Associação de IL1B -511C haplótipo /-31T e Helicobacter pylori vacA genótipos com úlcera gástrica e gastrite crônica

Associação de IL1B -511C /-31T
haplótipo e Helicobacter pylori vacA
genótipos com úlcera gástrica e gastrite crônica da arte abstracta
Fundo
A associação entre polimorfismos de genes de citocinas pró-inflamatórias e doenças gástricas relacionadas com Helicobacter . pylori
varia de população e área geográfica
Nosso objetivo foi determinar se a IL-1B
-511 T > C Comprar e -31 C > T
polimorfismos e H. pylori vacA
genótipos estão associados com risco de gastrite e úlcera gástrica em uma população mexicana.
Métodos
Nós realizados estudos endoscópicos em 128 pacientes com sintomas de dispepsia. Levou dois biópsias do corpo, antro, ou a borda da úlcera de cada paciente, e classificado nossos achados histopatológicos de acordo com o Sistema de Sydney. H. pylori
infecção e vacA
genotipagem foram realizadas através de PCR a partir de DNA total das biópsias gástricas. Foi confirmada a presença de anticorpos anti-H. pylori
IgG e IgM sérica em 102 indivíduos controle. Em ambos os assuntos de casos e controles, a IL-1B
-511 T > C
polimorfismo foi genotipados por PCR-RFLP e da IL-1B -31 C >. T
polimorfismo foi genotipados por pyrosequencing
resultados
Sessenta e dois vírgula sete (62,7%) dos 102 indivíduos controle foram H. pylori
seropositivos. Entre os temas de casos, 100 foram diagnosticados com gastrite crônica e 28 com úlcera gástrica. Descobrimos que 77% dos pacientes com gastrite crônica e 85,7% dos pacientes com úlcera gástrica eram H. pylori
positivo. A predominante H. pylori
genótipo foi vacA s1m1
(58,4%) e o subtipo mais frequente foi vacA S1
. A -511 TC
, (rs16944 -511 T > C) genótipo eo -511C
alelo foram associados com gastrite crônica (OR = 3,1; IC95% = 1,4-6,8 e OR = 3,0; IC95% = 1,4-6,0, respectivamente). Os indivíduos portadores -31T
(rs1143627 -31 C > T) foram encontrados para estar em maior risco de ter gastrite crônica (OR = 2,8; IC95% = 1,3-5,8). A IL-1B
-511C /-31T
haplótipo foi associada à gastrite crônica (OR = 2,1; IC95% = 1,2-3,8), mas não com úlcera gástrica.
Conclusões of the H. pylori vacA
genótipos aqui identificados foram semelhantes aos relatados para outras regiões do México. O vacA s1m1
genótipo não foi associada a úlcera gástrica. Na população mexicana sul, a IL-1B -511C Comprar e -31T
alelos e a -511C /-31T Comprar e -511T /-31T
haplótipos estão associados com risco aumentado de gastrite crônica e úlcera gástrica.
fundo
Helicobacter pylori
infecção está relacionada com a resposta inflamatória da mucosa gástrica. Enquanto a maioria dos indivíduos infectados permanecem assintomáticas, colonização persistente e inflamação crónica aumentar o risco de desenvolvimento de gastrite atrófica, úlceras pépticas, e o adenocarcinoma gástrico distal [1]. O desenvolvimento de gastrite crónica é o evento inicial no processo que conduz ao cancro do estômago. O risco de malignidade aumenta com a gravidade, cronicidade, e a duração do processo inflamatório [2, 3]. evolução clínica da infecção por H. pylori
é determinado pelas características genéticas do hospedeiro e bactérias, bem como fatores ambientais [4]. Enquanto H. pylori
é considerado uma classe I substância cancerígena, aceita-se que alguns genótipos ter maior virulência. As estirpes que expressam associada à citotoxina do gene A (CagA) e grandes quantidades de vacuolating citotoxina (VacA) são mais frequentemente encontrada em pacientes com úlceras pépticas e câncer gástrico [2, 5, 6]. Tem sido observado que VacA de H. pylori S1 /m1
estirpes produzem níveis elevados da citotoxina, as estirpes S1 /m2
produzir níveis moderados, e estirpes S2 /m2
produzem pouca ou nenhuma toxina [7, 9]. O vacA S1
subtipo está relacionado à maior gravidade da doença e um maior risco de desenvolver úlceras e cancro do estômago [5, 6, 10].
H. pylori
induzir a produção de IL-1β na mucosa gástrica. IL-1β modula a expressão de outros genes de citocinas pró-inflamatórias, tais como TNF-α, IL-2, IL-6 e IL-12, que aumentam a magnitude da inflamação [11]. A concentração de IL-1β produzida pelo epitélio inflamado é influenciado por dois polimorfismos bialélicos nas posições -511T > C (rs16944) e -31C > T (rs1143627). Estes polimorfismos estão em desequilíbrio genético quase total, e -31 é um polimorfismo TATA-box que afeta significativamente as interações DNA-proteína in vitro
. Assim, esses polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) pode modular a produção de IL-1β, afetando diretamente a transcrição [12, 13]. Dado que a IL-1β é um potente inibidor da secreção de ácido gástrico e podem contribuir para a dispersão de H. pylori
a partir do piloro para o corpo do estômago, polimorfismos no gene IL-1β pode ser considerado um factor fundamental na genética a determinação do padrão de gastrites que se desenvolve e um risco de transformação maligna [13, 14]. O -511T Comprar e -31C IL-1B
alelos estão associados com altos níveis de citocina e com inflamação grave ou câncer de estômago, em comparação com -511C Comprar e -31T
, que estão associados com baixos níveis de IL-1β. Esta associação com a infecção por H. pylori
ou câncer de estômago não tem sido significativo em todas as populações [2, 4, 6, 11, 13-20].
Em combinação, os fatores de bactéria de virulência e IL-B
polimorfismos (cagA + /vacA + /IL-1B-511T /IL-RN * 2
) estão associados com alterações histológicas graves na mucosa gástrica de algumas populações [1, 4]. No entanto, a variabilidade dos resultados entre populações e áreas geográficas tem sido uma fonte de controvérsia em curso [2, 13, 14]. Enquanto gastrite, úlcera, e duodenite constitui a quarta principal causa de doença na população mexicana [21], a base genética para as variações inter-individuais na resposta inflamatória e a produção de citoquinas, no contexto da infecção por H. pylori
, tem não foram bem estudados na população mexicana.
genotipagem do H. pylori vacA Comprar e IL-1B
polimorfismos podem ser importantes para a identificação precoce de indivíduos com alto risco de desenvolver doenças gástricas graves. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre IL-1B
-511 T > C Comprar e -31 C > T
polimorfismos ea presença de gastrite e úlcera gástrica, e analisar a relação de H. pylori vacA
genótipos com úlcera gástrica.
Métodos
População
Foram estudados 128 pacientes submetidos a um estudo endoscópico na Unidade especializada de Gastroenterologia Endoscopia na cidade de Chilpancingo, no estado de Guerrero, no México, a partir de abril de 2007 a maio de 2008. Todos os pacientes sofriam de dispepsia funcional, dor epigástrica e síndrome ulcerativa. Os pacientes que não receberam H. pylori
terapia de erradicação, e não tinham sido tratados com inibidores da bomba de protões nem com neutralizadores de pH gástricos durante os dois meses anteriores à endoscopia foram incluídos no estudo. Também estudamos 102 indivíduos sem sintomas de dispepsia, da mesma população como os casos, sem história de H. pylori
infecção ou doenças gastroduodenais. Em ambos os grupos, foram excluídos os indivíduos em tratamento não-esteróide medicamento anti-inflamatório não esteróide (AINE).
Consentimento informado foi obtido dos participantes ou de seus pais. hábitos alimentares dos participantes, fatores sócio-demográficos, história familiar de gastrite ou úlceras, consumo de álcool e tabagismo foram registradas através de enquetes. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Bioética da Universidad Autónoma de Guerrero.
Endoscopia e histologia gástrica
Para cada paciente, a endoscopia foi realizada utilizando um processador de vídeo e gastroscópio vídeo (Fujinon, Wayne, NJ, EUA). De cada paciente, tomamos duas biópsias do antro, corpus, ou a borda da úlcera; um espécime foi imediatamente fixado em formalina para testes histológicos e o outro foi colocado em solução tampão (Tris 10 mM pH 8,0, EDTA 20 mM pH 8,0, SDS a 0,5%) para H. pylori
diagnóstico. As biópsias destinados à detecção de H. pylori
foram mantidos a -20 ° C até processamento. Os cortes histológicos foram corados com hematoxilina-eosina e avaliadas por um patologista usando atualizados os critérios do sistema Sydney [22]. observação endoscópica e confirmação histopatológica foram utilizadas para determinar a patologia do paciente.
Sorologia
amostras de sangue (5 ml) foram retirados de todos os indivíduos do grupo controle. O soro foi testado para anticorpos IgG e IgM anti-H. pylori
por ensaio imunossorvente ligado a enzima (ELISA; internacionais imuno-Diagnostics, Foster City, CA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. A sensibilidade e especificidade deste método são 96% e 97%, respectivamente. Um sujeito foi considerada o H. pylori
-positivo se detectado, pelo menos, um dos dois anticorpos.
H. pylori
detecção e vacA

