Un modelo de ratón consciente de íleo gástrico usando endpoints

clínicamente relevante Un modelo de ratón consciente de íleo gástrico mediante criterios de valoración clínicamente relevantes
Resumen Antecedentes

íleo gástrico es un problema clínico sin resolver y el tratamiento actual se limita a las medidas de apoyo. Modelos de íleo con animales anestesiados, tiras de músculo o células aisladas de músculo liso no se reproducen de manera adecuada la situación clínica. Por lo tanto, los estudios anteriores que utilizan estas técnicas no han dado lugar a una clara comprensión de la fisiopatología de íleo. La viabilidad del uso de la ingesta de alimentos y la producción fecal como puntos finales simples, clínicamente relevantes para el seguimiento íleo en un modelo de ratón consciente se evaluó mediante la evaluación del curso de la gravedad y el tiempo de varios insultos conocidos por causar íleo.
Métodos
retrasa la ingesta de alimentos y la producción fecal asociada con íleo se controló después de la inyección intraperitoneal de endotoxina, la laparotomía con la manipulación del intestino, lesión térmica o la pancreatitis aguda inducida cerulein. La correlación de la disminución de la ingesta de alimentos después de la inyección de endotoxina con íleo gástrico fue validado mediante la medición del vaciamiento gástrico. También se determinó el efecto de la endotoxina en el nivel de actividad general y el comportamiento de alimentación. el tránsito del intestino delgado se midió utilizando un marcador rojo fenol.
: Resultados de la Cada insulto dio lugar a una disminución transitoria y comparable en la ingesta de alimentos y la producción fecal consistente con el cuadro clínico de íleo. Los criterios de valoración eran muy sensibles a pequeños cambios en las dosis bajas de endotoxina, el grado de manipulación del intestino, y la dosis cerulein. El retraso en la ingesta de alimentos directamente correlacionada con el vaciado gástrico retardado. Los cambios en la actividad y el comportamiento general de alimentación eran insuficientes para explicar la disminución de la ingesta de alimentos. el tránsito intestinal se mantuvo sin cambios en los tiempos medidos.
Conclusión
La ingesta de alimentos y la producción de heces son marcadores sensibles de la disfunción gástrica en cuatro modelos experimentales de íleo. En el ratón, retraso del vaciado gástrico parece ser la causa principal del efecto anoréxico asociado con el íleo. disfunción gástrica es más importante que la disfunción del intestino delgado en este modelo. La recuperación de la función del estómago parece ser simultánea a la recuperación del colon.
Antecedentes
íleo es una ocurrencia posquirúrgica frecuente caracterizada por la alteración transitoria de la función gastrointestinal. Además de la cirugía abdominal, sepsis, trauma, pancreatitis, agentes anestésicos y analgésicos opioides también se asocian con íleo. Los mecanismos de íleo implican señales inhibitorias neuronales y factores humorales que incluyen agentes paracrinos y hormonas intestinales [1-3]. No solo evento o factor ha sido claramente implicados como responsables; es más probable que múltiples mediadores actúan en varias ocasiones durante el curso de la enfermedad. Estos mediadores se comunican a través del tracto gastrointestinal. Por ejemplo, la manipulación quirúrgica del intestino distal puede inducir la disfunción gástrica [4-8]. Una vez establecido, se cree que el íleo de resolver a diferentes velocidades en seres humanos con la inhibición funcional de unas horas dentro del intestino delgado, de 1-2 días en el estómago y 2-3 días en el colon [9, 10]. Muchos
estudios recientes de íleo han centrado la atención en el intestino delgado disfunción del músculo liso en tiras musculares aisladas [11-14]. La debilidad del método de la tira de músculo, sin embargo, es la incapacidad para examinar las interacciones complejas que incluyen interacciones cerebro-intestino o los reflejos neuronales específicos de órganos. Del mismo modo, las preparaciones in vitro
en la cosecha de tejidos requieren para analizar la situación y no permiten un enfoque de sistemas para el problema de la oclusión intestinal. La disponibilidad de la información completa de la secuencia genómica en el ratón ha hecho de la aplicación de un sistema de enfoque factible usando análisis global de la expresión génica. Sin embargo, las caracterizaciones fenotípicas de íleo en modelos animales que proporcionan todo el sistema de información son insuficientes. Desarrollo de un modelo de este tipo en el ratón sería útil.
