Verband der IL1B -511C /-31T Haplotyp und Helicobacter pylori vacA Genotypen mit Magengeschwür und chronische Gastritis

Verband der IL1B -511C /-31T
Haplotyp und Helicobacter pylori vacA
Genotypen mit Magengeschwür und chronische Gastritis
Zusammenfassung
Hintergrund
Die Assoziation zwischen proinflammatorische Zytokin-Gen-Polymorphismen und Magen zu Helicobacter bedingte Krankheiten . pylori
variiert je nach Bevölkerung und das geografische Gebiet
Unser Ziel war es, festzustellen, ob die IL-1B
-511 T > C
und -31 C > T
Polymorphismen und H. pylori vacA
Genotypen sind mit dem Risiko einer chronischen Gastritis und Magengeschwür in einer mexikanischen Bevölkerung in Verbindung gebracht.
Methoden kaufen Wir mit den Symptomen einer Dyspepsie bei 128 Patienten endoskopische Untersuchungen durchgeführt. Wir nahmen zwei Biopsien aus dem Körper, Antrum oder Ulzera Rand von jedem Patienten und klassifiziert unsere histopathologische Befunde nach dem Sydney-System. H. pylori-Infektion
und vacA
Genotypisierung wurden aus Gesamt-DNA der Magen-Biopsien mittels PCR durchgeführt. Wir bestätigten die Anwesenheit von anti-H. pylori
Serum-IgG und IgM in 102 Kontrollpersonen. In beiden Fällen Probanden und der Kontrollgruppe, die IL-1B
-511 T > C
Polymorphismus von PCR-RFLP und die IL-1B -31 C >Genotypisierung wurde;. T
Polymorphismus genotypisiert wurde von Pyrosequenzierung
Ergebnisse
Zweiundsechzig Punkt sieben (62,7%) der 102 Kontrollpersonen waren H. pylori
seropositiv. Unter den Fall Probanden wurden 100 mit chronischer Gastritis und 28 mit Magengeschwür diagnostiziert. Wir fanden heraus, dass 77% der Patienten mit chronischer Gastritis und 85,7% der Patienten mit Magengeschwür waren H. pylori
positiv. Die vorherrschende H. pylori
Genotyp war vacA S1M1
(58,4%) und die häufigste Subtyp vacA s1
war. Die -511 TC
(rs16944 -511 T > C) Genotyp und das -511C
Allel wurden mit chronischer Gastritis (OR = 3,1, 95% CI = 1,4-6,8 und OR = 3,0, 95% CI = 1,4-6,0, respectively). Die Probanden tragen -31T
(rs1143627 -31 C > T) wurden auf einem höheren Risiko für chronische Gastritis (OR = 2,8, 95% CI = 1,3-5,8) erwiesen. Die IL-1B
-511C /-31T
Haplotyp wurde mit chronischer Gastritis (OR = 2,1, 95% CI = 1,2-3,8), aber nicht mit Magengeschwür verbunden.
Schlussfolgerungen
The H. pylori vacA
identifizierten Genotypen waren hier ähnlich wie bei anderen Regionen von Mexiko berichtet. Die vacA S1M1
Genotyp wurde nicht mit Magengeschwür verbunden. Im südlichen mexikanischen Bevölkerung, die IL-1B -511C
und -31T
Allele und die -511C /-31T
und -511T /-31T
Haplotypen mit einem erhöhten Risiko für chronische Gastritis assoziiert sind und Magengeschwüren.
