katalógusa több CagA EPIYA C motívumot egyértelműen összefügg a gyomorrák, de nem nyombélfekély.
magasabb számú EPIYA C szegmensben is társult gyomor rákmegelőző elváltozások által bemutatott szövettani gyomor atrophiás és metaplasticus változások és csökkent a szérum pepszinogén I. katalógusa Háttér katalógusa Helicobacter pylori
colonizes a gyomorban több mint a fele a világ népességének és a kapcsolódó szövődmények kialakulásának, mint például a peptikus fekély, gyomorrák, és gyomornyálkahártya-asszociált limfoid szövet limfóma [1-4]. A faktorok, amelyek néhány ember, hogy fejlesszék a társult betegségek, míg a legtöbb fertőzött emberek tünetmentes marad, ismeretlen, de már intenzív kutatás tárgya. Között a fogadó tényezők, citokin gén polimorfizmusok kimutatták, hogy növeli a gyomorrák, kifejezetten IL1B
-31, IL1RN katalógusa, és TNFA
-307 egypontos nukleotid polimorfizmus az európai lakosság körében, és IL1RN katalógusa egy brazil népesség [5-9]. Kórokozó törzs-specifikus tényezők is erősen vizsgálták. Ezek közül a CagA fehérje elfogadott mint kockázati tényező mind a peptikus fekélybetegség és gyomorrák [5, 10-12]. Egy vizsgálatban a csoport által okozott fertőzés H. pylori CAG katalógusa A-pozitív törzsek esélyhányados (OR) 11,9 gyomorrák, beállítása után a fogadó polimorfizmusok és egyéb változókat, míg a legerősebb fogadó tényező IL1RN
2 allél, egy OR 1,9 [5].
CAG
egy tartozik CAG
PAI (patogenitási sziget), amely kódokat egy IV típusú szekréciós rendszer (T4SS) összefüggésbe hozható a megnövekedett az IL -8, egy nagyon erős gyulladáskeltő kemokin, amely részt vesz a gyomorhurut által kiváltott a H. pylori
fertőzés. A T4SS is felelős a bejáratnál a CagA fehérjét a gyomor hámsejtek ahol CagA foszforilezzük a tirozin maradék a foszforiláció motívumok carboxi-terminális variábilis régióból a fehérje. Ezek a motívumok meghatározása a EPIYA (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala), A, B, C és D szerint a különböző szegélyező aminosavak. CagA fehérje szinte mindig rendelkezik EPIYA A és B szegmenst, amely követi a nulla, egy, kettő vagy három C szegmensben, a törzsek kering a nyugati országokban, vagy a D szegmens, a kelet-ázsiai országban. A EPIYA C és D a fő oldalak foszforilációja CagA. A foszforilezett CagA képez fizikai komplexet SHP-2 foszfatáz, és kiváltja abnormális celluláris jelek vezető deregulációja sejtnövekedés, a sejt-sejt érintkezés és sejtmigráció, nyúlás az epiteliális sejtek és növekedése epithelialis sejt forgalom, ami fokozza a kockázata a károsodott sejtek megszerezni rákmegelőző genetikai változásokat. Hordozó típusa D EPIYA vagy több C ismétlődés összefüggésbe hozható a megnövekedett SHP-2 foszfatáz aktivitás által indukált CagA [13, 14], ami felveti annak lehetőségét, hogy a fertőzés által CagA rendelkező törzsek nagyobb számú EPIYA C szegmensek hajlamosít a rákmegelőző elváltozások és gyomorrák esetén.
Valójában ezt a hipotézist tesztelték keleti országokban, de a tanulmány eredményei disszonáns. Azuma és mtsai katalógusa. [15] talált megnövekedett aránya EPIYA D törzsek betegek között sorvadásos gyomorhurut és a gyomorrák, de más szerzők nem tudták reprodukálni ezeket az eredményeket [16, 17]. Hasonlóképpen, a nyugati populációk, szignifikáns összefüggést a gyomorrák és a megnövekedett számú EPIYA C motívumok lehetett kimutatni két tanulmányt [18, 19], talán akár a kisszámú szereplő betegek más vizsgálatok [20-22], vagy regionális /ethnics különbségek már bizonyított más H. pylori katalógusa virulencia markerek [23, 24]. Továbbá eltéréseket már szintén vizsgálatokkal bizonyították értékelő száma EPIYA C motívumok és nyombélfekély [19, 25], amely megérdemli a mély vizsgálatot, mert nyombélfekély és gyomorrák kölcsönösen kizárják H. pylori katalógusa -asszociált betegségek.