En el contexto clínico, la resolución del íleo se determina por la reanudación de un comportamiento normal de alimentación y el paso de flatos o heces. A pesar de que la ingesta de alimentos y la producción fecal son simples mediciones de la función gastrointestinal que no han sido analizados rigurosamente en modelos animales de íleo. Aquí se describe un modelo de ratón consciente que utiliza la ingesta de alimentos y la producción de heces para supervisar el curso de tiempo de íleo, lo que permite la medición de la magnitud y la duración de la condición en el mismo animal. Este enfoque integrador para definir el fenotipo de íleo puede facilitar la investigación de posibles intervenciones clínicamente relevantes o estrategias preventivas. Además, este modelo de ratón consciente ofrece la oportunidad de estudiar eventos moleculares asociados con íleo.
Métodos
mascotas
ratones macho C3H, 8-12 semanas de edad, fueron utilizados durante todo el estudio. Los ratones se mantuvieron en un ciclo de 12 horas luz /oscuridad y se les dio libre acceso a alimento estándar para roedores y agua. Para el estudio de monitoreo continuo de la ingesta de alimentos, los ratones recibieron 20 mg bolitas de comida sin polvo (Bio-Serv, así, NJ). Todos los procedimientos fueron aprobados y supervisados ​​por la Universidad de Utah Institucional Cuidado de Animales y el empleo.
La ingesta de alimentos y la medición de la producción de heces
Los ratones fueron separados en jaulas individuales con libre acceso al agua y una cantidad tarada de los alimentos. Alimentos, se midieron la masa fecal y el ratón cada 12 horas en el comienzo de cada escotofase y fotofase (07 a.m. y 19:00). La cantidad de comida consumida durante el período de 12 horas se calculó como la diferencia entre la masa de comida al final del período y la cantidad de comida en el comienzo del período. la producción de heces se determinó a partir de la masa de los pellets fecales recogidas y medidas al final del período de 12 horas. El efecto potencial de deshidratación pellet fecal durante el período de 12 horas fue abordado en estudios piloto en la que el íleo se indujo usando ya sea 0,1 mg /kg de LPS o laparotomía, seguido por la manipulación del intestino 4 minutos, así como los controles correspondientes. bolitas fecales se recogieron cada 12 horas y se determinó la producción de heces de tres maneras: 1) determinación de la masa inmediatamente después de la recogida (como se informa en este estudio), 2) determinación de la masa después de un período de deshidratación 24 horas más, y 3) contando bolitas fecales . La disminución en la producción de heces respecto a los controles después de la inducción íleo fue similar y no significativamente diferente entre los tres métodos de medición (datos no mostrados). Llegamos a la conclusión de que el efecto potencial de deshidratación fue intrascendente. Después de un periodo de aclimatación de tres días, los ratones fueron distribuidos aleatoriamente en grupos experimentales y un grupo de simulación. La recogida de datos comenzó 24 horas antes de la inducción de íleo y continuó después de la inducción hasta una (línea de base) patrón circadiano normal de la alimentación y la salida fecal regresó. Para el control de la ingesta de alimentos continuo, los ratones se colocaron en cámaras metabólicas individuales con libre acceso al agua. Individuales 20 mg bolitas de comida sin polvo se entregaron el pedido utilizando un sistema de Coulbourn Instrumentos Habitest (Allentown, PA) equipado con un alimentador de pellets y comedero. La presencia de una bola de comida dentro de la luz a través bloqueado emitida por un diodo emisor de luz que llega a un fotodetector. Cuando el ratón retira el precipitado, se entregó un nuevo pellet. Este intercambio fue supervisado y registrado por el programa de software de notación gráfica Estado 2 (Coulbourn Instruments, Allentown, PA) de forma automática. Los ratones fueron aclimatadas a la jaula durante 4 días antes de la recolección de datos.