Hintergrund Helicobacter pylori Infektion
wird auf die Entzündungsreaktion der Magenschleimhaut zusammen. Während die meisten infizierten Personen asymptomatisch bleiben, anhaltende Besiedlung und chronische Entzündungen erhöhen das Risiko der Entwicklung atrophische Gastritis, Magengeschwüren und distale Adenokarzinom des Magens [1]. Die Entwicklung der chronischen Gastritis ist das auslösende Ereignis in dem Prozess, der zu Magenkrebs führt. Das Entartungsrisiko steigt mit dem Schweregrad, Chronifizierung, und die Dauer des Entzündungsprozesses [2, 3]. Klinische Ergebnis von H. pylori
Infektion wird durch den genetischen Eigenschaften der Wirts und Bakterien sowie Umweltfaktoren bestimmt [4]. Während H. pylori
wird als eine Klasse zu sein, die ich Karzinogen, ist es akzeptiert, dass einige Genotypen größere Virulenz haben. Die Stämme, die Cytotoxin-assoziierte Gen A (CagA) und große Mengen an Vakuolen-Cytotoxin (VacA) werden am häufigsten gefunden bei Patienten mit peptischen Geschwüren und Magenkarzinom [2, 5, 6] ausdrücken. Es wurde beobachtet, dass H. pylori vacA s1 /m1
Stämme hohe Konzentrationen des cytotoxin produzieren, Stämme s1 /m2
moderaten Niveaus erzeugen, und Stämme s2 /m2
produzieren wenig oder gar kein Toxin [7, 9]. Die vacA s1
Subtyp zu höheren Schweregrad der Erkrankung und ein höheres Risiko der Entwicklung von Geschwüren und Magenkrebs im Zusammenhang [5, 6, 10]. H.
pylori
Produktion von IL-1β in der Magenschleimhaut zu induzieren. IL-1β moduliert die Expression von anderen proinflammatorischen Cytokin-Gene, wie TNF-α, IL-2, IL-6 und IL-12, die das Ausmaß der Entzündung erhöhen [11]. C (rs16944) und -31C >; T (rs1143627) Die Konzentration von IL-1β durch das entzündete Epithel erzeugt wird, durch zwei biallelic Polymorphismen in Positionen -511T >beeinflusst. Diese Polymorphismen sind in fast gesamten genetischen Ungleichgewichts und -31 ist ein TATA-Box-Polymorphismus, die signifikant DNA-Protein-Wechselwirkungen in vitro
beeinflusst. Somit können diese single-nucleotide polymorphisms (SNPs) Produktion von IL-1β modulieren, direkt die Transkription zu beeinflussen [12, 13]. Da IL-1β ein starker Inhibitor der Magensäuresekretion und beitragen zur Dispersion von H. pylori
vom Pylorus zum Corpus des Magens, Polymorphismen im IL-1β Gen kann ein Schlüssel genetischen Faktor in Betracht gezogen werden in Bestimmung der Muster der Gastritis, die und ein Risiko für maligne Transformation entwickelt [13, 14]. Die IL-1B -511T
und -31C
Allele sind mit einem hohen Grad des Zytokins und mit schweren Entzündungen oder Magenkrebs verbunden sind, im Vergleich zu -511C
und -31T
, die verbunden sind, mit geringen Mengen an IL-1β. Dieser Verein mit Helicobacter-pylori-Infektion
oder Magenkrebs hat in allen Bevölkerungsgruppen nicht signifikant gewesen [2, 4, 6, 11, 13-20].
In Kombination Bakterium Virulenzfaktoren und IL-B
Polymorphismen (cagA + /vacA + /IL-1B-511T /IL-RN * 2
) sind verbunden mit schweren histologischen Veränderungen in der Magenschleimhaut von einigen Populationen [1, 4]. Allerdings hat sich die Variabilität der Ergebnisse in der Bevölkerung und geografischen Gebieten eine Quelle der laufenden Kontroverse [2, 13, 14]. Während Gastritis, Ulkus und Duodenitis die vierthäufigste Ursache der Krankheit in der mexikanischen Bevölkerung [21] dar, die genetische Grundlage für interindividuelle Schwankungen in Entzündungsreaktion und Zytokin-Produktion, im Zusammenhang mit der H. pylori-Infektion
hat nicht gut für die Entwicklung schwerer Magenerkrankungen in der mexikanischen Bevölkerung.
Genotypisierung von H. pylori vacA
und IL-1B
Polymorphismen könnte wichtig sein, in der Früherkennung von Personen mit hohem Risiko untersucht. Das Ziel dieser Studie war es, die Beziehung zwischen IL-1B
-511 T >zu bewerten; C
und -31 C > T
Polymorphismen und das Vorhandensein von chronischer Gastritis und Magengeschwür, und die Beziehung zu analysieren von H. pylori vacA
Genotypen mit Magengeschwür.
