Um modelo de rato consciente de íleo gástrica usando endpoints

clinicamente relevante um modelo de rato consciente de íleo gástrica usando endpoints clinicamente relevantes da arte abstracta
Fundo
íleo gástrico é um problema clínico sem solução e tratamento atual é limitado a medidas de suporte. Modelos de animais anestesiados utilizando íleo, tiras de músculo ou de células de músculo liso isolado não reproduzem de forma adequada a situação clínica. Assim, os estudos anteriores que utilizam estas técnicas não conduziram a uma compreensão clara da fisiopatologia do íleo. A viabilidade do uso de ingestão de alimentos e produção fecal como parâmetros simples, clinicamente relevantes para o monitoramento íleo em um modelo consciente do rato foi avaliada através da avaliação do curso de gravidade e tempo de vários insultos conhecidos por causar íleo.
Métodos
atrasada ingestão de alimentos e produção fecal associada ao íleo foi monitorada após a injeção intraperitoneal de endotoxina, a laparotomia com manipulação do intestino, lesões térmicas ou pancreatite aguda induzida ceruleína. A correlação da ingestão de alimentos diminuiu após a injecção de endotoxina com íleo gástrica foi validada medindo o esvaziamento gástrico. Determinou-se também o efeito de endotoxina no nível de actividade geral e o comportamento alimentar. trânsito do intestino delgado foi medido utilizando um fenol marcador vermelho.
Resultados
Cada insulto resultou em uma diminuição transitória e comparáveis ​​na ingestão de alimentos e produção fecal consistentes com o quadro clínico de íleo. Os pontos finais foram altamente sensíveis a pequenas alterações em baixas doses de endotoxina, a extensão da manipulação do intestino, e a dose ceruleína. O atraso na ingestão de alimentos diretamente correlacionado com o esvaziamento gástrico retardado. Mudanças no comportamento geral de atividade e alimentação eram insuficientes para explicar a ingestão de alimentos diminuiu. trânsito intestinal manteve-se inalterada nos momentos medidos.
Conclusão
A ingestão de alimentos e produção fecal são marcadores sensíveis da disfunção gástrica em quatro modelos experimentais de íleo. No ratinho, o esvaziamento gástrico retardado parece ser a principal causa do efeito anoréxico associado ao íleo. disfunção gástrica é mais importante do que a disfunção do intestino delgado neste modelo. A recuperação da função do estômago parece ser simultânea à recuperação do cólon.
Fundo
Ileus é uma ocorrência pós-cirúrgica comum caracterizada por disfunção transitória da função gastrointestinal. Além de cirurgia abdominal, sépsis, traumatismo, pancreatite, agentes anestésicos, analgésicos opióides e também estão associadas com o íleo. Os mecanismos de íleo envolvem sinais inibidores neurais e factores humorais, incluindo agentes parácrinos e hormonas do intestino [1-3]. Não existe um único evento ou fator foi claramente implicados como responsáveis; é mais provável que vários mediadores actuar em vários momentos ao longo do curso da doença. Estes mediadores comunicar ao longo do tracto gastrointestinal. Por exemplo, a manipulação cirúrgica do intestino distal pode induzir disfunção gástrica [4-8]. Uma vez estabelecido, o íleo é pensada para resolver a taxas diferentes em humanos, com inibição funcional com duração de algumas horas no intestino delgado, de 1-2 dias no interior do estômago e 2-3 dias no interior do cólon [9, 10].
Muitos estudos recentes de íleo chamaram a atenção para intestino delgado disfunção do músculo liso em tiras musculares isoladas [11-14]. A fraqueza do método tira muscular, no entanto, é a incapacidade de examinar as interações complexas, incluindo interações cérebro-intestinal ou órgão reflexos neurais específicas. Da mesma forma, in vitro
preparações exigem colheita de tecidos para analisar a condição e não permitem uma abordagem de sistemas para o problema do íleo. A disponibilidade de informações sequência genômica completa no rato fez a aplicação de uma abordagem de sistemas viável utilizando análise de expressão gênica global. No entanto, as caracterizações fenotípicas de íleo em modelos animais que fornecem informações para todo o sistema estão faltando. Desenvolvimento de um modelo deste tipo no ratinho seria útil.
