Augmentation du nombre de sites de phosphorylation Helicobacter pylori CagA Epiya C augmente le risque de cancer de l'estomac, mais pas ulcer

duodénaux plus grand nombre de Helicobacter pylori
sites de phosphorylation CagA Epiya C augmente le risque de cancer de l'estomac, mais pas ulcère duodénal
Résumé
Contexte
Helicobacter pylori
infection est l'une des infections les plus courantes dans le monde et est associée au cancer gastrique et ulcère gastro-duodénal. On a montré que les facteurs de virulence bactériens tels que CagA pour augmenter le risque de ces deux maladies. Des études ont suggéré un rôle causal des polymorphismes CagA Epiya dans la carcinogenèse gastrique, et il a été montré pour être géographiquement diversifiée. Nous avons étudié les associations entre H. pylori
modèles CagA Epiya et le cancer gastrique et ulcère duodénal, dans une population occidentale ethniquement mélangée du Brésil. CagA Epiya a été déterminée par PCR et confirmé par séquençage. Résultats d'un total de 436 patients ont été inclus, étant 188 avec un cancer gastrique, un ulcère duodénal 112 et 136 avec la gastrite.
Le nombre de Epiya C segments a été significativement associés au risque accru de cancer de l'estomac (OR = 3,08 , IC à 95% = 1,74 à 5,45, p < 10 -3), même après ajustement pour l'âge et le sexe. Augmentation du nombre de Epiya C segments a également été associée à une atrophie gastrique (p = 0,04) et la métaplasie intestinale (p = 0,007). En outre, les patients infectés par le cag
A souches possédant plus d'un segment Epiya C ont montré des niveaux sériques ont diminué de pepsinogène I par rapport à ceux qui sont infectés par des souches contenant une ou moins répétée Epiya C. Conclusions du Sinon, le nombre de Epiya C segments n'a pas associer à un ulcère duodénal.
Nos résultats démontrent que l'infection par les souches de H. pylori abritant plus d'un motif CagA Epiya C a été clairement associée au cancer gastrique, mais pas avec un ulcère duodénal.
plus grand nombre de Epiya C segments a également été associée à des lésions précancéreuses gastriques comme démontré par les changements atrophiques et métaplasiques gastriques histologiques et une diminution des niveaux de l'arrière-plan de pepsinogène I. sériques
Helicobacter pylori
colonise l'estomac de plus de la moitié de la population mondiale et est associée au développement de complications telles que ulcère gastro-duodénal, le cancer gastrique et le lymphome gastrique de tissu lymphoïde associé aux muqueuses [1-4]. Les facteurs qui conduisent quelques individus de développer des maladies associées, alors que la majorité des personnes infectées restent asymptomatiques, sont inconnus, mais ils ont fait l'objet d'intenses recherches. Parmi les facteurs de l'hôte, les polymorphismes du gène de cytokine ont été montré pour augmenter le risque de cancer de l'estomac, en particulier IL1B
-31,
IL1RN et SHON
-307 polymorphismes nucléotidiques simples dans les populations européennes, et IL1RN
dans une population brésilienne [5-9]. facteurs spécifiques à la souche Pathogène ont été fortement étudiée. Parmi ceux-ci, la protéine CagA est acceptée en tant que facteur de risque pour les maladies de l'ulcère gastro-duodénal et le cancer gastrique [5, 10-12]. Dans une étude de notre groupe, l'infection par H. pylori cag
souches A-positives avaient un odds ratio (OR) de 11,9 pour le cancer gastrique, après ajustement pour les polymorphismes d'accueil et d'autres variables, alors que le facteur de l'hôte le plus fort était IL1RN
allèle 2, avec un OR de 1,9 [5].
