Un modèle de souris conscient de iléus gastrique en utilisant des paramètres cliniquement pertinents

Un modèle de souris conscient de iléus gastrique en utilisant des paramètres cliniquement pertinents
Résumé de l'arrière-plan
iléus gastrique est un problème clinique non résolu et le traitement actuel est limité à des mesures de soutien. Les modèles de iléus utilisant des animaux anesthésiés, des bandes musculaires ou des cellules musculaires lisses isolées ne se reproduisent pas de manière adéquate la situation clinique. Ainsi, des études antérieures utilisant ces techniques ont pas conduit à une compréhension claire de la physiopathologie de l'iléus. La possibilité d'utiliser la prise alimentaire et la production fécale comme paramètres simples, cliniquement pertinentes pour iléus de surveillance dans un modèle de souris conscience a été évaluée en évaluant le cours de la gravité et le temps de diverses insultes connues pour provoquer un iléus.
Méthodes
retardé la prise alimentaire et la sortie fécale associée à un iléus a été contrôlée après l'injection intrapéritonéale d'endotoxine, laparotomie avec la manipulation de l'intestin, une lésion thermique ou une pancréatite aiguë céruléine induite. La corrélation entre la prise alimentaire a diminué après l'injection d'endotoxine à un iléus gastrique a été validé par la mesure de la vidange gastrique. L'effet de l'endotoxine sur le niveau d'activité générale et le comportement alimentaire a également été déterminée. transit de l'intestin grêle a été mesurée en utilisant un phénol marqueur rouge. Résultats de
Chaque insulte a entraîné une diminution transitoire et comparable dans la prise alimentaire et de la production fécale compatible avec le tableau clinique de l'iléus. Les critères d'évaluation étaient très sensibles à de petites variations de faibles doses d'endotoxine, l'étendue de la manipulation de l'intestin, et la dose céruléine. Le retard dans la prise alimentaire en corrélation directe avec la vidange gastrique. Les changements de comportement de l'activité et de l'alimentation générale étaient insuffisantes pour expliquer l'apport alimentaire a diminué. Le transit intestinal est resté inchangé à temps mesurés.
Conclusion de l'apport alimentaire et la production fécale sont des marqueurs sensibles du dysfonctionnement gastrique dans quatre modèles expérimentaux de iléus. Chez la souris, la vidange gastrique retardée semble être la principale cause de l'effet anorexique associée à un iléus. un dysfonctionnement gastrique est plus important que petit dysfonctionnement de l'intestin dans ce modèle. Rétablissement de la fonction de l'estomac semble être simultanée à la récupération colique.
Contexte
iléus est un phénomène post-chirurgicale commune caractérisée par une altération transitoire de la fonction gastro-intestinale. Outre la chirurgie abdominale, d'une septicémie, un traumatisme, une pancréatite, des agents anesthésiques et des analgésiques opioïdes sont également associés à un iléus. Les mécanismes d'iléus impliquent des signaux inhibiteurs neuronaux et des facteurs humoraux y compris les agents paracrines et hormones de l'intestin [1-3]. Aucun événement unique ou facteur a été clairement mis en cause comme étant responsable; il est plus probable que de multiples médiateurs agissent à différents moments tout au long de la maladie. Ces médiateurs communiquent à travers le tractus gastro-intestinal. Par exemple, la manipulation chirurgicale de l'intestin distal peut induire un dysfonctionnement gastrique [4-8]. Une fois établi, iléus est pensé pour résoudre à des taux différents chez l'homme avec une inhibition fonctionnelle de quelques heures dans le petit intestin, 1-2 jours à l'intérieur de l'estomac et 2-3 jours dans le côlon [9, 10].
Beaucoup des études récentes de l'iléus ont attiré l'attention sur l'intestin grêle dysfonctionnement des muscles lisses des bandes isolées de muscle [11-14]. La faiblesse de la méthode de la bande de muscle, cependant, est l'incapacité d'examiner les interactions complexes, y compris les interactions cerveau-intestin ou réflexes neuronaux spécifiques d'organes. De même, in vitro
préparations en exigent la récolte des tissus pour tester l'état et ne permettent pas une approche systémique au problème de l'iléus. La disponibilité de l'information complète de la séquence génomique de la souris a fait l'application d'une approche systémique possible en utilisant une analyse globale de l'expression des gènes. Cependant, les caractérisations phénotypiques de l'iléus dans des modèles animaux qui fournissent l'ensemble du système d'information font défaut. Le développement d'un tel modèle chez la souris serait utile.