Ezért értékeltük, hogy nagyobb számú CagA EPIYA C foszforilációja motívumok társul gyomorrák és /vagy nyombélfekély, beleértve egy nagy sorozat a betegek az előítéletek elkerülésére, és lehetővé teszi az életkor és nem szerinti nyugati népesség Brazíliából. Mivel nyombélfekély és gyomorrák kölcsönösen kizárják egymást betegségek, valamint CAG katalógusa A kockázati tényező mindkét feltételek, azt is értékelte, hogy a több EPIYA C szegmens a törzsek betegekből nyombélfekély eltért a törzsek izolált gyomor rákos betegeknél. Mivel a gyomor atrophiás és metaplasiás változtatások - rákmegelőző elváltozások - ronthat a termelés pepszinogén I (OFJ) által vezetője és nyálkahártya nyak sejtek a corpus és fundus mirigy, értékeltük, hogy a nagyobb számú EPIYA C motívumok járt a szérum pepszinogén szinten.
Eredmények
a betegek tulajdonságait mutatja az 1. táblázat a H. pylori jelenlétének
-specifikus ure
a és 16S rRNS
sikeresen megerősítette PCR-rel összes vizsgált törzs, és a CAG
egy PCR-eket pozitív, legalább egy alkalmazott módszer, az összes strains.Table 1 beteg jellemzői és eloszlása ​​a CagA EPIYA genotípusok szerint a H. pylori
-asszociált betegségek
katalógusa gyomorhurut 136 (%) Matton Gyomorrák 188 (%) Matton Nyombélfekély 112 (%)
katalógusa átlagéletkor (SD) hotelben 52,5 (16,9) 62,3 katalógusa (13,9) hotelben 43,5 (15,1) hotelben férfi nemi katalógusa 48 (35,3) hotelben 114 (60,6)
53 (47,3) hotelben EPIYA-AB
3 (2.2) hotelben 3 (1.6) hotelben 4 (3,6) hotelben EPIYA-ABC
108 (79,4) hotelben 107 (56,9) hotelben 93 (83,0) hotelben EPIYA-ABCC katalógusa 21 (15,4) hotelben 65 (34,6) hotelben 15 (13,4) hotelben EPIYA-ABCCC
4 (3,0) katalógusa 13 (6,9) hotelben 0 (0.0) hotelben SD, szórás katalógusa meghatározása CagA EPIYA minta katalógusa PCR termékek valamennyi CAG katalógusa a-pozitív törzsek jól kivehető minták a 3 'variábilis régióját CAG katalógusa A. egy elektroforézis gélen képviselik a különböző CagA EPIYA típusú látható az 1. ábra a PCR eredményeket szekvenálással igazoljuk a hetvenöt véletlenszerűen kiválasztott PCR-termékeket a betegektől az egyes csoportok. 1. ábra Elektroforézis a reprezentatív mintákat az egyes CagA EPIYA típusok látott betegekben a H. pylori -asszociált betegségek. 1. oszlop: 100 bp szabvány; 2. oszlop: EPIYA-AB; Oszlopok 3, 8, 11, és 12: EPIYA-ABC; 4. oszlop: EPIYA-ABC + -ABCCC; Oszlopok 5 és 13: EPIYA-ABCC; 6. oszlop: EPIYA ABCCC; A 7. oszlop: EPIYA-ABCC + -ABCCC; 9. oszlop: EPIYA-ABC + -ABCC + -ABCCC; 10. oszlop: EPIYA-ABC + -ABCC.