cag
a appartient à un cag
PAI (île de pathogénicité) que les codes d'un système de type IV de sécrétion (T4SS) associée à une augmentation de la sécrétion d'IL -8, une très forte chimiokines pro-inflammatoires qui participe à la gastrite induite par une infection à H. pylori. Le T4SS est également responsable de l'entrée de la protéine CagA dans les cellules epitheliales gastriques où CagA est phosphorylée sur le résidu de tyrosine dans les motifs de phosphorylation de la région variable carboxi-terminale de la protéine. Ces motifs sont définis comme Epiya (Glu-Pro-Ile-Tyr-Ala) A, B, C et D en fonction de différents acides aminés flanquants. protéines CagA possède presque toujours des segments Epiya A et B qui sont suivies par aucun, un, deux ou trois segments C, dans les souches en circulation dans les pays occidentaux, ou un segment D, dans les pays d'Asie orientale. Le Epiya C et D sont les principaux sites de phosphorylation de CagA. Phosphorylée CagA forme un complexe physique avec SHP-2 phosphatase et déclenche des signaux cellulaires anormaux conduisant à la dérégulation de la croissance cellulaire, la cellule de contact cellulaire et la migration cellulaire, l'allongement des cellules épithéliales et augmentation du chiffre d'affaires des cellules épithéliales, qui augmentent le risque de cellules endommagées acquérir des changements génétiques précancéreuses. Porter le type D Epiya ou multiple C répétitions est associée à une augmentation SHP-2 activité de la phosphatase induite par CagA [13, 14], ce qui soulève la possibilité que l'infection par CagA souches possédant nombre plus élevé Epiya C segments prédispose à des lésions précancéreuses et le cancer gastrique.
en fait, cette hypothèse a été testée dans les pays de l'est, mais les résultats de l'étude sont discordants. Azuma et al
. [15] ont trouvé une proportion accrue de souches Epiya D chez les patients souffrant de gastrite atrophique et cancer de l'estomac, mais d'autres auteurs ont été incapables de reproduire ces résultats [16, 17]. De même, dans les populations occidentales, une association significative entre le cancer gastrique et un nombre accru de Epiya C motifs a pu être démontrée dans deux études [18, 19], peut-être soit par le petit nombre de patients inclus dans les autres études [20-22], ou par /ethnies régionales différences comme déjà démontré pour d'autres H. pylori
virulence marqueurs [23, 24]. En outre, les écarts ont également été démontrée dans des études évaluant le nombre de Epiya C motifs et ulcère duodénal [19, 25], qui mérite des enquêtes profondes parce que l'ulcère duodénal et le cancer gastrique sont mutuellement exclusifs maladies -Associated H. pylori
.
par conséquent, nous avons évalué si l'augmentation du nombre de CagA Epiya C phosphorylation des motifs est associée au cancer gastrique et /ou ulcère duodénal, y compris une grande série de patients pour éviter les biais et pour permettre un ajustement pour l'âge et le sexe dans une population de l'Ouest du Brésil. Depuis l'ulcère duodénal et de cancer de l'estomac sont des maladies mutuellement exclusives, et cag
A est un facteur de risque pour les deux conditions, nous avons également évalué si le nombre de Epiya C segments des souches isolées chez les patients atteints d'ulcère duodénal différait de celle des souches isolé à partir de patients atteints d'un cancer gastrique. Parce que les changements atrophiques et métaplasiques gastriques - lésions précancéreuses - conduisent à une insuffisance de la production de pepsinogène I (PGI) par le chef et les cellules muqueuses du collet dans le corpus et les glandes fundiques, nous avons évalué si le nombre plus élevé de Epiya C motifs a été associée avec le sérum Résultats de niveaux de pepsinogène.