Inducción de íleo
Después de períodos de aclimatación y recolección de datos de línea de base, íleo se indujo 30 minutos antes de scotofase menos que se indique lo contrario. Para imitar la sepsis, lipopolisacárido (E. coli O111
: B4, Lista Biological Laboratories, Campbell, CA) fue administrado por inyección intraperitoneal. La relación dependiente de la dosis de endotoxina en la ingesta de alimentos y la producción fecal se investigó mediante la determinación de los cursos de tiempo para cada punto final después de la administración de la masa 0,005, 0,01, 0,02, 0,04, 0,1, 0,2, y 0,4 mg /kg de ratón de la endotoxina. Los ratones control recibieron un volumen similar de solución salina portadora. íleo post-quirúrgica se indujo en ratones anestesiados con isoflurano ya sea por laparotomía seguido por la manipulación del ciego durante 1 minuto o laparotomía, evisceración en una esponja humedecida con solución salina y la manipulación del intestino delgado, ciego y colon durante un tiempo total de manipulación de 4 minutos . La manipulación se llevó a cabo usando hisopos de algodón con punta. Después del cierre de la incisión con puntos de sutura, el ratón se retiró de la anestesia y se dejó recuperar bajo una lámpara de calentamiento durante 30 minutos antes de la recolección de datos se reanuda. Para evaluar los efectos de la lesión térmica, se indujo una superficie corporal total (SCT) escaldaduras 20% en ratones de la que se eliminó el pelo del tronco. La quemadura escaldadura fue inducida por la inmersión de la piel dorsal expuesto en 70 ° C agua durante 7 segundos. Inmediatamente después de la lesión por quemadura, los ratones se les administró 1 ml de intraperitoneal (IP) solución de Ringer lactato. Los ratones recibieron 0,5 ml de LR IP cada 12 horas durante 72 horas después de la lesión por quemadura. Los animales de control se había quitado el pelo troncal y recibieron un curso de tiempo similar de anestesia y reanimación con LR. La pancreatitis aguda se indujo en ratones después de un período de ayuno 18 hora usando 3 o 7 inyecciones IP por hora de cerulein (50 mg /kg /dosis). los ratones de control tratados Sham recibieron un volumen similar de vehículo (0,1% de BSA en PBS). El horario de administración fue coordinada de tal manera que la última inyección se produjo a principios de scotofase.
Vaciado gástrico y el tránsito intestinal
Después de 2 horas de ayuno al contenido estómago vacío, los ratones se les dio 200 l de un 1,5% metilcelulosa (w /v), 0,5% (w /v) de solución de rojo de fenol en solución salina normal por sonda. Treinta minutos después de alimentación forzada, los ratones se sacrificaron por dislocación cervical, una laparotomía realizado y el estómago aislado por apriete el duodeno cerca del píloro y el esófago en el cardias. Todo el procedimiento de sacrificio para sujeción se realizó en menos de un minuto. El GIT se retiró, se separa el estómago en el intestino. El intestino delgado se disecó desde el ciego /colon y dividido en cuatro segmentos de igual longitud por bisección secuencial. se determinó espectrofotométricamente La cantidad de rojo fenol en los segmentos de estómago e intestinales después de la homogeneización como se describe [15]. El vaciado gástrico se evaluó como el porcentaje de colorante que queda en el estómago con respecto a la cantidad total de colorante recuperado en un grupo de estandarización de los ratones que fueron sacrificados inmediatamente después de la alimentación forzada. tránsito intestinal fue determinada por la medición de la compartimentación de colorante dentro de los pequeños segmentos de intestino y colon numerada 1-5, proximal a distal. El centro geométrico de tránsito colorante se calculó para cada animal como (Σ (% de colorante por número de segmento X segmento) /100) como se describe [16].