Methoden
Bevölkerung
Wir untersuchten 128 eine endoskopische Untersuchung in der Fachstelle für Gastroenterologie Endoskopie in der Stadt Chilpancingo ausgesetzt Patienten, im Bundesstaat Guerrero, Mexiko, von April 2007 bis Mai 2008. Alle Themen aus funktioneller Dyspepsie, Magenschmerzen gelitten und Colitis-Syndrom. Patienten, die nicht H. pylori
erradication Therapie erhalten, und hatte nicht mit Protonenpumpeninhibitoren noch mit Magen-pH-Neutralisierungsmittel während der zwei Monate vor der Endoskopie behandelt wurden in die Studie aufgenommen. Wir untersuchten auch 102 Probanden ohne Dyspepsie Symptome, aus derselben Population wie die Fälle, ohne Geschichte von H. pylori-Infektion
oder gastro-Erkrankungen. In beiden Gruppen ausgeschlossen wir Probanden unter nicht-steroidalen Antirheumatikum (NSAID) Behandlung.
Einwilligung wurde von Teilnehmern oder ihren Eltern erhalten. Teilnehmer Essgewohnheiten, soziodemografische Faktoren, Familiengeschichte von Gastritis oder Geschwüre, Alkoholkonsum und Rauchgewohnheiten wurden durch Befragungen erfasst. Die Studie wurde von der Bioethik-Komitee der Universidad Autónoma de Guerrero genehmigt wurde.
Endoskopie und Magen-Histologie
Für jeden Patienten, Endoskopie wurde mit einem Videoprozessor und Video-Gastroskop durchgeführt (Fujinon, Wayne, New Jersey, USA). Von jedem Patienten haben wir zwei Biopsien aus dem Antrum, Korpus oder Ulzera Rand; eine Probe wurde sofort in Formalin zur histologischen Prüfung fixiert und die andere wurde in Pufferlösung (Tris 10 mM pH 8,0, EDTA 20 mM, pH 8,0, SDS 0,5%) für H. pylori
Diagnose gestellt. Die Biopsien, die für H. pylori
Detektion wurden bei -20 ° C bis zur Verarbeitung gehalten wird. Die histologischen Schnitte wurden von einem Pathologen mit Hämatoxylin-Eosin und ausgewertet gefärbt, um die aktualisierten Sydney-System Kriterien [22]. Endoskopische Beobachtung und histopathologischen Bestätigung wurden verwendet, der Pathologie des Patienten zu bestimmen.
Serologie
Blutproben (5 ml) wurden von allen Probanden genommen. Das Serum wurde für IgG und IgM anti-H getestet. pylori und Videos enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA; Internationale Immuno-Diagnostics, Foster City, CA, USA) gemäß den Anweisungen des Herstellers. Die Sensitivität und Spezifität dieses Verfahrens sind 96% und 97% betragen. Ein Subjekt wurde als H. pylori -positiven
wenn man mindestens einen der beiden Antikörper nachgewiesen.