les caractéristiques des patients sont présentés dans le tableau 1. la présence de H. pylori
spécifique de ure
A et 16S ARNr
a été confirmé avec succès par PCR toutes les souches étudiées et la cag
A RFP ont été positifs, par au moins un de la méthode utilisée, dans tous les strains.Table 1 caractéristiques des patients et la distribution des génotypes CagA Epiya selon H. pylori
maladies -Associated

Gastrite 136 (%)
cancer gastrique 188 (en%)
ulcère duodénal 112 (en%)

Âge moyen (SD)
52,5 (16,9)
62,3 (13,9)
43,5 (15,1)
Homme sexe
48 (35,3)
114 (60,6)
53 (47,3)
Epiya-AB
3 (2.2)
3 (1.6)
4 (3.6)
Epiya-ABC
108 (79,4) 107
(56,9)
93 (83,0)
Epiya-ABCC
21 (15,4)
65 (34,6)
15 (13.4)
Epiya-ABCCC
4 (3.0)
13 (6.9)
0 (0,0)
SD, standard Deviation
Détermination du motif CagA Epiya
produits amplifiés par PCR de tous les cag
souches A-positives ont montré des modèles distincts dans région variable de la 3 'cag
A. Un gel d'électrophorèse représentant les différents types CagA Epiya est représenté sur la figure 1. les résultats de la PCR ont été confirmées par séquençage en soixante cinq produits de PCR choisies au hasard parmi les patients de chaque groupe. La figure 1 Electrophorèse des échantillons représentatifs avec chacun des types CagA Epiya observés chez les patients infectés par H. pylori -Associated maladies. Colonne 1: 100 standard pb; Colonne 2: Epiya-AB; Les colonnes 3, 8, 11 et 12: Epiya-ABC; Colonne 4: Epiya-ABC + -ABCCC; Les colonnes 5 et 13: Epiya-ABCC; Colonne 6: Epiya ABCCC; Colonne 7: Epiya-ABCC + -ABCCC; Colonne 9: Epiya-ABC + -ABCC + -ABCCC; Colonne 10:. Epiya-ABC + -ABCC
No Epiya D a été trouvé dans le H. pylori
souches étudiées. La distribution des génotypes Epiya est indiquée dans le tableau 1.
Association entre le nombre de Epiya C segments et le cancer gastrique et ulcère duodénal
Colonisation par des souches pylori
CagA-positifs H. possédant deux ou trois Epiya C motifs était plus fréquemment observée (p < 10 -3) dans le cancer gastrique (78/188, 41,5%) que dans la gastrite (25/136, 18,4%) patients. L'association est restée fortement significative même après ajustement pour l'âge et le sexe au moyen de la régression logistique (tableau 2). Le test de Hosmer-Lemeshow a montré une bonne forme physique du modèle (Chi-carré = 3,98, 8 degrés de liberté, p = 0,86, avec 10 étapes). Sinon, le nombre de Epiya C segments ne pas associer avec ulcère duodénal (tableau 2) .Table 2 Association entre le nombre de CagA Epiya C motifs et H. pylori
maladies -Associated

analyse univariée
analyse multivariée

p
OU

95% CI
p
Gastric cancer
- augmentation de l'âge
< 10-3
1,04
1,03 à 1,06
< 10-3
- Le sexe féminin
< 10-3
0,29
0,18 à 0,48
< 10-3
- à haut risque Epiya (ABCC ou ABCCC)
< 10-3
3,08
1,74 à 5,45
< 10-3
Ulcère duodénal
- L'augmentation de l'âge
< 10-3
1,03
01.02 à 01.05
< 10-3
- Le sexe féminin
0,04
1,26
0,73 à 2,18
0,41
- à haut risque Epiya (ABCC ou ABCCC)
0,29
-
-
- le test de Hosmer-Lemeshow a montré une bonne forme physique du modèle de cancer gastrique (8 degrés de liberté, p = 0,86, avec 10 étapes) et ulcère duodénal (8 degrés de liberté, p = 0,25, avec 10 étapes).
Parce qu'il pourrait être spéculé que le nombre de Epiya C motifs augmente avec l'âge de plus en plus, nous avons également construit un modèle avec le nombre de Epiya C étant la variable dépendante et l'âge, le sexe et H. pylori
maladies -Associated comme covariables indépendantes. segments Augmentation Epiya C n'associaient pas avec l'âge (p = 0,13), le sexe (p = 0,66) et l'ulcère duodénal (p = 0,29), mais est restée associée au cancer gastrique (p < 10 -3, OR = 2,81; IC à 95% = 1,64 -. 4,82) Association entre la colonisation et les maladies de souche mixte
infection par une souche mixte a été observée dans 57 (13,08%) des patients et il était significativement plus fréquente chez les patients atteints de cancer gastrique (38/188, 20,2%) que chez ceux souffrant de gastrite (14/136, 10,3%) avec un OR pour le carcinome gastrique de 2,21 (IC à 95% = 1,10 à 4,50). Dans le cas contraire, une infection mixte a été moins fréquemment observée chez les patients présentant un ulcère duodénal (5/112, 4,5%) avec une tendance à une association négative (p = 0,09) de. Association entre le nombre de Epiya C segments et les niveaux de PGI sérique
Le pepsinogène I sérique étaient significativement plus élevés (p = 0,01) dans l'ulcère duodénal (moyenne 161,67 ± 102,36 mg /L) que dans la gastrite (100.37 ± 70,85 pg /L).