Media de la presión sanguínea arterial
Los ratones fueron anestesiados con isoflurano y se colocaron sobre una almohadilla térmica 37 ° C. se insertó una cánula de polietileno (PE 10), conectado a un transductor de presión, aproximadamente 5 mm en la arteria femoral. la presión arterial media y la frecuencia respiratoria (contado más de 1 minuto) se registró cada cinco minutos. Después de 10 minutos de la monitorización para asegurar la estabilidad de la presión y la frecuencia respiratoria, LPS (25 mg /ml, en dosis de 0,1 y 0,4 mg /kg) o vehículo se inyectó IP. La presión arterial y la frecuencia respiratoria se registró cada cinco minutos durante un total de 1 hora. monitoreo
Actividad
imágenes de vídeo digitales se registraron usando un sistema basado en computadora personal que consiste en una cámara web (PC-CAM 300, Creative Labs, Milpitas , CA) y el centro de control de WebCam versión de software 5.6 http:.. //www webcam a través del centro de control com. La cámara se coloca por encima de cuatro jaulas de ratón estándar con las tapas de alambre. En lugar de la basura, una sola toalla de papel triturado se colocó en cada jaula para las camas. Una luz de cuarto oscuro equipado con una sola bombilla de 15 vatios y un filtro de seguridad KODAK GBX-2 (Eastman Kodak, Rochester, NY) proporcionó la iluminación. ratones individuales se colocaron en cada jaula, con acceso libre al agua y una cantidad tarada de los alimentos. Con el fin de mantener una visión sin obstáculos, se proporcionó agua en una botella de vidrio y la comida se limitaba a 4 gránulos para roedores estándar (aproximadamente 5 g cada una). Los ratones fueron aclimatados a las jaulas durante 5 días anteriores a la recogida de datos. Los ratones se les administró solución salina, 0,1 mg /kg de LPS o 2 mg /kg de LPS en una forma ciega 30 minutos antes de escotofase. Las imágenes fueron registradas a 1 imagen por segundo durante 10 segundos cada 10 minutos durante 36 horas. Los investigadores cegados al tratamiento anotaron las imágenes grabadas para la actividad del ratón y el ratón inducida por el movimiento de las bolas de comida. La actividad se anotó si el movimiento bruto del cuerpo del ratón era evidente dentro de cualquiera de las imágenes de 10 segundos. Del mismo modo, el movimiento de bola de comida se anotó si la posición de cualquiera de los gránulos de comida eran diferentes cuando se compararon las 10 imágenes. Nuevos bolitas de comida y se colocaron los alimentos registraron masa a intervalos de 12 horas correspondiente a scotofase y análisis fotofa-.
Estadísticos se realizaron comparaciones estadísticas
mediante ANOVA factorial o de medidas repetidas ANOVA (análisis de evolución en el tiempo) y de Fisher protegida menos significativo diferencia (PLSD) pruebas post-hoc. Las comparaciones se consideraron estadísticamente significativas a P Hotel < 0.05. Los valores se expresan como media ± SEM a menos que se muestran los datos de ratones individuales.
Con el fin de determinar la mediana de la dosis-efecto de LPS en la ingesta de alimentos y la producción fecal, los datos de 12 horas (la primera noche) se ajustó a una dosis -response curva. El modelo tenía una forma de proporcionalidad inversa con desplazamientos: La ingesta de alimentos

= A +
(BA) * D
m
/(Dosis
+ D
m
)
+ error
la dosis donde
es la dosis de la droga, a Luxury es la ingesta mínima de alimentos en grandes dosis arbitrarias (asíntota horizontal), B
es la ingesta de alimentos de línea de base (cuando la dosis
= 0) y D
m
es la mediana de la dosis-efecto, que es la dosis a la que la ingesta de alimentos es a medio camino entre la línea de base B Opiniones y mínimo Una
. El error
término refleja la variabilidad entre animales de la ingesta de alimentos, que se supone que tiene una distribución normal con media 0 y varianza proporcional a la respuesta: error ~ N (0, s
2 (la ingesta de alimentos ))
. El ajuste de la variabilidad dependiendo de la respuesta era necesario ya que la variabilidad entre animales disminuyó a medida que disminuyó la ingesta de alimentos. Dado que cada punto de datos corresponde a un ratón diferente, las observaciones son independientes. El modelo anterior se extendió a todos los puntos de tiempo mediante el modelado de la mediana de la dosis-efecto
D m
como una función del tiempo: D

m gratis (T) = D
m gratis (1) c
T
, donde T es el tiempo en
"noches"
es decir por cada noche la dosis requerida para producir un efecto mediano se incrementa c
-fold. También hemos añadido dos términos de efectos aleatorios: entre-ratón variabilidad de la mediana de la dosis-efecto
D m gratis (1) gratis (en escala logarítmica) y de la línea de base ingesta de alimentos B
. Estos términos específicos de ratón nos permiten dar cabida a la dependencia dentro del ratón de las observaciones.