Nem EPIYA D találtak a H. pylori törzsek katalógusa vizsgálták. Az eloszlás a EPIYA genotípusok látható az 1. táblázatban
közötti társulás a számok a EPIYA C szegmensek és a gyomorrák és nyombélfekély
kolonizációja a H. pylori
CagA-pozitív törzsek rendelkező két vagy három EPIYA C motívumok gyakrabban figyelhető meg (p < 10 -3) a gyomorrák (78/188, 41,5%), mint a gyomorhurut (25/136, 18,4%) betegnél. Az egyesület továbbra is erősen szignifikáns után is az életkor és a nemek útján logisztikus regresszió (2. táblázat). A Hosmer-Lemeshow teszt mutatott jó fitness modell (Chi-négyzet = 3.98, 8 szabadsági fok, p = 0,86, 10 lépés). Egyébként száma EPIYA C szegmens nem társítani nyombélfekély (2. táblázat) .table 2 közötti társulás számos CagA EPIYA C motívumok és a H. pylori katalógusa -asszociált betegségek katalógusa katalógusa egyváltozós elemzés

többváltozós elemzés Matton katalógusa p
OR katalógusa
95% CI Matton p
Gyomorrák katalógusa - Az idős kor katalógusa < 03/10 katalógusa 1,04 katalógusa 1,03-1,06 katalógusa < 03/10 katalógusa - női nemi katalógusa < 03/10 katalógusa 0.29 katalógusa 0,18-0,48 katalógusa < 03/10 katalógusa - Magas kockázatú EPIYA (ABCC vagy ABCCC) hotelben < 03/10 katalógusa 3.08 katalógusa 1,74-5,45 katalógusa < 03/10 katalógusa Nyombélfekély katalógusa - Az idős kor katalógusa < 03/10 katalógusa 1,03 katalógusa 1,02-1,05 katalógusa < 03/10 katalógusa - női nemi katalógusa 0,04 katalógusa 1.26 katalógusa 0,73-2,18 katalógusa 0.41 katalógusa - Magas kockázatú EPIYA (ABCC vagy ABCCC) hotelben 0,29 katalógusa -
- -
a Hosmer-Lemeshow teszt mutatott jó fitness modell gyomorrák (8 szabadsági fokkal, p = 0,86, 10 lépés) és nyombélfekély (8 szabadsági fokkal, p = 0,25, 10 lépés).
mert lehet, hogy feltételezi, hogy a több EPIYA C motívumokat a kor előrehaladtával nő, mi is épített modell száma EPIYA C pedig a függő változó és a kor, a nem és a H. pylori
-asszociált betegségek önálló covariables. Fokozott EPIYA C szegmens nem társítani kor (p = 0,13), a nemi (p = 0,66) és nyombélfekély (p = 0,29), de továbbra is jár a gyomorrák (p < 10 -3, OR = 2,81; 95% CI = 1,64-4,82). katalógusa közötti társulás vegyes törzs kolonizáció és betegségek katalógusa vegyes törzs fertőzés volt megfigyelhető 57 (13,08%) beteg, és ez volt szignifikánsan gyakoribb gyomorrákos betegeknél (38/188, 20,2%), mint a gastritis (14/136, 10,3%), és az OR gyomorrák 2,21 (95% CI = 1,10-4,50). Ellenkező esetben kevert fertőzés ritkábban megfigyelhető nyombélfekély betegek (5/112, 4,5%), a tendencia, hogy negatív kapcsolat (p = 0,09). Katalógusa Egyesület számai között EPIYA C szegmens és a szérum OFJ szint
A pepszinogén I szérumszintje szignifikánsan magasabb volt (p = 0,01) nyombélfekély (átlag 161,67 ± 102,36 ng /l), mint a gyomorhurut (100,37 ± 70,85 ng /l).