No ambiente clínico, resolução de íleo é determinado pela retomada do comportamento alimentar normal e a passagem de flatos ou fezes. Apesar do facto de que a ingestão de alimentos e produção fecal são medidas simples de função gastrointestinal que não foram analisados ​​rigorosamente em modelos animais de íleo. Descrevemos aqui um modelo de rato consciente de que utiliza a ingestão de alimentos e produção fecal para monitorar o tempo de curso do íleo, que permite a medição de ambos a magnitude e a duração da condição de, no mesmo animal. Esta abordagem integrativa para definir o fenótipo de íleo podem facilitar as investigações de potenciais intervenções clinicamente relevantes ou estratégias preventivas. Além disso, este modelo de rato consciente oferece a oportunidade para estudar os eventos moleculares associados ao íleo.
Métodos Animais

ratinhos machos C3H, 8-12 semanas de idade, foram usadas durante todo o estudo. Os ratos foram mantidos com uma luz de 12 horas ciclo /escuro e dado livre acesso a ração padrão para roedores e água. Para o estudo de monitorização contínua da ingestão de alimentos, os ratos receberam 20 mg de grânulos de alimento dustless (Bio-Serv, Frenchtown, NJ). Todos os procedimentos foram aprovados e monitorados pela Universidade de Utah Institutional Animal Care e Use Committee.
A ingestão de alimentos e medição da saída fecal
ratos foram separados em gaiolas individuais com livre acesso a água e uma quantidade tarado de alimentos. Comida, massa fecal e rato foram medidos a cada 12 horas no início de cada escotofase e fotofase (07:00 e 19:00). A quantidade de comida consumida ao longo do período de 12 horas foi calculada como a diferença entre a massa de comida no final do período e da quantidade de alimento no início do período. produção fecal foi determinada a partir da massa de partículas fecais recolhidos e medidos no fim do período de 12 horas. O efeito potencial de desidratação pelota fecal ao longo do período de 12 horas foi abordada em estudos-piloto em que íleo foi induzida utilizando tanto a 0,1 mg /kg de LPS ou laparotomia seguido pela manipulação do intestino 4 minutos, bem como os controlos correspondentes. pelotas fecais foram coletadas a cada 12 horas e produção fecal foi determinada em três maneiras: 1) determinação da massa imediatamente após a coleta (como relatado neste estudo), 2) a determinação da massa depois de um período adicional de desidratação 24 horas, e 3) pela contagem pelotas fecais . A diminuição da produção fecal em relação aos controlos, após a indução íleo foi semelhante e não é significativamente diferente entre os três métodos de medição (dados não mostrados). Concluiu-se que o efeito potencial de desidratação foi inconsequente. Após um período de aclimatação de três dias, os ratinhos foram distribuídos aleatoriamente em grupos experimentais e um grupo de simulação. A coleta de dados iniciada 24 horas antes da indução de íleo e continuou após a indução até que um (baseline) padrão circadiano normal da alimentação e de saída fecal retornado. Para o controlo da ingestão de alimentos contínuo, os ratos foram colocados em câmaras de metabólicas individuais com livre acesso à água. 20 mg dustless pelotas do alimento individuais foram entregues sob demanda usando um sistema Coulbourn Instruments Habitest (Allentown, PA), equipado com um alimentador de pellet e comedouro. A presença de uma pastilha de comida dentro da calha de luz emitida a partir bloqueados um díodo emissor de luz que alcança um fotodetector. Quando o rato removidas do pelete, um novo sedimento foi entregue. Esta troca foi automaticamente monitorados e registrados pelo programa de software Estado Graphic Notation 2 (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Os ratos foram aclimatados à gaiola durante 4 dias antes da coleta de dados.