Dans le contexte clinique, la résolution de l'iléus est déterminée par la reprise du comportement alimentaire normal et le passage de flatulences ou de selles. En dépit du fait que l'apport alimentaire et la production fécale sont de simples mesures de la fonction gastro-intestinale, ils ne sont pas rigoureusement analysés dans des modèles animaux d'iléus. Nous décrivons ici un modèle de souris conscient qui utilise la prise alimentaire et la production fécale pour surveiller l'évolution temporelle de l'iléus, permettant de mesurer à la fois l'amplitude et la durée de l'état dans le même animal. Cette approche intégrée pour définir le phénotype de l'iléus peut faciliter les enquêtes sur les interventions cliniquement pertinentes potentielles ou des stratégies de prévention. En outre, ce modèle de souris consciente offre la possibilité d'étudier les événements moléculaires associés à iléus. Animaux
les souris mâles C3H de
Méthodes, vieux 8-12 semaines, ont été utilisés tout au long de l'étude. Les souris ont été maintenus sur un cycle de lumière de 12 heures /sombre et libre accès à nourriture standard pour rongeurs et de l'eau. Pour l'étude de surveillance continue de la consommation de nourriture, les souris ont reçu 20 mg granulés alimentaires pulvérisantes (Bio-Serv, Frenchtown, NJ). Toutes les procédures ont été approuvées et contrôlées par l'Université de l'Utah Institutional Animal Care et utilisation Comité.
Apport alimentaire et mesure de la production fécale
souris ont été séparés dans des cages individuelles avec un accès libre à l'eau et une quantité tarée de nourriture. Alimentation, masse fécale et de la souris ont été mesurées toutes les 12 heures au début de chaque scotopériode et photopériode (7 h et 19 heures). La quantité de nourriture consommée au cours de la période de 12 heures a été calculé comme étant la différence entre la masse de nourriture à la fin de la période et le montant de la nourriture au début de la période. sortie fécal a été déterminée à partir de la masse des pelotes fécales recueillies et mesurées à la fin de la période de 12 heures. L'effet potentiel des matières fécales granulés déshydratation au cours de la période de 12 heures a été abordée dans des études pilotes dans lequel iléus a été induite en utilisant soit 0,1 mg /kg de LPS ou laparotomie suivie par la manipulation de l'intestin de 4 minutes, ainsi que les commandes correspondantes. pellets fécaux ont été collectés toutes les 12 heures et la sortie fécale a été déterminée de trois façons: 1) détermination de la masse immédiatement après la collecte (tel que rapporté dans cette étude), 2) détermination de la masse après une nouvelle période de déshydratation de 24 heures, et 3) en comptant les pelotes fécales . La diminution de la production fécale par rapport aux témoins après l'induction iléus était similaire et pas significativement différentes entre les trois méthodes de mesure (données non présentées). Nous avons conclu que l'effet potentiel de déshydratation était sans conséquence. Après une période d'acclimatation de trois jours, les souris ont été randomisées en groupes expérimentaux et un groupe témoin. La collecte des données a commencé 24 heures avant l'induction de l'iléus et a continué après l'induction jusqu'à ce qu'un (de base) rythme circadien normal de l'alimentation et de la production fécale retourné. Pour la surveillance continue de la prise de nourriture, les souris ont été placées dans des chambres métaboliques individuelles avec un accès libre à l'eau. Simples 20 mg granulés alimentaires pulvérisantes ont été livrés à la demande en utilisant un système Coulbourn Instruments Habitest (Allentown, PA) équipée d'un dispositif d'alimentation en granulés et le creux de la nourriture. La présence d'une pastille alimentaire dans la lumière de l'auge bloqué émis par une diode émettant de la lumière atteignant un photodétecteur. Lorsque la souris enlevé le culot, un nouveau culot a été livré. Cet échange a été automatiquement surveillé et enregistré par la notation 2 logiciel Etat Graphic (Coulbourn Instruments, Allentown, PA). Les souris ont été acclimatés à la cage pendant 4 jours avant la collecte des données.