Resultados
endotoxina disminuyó transitoriamente la ingesta de alimentos y la producción fecal en una forma dependiente de la dosis
sin tratar (línea de base) y ratones tratados portadores demostraron un patrón circadiano de la ingesta de alimentos. Los ratones tomó una comida grande durante scotofase temprana y una comida más pequeña cerca del final de scotofase o principios del fotoperiodo. A pesar de la ingesta de alimentos fue menor durante el período de luz, al parecer, los ratones se anticipó a la fase de oscuridad a la espera de que la ingesta de alimentos aumentó cerca del final del fotoperiodo. La administración de endotoxina en el tiempo 0 resultó en una disminución inmediata y visible en la ingesta de alimentos (Figura 1). la conducta de alimentación comenzó a recuperarse durante el fotoperiodo y la subsiguiente scotofase con un retorno a un patrón normal por el tercer scotofase después de la inyección. Figura 1 patrón circadiano de la ingesta de alimentos y el efecto de la administración de endotoxina. La ingesta de alimentos se monitorizó continuamente. Endotoxina (0,1 mg /kg, línea continua) o vehículo (línea discontinua) se administró IP en el tiempo 0. Las barras negras a lo largo del eje de abscisas indican scotofase. Los puntos de datos representan valores medios de seis ratones en los contenedores de tiempo de 3 horas.
Dado el comportamiento de alimentación diurna de los ratones con la mayoría de los alimentos que se consumen durante la fase de oscuridad, los experimentos posteriores se llevaron a cabo mediante el análisis de la ingesta de alimentos durante cada 12 horas fotoperíodo. Este procedimiento permitió la recuperación simultánea de los pellets fecales. la administración de LPS resultó en una reducción estadísticamente significativa en la ingesta de alimentos nocturno durante la primera (17% de control), segundos (60% del control), y tercero (83% del control) scotophases (Figura 2A). La ingesta de alimentos se recuperó a niveles casi normales por el tercer scotofase con recuperación completa del patrón circadiano de la cuarta scotofase. Estos datos fueron consistentes con los hallazgos iniciales usando el monitoreo continuo de alimentos. Aunque la cantidad de alimento consumido durante la primera fotofase no fue significativamente diferente entre los ratones de control y LPS los ratones tratados, había un aumento significativo en la ingesta de alimentos durante el segundo fotofase que indica que, durante la recuperación de la lesión, el patrón de onda de la ingesta de alimentos circadiano permanecido humedecida. El patrón de la producción de heces fue similar al patrón de la ingesta de alimentos con una producción significativamente inhibido fecal en el primero (26% de control), segundos (51% del control), y tercero (86% del control) scotophases (Figura 2B). A diferencia de los datos de consumo de alimentos, la producción de heces se incrementó significativamente en relación con los controles durante el cuarto día después de la inyección (116% de control). Figura 2 Inducción de íleo después de la administración de endotoxina. Las mediciones se realizaron cada 12 horas de manera que cada punto de datos representa la ingesta de alimentos (A) o la salida fecal (B) correspondiente a la escotofase o fotofase anterior. Bares a lo largo del eje de abscisas indican scotofase. La endotoxina (0,1 mg /kg, línea continua) o vehículo (línea discontinua) se administró mediante inyección intraperitoneal en el tiempo 0 (flecha). Los puntos de datos se presentan como media ± SEM (n = 9 ratones por grupo). * P
= 0,02 frente a control en el punto de tiempo que corresponde por ANOVA de medidas repetidas y PLSD de Fisher.