Indução de íleo
Após períodos de aclimatação e de recolha de dados de base, íleo foi induzida 30 minutos antes escotofase salvo indicação em contrário. Para imitar sepse, lipopolissacarídeo (E. coli O111
: B4, List Biological Laboratories, Campbell, CA) foi administrada por injecção intraperitoneal. A relação dose-dependente da endotoxina na ingestão de alimentos e produção fecal foi investigada através da determinação dos intervalos de tempo para cada ponto final após a administração de 0,005 kg de massa, 0,01, 0,02, 0,04, 0,1, 0,2, e 0,4 mg /rato de endotoxina. Os ratinhos de controlo receberam um volume semelhante de solução salina transportadora. O íleo pós-cirúrgico foi induzido em ratos anestesiados com isoflurano, quer por laparotomia seguido pela manipulação do ceco durante 1 minuto ou laparotomia, a evisceração em uma esponja salina humedecido e manipulação do intestino delgado, ceco e cólon para um tempo total de manipulação de 4 minutos . Manipulação foi realizada utilizando algodão derrubado cotonetes. Após o encerramento da incisão com suturas, o rato foi removido da anestesia e deixados a recuperar sob uma lâmpada de aquecimento durante 30 minutos antes da recolha de dados é reiniciada. Para avaliar os efeitos da lesão térmica, uma área de superfície corporal (TBSA) queimadura total de escaldadura 20% foi induzida em ratos a partir do qual o cabelo troncular foi removido. A queimadura escaldadura foi induzida por imersão da pele dorsal expostos em 70 ° C de água, durante 7 segundos. Imediatamente após a lesão por queimadura, os ratinhos foram administrados 1 mL de injecção intraperitoneal (IP) solução de Ringer lactato. Ratos receberam 0,5 ml de LR IP a cada 12 horas por 72 horas após a lesão por queimadura. Os animais de controlo tinha cabelo tronco removido e recebeu um curso de tempo similar de anestesia e reanimação com LR. A pancreatite aguda foi induzida em ratos a seguir a um período de jejum de 18 horas usando 3 ou 7 injecções IP horárias de ceruleína (50 ug /kg /dose). ratos de controlo com tratamento simulado receberam volumes semelhantes de suporte (0,1% de BSA em PBS). O momento das injecções foi coordenado de tal modo que a última injecção ocorreu no início da escotofase.
Esvaziamento gástrico e trânsito intestinal
Depois de uma 2 horas de jejum para o conteúdo do estômago vazio, os ratinhos receberam 200 ul de um 1.5% metilcelulose (v /w), 0,5% (w /v) de solução de vermelho de fenol em solução salina normal, por gavagem. Trinta minutos após a administração por sonda, os ratinhos foram sacrificados por deslocamento cervical, realizada uma laparotomia e o estômago isolado por aperto no duodeno próximo do piloro e do esófago no cárdia. Todo o procedimento de sacrifício para fixação foi realizada em menos de um minuto. O GIT foi removida, separando o estômago a partir do intestino. O intestino delgado foi dissecada do ceco /cólon e dividido em quatro segmentos de comprimento iguais pela bisection sequencial. A quantidade de vermelho de fenol nos segmentos do estômago e intestinais foi determinada espectrofotometricamente depois de homogeneização, tal como descrito [15]. O esvaziamento gástrico foi avaliado como a percentagem de corante que permanece no estômago em relação à quantidade total de corante recuperado em um grupo de padronização de murganhos que foram sacrificados imediatamente após a administração por sonda. trânsito intestinal foi determinada medindo a compartimentação de corante dentro dos pequenos segmentos do intestino e do cólon numerados 1-5, proximal para distal. O centro geométrico de passagem de corante foi calculada para cada animal como (Σ (% de corante por número de segmento segmento X) /100) como descrito [16].