Induction de l'iléus
Après des périodes d'acclimatation et de collecte de données de référence, iléus a été induite 30 minutes avant scotopériode, sauf indication contraire. Pour imiter la septicémie, le lipopolysaccharide (O111 de la bactérie E. coli: B4, List Biological Laboratories, Campbell, CA) a été administrée par injection intrapéritonéale. La relation dose-dépendante de l'endotoxine sur la prise alimentaire et de la production fécale a été étudiée par la détermination des cours de temps pour chaque point final après l'administration de la masse de 0,005, 0,01, 0,02, 0,04, 0,1, 0,2 et 0,4 mg /kg souris d'endotoxine. Les souris témoins ont reçu un volume similaire de support saline. iléus post-opératoire a été induite chez des souris anesthésiés avec de l'isoflurane, soit par laparotomie suivie par la manipulation du caecum pendant 1 minute ou laparotomie, éviscération sur une solution saline humidifié éponge et la manipulation de l'intestin grêle, du caecum et du côlon pour une durée totale de manipulation de 4 minutes . Manipulation a été réalisée à l'aide de coton écouvillons. Après la fermeture de l'incision avec des sutures, la souris a été retirée de l'anesthésie et on le laisse récupérer sous une lampe chauffante pendant 30 minutes avant de reprendre la collecte de données. Pour évaluer les effets de la lésion thermique, une surface totale du corps (TBSA) échaudure brûlure de 20% a été induite sur des souris à partir de laquelle les cheveux tronculaire a été retiré. La brûlure d'échaudage a été induite par l'immersion de la peau dorsale exposée à 70 ° C l'eau pendant 7 secondes. Immédiatement après la blessure par brûlure, les souris ont reçu 1 ml de intraperitoneale (IP) lactate solution de Ringer. Les souris ont reçu 0,5 ml de LR IP toutes les 12 heures pendant 72 heures après la brûlure. Les animaux témoins avaient des cheveux tronculaire enlevé et ont reçu un cours de temps similaire de l'anesthésie et de réanimation avec LR. une pancréatite aiguë a été induite chez la souris après une période de jeûne de dix-huit heures en utilisant 3 ou 7 injections IP horaires de céruléine (50 ug /kg /dose). souris témoins Sham traités ont reçu des volumes similaires de support (0,1% de BSA dans du PBS). Le calendrier des injections a été coordonnée de telle sorte que la dernière injection a eu lieu au début de scotopériode.
Vidange gastrique et intestinale transit
Après 2 heures de jeûne pour vider le contenu de l'estomac, les souris ont reçu 200 ul de 1,5% (p /v) de méthylcellulose, 0,5% (p /v) de rouge de phénol dans une solution saline normale par gavage. Trente minutes après le gavage, les souris ont été sacrifiées par dislocation cervicale, une laparotomie effectuée et l'estomac isolé par serrage duodénum près du pylore et de l'oesophage lors du cardia. La procédure entière de sacrifice à serrage est réalisée en moins d'une minute. On a éliminé le TGI, séparant l'estomac, de l'intestin. L'intestin grêle a été disséqué à partir du caecum /côlon et divisé en quatre segments de longueur égale par bissection séquentielle. La quantité de rouge de phénol dans l'estomac et l'intestin des segments a été déterminée par spectrophotométrie après homogénéisation comme décrit [15]. La vidange gastrique a été évaluée comme le pourcentage de colorant restant dans l'estomac par rapport à la quantité totale de colorant récupéré dans un groupe de standardisation des souris qui ont été sacrifiées immédiatement après le gavage. le transit intestinal a été déterminée en mesurant la répartition du colorant dans les petits segments de l'intestin et du côlon numérotés de 1 à 5, proximale à distale. Le centre géométrique de passage de colorant a été calculé pour chaque animal (Σ (% de colorant par rapport au nombre X de segments de segment) /100), comme décrit [16].