H. pylori
Detektions- und vacA
Genotypisierung
Gesamt-DNA wurde aus den Magenbiopsien extrahiert jedes Patienten über die Phenol: Chloroform: isoamilic Alkohol Technik, nach Verdau mit Proteinase K [23]
In den Fällen, die Anwesenheit von H. pylori
durch Polymerasekettenreaktion (PCR) für die 16S erkannt wurde. rRNA-Gen. Wir haben 150 ng Gesamt-DNA, 2,5 mM MgCl 2, 0,2 mM dNTPs (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 10 pmol jedes Oligonukleotids und 1 U Platinum ®Taq DNA-Polymerase (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) in einem Endvolumen von 15 &mgr; l. Die H. pylori
-positiven Proben wurden zur Detektion von Subtypen von vacA und Videos PCR unterzogen. Für die PCR der Signalbereich (e) und Medium (m), verwendeten wir 300 ng Gesamt-DNA, 1,5 mM MgCl 2, 0,2 mM dNTP, 15 pmol jedes Oligonukleotids und 1 U Platinum DNA ®Taq Polymerase in einem Endvolumen von 20 &mgr; l. Die Amplifikationsprotokolle wurden zuvor von Atherton et al
beschrieben. und Park et al
. [24, 25]. In jeder PCR verwendeten wir DNA aus dem Stamm ATCC43504, vacA s1 /m1
als positive Kontrolle für die H. pylori
und für vacA
Genotypen. Die Templat-DNA wurde mit sterilem deionisiertem Wasser in der negativen Kontrolle ersetzt. Alle PCRs wurden in einem Mastercycler durchgeführt ® Ep Gradient Thermocycler (Eppendorf, Hamburg, Deutschland)
IL-1B
-511 T >. C und -31 C > T Genotypisierung kaufen Wir erhalten periphere Blut-DNA aus den Kontrollpersonen unter Verwendung von Millers Technik [26]. Genotypisierung des IL-1B -511
T > C
SNP erfolgte mittels PCR-Restriktionsfragmentlängen-Polymorphismus (RFLP), wie zuvor beschrieben [1]. Acht Mikroliter des PCR-Produkts wurden verdaut mit 2 U AvaI
(New England Biolabs, Ipswich, MA, USA) bei 37 ° C für 12 h und in 2% Agarose-Gelen analysiert. Die IL-1B
-31 C > T
SNP von Pyrosequenzierung nach der Methodik von Pérez et al
beschrieben Genotypisierung wurde. [27]. Von den 230 Proben verarbeitet wurden 12% einer PCR-RFLP für Genotyp Verifikation.
Statistische Analyse
Wir wandten X 2 oder der exakte Test nach Fisher Frequenzen zwischen den Gruppen zu vergleichen und Varianzanalyse (ANOVA) oder Kruskal-Wallis-Tests Mittelwerte und Mediane zu vergleichen sind. In der Kontrollgruppe, werteten wir die Hardy-Weinberg-Gleichgewicht (HWE) für IL-1B
Polymorphismen. Um die Zuordnung von IL-1B
Polymorphismen mit chronischer Gastritis und Magengeschwür zu bestimmen, untersuchten wir binomischen und Polynom logistische Regressionsmodelle und verwendet multiplikative Interaktion Modelle die Wirkung der möglichen Wechselwirkungen zwischen H. pylori
zu studieren und IL- 1B
Genotypen und Magengeschwür. Wir Lewontin der D 'Statistik für Kopplungsungleichgewicht zwischen Loci berechnet. Zweischwänziges statistischen Tests wurden mit einem Signifikanzniveau von 5% durchgeführt mit Stata 10-Software.
Ergebnisse
histologische Diagnose
