análise de proteoma de adenocarcinoma da cárdia gástrica humana pelo laser microdissecção de captura

análise de proteoma de adenocarcinoma da cárdia gástrica humana por microdissecção de captura a laser da arte abstracta
Fundo
A incidência de adenocarcinoma gástrico cardíaca (GCA) tem vindo a aumentar nas últimas duas décadas na China, mas as alterações moleculares relacionados com a carcinogênese têm não foram bem caracterizados.
Métodos
neste estudo, foi utilizada uma abordagem proteômica comparativa para analisar as cárdia gástrico malignas e não malignas células epiteliais isoladas por navegado captura a laser microdissecção (LCM) de espécimes cirúrgicos pareadas de GCA humano.
Resultados
Vinte e sete pontos correspondentes a 23 proteínas foram consistentemente diferencialmente regulado. Quinze proteínas foram mostrados para ser regulada para cima, enquanto oito proteínas mostraram ser regulada em células malignas em comparação com o epitélio colunar não-malignas. As proteínas identificadas parecia estar envolvida no metabolismo, chaperona, antioxidação, transdução de sinal, apoptose, proliferação de células, e diferenciação. Além disso, a expressão de HSP27, 60, e Prx-2 em amostras GCA foram ainda confirmada por mancha imuno-histoquímica e análise de Western.