La pression sanguine artérielle moyenne
souris ont été anesthésiées avec de l'isoflurane et on les place sur un tampon C de chauffage de 37 °. Une canule en polyethylene (PE 10), connecté à un transducteur de pression, est inséré à environ 5 mm dans l'artère fémorale. la pression artérielle moyenne et la fréquence respiratoire (compté plus de 1 minute) a été enregistré toutes les cinq minutes. Après 10 minutes de surveillance pour assurer la stabilité de la pression et la fréquence respiratoire, LPS (25 pg /ml, à des doses de 0,1 et 0,4 mg /kg) ou le transporteur a été injecté IP. La pression artérielle et la fréquence respiratoire a été enregistré toutes les cinq minutes pour un total de 1 heure. surveillance
d'activité
images vidéo numériques ont été enregistrées au moyen d'un système personnel d'ordinateur composé d'une WebCam (PC-Cam 300, Creative Labs, Milpitas , CA) et Control Center webCam la version http du logiciel 5.6:.. //www webcam-control-center com. La caméra a été placée au-dessus de quatre cages de souris standard avec des sommets de fil. Au lieu de la litière, une seule serviette de papier déchiqueté a été placé dans chaque cage pour la literie. Une lumière de la chambre noire équipée d'une seule ampoule de 15 watts et un filtre inactinique Kodak GBX-2 (Eastman Kodak, Rochester, NY) a fourni un éclairage. souris individuelles ont été placées dans chaque cage avec un accès libre à l'eau et une quantité tarée de nourriture. Afin de maintenir une vue dégagée, l'eau a été fournie dans une bouteille en verre et la nourriture a été limitée à 4 pastilles rongeurs chow standard (environ 5 g chacun). Les souris ont été acclimatés dans les cages pendant 5 jours avant la collecte des données. Les souris ont reçu une solution saline, 0,1 mg /kg de LPS ou 2 mg /kg de LPS en aveugle 30 minutes avant scotopériode. Les images ont été enregistrées à 1 image par seconde pendant 10 secondes toutes les 10 minutes pendant 36 heures. Les enquêteurs aveuglés au traitement ont marqué les images enregistrées pour l'activité de la souris et la souris induite par le mouvement des boulettes de nourriture. L'activité a été marqué si le mouvement brut du corps de la souris était évidente dans l'une des 10 secondes d'images. De même, le mouvement de boulette de nourriture a été notée si la position de l'une quelconque des boulettes de nourriture étaient différentes lorsque les 10 images ont été comparées. De nouvelles boulettes de nourriture ont été placés et la nourriture de masse enregistrées à intervalles de 12 heures correspondant à scotopériode et des analyses statistiques de photopériode. Les comparaisons statistiques
ont été faites en utilisant ANOVA factorielle ou mesures répétées ANOVA (pour les analyses en fonction du temps) et Fisher protégé le moins significatif différence (PLSD) Les tests post-hoc. Des comparaisons ont été considérées comme statistiquement significatives au P
< 0,05. Les valeurs sont exprimées en moyenne ± écart-type, sauf si les données provenant de souris individuelles sont représentées.