Von den 128 untersuchten Patienten, 78,1% hatten chronische Gastritis und 21,9% hatten Magengeschwür. Die Mehrzahl der Fälle und Kontrollen waren Frauen. Das Durchschnittsalter lag bei 29 Jahren für die Kontrolle (Bereich 17-61), 46 Jahre für chronische Gastritis Fälle (Bereich 11-80), und 56 Jahre bei Magengeschwür-Patienten (Bereich 25-83). Es gab erhebliche Unterschiede zwischen den drei Gruppen in Alter, Schulbildung, geographische Herkunft, Familiengeschichte von Gastritis oder Ulzera und Rauchgewohnheiten (p < 0,05)., Tabelle 1.Table 1 soziodemographische Merkmale in Fällen und Kontrollen

Hüllen

Charakteristika
Kontrollen
(n = 102)
Chronische Gastritis
(n = 100)
Magengeschwür
(n = 28)
p-Wert
Alter (Mittelwert ± sd; Jahre)
29,8 ± 11
46,1 ± 14,6
56,3 ± 17,1
< 0,001 €
Geschlecht n (%)
Weiblich
65 (63,7)
64 (64)
19 (67,9)
0,917 θ
männlich
37 (36,3)
36 (36)
9 (32,1 ) Nachrichten Bildung [Mittelwert (Bereich); Jahre]
12 (12-17)
12 (6-17)
6 (0-12)
< 0,001 †
Geografisches Gebiet n (%)
Chilpancingo
44 (43,1)
30 (30)
5 (17,9)
0,021 θ
Sonstige Gemeinden
58 (56,9)
70 (70)
23 (82,1 )
Familiengeschichte von Gastritis und /oder Geschwür n (%)
0,001 θ
No
49 (48,0) 39 (39,0
)
22 (78,6)
Ja
53 (52,0)
61 (61,0)
6 (21,4)
Rauchen Gewohnheit n (%)
No
39 (38,2)
65 (65)
10 (35,7)
< 0,001 θ
Aktueller Raucher oder 63
ehemaliger Raucher (61,8)
35 (35)
18 (64,3)
Alkoholkonsum n (%)
Nein
14 (13,7)
22 (22)
7 (25)
0,211 θ
verbraucht oder verbraucht
88 (86,3)
78 (78)
21 (75)
€ ANOVA-Test; † Kruskal-Wallis-Test; θ X2-Test; Exact Test
H. pylori
Infektion und vacA
Genotypen des Ω Fisher
64/102 (62,7%) der Kontrollgruppe anti-H. pylori
Antikörper wurden nachgewiesen; 47 Kontrollpersonen (46,1%) waren für positive entweder IgG oder IgM und 17 (16,7%) waren IgG + /IgM +. Von den 128 Fällen, 101 (78,9%) waren H. pylori
-positiver und die durch Diagnose variiert die Prävalenz. Ein vacA
Genotyp wurde in 85/101 (84,2%) infizierten Patienten nachgewiesen und zwei Genotypen wurden in 15/101 (14,8%) der Patienten festgestellt. Der S1M1
Genotyp in 59/101 (58,4%) infizierten Patienten, s1m2
erkannt wurde in 37/101 (36,6%) festgestellt wurde, S2M2
in 19/101 (18,8%) und S1M1 /s1m2
in 15/101 (14,8%) infizierten Patienten. Eine Probe war verstärken nicht für m
Subtypen. Genotypen S1M1
und s1m2
waren überwiegend in den beiden Gruppen von Fällen, Tabelle 2. Die meisten, 97/116 (83,6%), waren typisiert Subtypen vacA s1
. Die s1
Variante wurde in 22/25 (88%) der Patienten mit Ulcus und 75/91 (82,4%) der Patienten mit Gastritis nachgewiesen. Co-Infektion mit S1M1 /s1m2
Genotypen war häufiger bei Patienten mit chronischer Gastritis (18,2%) als bei Patienten mit Magengeschwür (4,2%). Es gab keine signifikante Assoziation zwischen der H. pylori-s1
Subtyp und Magengeschwür (OR = 1,9, 95% CI = 0,29 bis 12,8, p = 0,48) als chronische Gastritis verglichen. H. pylori-Infektion wurde
mit chronischer Gastritis (OR = 2,3, 95% CI = 1,2-4,1, p = 0,009) und mit Magengeschwür (OR = 4,0, 95% CI = 1,3-12,5, p = 0,016) im Vergleich zu controls.Table 2-Genotypen und Allele von H. pylor
i vacA
Frequenzen in Fällen.