Pressão arterial média
Os ratinhos foram anestesiados com isoflurano e colocado sobre a 37 ° C de aquecimento pad. Uma cânula de polietileno (PE 10), ligado a um transdutor de pressão, foi inserido aproximadamente 5 mm na artéria femoral. pressão arterial média e frequência respiratória (contados mais de 1 minuto) foi registrada a cada cinco minutos. Depois de 10 minutos de controlo para garantir a estabilidade de pressão e taxa respiratória, o LPS (25 ug /ml, em doses de 0,1 e 0,4 mg /kg) ou veículo foi injectado IP. A pressão arterial ea freqüência respiratória foi registrada a cada cinco minutos durante um total de 1 hora. monitoramento
Atividade
imagens de vídeo digitais foram gravados usando um sistema baseado em computador pessoal constituído por uma webcam (PC-Cam 300, Creative Labs, Milpitas , CA) e WebCam Control center versão 5.6 software http:.. //www webcam de control-center com. A câmera foi colocada acima de quatro gaiolas de mouse padrão com tops de arame. Em vez de areia, uma única toalha de papel picado foi colocada em cada gaiola para a cama. Uma luz câmara escura equipada com uma única lâmpada de 15 watts e um filtro Kodak Safelight GBX-2 (Eastman Kodak, Rochester, NY) fornecida iluminação. ratos individuais foram colocados em cada gaiola com acesso livre a água e uma quantidade tarada de alimentos. A fim de manter uma visão desobstruída, a água foi fornecida em um frasco de vidro e de alimentos foi limitada a 4 peletes Rodent Chow padrão (cerca de 5 g cada). Os ratos foram aclimatados às gaiolas durante 5 dias antes da coleta de dados. Os ratinhos foram administrados solução salina, 0,1 mg /kg de LPS ou 2 mg /kg de LPS de um modo cego 30 minutos antes da escotofase. As imagens foram gravadas em 1 imagem por segundo durante 10 segundos a cada 10 minutos durante 36 horas. Os investigadores cegos para o tratamento marcou as imagens gravadas para atividade de mouse e induziu rato movimento das pelotas do alimento. Atividade foi marcado se o movimento total do corpo do rato foi evidente em nenhuma das imagens de 10 segundos. Da mesma forma, o movimento da pelota comida foi marcado, se a posição de qualquer um dos peletes de alimento eram diferentes quando as imagens 10 foram comparados. Novas pelotas do alimento foram colocadas e comida em massa registrada em intervalos de 12 horas correspondente a escotofase e analisa fotofase.
Estatística As comparações estatísticas
foram feitas usando fatorial ANOVA ou medidas repetidas ANOVA (para análises curso de tempo) e Fisher protegido menos significativo diferença (PLSD) testes post-hoc. As comparações foram consideradas estatisticamente significativas na P Art < 0,05. Os valores são expressos como média ± SEM, a menos que os dados de ratos individuais são mostrados.
A fim de determinar a dose do efeito mediano de LPS na ingestão de alimentos e produção fecal, os dados de 12-horas (primeira noite) foram ajustados a uma dose curva -response. O modelo tinha uma forma de proporcionalidade inversa com deslocamentos:
A ingestão de alimentos
= A
+ (BA) * D
m
/(Dose
+ D
m
)
+ erro
onde dose
é a dose da droga, a
é a ingestão mínima de alimentos em doses arbitrárias grandes (assíntota horizontal), B
é a ingestão de base alimentar (quando a dose
= 0) e D
m
é a dose do efeito mediano, que é a dose à qual a ingestão de alimentos está a meio caminho entre a linha de base B Comprar e mínimo A
. O erro
termo reflete a variabilidade entre animais de ingestão de alimentos, presume-se ter distribuição normal com média 0 e variância proporcional à resposta: erro ~ N (0, s
2 (Consumo Alimentar ))
. O ajustamento da variabilidade dependendo da resposta foi necessário porque a variabilidade entre animais diminuiu como a diminuição da ingestão de alimentos. Uma vez que cada ponto de dados corresponde a um rato diferente, as observações são independentes. O modelo anterior foi estendido a todos os pontos de tempo com a modelagem da
de dose-efeito médio D m
como uma função do tempo:
D
m
(T) = D
m
(1) c
T
, onde T
é o tempo em "noites"
que é para cada noite a dose necessária para produzir um efeito médio é aumentado c
fold. Nós também adicionamos dois termos de efeito aleatório: entre-rato variabilidade da dose do efeito mediano D
(1) m
(em log-escala) e da linha de base a ingestão de alimentos B
. Estes termos específicos do rato nos permitem acomodar a dependência dentro do rato das observações.