La relación dependiente de la dosis de endotoxina en la ingesta de alimentos y la producción fecal se investigó mediante la determinación de los cursos de tiempo para cada punto final después de la administración de diversas dosis de endotoxina. Cada dosis dado lugar a una disminución estadísticamente significativa en la ingesta de alimentos y la producción fecal durante la primera escotofase, por lo tanto, la dosis umbral de endotoxina era menor que 0,005 mg /kg IP. Los parámetros estimados y sus intervalos de confianza del 95% se dan en la Tabla 1 y la trama de los datos observados con las curvas de dosis-respuesta ajustadas se muestran en la Figura 3. Los dos ajustes dan lugar a conclusiones similares: la mediana-efecto de la dosis D
m
era aproximadamente 0,01 mg /kg y no parecía ser un /salida fecal no nula ingesta mínima de alimentos, incluso a altas doses.Table 1 los parámetros de la curva dosis-respuesta endotoxina de 12 horas. Los resultados del modelo ajustado examinar el efecto de varias dosis de endotoxina en la ingesta de alimentos y la producción fecal durante el primer scotofase se muestran.
Parámetro
Estimación

95% Intervalo de confianza
la ingesta de alimentos
Un CD - mínimo, 0,16 gramos
gratis (0,08, 0,24)
B Opiniones - basal, gramos
3.27 gratis (2,90, 3,64)
D
m CD - mediana de la dosis efecto, mg /kg
0,011 gratis (0,007, 0,015)
s CD - norma desviación, 0,33 gramos
gratis (0,28, 0,41)
la producción de heces
Un CD - mínimo, 0,11 gramos
gratis (0,08, 0,14) sobre B
- la línea de base, 1.00 gramos
gratis (0,88, 1,12)
D
m CD - mediana de la dosis efecto, mg /kg
0,010 gratis (0,006, 0,015)
s CD - desviación estándar, 0,13 gramos
gratis (0,11, 0,16): perfil Figura 3 Efecto de la dosis de endotoxina en la ingesta de alimentos y la producción fecal. la ingesta de alimentos Doce horas y la producción de heces se controló durante un período de 4 días después de la inyección de vehículo o diversas dosis de endotoxina. Las curvas de dosis-respuesta ajustadas para la ingesta de alimentos (A) y la producción de heces (B) durante las primeras 12 horas después de la inyección de endotoxina se muestran (n = 6 ratones por dosis). Empresas El coeficientes del modelo global equipada, que examinó la datos a través de las primeras cuatro noches se dan en la Tabla 2. la Figura 4A muestra el modelo ajustado como curvas de dosis-respuesta para un ratón "medio", mientras que la figura 4B representa gráficamente las curvas en función del tiempo para cada ratón por separado. El modelo capta la mayor parte de los fenómenos observados, excepto el "rebase" en la cuarta noche (84 horas). Se necesitaría una forma más complicada de capturar ese efecto. El c-multiplicador resultante indica que, como los ratones recuperaron, la dosis del efecto mediana aumentó 11 veces cada uno night.Table 2 Parámetros de las curvas de dosis-respuesta de endotoxina para la ingesta de alimentos con el tiempo. Los resultados del modelo ajustado examinar el efecto de varias dosis de endotoxina en la ingesta de comida nocturna ampliarse para incluir las cuatro noches después de la inyección de LPS.