genotipagem de DNA total foi extraído a partir das biópsias gástricas de cada paciente através do fenol: clorofórmio: álcool isoamílico técnica, após a digestão com proteinase K [23]
nos casos, a presença de H. pylori
foi detectada por reacção em cadeia da polimerase (PCR) para os 16S. gene rRNA. Foram utilizados 150 ng de ADN total, 2,5 mM MgCl 2, dNTPs 0,2 mM (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), 10 pmol de cada um dos oligonucleótidos e 1 L de platina ®Taq ADN Polimerase (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) num volume final de 15 uL. A H. pylori
-positivas amostras foram submetidas a detecção de subtipos de vacA
por PCR. Para PCR da região sinal (S) e forma (m), utilizou-se 300 ng de ADN total, 1,5 mM MgCl 2, dNTP 0,2 mM, 15 pmol de cada um dos oligonucleótidos e 1 L de platina ADN ®Taq polimerase num volume final de 20 uL. Os protocolos de amplificação foram previamente descrito por Atherton et ai
. e Park et al
. [24, 25]. Em cada PCR, utilizou-se o DNA de ATCC43504 tensão, vacA S1 /m1
como controle positivo para H. pylori
e para vaca
genótipos. O ADN molde foi substituído com água desionizada estéril no controlo negativo. Todos os PCRs foram realizados em um Mastercycler ® Ep termociclador gradiente (Eppendorf, Hamburgo, Alemanha)

• avaliação sorológica de atrofia da mucosa gástrica em câncer gástrico
• progressão do cancro gástrico associado com a progressão do cancro gástrico locais humoral responses