Resultados
endotoxina transitoriamente diminuição da ingestão de alimentos e produção fecal de uma forma dependente da dose
não tratada (baseline) e ratos tratados transportadora demonstrou um padrão circadiano da ingestão de alimentos. Camundongos levou uma grande refeição durante escotofase precoce e um menor refeição perto do final da escotofase ou o início de fotofase. Embora a ingestão de alimentos foi menor durante o período de luz, os ratos aparentemente antecipou a fase escura pendentes como a ingestão de alimentos aumentou perto do final da fotofase. A administração de endotoxina no tempo 0 resultou numa diminuição imediata e evidente na ingestão de alimentos (Figura 1). comportamento alimentar começou a se recuperar durante a fotofase que se seguiu e escotofase com um retorno a um padrão normal pelo terceiro escotofase após a injeção. Figura 1 Padrão circadiano da ingestão alimentar e efeito da administração de endotoxina. A ingestão de alimentos foi monitorada continuamente. A endotoxina (0,1 mg /kg, linha a cheio) ou veículo (linha a tracejado) foi administrado IP ao tempo 0. As barras pretas ao longo das abcissas indicam escotofase. Os pontos de dados representam valores médios de seis ratinhos em caixas de tempo de 3 horas.
Dado o comportamento de alimentação diurna dos ratinhos com a maioria dos alimentos consumidos durante a fase escura, experiências subsequentes foram levadas a cabo através da análise de ingestão de alimentos durante 12 horas cada fotoperíodo. Este procedimento permitiu a recuperação simultânea de pelotas fecais. a administração de LPS resultou numa redução estatisticamente significativa na ingestão de comida nocturna durante o primeiro (17% do controlo), segunda (60% do controlo), e terceira (83% do controlo) scotophases (Figura 2A). A ingestão de alimentos recuperou para níveis quase normais no terceiro escotofase com recuperação completa do padrão circadiano pela quarta escotofase. Estes dados foram consistentes com os resultados iniciais utilizando monitoramento de alimentos contínua. Embora a quantidade de alimentos consumidos durante o primeiro fotofase não foi significativamente diferente entre ratos de controlo e de LPS os ratinhos tratados, houve um aumento significativo na ingestão de alimentos durante a segunda fotofase indicando que, durante a recuperação do insulto, o padrão de onda da ingestão de alimentos circadiano permaneceu umedecido. O padrão de produção fecal foi semelhante ao padrão de ingestão de alimento com potência significativamente inibida fecal no primeiro (26% do controlo), segunda (51% do controlo), e terceira (86% do controlo) scotophases (Figura 2B). Ao contrário dos dados de ingestão de alimentos, produção fecal foi significativamente aumentado em relação aos controlos durante o quarto dia após a injecção (de 116% de controlo). Figura 2 Indução de íleo paralítico após a administração de endotoxina. As medições foram feitas a cada 12 horas de tal modo que cada ponto de dados representa a ingestão de alimentos (A) ou produção fecal (B) correspondente à escotofase anterior ou fotofase. Bares ao longo da abscissa indicam escotofase. A endotoxina (0,1 mg /kg, linha a cheio) ou veículo (linha a tracejado) foi administrada por injecção intraperitoneal no momento 0 (seta). Os pontos de dados são apresentados como média ± EPM (N = 9 murganhos por grupo). * P
= 0,02 vs. controlo no ponto de tempo correspondente por ANOVA de medidas repetidas e PLSD de Fisher.