A fertőzött betegek CagA rendelkező törzsek két vagy három EPIYA C szegmensek mutattak csökkent szintje PGI összehasonlítva azok által okozott fertőzést CagA rendelkező törzsek ≤ 1 EPIYA C szegmens (nyombélfekély: 179,67 ± 83,30 vs. 67,01 ± 34,30, p = 0,02 és gastritis: 109,26 ± 85,61 vs. 57,55 ± 34,61, p = 0,01). katalógusa Egyesület száma között EPIYA C ismétlődik, és a gyomor szövettani elváltozások és a tumor besorolás katalógusa számának növekedése EPIYA C szegmens járt jelenlétében rákmegelőző elváltozások, vagy sorvadás ( p = 0,04), vagy intesztinális metaplázia (p = 0,007), de nem a többi szövettani paramétereket. Továbbá, a fertőzés hordozó törzsek fokozott EPIYA C motívumok nem társítani bél- vagy diffúz tumor típusa (p = 0,34). Katalógusa Megbeszélés katalógusa Ebben a vizsgálatban kiértékelésével egy nagy sorozat beteg, azt bizonyította, hogy a fertőzött által CagA-pozitív H. pylori katalógusa rendelkező törzsek több mint egy EPIYA C motívum vannak háromszorosan szorosára emelkedett a kockázata a fejlődő gyomorrák. Az erőssége a tanulmány tartalmazza megfelelő számú minta azonosítása törzsek segítségével PCR visszaigazolást szekvenálás és beállítása a zavaró tényezőket logisztikus regressziós analízissel. Katalógusa CagA tekintik fontos bakteriális virulencia faktor egyaránt jár gyomor adenokarcinóma és nyombélfekély betegség [2, 5, 11, 12, 26]. Száma és a foszforilációs mintázat motívumok úgy tűnik, hogy tovább rétegződik kockázatokkal jár az egyes törzsek [18, 27].
Bebizonyosodott, hogy a H. pylori
CagA EPIYA minták egy jelentős földrajzi változékonyság és szorosan követik minták történelmi emberi vándorlás. EPIYA D jellegzetes ázsiai EPIYA minta gyakorlatilag nem fordul elő a nyugati H. pylori törzsek katalógusa [28]. A brazilok alkot egyedülálló nyugati népesség, mert annak ellenére, hogy több eredetét és az ebből sokfélesége fenotípusos megjelenése, volt jelentős mértékű etnikumok tenyésztés, így a legtöbb ember nem lehet hozzárendelni bármely alapító csoportok alapján genetikai háttér, hanem az általuk mintegy 33% -a gének egyes főbb versenyeken, hogy történelmileg áll az ország (kaukázusiak, afrikaiak és indián) [29]. Ezzel a háttérrel, az lenne várható, hogy néhány CagA EPIYA D a mi H. pylori törzsek katalógusa, hiszen már megfigyelhető az is, indián (összhangban az elmélet, hogy kezdetben az emberek Ázsiából lakott amerikai vándorlását a kelet-ázsiai ), de nem találtunk semmilyen EPIYA D népességünk.
Sajnos kevés tanulmány tekintetében az egyesület közötti EPIYA C szám és a H. pylori
kapcsolatos betegségek a nyugati populációk eredményei ellentmondásosak közöttük. Basso et al katalógusa. [19] kimutatta, hogy nagyobb számú EPIYA C szegmens járt gyomorrák a kaukázusi populációban Olaszországból, hasonlóan az eredmények Yamaoka munkatársai katalógusa. [18] értékelő amerikai betegek a Texas. Ellenkező esetben nincs összefüggés volt megfigyelhető, amikor a kolumbiai beteget értékeltek a Jamaoka tanulmánya [18] szerint a kapott eredmények Acosta munkatársai katalógusa. [22], míg Sicinschi munkatársai katalógusa. [21] megfigyelt összefüggést nőtt EPIYA C szegmensek és rákmegelőző elváltozások. Továbbá, nem meggyőző eredményt közzé Argent et al katalógusa. [20] értékeli 44 törzsek afrikai beteg a szerzők kimutatták tendencia közötti társulás CagA két vagy több EPIYA C szegmens és a gyomorrák.