Les patients infectés par le CagA souches possédant deux ou trois segments Epiya C ont montré une diminution des niveaux de PGI par rapport à ceux qui sont infectés par des souches possédant CagA ≤ 1 Epiya segment C (ulcère duodénal: 179,67 ± 83,30 vs 67,01 ± 34,30, respectivement, p = 0,02 et la gastrite: 109.26 ± 85.61 vs. 57,55 ± 34,61, respectivement, p = 0,01).
Association entre le nombre de Epiya C répétitions et des altérations histologiques gastriques et classification des tumeurs
Augmentation du nombre de Epiya C segments a été associée à la présence de lésions précancéreuses, soit une atrophie ( p = 0,04) ou métaplasie intestinale (p = 0,007), mais pas avec les autres paramètres histologiques. En outre, l'infection par des souches portant augmentation des motifs Epiya C n'a pas associé avec le type de tumeur intestinale ou diffuses (p = 0,34) Discussion de
. Dans cette étude, en évaluant une grande série de patients, nous avons démontré que les personnes infectées par H. pylori
souches CagA-positives possédant plus d'un motif Epiya C sont à risque trois fois fois plus élevé de développer un cancer gastrique. Les points forts de notre étude comprennent la taille d'échantillon adéquate, l'identification des souches par PCR avec confirmation par séquençage et l'ajustement pour les facteurs confondants par analyse de régression logistique.
CagA est considéré comme un important facteur de virulence bactérienne associée à la fois adénocarcinome gastrique et ulcère duodénal la maladie [2, 5, 11, 12, 26]. Le nombre et la structure des motifs de phosphorylation semblent stratifier davantage le risque associé à des souches individuelles [18, 27].
Il a été démontré que les modèles H. pylori
CagA Epiya ont une variabilité géographique importante et suivre de près les modes de migrations humaines historiques. Epiya D est un motif asiatique Epiya caractéristique que pratiquement ne se produit pas dans les souches de H. pylori Western [28]. Les Brésiliens forment une population occidentale unique parce que, en dépit des origines multiples et la grande diversité conséquente de l'apparence phénotypique, il y a eu un degré substantiel de reproduction inter-ethnique et donc la plupart des individus ne peut pas être attribué à l'un des groupes fondateurs sur la base de fond génétique, plutôt qu'ils transportent environ 33% des gènes de chacune des grandes courses qui, historiquement, composaient le pays (Caucasiens, Africains et Amérindiens) [29]. Dans ce contexte, il serait prévu de trouver un CagA Epiya D dans les souches de notre H. pylori, comme il a été détecté chez les Amérindiens (en accord avec la théorie selon laquelle un premier temps les gens d'Asie peuplés Amériques qui migrent de l'Asie de l'Est ), mais nous ne détectons une Epiya D dans notre population.
Malheureusement, il y a peu d'études à l'égard de l'association entre Epiya C nombre et H. pylori maladies
associées dans les populations occidentales avec des résultats discordants entre eux. Basso et al
. [19] ont montré que plus grand nombre de segments C Epiya est associée à un carcinome gastrique dans une population caucasienne d'Italie, de manière similaire aux résultats de Yamaoka et al
. [18] l'évaluation des patients américains du Texas. Sinon, aucune association n'a été observée lorsque les patients colombiens ont été évalués dans l'étude de la Yamaoka [18] en conformité avec les résultats obtenus par Acosta et al
. [22], alors que Sicinschi et al
. [21] ont observé des associations entre l'accroissement des segments Epiya C et des lésions précancéreuses. En outre, les résultats non concluants publiés par Argent et al
. [20] l'évaluation de 44 souches provenant de patients africains, les auteurs ont montré la tendance de l'association entre CagA avec deux ou plusieurs segments Epiya C et le cancer gastrique.