A relação dependente da dose de endotoxina na ingestão de alimentos e produção fecal foi investigada através da determinação dos intervalos de tempo para cada ponto final após a administração de várias doses de endotoxina. Cada dose resultou num decréscimo estatisticamente significativo na ingestão de alimentos e produção fecal durante o primeiro escotofase, assim, a dose limiar de endotoxina era inferior a 0,005 mg /kg IP. Os parâmetros estimados e os seus intervalos de confiança de 95% são apresentados na Tabela 1 e a trama de dados observados com as curvas de dose-resposta embutidos são apresentados na Figura 3. Ambos os ajustes resultar em conclusões semelhantes: a mediana da dose-efeito D
m
foi de cerca de 0,01 mg /kg e não parecia ser uma ingestão alimentar diferente de zero mínimo /saída de fezes, mesmo em altas doses.Table 1 os parâmetros da curva de dose-resposta de endotoxina de 12 horas. Os resultados do modelo ajustado examinar o efeito de várias doses de endotoxina na ingestão de alimentos e produção fecal durante o primeiro escotofase são mostrados.
Parâmetro
Estimativa

95% Intervalo de confiança
Consumo Alimentar
A Restaurant - mínimo, gramas
0,16
(0,08, 0,24)
B Restaurant - linha de base, gramas
3,27
(2,90, 3,64)
D
m viajantes - dose de efeito mediano, mg /kg
0,011
(0,007, 0,015)
s Restaurant - padrão desvio, gramas
0,33
(0,28, 0,41)
produção fecal
A Restaurant - mínimo, gramas
0,11
(0,08, 0,14)
B
- linha de base, gramas
1,00
(0,88, 1,12)
D
m viajantes - dose de efeito mediano, mg /kg
0,010
(0,006, 0,015)
s Restaurant - desvio padrão, gramas
0,13
(0,11, 0,16)
Figura 3 Efeito da dose de endotoxina na ingestão de alimentos e produção fecal. Doze horas a ingestão de alimentos e produção fecal foi monitorizada ao longo de um período de quatro dias após a injecção de veículo ou várias doses de endotoxina. As curvas de dose-resposta embutidos para a ingestão de alimentos (A) e produção fecal (B) para as primeiras 12 horas após a injecção de endotoxina são mostrados (n = 6 ratos por dose).
Os coeficientes do modelo global equipada, que examinou o os dados ao longo dos primeiros quatro noites são dadas na Tabela 2. a Figura 4A mostra o modelo ajustado como curvas de dose-resposta para um ratinho "média", enquanto que a Figura 4B representa graficamente as curvas de tempo-dependente para cada rato separadamente. O modelo capta a maior parte dos fenômenos observados, exceto a "superação" na quarta noite (84 horas). Uma forma mais complicada que seria necessário para capturar o efeito. O C-multiplicador resultante indica que, tal como os ratos recuperaram, a dose do efeito mediano aumentou 11 vezes cada night.Table 2 Parâmetros das curvas de dose-resposta de endotoxina para a ingestão de alimentos ao longo do tempo. Os resultados do modelo ajustado examinar o efeito de várias doses de endotoxina na ingestão alimentar noturno estendido para incluir as quatro noites após a injeção LPS.