Ezek a különbségek magyarázhatók a különböző tanulási minták, minta mérete és a populációk földrajzi sokszínűsége H . pylori
markerek patogenitás tekintetében a CagA EPIYA minta, kiemeli a tanulmányozása különböző földrajzi régiókban.
a vizsgálat eredményei azt mutatták, hogy nagyobb számú EPIYA C szegmensek társított gyomorrák és előre -malignant elváltozások, atrophia és intestinalis metaplasia a corpus nyálkahártya a betegcsoportot gyomorhurut. Egyetértésben ezeket a megállapításokat, azt is kimutatták, hogy a szérum koncentráció OFJ kétszer csökkent a fertőzött betegek CAG
A-pozitív törzsek két vagy három EPIYA C motívumok. Mivel OFJ kiválasztódik a vezető sejtek és nyálkahártya nyak sejtek a corpus és fundus mirigy, a szérum OFJ szintek tükrözik a funkcionális és morfológiai állapotát corpus gyomornyálkahártya; így, gyomor- atrophiás /metaplasztikus változásokat vezet csökkent PGI szérumszint [30, 31]. Bár a corpus nyálkahártyában betegek H. pylori
kapcsolatos nyombélfekély az vagy enyhén vagy nem gyulladt, az OFJ szérumszintje is csökkent nyombélfekély fertőzött betegek törzsek, amelyek nagyobb számú EPIYA C szegmensben.
Eredményei a jelen tanulmány erősítése lehetséges szerepét CagA polimorfizmus a fejlesztés a gyomorrák egyetértésben az eredmények a korábbi vizsgálatok [18, 19]. Azt azonban nem zárja ki annak a lehetőségét, hogy a genetikai kapcsolat a befogadó, több, mint a baktérium törzset, hajlamossá teszi a sorvadásos gyomorhurut és a H. pylori katalógusa hordozó törzsek egyre nagyobb számban EPIYA C ismétlődés előnyt élveznének a többi törzs a gyarmatosító az új gyomor környezetben vagy pedig bonyolultabb kölcsönhatás mindkét mechanizmus.
tekintetében a nyombélfekély, továbbá a tanulmányok eredményeit is disszonáns [19, 25]. Eredményeink összhangban vannak a szedők által Basso et al katalógusa. [19], aki szintén nem találtak összefüggést a betegség és a szám a EPIYA C szegmens egy olasz lakosság. Nevezetesen, sem beteg nyombélfekély mi kohort gyarmatosították CagA lévő három EPIYA C szegmensben. Ahogyan azt Jamaoka munkatársai katalógusa. [18], akkor lehetséges, hogy törzsek nagyobb számú EPIYA C szegmensek lehet kevésbé ellenálló a savas [18].
Is értékeltük, hogy kolonizációja különböző törzsek (vegyes fertőzés) összefüggésbe hozható a betegség kimenetelét. Azt találtuk, hogy gyomorrákos betegek szignifikánsan gyakrabban gyarmatosították vegyes törzsek, míg betegek nyombélfekély volt a tendencia kevésbé vegyes törzs gyarmatosítás. Az egyik lehetőség az, hogy a betegek a gyomorrák volna területein gyomornyálkahártya mutató rák transzformáció, váltakozó területeken atrófia, intesztinális metaplázia, dysplasia, és a normál nyálkahártya, mindegyik képviselő mikrokörnyezetet lenne szelektíven előnyös kevert fertőzések [32, 33 ].
Következtetések katalógusa Összefoglalva, azt találtuk, hogy a H. pylori fertőzés katalógusa CagA-pozitív törzsek megtelepedését több EPIYA C megismétlődik társul gyomor rákmegelőző elváltozások és a gyomorrák, de nem nyombélfekély etnikailag sokszínű, összekeverjük, nyugati népesség.
Bár fertőzés H. pylori CAG katalógusa a-pozitív törzsek kockázati tényező az egymást kölcsönösen kizáró betegségek, gyomorrák és nyombélfekély, CagA rendelkező törzsek nagyobb számú EPIYA C szegmensek társuló gyomor rák, de nem a nyombélfekély.
magasabb számú EPIYA C szegmensek is társult gyomor prekancerózus által bizonyított szövettani gyomor atrophiás és metaplasztikus változások és csökkent a szérum pepszinogén I. katalógusa módszerek
a betegek katalógusa Bevettünk 436 fertőzött betegek CAG
a-pozitív törzsek H. pylori katalógusa (188 gyomorrák, 112 nyombélfekély és 136 gastritis), azok között, akik nyilatkoztak, hogy endoszkóppal eredetének tisztázására kapcsolatos tünetek a tápcsatorna felső, vagy átesett gyomor műtéti eltávolítása gyomorrák Egyetemi Kórház /UFMG, Luxemburgo, és Mário Penna kórházak, a Belo Horizonte, Brazília. A legtöbb szereplő egyének (> 80%) volt, az alacsony társadalmi-gazdasági szinten hasonló kulturális szokások, és mindegyik natív Minas Gerais állam az azonos etnikai háttér, mintegy 33% -át a portugál, a 33% -a indián és 33% az afrikai származású, homogén jelen minden tárgyban [29].