Afin de déterminer la dose médiane effet du LPS sur la prise alimentaire et de la production fécale, les données de 12 heures (première nuit) a été ajusté à une dose courbe -response. Le modèle avait une forme de proportionnalité inverse avec des décalages:
apport alimentaire
= A
+ (BA) * D
m
/(Dose
+ D
m
)
+ erreur
le où dose
est la dose du médicament, A
est l'apport minimum de nourriture à de fortes doses arbitraires (asymptote horizontale), B
est l'apport alimentaire de base (lorsque la dose
= 0) et D
m
est la dose d'effet médian, qui est la dose à laquelle l'apport alimentaire est à mi-chemin entre la ligne de base B
et minimum A
. L'erreur
terme reflète la variabilité entre animaux de la prise alimentaire, il est supposé avoir une distribution normale de moyenne 0 et de variance proportionnelle à la réponse: erreur ~ N (0, s
2 (prise alimentaire ))
. L'ajustement de la variabilité en fonction de la réponse était nécessaire que la variabilité entre animaux diminue à mesure que la consommation de nourriture réduite. Etant donné que chaque point de données correspondant à une autre souris, les observations sont indépendantes. Le modèle ci-dessus a été étendu à tous les points de temps par la modélisation de la dose d'effet médian D
m
en fonction du temps:
D
m
(T) = D
m
(1) c
T
, où T
est temps "nuits"
qui est pour chaque nuit, la dose nécessaire pour produire un effet médian est augmentée c
-fold. Nous avons également ajouté deux termes d'effet aléatoire: entre-souris variabilité de la dose d'effet médian D
m
(1)
(sur une échelle logarithmique) et de la ligne de base l'apport alimentaire B
. Résultats de Ces termes spécifiques de la souris nous permettent de tenir compte de la dépendance des observations au sein de la souris.
endotoxines transitoirement diminution de la consommation alimentaire et la production fécale d'une manière dépendante de la dose
non traitée (de base) et des souris porteuses traitées ont démontré un rythme circadien de la prise alimentaire. Souris a pris un grand repas pendant scotopériode tôt et un petit repas près de la fin de scotopériode ou au début de photopériode. Bien que la consommation de nourriture était plus faible au cours de la période de lumière, les souris ont apparemment prévu la phase d'obscurité en attendant que la prise alimentaire a augmenté vers la fin de photopériode. L'administration de l'endotoxine au temps 0 a entraîné une diminution immédiate et visible dans la prise alimentaire (Figure 1). Le comportement alimentaire a commencé à récupérer au cours de la photopériode qui a suivi et scotopériode avec un retour à un modèle normal par le troisième scotopériode après l'injection. Figure 1 modèle circadien de l'apport et l'effet de l'administration de l'endotoxine alimentaire. La prise d'aliments a été surveillé en permanence. Endotoxine (0,1 mg /kg, trait plein) ou le support (ligne pointillée) a été administré IP au moment 0. Des barres noires le long de l'abscisse indiquent scotopériode. Les points de données représentent des mesures moyennes de six souris dans des bacs de temps de 3 heures.
Compte tenu du comportement alimentaire diurne de la souris avec la majorité des aliments consommés au cours de la phase d'obscurité, les expériences suivantes ont été réalisées par analyse de la consommation alimentaire au cours de chaque période de 12 heures photopériode. Cette procédure a permis de récupérer simultanément les pelotes fécales. l'administration de LPS a entraîné une réduction statistiquement significative dans la prise alimentaire nocturne au cours de la première (17% du témoin), deuxième (60% du témoin) et troisième (83% du témoin) scotophases (figure 2A). L'apport alimentaire récupéré à des niveaux proches de la normale par la troisième scotopériode avec récupération complète du rythme circadien par la quatrième scotopériode. Ces données concordent avec les résultats initiaux en utilisant le contrôle des aliments continue. Bien que la quantité de nourriture consommée au cours de la première photopériode n'a pas été significativement différente entre les souris témoins et LPS souris traitées, il y a eu une augmentation significative de la consommation alimentaire au cours du deuxième photophase indiquant que, lors de la récupération de l'insulte, la forme d'onde de l'apport alimentaire circadien est resté humide. La structure de la production fécale était similaire au motif de la prise alimentaire avec une production significativement inhibée fécale dans le premier (26% du contrôle), deuxième (51% du contrôle), et le troisième (86% du contrôle) scotophases (figure 2B). A la différence des données d'admission les alimentaires production fécale a augmenté significativement par rapport aux témoins au cours du quatrième jour après l'injection (116% du contrôle). Figure 2 Induction de l'iléus après l'administration d'endotoxine. Les mesures ont été effectuées toutes les 12 heures de telle sorte que chaque point de données représente la prise de nourriture (A) ou une sortie de vidange (B) correspondant à la scotophase précédente ou photophase. Bars en abscisse indiquent scotopériode. Endotoxine (0,1 mg /kg, trait plein) ou le support (ligne pointillée) a été administré par injection intrapéritonéale au temps 0 (flèche). Les points de données sont présentées comme moyenne ± SEM (n = 9 souris par groupe). * P
= 0,02 vs contrôle au point de temps correspondant par mesures répétées ANOVA et le PLSD de Fisher.