Parâmetro
Estimativa

95% Intervalo de confiança
A Restaurant - mínimo, gramas
0,13
(0,05, 0,21)
B Restaurant - linha de base, gramas
3,50
(3,61, 3,72)
D
m
(1) Restaurant - dose de efeito médio para a primeira noite, mg /kg
0,010
(0,007, 0,012)
c Restaurant - multiplicador da dose efeito médio para cada noite adicional
11,00
(8,62, 14,04)
s
B - desvio padrão de B, g

0,27
(0,18, 0,39)
s
D Restaurant - desvio padrão de logD
m
(1)
, g
0,47
(0,33 , 0,66)
s Restaurant - residual desvio padrão, gramas
0,23
(0,20, 0,26)
Figura 4 Efeito de endotoxina dose, time.A. As curvas de dose-resposta para a ingestão de alimentos embutidos estão apresentados para os quatro noites após a injecção que ilustram o aumento da dose eficaz mediana cada noite. curvas de consumo alimentar B. dependentes do tempo são mostrados para os murganhos individuais em cada dose. (N = 6 ratos por dose)
Diminuição da ingestão de alimentos e efeitos de saída de fezes eram comuns a outros insultos
Outros insultos clinicamente relevantes que resultam em íleo foram examinadas usando o modelo consciente mouse. Uma redução transitória da ingestão de alimentos e produção fecal foi identificado após a manipulação laparotomia /intestino (Figura 5), ​​a lesão térmica (Figura 6), e ceruleína induzida pancreatite aguda (Figura 7). Todos os três insultos causou uma redução significativa na ingestão de alimentos (52%, 21% e 54% do controlo, respectivamente) e de saída de fezes (50%, 25% e 67% do controlo, respectivamente) dentro das primeiras 12 horas. Os efeitos de ceruleína induzida indução pancreatite aguda sobre a ingestão de comida nocturna e produção fecal não atingem o seu ponto mais baixo até que o segundo escotofase (37% de controle para a ingestão de alimentos, 36% de controle para a produção fecal) após a injecção ceruleína indicando que, em comparação com o outros insultos, mais tempo foi necessário para desenvolver um efeito completo (Figura 7). Figura 5 Indução de íleo pós-operatório. Doze horas medições são representados como descrito na legenda da Figura 2. Os ratinhos foram anestesiados, realizada uma laparotomia e o ceco manipulado com cotonetes com ponta durante 1 minuto no tempo 0 (linha a cheio). Os ratinhos de controlo receberam anestesia durante um tempo semelhante (linha a tracejado). N = 10 ratos por grupo. * P
= 0,008 vs. controlo no ponto de tempo correspondente.
Figura 6 Indução de íleo após a lesão térmica. Doze horas foram medidas são representados como descrito na legenda da Figura 2. Uma queimadura total de área de superfície corporal escaldadura 20% foi induzida no tempo 0 (linha a cheio). Os ratinhos de controlo receberam somente anestesia (linha a tracejado). N = 3 ratos por grupo. * P
= 0,05 vs. controlo no ponto de tempo correspondente.
Figura 7 Efeito da ceruleína pancreatite aguda induzida na ingestão de alimentos e produção fecal. Doze horas medições foram representados como descrito na legenda da Figura 2. Sete injecções por hora de ceruleína (50 ug /kg por dose) foram administrados depois de um período de jejum de 12 horas que termina no instante 0 (linha sólida) e comparados com ratinhos de controlo que receberam transportador sozinho (linha pontilhada). N = 6 ratinhos por grupo. * P = 0,009
vs controlo no ponto de tempo correspondente.
A especificidade de ceruleína laparotomia e /manipulação do intestino para provocar a diminuição transitória na ingestão de alimentos e produção fecal foi avaliada pela alteração da gravidade dos insultos. Tal como com o tratamento com endotoxina, havia uma correlação directa entre a gravidade e a magnitude dos efeitos (Figura 8). pancreatite aguda foi induzida em ratos usando uma série de três ou sete injeções horárias de ceruleína. A Figura 8A mostra o efeito de cada série sobre a ingestão de alimentos nocturna nos subsequentes três noites. Três injeções de ceruleína resultou na ingestão de alimentos diminuiu para as duas primeiras refeições noturnas (P ≤ 0,013
correspondente vs controles) e voltou a níveis normais até a terceira noite. Uma resposta mais pronunciada foi observada após sete injeções ceruleína, com diminuição da ingestão de alimentos evidente para todos os três noites (P Art < 0,0001 vs. correspondente de controle). A comparação estatística dos dois insultos revelou uma diferença significativa (P = 0,0018
) em cada ponto de tempo indicando que a magnitude da resposta estava directamente relacionada com a gravidade da lesão. Um resultado semelhante foi observado quando a manipulação laparotomia /intestino foi utilizado para induzir íleo (Figura 8B). Ambos laparotomia seguido por manipulação de um minuto ceco ou 4 minutos a manipulação do intestino delgado, ceco, cólon e resultou numa redução em cada uma das três refeições subsequentes de tempo de noite (P = 0,04 vs
correspondente controlo). As diferenças entre os dois insultos não foi tão acentuada como o efeito das doses ceruleína, mas teve como resultado uma diferença significativa para a primeira noite (P = 0,0024
). Figura 8 Correlação de gravidade insulto ea magnitude do consumo de alimentos ileus.Nocturnal para as três noites pós-insulto foi traçado para A. após 3 (azul) ou 7 (vermelho) injeções horárias de ceruleína e B. após laparotomia e quer um manipulação minutos ceco (azul) ou uma manipulação 4 minutos do GIT (vermelho). Correspondente dados de controle é mostrado para cada lote (linha pontilhada). As comparações estatísticas são discutidos no texto. Os valores são média ± SEM.