Parámetro
Estimación

95% Intervalo de confianza
Un CD - mínimo, 0,13 gramos
gratis (0,05, 0,21)
B Opiniones - basal, 3,50 gramos

(3,61, 3,72)
D
m gratis (1) CD - dosis del efecto mediano de la primera noche, mg /kg
0,010 gratis (0,007, 0,012)
c CD - multiplicador de la mediana de la dosis efectiva para cada noche adicional
11.00 gratis (8.62, 14.04)
s
B Opiniones - desviación estándar de B, g

0.27 gratis (0,18, 0,39)
s
D CD - desviación estándar de logD
m gratis (1)
, g
0.47 gratis (0,33 , 0.66)
s CD - desviación estándar residual, gramos
0.23 gratis (0.20, 0.26): perfil Figura 4 Efecto de endotoxina dosis en time.A. Las curvas de dosis-respuesta ajustadas para la ingesta de alimentos se muestran para las cuatro noches después de la inyección que ilustran el aumento de la dosis efectiva media cada noche. las curvas de consumo de alimentos B. dependiente del tiempo se muestran para los ratones individuales en cada dosis. (N = 6 ratones por dosis)
Disminución de la ingesta de alimentos y los efectos de la producción de heces eran comunes a otros insultos Livra insultos clínicamente relevantes que resultan en el íleo fueron examinadas usando el modelo de ratón consciente. Se identificó una reducción transitoria en la ingesta de alimentos y la producción de heces después de la manipulación laparotomía /intestinal (Figura 5), ​​la lesión térmica (Figura 6), y cerulein inducida pancreatitis aguda (Figura 7). Todos los tres insultos causó una reducción significativa en la ingesta de alimentos (52%, 21% y 54% del control, respectivamente) y la producción de heces (50%, 25% y 67% del control, respectivamente) dentro de las primeras 12 horas. Los efectos de cerulein inducidos inducción pancreatitis aguda en la ingesta de alimentos nocturna y salida fecal no alcanzó su punto más bajo hasta que el segundo escotofase (37% de control de la ingesta de alimentos, 36% de control para la producción de heces) después de la inyección cerulein lo que indica que, en comparación con el otros insultos, se requiere más tiempo para desarrollar el efecto completo (Figura 7). Figura 5 La inducción de íleo postoperatorio. mediciones de doce horas se representan como se describe en la leyenda para la Figura 2. Los ratones fueron anestesiados, una laparotomía realizada, y el ciego manipulados con hisopos de algodón con punta para 1 minuto en el tiempo 0 (línea continua). Los ratones de control recibieron anestesia durante un tiempo similar (línea discontinua). N = 10 ratones por grupo. * P
= 0,008 frente a control en el punto de tiempo correspondiente.
Figura 6 Inducción de íleo después de la lesión térmica. Doce horas mediciones se representan como se describe en la leyenda para la Figura 2. Una quemadura de la superficie corporal total escaldado 20% fue inducido en el tiempo 0 (línea continua). Los ratones de control recibieron sólo anestesia (línea discontinua). N = 3 ratones por grupo. * P
= 0,05 frente a control en el punto de tiempo correspondiente.
Figura 7 Efecto de cerulein pancreatitis aguda inducida por la ingesta de alimentos y la producción de heces. mediciones de doce horas se representará gráficamente como se describe en la leyenda para la Figura 2. Siete inyecciones por hora de cerulein (50 mg /kg por dosis) se administraron después de un ayuno de 12 horas que termina en el tiempo 0 (línea continua) y en comparación con los ratones control que recibieron vehículo solo (línea de puntos). N = 6 ratones por grupo. * P
= 0,009 vs. el control en el punto de tiempo correspondiente.
La especificidad de cerulein y laparotomía /manipulación del intestino para causar la disminución transitoria en la ingesta de alimentos y la producción fecal se evaluó mediante la alteración de la gravedad de los insultos. Como con el tratamiento de endotoxina, había una correlación directa entre la gravedad y magnitud de los efectos (Figura 8). La pancreatitis aguda se indujo en ratones usando una serie de tres o siete inyecciones por hora de cerulein. La Figura 8A muestra el efecto de cada serie en la ingesta de alimentos nocturna durante los siguientes tres noches. Tres inyecciones cerulein produjo una reducción de la ingesta de alimentos para las dos primeras comidas nocturnas (P ≤ 0,013 vs.