Conclusão Estes dados indicam que a combinação de LCM navegado com 2-DE proporciona uma estratégia eficaz para a descoberta de proteínas que são diferencialmente expressas em CGC. Tais proteínas podem contribuir para elucidar os mecanismos moleculares de carcinogénese GCA. Além disso, a combinação proporciona biomarcadores clínicos potenciais que ajuda na detecção precoce e fornecer potenciais alvos terapêuticos.
Fundo
Várias análises de dados de incidência de câncer abatidos a partir de países ocidentais têm revelado taxas rapidamente crescentes de adenocarcinoma do esôfago e cárdia gástrica em Nas últimas décadas, em comparação com as taxas estáveis ​​e em declínio para o carcinoma de esôfago de células escamosas (SCC) e adenocarcinoma gástrico distal (DGA) [1-3]. Este fenômeno também é evidente na China, exceto que o aumento da incidência de adenocarcinoma gástrico da cárdia (GCA) aparece notavelmente maior do que a incidência de câncer de esôfago. As evidências indicam que GCA é uma entidade clínica distinta como sua patogênese e fatores de risco são bastante diferentes dos DGA. Portanto, GCA é muito mais prevalente, com uma maior incidência de metástases linfonodais e um pior prognóstico do que DGA [4]. A incidência anual de ACG é 50 /100.000 e pode mesmo ser tão alta como 190/100000 em várias regiões da China [5]. A natureza relativamente assintomática nas fases iniciais da doença e a falta de testes de rastreio adequados resultaram na maioria dos pacientes diagnosticados GCA ser numa fase já avançada da doença. Assim, é necessário compreender o mecanismo molecular de carcinogénese e para identificar os biomarcadores para o diagnóstico precoce e o tratamento eficaz da ACG humano.
Recentemente, o proteoma tem emergido como um componente do complemento do genoma. A suposição é de que poderia ajudar drasticamente para desvendar os mecanismos bioquímicos e fisiológicos de doenças multivariados complexos ao nível molecular funcional. Embora a mutação genética e /ou a expressão do gene errante pode ser a base de uma doença, as bases bioquímicas para a maioria das doenças são causadas por defeitos de proteína. Portanto, uma análise de abundância global de proteínas em tumores humanos, chamada proteômica câncer, pode oferecer muitas oportunidades e desafios na identificação de novos marcadores tumorais e alvos terapêuticos, bem como na compreensão patogênese tumor. Actualmente, electroforese em gel bidimensional (2-DE) e espectrometria de massa (MS) são as ferramentas mais amplamente utilizado para a separação e identificação de proteínas. No entanto, a heterogeneidade é sempre uma preocupação em estudos de tecido tumoral humano. Embora a cultura de células é uma abordagem para ultrapassar este problema, ele pode não representar com precisão os acontecimentos moleculares que ocorrem no tecido real a partir da qual eles foram derivados [6]. Uma comparação entre as linhas de células da próstata humana e células de tumor a partir dos mesmos doentes mostrou que 20% dos perfis de proteínas foram alterados [7]. microdissecação de captura laser (LCM) é um desenvolvimento recente, que pode ser usada para adquirir subpopulação altamente representativa de células a partir de amostras de tecidos heterogéneos complexos [8]. Esta tecnologia tem sido utilizado com muito sucesso em um diversificado leque de estudos utilizando análise de jusante para o DNA e os níveis de ARN, incluindo a expressão gênica global de perfis [9] e análises do proteoma de próstata [7], cólon [10], hepatocelular [11 ], mama [12], e tumores pancreáticos [13]. No entanto, a combinação de 2-DE e MS nunca foi aplicada ao estudo da GCA humano.
Este estudo tem como objetivo delinear a carcinogênese do GCA e identificar proteínas associadas a doenças específicas-GCA como potenciais biomarcadores clínicos para a detecção precoce e novos alvos terapêuticos. Foi realizada navegada LCM para enriquecer tanto as células cardíacas gástricas malignas e não malignas epiteliais de espécimes cirúrgicos pareadas de GCA humano. As proteínas extraídas a partir destas células foram separadas por 2-DE. manchas diferencial de proteínas foram identificadas por impressão digital de massa de péptido (FMP) com base na dessorção de laser assistida pela matriz /ionização por espectrometria de massa de tempo-de-voo (MALDI-TOF MS) e a pesquisa do banco de dados. A validade destes resultados foi confirmada por imuno-histoquímica e Western-blot análises.
Métodos
Materiais
tiras de IPG (pH 3-10 não-linear) e soluções tampão de IPG (pH 3-10 não-linear) foram adquiridos de Amersham Pharmacia Biotech (APB, Suécia). DTT, ureia, tioureia, base Tris, TX-100, CHAPS, a glicina, a acrilamida, a metileno, SDS, TEMED, persulfato de amónio, nitrato de prata, Tripsina (grau de sequenciação), ACN, e o TFA foram adquiridos a Sigma (St. Louis, MO, EUA). Finalmente, o cocktail inibidor de protease completo foi a partir de Roche (Lewes, Reino Unido). água de grau Milli-Q foi utilizado para todas as soluções.
amostras GCA
Nove pares de adenocarcinoma da cárdia gástrica humana e seus tecidos cárdia nontumourous adjacentes foram obtidos dentro de 30 minutos após a ressecção cirúrgica no segundo hospital afiliada de Xi ' um Jiaotong University em 2005 (Tabela 1). A fim de evitar áreas óbvias de úlcera ou necrose, as amostras foram adquiridos a partir dos bordos dos tumores. Eles foram imediatamente congelados em azoto líquido e armazenado a -80 ° C até à sua utilização. consentimentos informados foram obtidos a partir de todos os pacientes. Enquanto isso, dois patologistas experientes avaliaram a classificação tumor por um exame microscópico dos samples.Table 1 Os dados clínicos e histológicos de amostras de tumores de pacientes
Case

Age

Gender

Locationa)

Size(cm)

Grade

1
58
M
Within 2 cm de JGE
1,5 × 2
moderadamente diferenciado Página 2
63
M
Dentro de 2 cm de JGE
5 × 6
moderadamente diferenciado Sims 3
46
M
Dentro de 2 cm de JGE
4 × 5
moderadamente diferenciado 4
60
M
Dentro de 2 cm de JGE
2 × 2,5
Bem diferenciado
5
73
M
Dentro de 2 cm de JGE
3 × 1

• significado clínico da gastrectomia paliativa na sobrevida de pacientes com câncer gástrico avançado incurável: a revisão e meta-analysis
• MicroRNA-645, up-regulamentada em adencarcinoma humana da junção do esôfago gástrica, inibe a apoptose, visando supressor de tumor IFIT2