Ces différences peuvent être expliquées par des conceptions différentes de l'étude, la taille de l'échantillon, les populations et la diversité géographique de H . pylori
marqueurs de pathogénicité, en ce qui concerne le motif CagA Epiya, en soulignant la nécessité d'étudier les différentes régions géographiques.
les résultats de cette étude ont montré que nombre plus élevé de Epiya C segments est associée au cancer gastrique et avec pré les lésions -malignant, l'atrophie et la métaplasie intestinale de la muqueuse du corps dans le groupe des patients souffrant de gastrite. En accord avec ces résultats, nous avons également montré que la concentration sérique de PGI a été deux fois diminué chez les patients infectés par le cag
A-positives souches avec deux ou trois motifs Epiya C. Parce que le PGI est sécrétée par les cellules principales et des cellules muqueuses du collet dans le corpus et fundiques glandes, les niveaux sériques IGP reflètent l'état fonctionnel et morphologique de la muqueuse gastrique oxyntique; ainsi, les changements métaplasiques /atrophiques gastriques conduisent à une diminution des taux sériques IGP [30, 31]. Bien que la muqueuse du corpus des patients atteints de H. pylori Associées ulcère duodénal est soit légèrement ou non enflammé, les taux sériques du PGI ont également diminué chez les patients présentant un ulcère duodénal infectés par des souches contenant plus grand nombre de Epiya C segments.
Les résultats de la présente étude renforcer le rôle potentiel du CagA polymorphisme dans le développement du cancer de l'estomac en accord avec les résultats des études précédentes [18, 19]. Cependant, nous ne pouvons pas exclure la possibilité que la constitution génétique de l'hôte, plus que la souche de bactérie, pourrait prédisposer à la gastrite atrophique et les souches de H. pylori portant augmentation du nombre de Epiya C répétitions aurait un avantage sur les autres souches en colonisant le nouvel environnement gastrique ou encore un jeu plus complexe des deux mécanismes.
en ce qui concerne l'ulcère duodénal, aussi les résultats des études sont discordants [19, 25]. Nos résultats sont en accord avec ceux rapportés par Basso et al
. [19] qui a également n'a pas trouvé d'association entre la maladie et le nombre de Epiya C segments dans une population italienne. Notamment, aucun patient avec ulcère duodénal de notre cohorte a été colonisée par CagA possédant trois segments Epiya C. Comme suggéré par Yamaoka et al
. [18], il est possible que des souches avec un nombre plus élevé de Epiya C segments peuvent être moins résistantes à l'acide [18].
Nous avons également évalué si la colonisation par différentes souches (infection mixte) pourrait être associée à des résultats de la maladie. Nous avons constaté que les patients atteints de cancer gastrique ont été significativement plus souvent colonisées par des souches mixtes, alors que les patients atteints d'ulcère duodénal avaient une tendance à moins mélangé souche colonisation. Il est possible que les patients atteints d'un cancer gastrique auraient des zones de muqueuse gastrique montrant la transformation cancéreuse, alternant avec des zones d'atrophie, une métaplasie intestinale, la dysplasie et la muqueuse normale, chacun d'entre eux représentant des microenvironnements qui seraient sélectivement avantageux d'infections mixtes [32, 33 ].
Conclusions
en conclusion, nous avons constaté que l'infection par H. pylori
souches CagA-positives hébergeant plusieurs Epiya C répétitions est associée à des lésions précancéreuses gastriques et cancer de l'estomac, mais pas avec l'ulcère duodénal dans un plan ethnique diversifié, mélangé, population de l'Ouest.