La relation dose-dépendante de l'endotoxine sur la prise alimentaire et de la production fécale a été étudiée par la détermination des cours à temps pour chaque noeud final après l'administration de diverses doses de l'endotoxine. Chaque dose a entraîné une diminution statistiquement significative dans la prise alimentaire et de la production fécale pendant la première scotophase, par conséquent, la dose seuil d'endotoxine était inférieur à 0,005 mg /kg IP. Les paramètres estimés et leurs intervalles de confiance à 95% sont donnés dans le tableau 1 et le graphique des données observées avec les courbes dose-réponse ajustés sont présentés dans la figure 3. Les deux crises entraînent des conclusions similaires: l'effet médian dose D
m
était d'environ 0,01 mg /kg et il semblait être un non-zéro apport alimentaire minimum /production fécale même à haute doses.Table 1 Paramètres de la courbe dose-réponse endotoxine de 12 heures. Les résultats du modèle ajusté examinant l'effet de diverses doses d'endotoxine sur la prise alimentaire et de la production fécale pendant la première scotopériode sont présentés.
Paramètre
Estimation

95% Intervalle de confiance
prise alimentaire
A
- minimum, 0,16
(0,08, 0,24)
B de
grammes - de base, g
3,27
(2,90, 3,64)
D
m
- dose médiane d'effet, mg /kg
0,011
(0,007, 0,015)
s
- norme écart, 0,33
(0,28, 0,41)
sortie Fecal de grammes
A
- minimum, 0,11
(0,08, 0,14)
B
grammes - la ligne de base, grammes
1,00
(0.88, 1.12)
D
m
- dose médiane d'effet, mg /kg
0,010
(0,006, 0,015)
s
- écart-type, 0,13
grammes (0,11, 0,16)
Figure 3 effet de la dose d'endotoxine sur la prise alimentaire et de la production fécale. l'apport alimentaire de douze heures et la production fécale a été contrôlée sur une période de 4 jours après l'injection de véhicule ou diverses doses d'endotoxine. Les courbes dose-réponse ajustées pour la prise alimentaire (A) et la sortie fécale (B) pour les 12 premières heures après l'injection d'endotoxine sont présentés (n = 6 souris par dose).
Les coefficients du modèle global ajusté qui a examiné la les données au cours des quatre premiers jours sont donnés dans le tableau 2. la figure 4A montre le modèle ajusté sous forme de courbes dose-réponse pour une souris "moyenne", tandis que la figure 4B trace les courbes en fonction du temps pour chaque souris séparément. Le modèle capture la plupart des phénomènes observés à l'exception du "dépassement" sur la quatrième nuit (84 heures). Une forme plus complexe serait nécessaire pour capturer cet effet. Le c-multiplicateur résultant indique que, comme les souris récupérés, la dose d'effet médian a augmenté 11 fois chaque night.Table 2 Paramètres de courbes dose-réponse des endotoxines pour la prise alimentaire au fil du temps. Les résultats du modèle ajusté examinant l'effet de diverses doses d'endotoxine sur la prise alimentaire nocturne étendues pour inclure les quatre nuits après l'injection de LPS.