Genotypen oder Allele
Fälle
p-Wert

Chronische Gastritis
n (%)
Magengeschwür
n (%)


Genotypen
S1M1
31 (40,2)
13 (54,1)
0.254Ω
s1m2
16 (20,8)
6 (25,0)
S2M2
16 (20,8)
3 (12.5)
S1M1 y s1m2
14 (18.2)
1 (4.2)
nicht getippt * Suche - Seite 1 (4.2)
insgesamt
77 (100)
24 (100)
Allelen s
s1
75 (82,4)
22 (88,0)
0.551Ω
s2
16 (17,6)
3 (12,0)
insgesamt
91 (100) 25
( 100)
Allelen m
m1
45 (49,5)
14 (58,3)
0,187 θ
m2
46 (50,5) 10
(41,7 )
insgesamt
91 (100)
24 ♪ (100)
* Signalbereich S1
Genotyp Ω Fisher Exact Test θ X2-Test
♪ Es ist nicht möglich war, die m zu verstärken Allel in einer Biopsie
IL-1B -511 T >. C
und -31 C > T
Polymorphismen in der Kontrollgruppe
, die -511 T > C
und -31 C > T IL-1B
Genotypen SNPs in Hardy-Weinberg-Gleichgewicht (HWE) waren (für SNP -511 X 2 = 0,500, p = 0,479; für SNP -31 X 2 = 0,014, p = 0,905). Die genotypische Frequenzen des IL-1B
-511 T > C
und -31 C > T
SNPs waren signifikant unterschiedlich zwischen den Patienten und der Kontrollgruppe (-511 T > C
, p = 0,015; -31 C > T
, p = 0,027). Für rs16944 (-511 T > C), war die Häufigkeit des Genotyps TC höher bei Patienten mit Gastritis (60%) und Ulcus (46,4%) als in der Kontrollgruppe (38,2%). Genotype CC war die am häufigsten bei Patienten mit Magengeschwür (17,9%). Der Genotyp Häufigkeitsverteilung für rs1143627 (-31 C > T) CT betrug 57,1% bei Patienten mit Magengeschwür, 52% bei Patienten mit chronischer Gastritis und 41,2% in der Kontrollgruppe. Genotype TT war häufiger bei Patienten mit Gastritis. Die IL-1B -31T
Allels war die häufigste unter den Patienten mit chronischer Gastritis und Ulcus im Vergleich zu Kontroll, Tabelle 3. Konkordanz der Ergebnisse zwischen Pyrosequenzierung und PCR-RFLP Genotypisierung von -31 C > T SNP betrug 96,4%. Kopplungsungleichgewichts war fast vollständig zwischen IL-1B-31
und IL-1B-511
in den Fall Probanden (D '= 0,97; p < 0,001) .Tabelle 3 genotypische Verteilung und Allelhäufigkeiten von IL-1
B
Polymorphismen in den Fällen und Kontrollen.

Hüllen

511 T > C SNP
Kontrollen
n (%)
Chronische Gastritis
n (%)
Magengeschwür
n (%)
p-Wert
Genotype
TT 53 (52,0) auf
31 (31,0)
10 (35,7)
0,015 θ
TC
39 (38,2)
60 (60,0)
13 (46,4)
CC
10 (9.8)
9 (9,0)
5 (17.9 )
Allels
T
0.711
0.610
0.589
0,060 θ
C
0.289
0.390
0.411
-31 C > T SNP
Genotype
CC
52 (51,0)
31 (31,0)
10 (35,7)
0,027 Ω
CT 42
(41,2)
52 (52.0)
16 (57,1)
TT
8 (7,8)
17 (17,0)
2 (7.1)
Allels
C
0.716
0.570
0.643
0,009 θ
T
0.284
0.430
0.357
θ X2-Test Ω Fisher Exact Test
die -511TC /-31CT
Genotypen häufiger bei Patienten mit chronischer Gastritis (48%) und bei Patienten mit Magengeschwüren (42,9%); im Gegensatz dazu war die -511TT /-31CC
Kombination in 29% und 32,1% dieser Gruppen sind. CT /TT
von IL-1B
-31 C > T
SNP wurde mit dem Vorhandensein von chronischer Gastritis (OR = 2,8, 95% CI = 1,3 bis 5,8, p = 0,006), aber nicht mit die Anwesenheit von Magengeschwür, Tabelle 4. Einstellung für Alter, Herkunft, Schulbildung, Rauchgewohnheiten, Familiengeschichte von Gastritis oder Magengeschwür, und H. pylori-Infektion
, TC /CC
von IL-1B
-511 T > C
SNP signifikant mit Geschwür und chronische Gastritis zusammen, verglichen (OR = 2,9, 95% CI = 1,4-5,8, p = 0.004) zu den Kontrollen verbunden war. Die Trennung von Diagnose, fanden wir, Vereinigung von -511TC /CC
mit chronischer Gastritis (OR = 3,0, 95% CI = 1,4-6,3, p = 0,003). Die -511C /-31T
und -511T /-31T
Haplotypen waren signifikant mit chronischer Gastritis, aber nicht mit Magengeschwür, Tabelle 5.Table 4 Verband der IL-1

• Die serologische Beurteilung der Magenschleimhaut Atrophie im Magen-cancer
• Magenkrebs Progression mit lokalen humorale Immun responses