Diminuição da ingestão alimentar correlacionada com atraso do esvaziamento gástrico
Para validar o uso destas medidas simples como marcadores de íleo, examinamos o esvaziamento gástrico e trânsito intestinal neste modelo. O esvaziamento gástrico de um metil celulose /fenol corante vermelho refeição foi medida em ratinhos que tinham sido administrados 0,1 mg /kg IP de LPS uma hora antes da administração por sonda (Figura 9A). Um período de esvaziamento rápido foi observada em ambos os ratinhos de controlo e murganhos administrados com endotoxina ao longo dos primeiros 15 minutos após a administração por sonda. A quantidade de corante esvaziado do estômago dos ratos de controlo continuaram a aumentar entre os 15 e 45 minutos após administração por sonda de ratinhos enquanto que o esvaziamento endotoxina administrada foi estático em relação ao mesmo período. gástrico esvaziamento geral uma hora após a administração de LPS foi reduzida significativamente em relação aos controlos (P
< 0,0001 vs. controlo correspondente para os pontos 15, 30 e 45 minutos de tempo). A taxa de esvaziamento gástrico de 30 minutos, também foi significativamente reduzida relativamente aos controlos 12 horas após a administração de LPS (P = 0,0053
), mas recuperou para controlar os níveis por 36 horas após a administração do LPS (Figura 9b). A recuperação do esvaziamento gástrico aparentemente precedeu a recuperação da ingestão alimentar como os níveis normais de ingestão de alimentos não eram evidentes até à terceira ou quarta noite após a administração de LPS (ver Figuras 1 e 2A). Para avaliar graficamente a correlação das duas taxas de recuperação, a ingestão de comida nocturna foi representada graficamente contra o esvaziamento gástrico medido 12 horas antes da refeição noturna correspondente (Figura 9C). Em essência, nós perguntado se dados de consumo alimentar noturno poderia ser "previsto" pelo gástrica antecedente esvaziamento medição. Ambos os conjuntos de dados foram representados graficamente como percentagem de medidas de controle. A inclinação resultante de um indica uma correlação positiva entre a ingestão alimentar eo esvaziamento gástrico. Figura 9 Efeito de endotoxina no esvaziamento gástrico. A. O esvaziamento gástrico curva gerada uma hora depois de endotoxina (0,1 mg /kg, linha a cheio) ou veículo (linha tracejada) de injecção. A metilcelulose /fenol corante vermelho refeição foi administrada a diferentes grupos de ratos por sonda intragástrica. A quantidade de corante remanescente no estômago após um período de trânsito 1, 15, 30 ou 45 minutos foi medida. A percentagem de corante esvaziado foi calculada em relação à quantidade total de corante tratadas por gavage. Cada ponto de dados representa medições a partir de 3 - 7 ratos. B. A recuperação da função gástrica foi monitorizada através da medição do esvaziamento de 30 minutos a vários tempos após a administração de endotoxina (0,1 mg /kg, linha a cheio) ou veículo (linha a tracejado). N = 3-12 ratinhos por grupo. plot Correlação C. comparando a recuperação da ingestão alimentar e o esvaziamento gástrico. * P <

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