correspondientes controles) y volvieron a niveles normales por la tercera noche. Una respuesta más pronunciada se observó después de siete inyecciones cerulein, con una disminución de la ingesta de alimentos evidentes para las tres noches (P Hotel < 0,0001 vs correspondiente de control). La comparación estadística de los dos insultos reveló una diferencia significativa (P = 0,0018
) en cada punto de tiempo que indica que la magnitud de la respuesta estaba relacionada directamente con la gravedad de la lesión. Un resultado similar se observó cuando se utilizó la manipulación laparotomía /intestino para inducir íleo (Figura 8B). Tanto laparotomía seguido de manipulación 1 minuto ciego o 4 minutos manipulación del intestino delgado, ciego y colon resultó en una reducción de cada una de las tres comidas posteriores nocturnas (P
= 0,04 frente a control correspondiente). Las diferencias entre los dos insultos no fue tan pronunciado como el efecto de las dosis cerulein, pero dio lugar a una diferencia significativa para la primera noche (P = 0,0024
). Figura 8 La correlación de la severidad de la injuria y la magnitud de la ingesta de alimentos para el ileus.Nocturnal tres noches después del insulto se trazan para A. Después de 3 (azul) o 7 (roja) por hora de las inyecciones cerulein y B. Después de la laparotomía y, o bien una la manipulación minutos ciego (azul) o una manipulación 4 minutos del GIT (rojo). Correspondientes datos de control se muestra para cada parcela (línea discontinua). Las comparaciones estadísticas se discuten en el texto. Los valores son medias ± SEM.
Disminución de la ingesta de alimentos en correlación con el vaciado gástrico retardado
Para validar el uso de estas medidas simples como marcadores de íleo, hemos examinado el vaciado gástrico y el tránsito intestinal en este modelo. El vaciado gástrico de una comida de tinte rojo de metilo celulosa /fenol se midió en ratones que habían sido administrados 0,1 mg /kg IP LPS una hora antes de gavage (Figura 9A). Un período de vaciado rápido se observó tanto en los ratones de control y ratones administrados endotoxina durante los primeros 15 minutos después de la alimentación forzada. La cantidad de colorante vaciado del estómago de los ratones de control continuó aumentando entre 15 y 45 minutos después de sonda mientras que el vaciado de los ratones endotoxina administrada fue estática durante el mismo período. En general gástrico vaciado una hora después de la administración de LPS se redujo drásticamente con respecto a los controles (P
< 0,0001 frente al control correspondiente de los puntos 15, 30 y 45 de tiempo minutos). La tasa de 30 minutos de vaciado gástrico también se redujo significativamente en relación con los controles de 12 horas después de la administración de LPS (P = 0,0053
), pero se recuperó para controlar los niveles de 36 horas después de la administración de LPS (Figura 9B). La recuperación de vaciado gástrico aparentemente precedió a la recuperación de la ingesta de alimentos como los niveles normales de la ingesta de alimentos no fueron evidentes hasta que la tercera o cuarta noche después de la administración de LPS (ver las figuras 1 y 2A). Para evaluar gráficamente la correlación de las dos tasas de recuperación, la ingesta de alimentos nocturna se representó frente vaciado gástrico medido 12 horas antes de la comida nocturna correspondiente (Figura 9C). En esencia, nos preguntamos si los datos de consumo de alimentos nocturnos podrían ser "predijeron" por el vaciamiento gástrico antecedente de medición. Ambos conjuntos de datos se representaron como porcentaje de las mediciones de control. La pendiente resultante de uno indica una correlación positiva entre la ingesta de alimentos y el vaciado gástrico. Figura 9 Efecto de la endotoxina en el vaciado gástrico. A. vaciado gástrico curva generada 1 hora después de la endotoxina (0,1 mg /kg, línea continua) o portador de inyección (línea discontinua). A metilcelulosa /fenol comida colorante rojo se administró a diferentes grupos de ratones mediante sonda intragástrica. Se midió la cantidad de colorante que queda en el estómago después de un período de tránsito 1, 15, 30 o 45 minutos. El porcentaje de colorante vació se calculó con relación a la cantidad total de colorante alimentado a la fuerza. Cada punto de datos representa las mediciones a partir de 3 - 7 ratones. B. La recuperación de la función gástrica se monitorizó midiendo el vaciado 30 minutos en varios momentos después de la administración de endotoxina (0,1 mg /kg, línea continua) o vehículo (línea discontinua). N = 3 a 12 ratones por grupo. C. gráfica de correlación comparación de la recuperación de la ingesta de alimentos y el vaciado gástrico.

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