a tanulmány által jóváhagyott intézményi etikai bizottságok és beleegyezését adta az összes betegnél. A közlekedés, a kultúra, és mikrobiológiai azonosítása baktérium izolátumok végeztük a korábban leírtak [34, 35].
Szövettan
A csoport a gyomorhurut és nyombélfekély betegek endoszkópos biopsziás mintákat a antrális és corpus típusú gyomornyálkahártya kaptuk a szövettani és mikrobiológiai vizsgálata. Antrális és corpus típusú biopsziás mintákat fixáltuk 10% -os formalin és paraffinba ágyaztuk, és 4-um vastag szövettani metszeteket carbolfuchsin H. pylori
vizsgálat [35] és hematoxycilin és eozinnal hisztológiai értékelés szerint a frissített Sydney rendszer [36]. Abban a csoportban, a gyomor rákos betegek, a fragmenseket kaptuk a gyomorból eltávolítjuk gastrectomián kinyitása után azt a nagyobb görbület mentén egy órán belül reszekció. A tumort szerint osztályozott Lauren [37].
Kitermelése bakteriális DNS katalógusa Bacterium nyert DNS 60 mm-es Petri-csészébe növekedés extraháljuk segítségével QIAmp (Qiagen, Hilden, Németország) szerinti készlet gyártó ajánlásainak, kisebb módosításokkal . Desztillált vizet használtunk, mint a reakció ellenőrzés. A DNS-koncentrációt határoztuk meg spektrofotometriás alkalmazásával NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, NC), és -20 ° C-on tároltuk felhasználásig.
Amplifikálása a H. pylori
-specifikus ure
A és 16S rRNS
gének
A jelenléte a specifikus ure katalógusa A és 16S rRNS
gének szerint értékeltük Clayton et al.
[38] és a Fox és munkatársai katalógusa. [39] határozta meg. A szabványos Tx30a H. pylori
törzset használtuk pozitív kontrollként, és egy Escherichia coli
törzs és desztillált vizet egyaránt alkalmaztunk negatív kontrollokként.
A thermocycler GeneAmp PCR System 9700 (Applied Biosystems, Foster City , CA) használtunk valamennyi reakciókat. Az amplifikált termékeket elektroforézisnek 2% -os agaróz gélen, etidium-bromiddal festjük, és elemeztük egy ultraibolya fény transzilluminátor.
Amplifikálása CAG
Egy gén
CAG
egy gént amplifikáltunk eszközökkel két, korábban leírt primer párok [40, 41]. A H. pylori
törzset a gyűjtemény (1010-1095), ismert, hogy a CAG
egy-pozitív, alkalmaztunk pozitív kontrollként, és Tx30a H. pylori
törzsből hiányzik CAG
egy és desztillált vizet egyaránt alkalmaztunk negatív kontrollokként. A H. pylori
törzseket tekinthető CAG katalógusa A-pozitív, ha legalább az egyik a két reakció pozitív volt.
Amplifikálása 3 'variábilis régióját CAG
Egy fiatal For a PCR-amplifikáció a 3 'variábilis régióját CAG
egy olyan gént (amely tartalmazza a EPIYA szekvenciák), 20 és 100 ng DNS-t adtunk 1% Taq DNS polimeráz puffer-oldattal (KCl, 50 mM és Tris-HCl-10 mM), 1,5 mM MgCI 2, 100 jiM mindegyik dezoxinukleotid, 1,0 U Platinum Taq DNS-polimeráz (Invitrogen, Sao Paulo, Brazília) és 10 pmol mindegyik primerből, összesen oldat 20 pl térfogatban. Az alkalmazott primerek a korábban leírt Yamaoka munkatársai katalógusa. [27]. A reakció körülményei a következők voltak: 95 ° C 5 perc, majd 35 ciklusban 95 ° C 1 perc, 50 ° C-on 1 percig és 72 ° C-on 1 percig, befejezve 72 ° C-on 7 percig. Az amplifikált termékeket elektroforézisnek 1,5% -os agaróz gélen, melyet etidium-bromiddal festjük, és elemeztük egy ultraibolya fény transzilluminátor. A reakció eredményezett termékek 500-850 bp szerint száma EPIYA C. Ez a módszer azt is lehetővé teszi a kimutatási vegyes fertőzés.