Paramètre
Estimation

95% Intervalle de confiance
A
- minimum, 0,13
(0,05, 0,21)
B
grammes - de base, grammes
3,50
(3,61, 3,72)
D
m
(1)
- dose d'effet médian pour la première nuit, mg /kg
0,010
(0,007, 0,012)
c
- multiplicateur de la dose médiane d'effet pour chaque nuit supplémentaire
11,00
(8.62, 14.04)
s
B
- écart-type de B, g

0,27
(0,18, 0,39)
s
D
- écart type de m de
logD (1)
, g
0,47
(0,33 , 0,66)
s
- écart type résiduel, 0,23
grammes (0,20, 0,26)
Figure 4: effet de l'endotoxine dose sur time.A. Les courbes dose-réponse ajustées pour la prise alimentaire sont présentés pour les quatre nuits après l'injection illustrant l'augmentation de la dose efficace moyenne chaque nuit. Les courbes de consommation alimentaire B. Time-dépendants sont présentés pour la souris individuelles à chaque dose. (N = 6 souris par dose)
diminution de l'apport alimentaire et les effets de sortie fécaux étaient communs à d'autres insultes cliniquement pertinentes d'autres insultes qui aboutissent à iléus ont été examinés à l'aide du modèle de souris conscient. Une réduction transitoire de la prise alimentaire et la production fécale a été identifiée après manipulation laparotomie /intestin (Figure 5), une lésion thermique (Figure 6), et céruléine induite pancréatite aiguë (figure 7). Tous les trois déversements ont provoqué une réduction significative de la prise alimentaire (52%, 21% et 54% du témoin, respectivement) et de la production fécale (50%, 25% et 67% du témoin, respectivement) au cours des 12 premières heures. Les effets de la ceruléine induites pancréatite induction aiguë sur la prise alimentaire nocturne et la production fécale n'a pas atteint leur nadir jusqu'à ce que le second scotopériode (37% du contrôle de la prise alimentaire, 36% de contrôle pour la sortie fécale) après avoir indiqué l'injection de céruléine que, par rapport à la d'autres insultes, plus de temps était nécessaire pour développer le plein effet (figure 7). Figure 5 Induction de l'iléus post-opératoire. Douze mesures heures sont tracées comme décrit dans la légende de la figure 2. Les souris ont été anesthésiés, une laparotomie effectuée, et le caecum manipulés avec coton écouvillons pendant 1 minute au temps 0 (trait plein). Les souris témoins ont reçu l'anesthésie pendant une période similaire (ligne pointillée). N = 10 souris par groupe. * P
= 0,008 vs témoin au point de temps correspondant.
Figure 6: Induction de l'iléus après une blessure thermique. Douze mesures heures ont été sont tracés comme décrit dans la légende de la figure 2. Un total brûlure surface du corps d'échaudage de 20% a été induite au temps 0 (trait plein). Les souris témoins ont reçu seulement l'anesthésie (ligne pointillée). N = 3 souris par groupe. * P
= 0,05 vs contrôle au point de temps correspondant.
Figure 7 Effet de la ceruléine induite par une pancréatite aiguë sur la prise alimentaire et de la production fécale. Douze mesures heures ont été tracées comme décrit dans la légende de la figure 2. Sept injections horaires de céruléine (50 ug /kg par dose) ont été administrées après une période de jeûne de 12 heures se terminant à l'instant 0 (trait plein) et par rapport aux souris témoins recevant porteuse seule (ligne pointillée). N = 6 souris par groupe. * P = 0,009
contrôle par rapport au point de temps correspondant.
La spécificité de céruléine et laparotomie /manipulation de l'intestin pour provoquer la diminution transitoire de la prise alimentaire et la production fécale a été évaluée en modifiant la gravité des insultes. Comme dans le cas du traitement d'endotoxine, il y avait une corrélation directe entre la gravité et de l'ampleur des effets (figure 8). une pancréatite aiguë a été induite chez les souris en utilisant une série de trois ou sept injections toutes les heures de céruléine. La figure 8A montre l'effet de chaque série sur la prise alimentaire nocturne au cours des trois nuits suivantes. Trois injections céruléine ont donné lieu à la prise de nourriture a diminué pour les deux premiers repas nocturnes (P
≤ 0,013 vs correspondant témoins) et renvoyés à des niveaux normaux de la troisième nuit. Une réponse plus prononcée a été observée après sept injections céruléine, avec une diminution de la prise alimentaire évidente pour les trois nuits (P
< 0,0001 vs. contrôle correspondant). La comparaison statistique des deux insultes a révélé une différence significative (P = 0,0018
) à chaque point de temps indiquant que l'ampleur de la réponse était directement liée à la gravité de l'insulte. Un résultat similaire a été observé lorsque la manipulation laparotomie /l'intestin a été utilisé pour induire l'iléus (figure 8B). Les deux laparotomie suivi soit par la manipulation de 1 minute caecum ou 4 minutes manipulation de l'intestin grêle, du caecum et du côlon a entraîné une réduction pour chacune des trois suivantes repas de nuit (P = 0,04 vs
commande correspondant). Les différences entre les deux insultes n'a pas été aussi prononcés que l'effet des doses de céruléine, mais ne se traduisent par une différence significative pour la première nuit (P = 0,0024
). Figure 8 Corrélation d'insulte gravité et l'ampleur de ileus.Nocturnal apport alimentaire pour trois nuits après l'insulte a été tracé pour A. après 3 (bleu) ou 7 (rouge) injections horaires de céruléine et B. après laparotomie et soit un un manipulation minute caecum (bleu) ou une manipulation de 4 minutes du GIT (rouge). Les données correspondantes de contrôle est indiquée pour chaque parcelle (ligne pointillée). Les comparaisons statistiques sont discutées dans le texte. Les valeurs sont la moyenne ± SEM.