Bien que l'infection par H. pylori cag
souches a-positives est un facteur de risque pour les maladies mutuellement exclusives, le cancer gastrique et ulcère duodénal, des souches de CagA possédant plus grand nombre de Epiya C segments étaient associée au cancer gastrique, mais pas avec l'ulcère duodénal.
plus grand nombre de Epiya C segments a également été associé à des lésions précancéreuses gastriques comme démontré par les changements atrophiques et métaplasiques gastriques histologiques et une diminution des niveaux de pepsinogène I. sériques
Méthodes
patients
Nous avons inclus 436 patients infectés par le cag
A-positives souches de H. pylori
(188 avec le cancer gastrique, un ulcère duodénal 112 et 136 avec la gastrite), parmi ceux qui ont été soumis à l'endoscopie à préciser l'origine des symptômes liés au tractus gastro-intestinal supérieur ou ayant subi une chirurgie gastrique pour enlever le carcinome gastrique à l'hôpital universitaire /UFMG, Luxemburgo et Mário Penna Hôpitaux, à Belo Horizonte, au Brésil. La plupart des individus inclus (> 80%) étaient de faible niveau socio-économique avec les habitudes culturelles similaires, et tous étaient originaire de l'État du Minas Gerais avec la même origine ethnique, environ 33% des Portugais, 33% des Amérindiens et 33% de l'Afrique ascendance, homogène présent dans chaque sujet [29].
L'étude a été approuvée par les comités d'éthique institutionnels et le consentement éclairé a été obtenu de tous les patients. Le transport, la culture, et l'identification microbiologique des isolats bactériens ont été réalisées comme décrit précédemment [34, 35] histologie
. Dans le groupe de la gastrite et les patients présentant un ulcère duodénal, des échantillons de biopsie endoscopique de la antrale et de la muqueuse gastrique oxyntique ont été obtenus pour l'étude histologique et microbiologique. biopsies antrales et pariétales ont été fixés dans du formol à 10% et noyés dans de la cire de paraffine et des coupes histologiques de 4 um d'épaisseur ont été colorées avec carbolfuchsine H. pylori
enquête [35] et hematoxycilin éosine pour évaluation histologique selon la système Sydney mise à jour [36]. Dans le groupe des patients atteints d'un cancer de l'estomac, les fragments ont été obtenus à partir de l'estomac enlevé par gastrectomie après l'avoir ouvert le long de la grande courbure à une heure de résection. La tumeur a été classée selon Lauren [37] Extraction de l'ADN bactérien
Bactérie ADN obtenu à partir Petri croissance de 60 mm de plat de. A été extrait en utilisant le QIAmp (QIAGEN, Hilden, Allemagne) Kit selon les recommandations du fabricant avec des modifications mineures . De l'eau distillée a été utilisée comme contrôle de réaction. La concentration en ADN a été déterminée par spectrophotométrie en utilisant NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, Wilmington, Caroline du Nord) et stocké à -20 ° C jusqu'à ce que l'amplification de l'utilisation. H. pylori
spécifique de
ure A et ARNr 16S
gènes
La présence d'un de ure spécifique et les gènes d'ARNr 16S a été évaluée en fonction de Clayton et al.
[38] et Fox et al
. [39] respectivement. la souche La norme Tx30a H. pylori a été utilisé comme témoin positif, et une souche d'Escherichia coli
et de l'eau distillée ont tous deux été utilisés comme témoins négatifs.
Le thermocycleur PCR System GeneAmp 9700 (Applied Biosystems, Foster City , CA) a été utilisé pour toutes les réactions. Les produits amplifiés ont été soumis à une électrophorèse dans un gel d'agarose à 2%, colorés avec du bromure d'éthidium et on les analyse dans un transilluminateur lumière ultraviolette. D'amplification du gène cag
The cag
un gène a été amplifié par des moyens de deux paires d'amorces décrites précédemment [40, 41]. A H. pylori
souche de notre collection (1010-1095), connu pour être CAG
A-positif, a été utilisé comme témoin positif, et Tx30a H. pylori souche
défaut cag
A et de l'eau distillée ont tous deux été utilisés comme témoins négatifs. Amplification de H. pylori
souches ont été considérées comme CAG
A-positif quand au moins une des deux réactions a été positive. De la région variable 3 'de cag
A
Pour l'amplification par PCR de la région variable de la 3 'du cag
Un gène (qui contient les séquences Epiya), de 20 à 100 ng d'ADN ont été ajoutés à une solution de 1% d'ADN Taq tampon de polymerase (KCl 50 mM et Tris-HCl 10 mM), MgCl 1,5 mM 2, 100 uM de chaque désoxynucléotide, 1,0 U Platinum Taq DNA polymerase (Invitrogen, São Paulo, Brésil), et 10 pmol de chaque amorce, pour un volume total de solution de 20 pi. Les amorces utilisées ont été précédemment décrits par Yamaoka et al
. [27]. Les conditions de réaction étaient les suivantes: 95 ° C pendant 5 minutes, suivi par 35 cycles de 95 ° C pendant 1 minute, 50 ° C pendant 1 minute, et 72 ° C pendant 1 minute, en terminant par 72 ° C pendant 7 minutes. Les produits amplifiés ont été soumis à une électrophorèse dans un gel d'agarose à 1,5% qui a été coloré avec du bromure d'éthidium, et on l'analyse dans un transilluminateur lumière ultraviolette. La réaction a donné les produits de 500-850 pb en fonction du nombre de Epiya C. Cette méthodologie permet également la détection d'une infection mixte.