Szekvenálása 3 'variábilis régióját CAG
egy
egy jelentős alcsoportját mintákat (körülbelül 75 beteg mindegyik csoport) véletlenszerűen kiválasztott szekvenálás, annak érdekében, hogy erősítse meg a PCR eredményeket. PCR termékeket tisztítottuk a Wizard SV Gel és PCR Clean-Up rendszer (Promega, Madison, MI), a gyártó ajánlásainak megfelelően. Tisztított termékeket szekvenáltuk alkalmazásával BigDye ® Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit egy ABI 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA). A kapott szekvenciákat összehangolták a Eng3 Sequence Közgyűlés Program (elérhető a http: //pbil. Univ-lyon1. Fr /Eng3. Php). Beállítás után nukleotid szekvenciákat átalakult aminosav szekvenciákat BLASTX programot (kapható a: http: //robbanás. NCBI. NLM. NIH. Gov /robbanás. Cgi), és összehasonlítva a szekvenciákat letétbe a GenBank (http: //www. NCBI. NLM. NIH. gov /Genbank /). katalógusa meghatározása szérum OFJ szintek
a szérum OFJ kerültek meghatározásra a betegek gyomorhurut és nyombélfekély egy specifikus ELISA-val (Biohit, Helsinki, Finnország) alkalmazásával a gyártó ajánlásainak megfelelően.
Statisztikai analízis
egy minta mérete legalább 112 alanyok minden csoportban, annak érdekében, hogy azt mutatják, 15% -os különbség a csoportok közötti egy 80% -os teljesítménnyel, alfa 5% -os, és a megbízhatósági intervallum 95% számítására az Epi Info program verzióját 3.5.1 (központok Disease Control and Prevention, Atlanta, Georgia).
közötti társulás száma EPIYA C motívumok és gyomorrák eredetileg értékelték egyváltozós elemzés, és a változók egy p-érték kevesebb, mint 0,2 vontak be a végső modell logisztikus regresszió, kontrollálva az befolyásolja a kora és neme. Azt is értékelték a hatását a nem és az életkor számának EPIYA C szegmens egy modell száma EPIYA C pedig a függő változó és a kor, a nem és a H. pylori katalógusa -asszociált betegségek önálló covariables. A logisztikus modell fitness értékeltük a Hosmer-Lemeshow teszt. Mivel az OFJ-szintet nem normális eloszlású adatok log-transzformált és normálissá vált. Egyesületek voltak, így értékeltük Student t-teszt (átlag ± standard deviáció). Egyesület között több EPIYA C szegmensben, és milyen mértékben a gyomor gyulladás, atrófia és intestinalis metaplasia végezte a két farkú Mann-Whitney teszt. A szignifikancia szint került meghatározásra ap érték ≤ 0,05. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás katalógusa Ezt a munkát támogatták a CNPq, FAPEMIG és INCT, Brazília.
DMM, Queiroz finanszírozza a hatodik keretprogram az Európai Unió, a projekt tartalma (INCO-CT-2006-032136). katalógusa a szerzők eredeti beküldötteknek képeket
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12866_2010_1347_MOESM1_ESM.pdf A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12866_2010_1347_MOESM2_ESM.pdf A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12866_2010_1347_MOESM3_ESM.pdf A szerzők eredeti fájl a 3. ábra

• Közötti megállapodás hiánya tonometriás és gyomornedv részleges széndioxid nyomás
• Downregulációját kötőszöveti növekedési faktor gátolja a növekedést és a invázió gyomorrák sejtek és csökkenti a hashártya terjesztés