Diminution de l'apport alimentaire en corrélation avec la vidange gastrique retardée
Pour valider l'utilisation de ces mesures simples comme marqueurs d'iléus, nous avons examiné la vidange gastrique et le transit intestinal dans ce modèle. le vidage gastrique d'une méthylcellulose /colorant rouge de phénol repas a été mesurée chez des souris qui avaient été administrées à 0,1 mg /kg de LPS IP une heure avant le gavage (figure 9A). Une période de vidange rapide a été observée chez les souris témoins et les souris ayant reçu une endotoxine au cours des 15 premières minutes après le gavage. La quantité de colorant vidé d'estomacs des souris témoins a continué d'augmenter entre 15 et 45 minutes après le gavage alors que la vidange de souris endotoxine administré était statique au cours de la même période. gastrique global de vidange d'une heure après l'administration de LPS a été considérablement réduite par rapport aux témoins (P
< 0,0001 vs. contrôle correspondant pour les points 15, 30 et 45 temps de minute). Le taux de vidange gastrique de 30 minutes a également été réduite de manière significative par rapport aux témoins 12 heures après l'administration de LPS (P = 0,0053
), mais récupéré pour contrôler les niveaux de 36 heures après l'administration de LPS (Figure 9B). La reprise de la vidange gastrique apparemment précédé la reprise de la consommation alimentaire des niveaux normaux de la consommation de nourriture ne sont pas évidents jusqu'à la troisième ou la quatrième nuit après l'administration de LPS (voir les figures 1 et 2A). Pour évaluer graphiquement la corrélation entre les deux taux de récupération, l'apport alimentaire nocturne a été tracée en fonction de la vidange gastrique mesurée 12 heures avant le repas nocturne correspondant (Figure 9C). En substance, nous avons demandé si les données sur la consommation alimentaire nocturnes pourraient être «prédit» par l'estomac antécédent de vidange mesure. Les deux ensembles de données ont été tracées en pour cent des mesures de contrôle. La pente résultante indique une corrélation positive entre l'apport alimentaire et la vidange gastrique. Figure 9 Effet des endotoxines sur la vidange gastrique. A. gastrique courbe de vidange générée 1 heure après l'endotoxine (0,1 mg /kg, trait plein) ou le support (ligne pointillée) injection. Un méthylcellulose /colorant rouge de phénol repas a été administré à différents groupes de souris, par gavage intragastrique. La quantité de colorant restant dans l'estomac après une période de 1, 15, 30 ou 45 minutes de transit a été mesuré. Le pour cent de colorant vidé a été calculé par rapport à la quantité totale de colorant gavées. Chaque point de données représente des mesures à partir de 3 - 7 souris. B. La récupération de la fonction gastrique a été contrôlée par mesure de la vidange de 30 minutes à différents moments après l'administration d'endotoxine (0,1 mg /kg, trait plein) ou un support (ligne pointillée). N = 3-12 souris par groupe. C. Corrélation tracé comparant la reprise de l'apport alimentaire et la vidange gastrique. Les points de données représentent les pourcentages de la commande correspondante.

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