Le séquençage de la région variable de la 3 'cag
un
Un sous-groupe important de échantillons (environ 75 patients de chaque groupe) a été sélectionné au hasard pour le séquençage, afin de confirmer les résultats de la PCR. Les produits de PCR ont été purifiés avec le SV Gel Wizard et PCR système Clean-Up (Promega, Madison, MI) selon les recommandations du fabricant. Les produits purifiés ont été séquencées en utilisant un BigDye Terminator v3.1 Kit Cycle Sequencing ® dans un analyseur génétique 3130 ABI (Applied Biosystems, Foster City, CA). Les séquences obtenues ont été alignées à l'aide du Programme de séquence d'assemblage CAP3 (disponible à partir de: http:... //PBIL univ-Lyon1 fr /cap3 php). Après l'alignement, les séquences nucléotidiques ont été transformées en séquences d'acides aminés en utilisant le programme Blastx (disponible à partir de: http:..... //Explosion NCBI nlm nih gov /Explosion cgi) et par rapport à des séquences déposé dans le GenBank. (http:.... //www NCBI nlm nih gov /Genbank /)
Détermination des niveaux de PGI du sérum
les concentrations sériques de PGI ont été déterminées chez les patients atteints gastrite et ulcère duodénal par un ELISA spécifique (Biohit, Helsinki, Finlande) selon les recommandations du fabricant.
analyse statistique
une taille d'au moins 112 sujets dans chaque groupe d'échantillons, afin de montrer une différence de 15% entre les groupes avec une puissance de 80%, alpha de 5%, et l'intervalle de confiance à 95% a été calculée avec la version Epi info du programme 3.5.1 (Centres for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA).
Association entre le nombre de Epiya C motifs et cancer de l'estomac a été initialement évalués dans l'analyse univariée et variables avec une valeur p inférieure à 0,2 ont été inclus dans le modèle final de régression logistique, en contrôlant les influences de l'âge et le sexe. Nous avons également évalué l'effet de l'âge et le sexe du nombre de Epiya C segments dans un modèle avec le nombre de Epiya C étant la variable dépendante et l'âge, le sexe et H. pylori
maladies -Associated covariables indépendantes. Le modèle de remise en forme logistique a été évaluée avec le test de Hosmer-Lemeshow. Parce que les niveaux IGP ne sont pas normalement distribués le journal de données transformé et est devenu normal. Les associations ont été, par conséquent, évalué par le test t de Student (moyenne ± écart-type). Association entre le nombre de Epiya C segments et le degré d'inflammation gastrique, atrophie et métaplasie intestinale a été fait par le Mann-Whitney test à deux queues. Le niveau de signification a été fixé à une valeur de p ≤ 0,05.
Déclarations Remerciements
Ce travail a été soutenu par des subventions du CNPq, FAPEMIG et INCT, Brésil.
DMM, Queiroz est financé au titre du sixième Programme-cadre de l'Union européenne, le contenu du projet (INCO-CT-2006-032136). »soumis d'origine des fichiers pour les images
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• L'absence d'accord entre les tonométrique et le suc gastrique tension de dioxyde de carbone partielle
• La régulation négative de facteur de croissance tissulaire inhibant la croissance et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques et atténue la dissémination peritoneale