| Stomach Health > skrandžio sveikatos >  > Stomach Knowledges > tyrimai

Ryšys hipoksijos-indukuojamąją faktoriaus 1α ir p21WAF1 /CIP1 į mobiliuosius apoptozę ir klinikinei baigčiai pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu

Ryšys hipoksijos-indukuojamąją faktoriaus 1α ir p21 WAF1 /CIP1 į mobiliuosius apoptozę ir klinikinei baigčiai pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu
tezės
Background pervežimas Hipoksija-indukuojamąją faktorius 1α (HIF-1α) vaidina esminis vaidmuo deguonies homeostazę. Iš HIF-1α indukuojamas genų ekspresija yra susijęs su naviko progresavimo. P21 tarpininkauja ląstelės ciklo suimti ir yra viena iš tolesnių genų, kuriems skirta HIF-1.
Ligoniai ir metodai
Mes išnagrinėjome tarp HIF-1α ir p21 išraiškos, apoptozės ir naviko progresavimas santykius naudojant audinių pavyzdžius, gautus chirurginiu iš 126 pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu.
rezultatai
Imunohistocheminiais analizė parodė, kad nuostoliai p21 išraiškos teigiamai koreliavo su paciento amžiumi ir naviko dydžio. Limfmazgių metastazės buvo žymiai dažnesni navikų nuostolių p21 išraiškos (p = 0,022). HIF-1α teigiamas /P21-neigiami navikai turėjo Apoptozė rodiklis yra mažesnis negu kitų navikų mėginiuose, ir pacientams, sergantiems HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas navikų taip pat turėjo žymiai prasčiau prognozę nei kitų pacientų grupėms.
Išvada
Šie rezultatai rodo, kad nuostoliai HIF-1α-priklausomų P21 raiškos rezultatų sumažėjo apoptozę, padidintą ląstelių išgyvenimą ir daugiau agresyvių auglius.
faktai
nereguliuojama augimo vėžinių ląstelių dažnai sukelia hipoksinės sąlygomis naviko ląstelių mases. Naviko hipoksija rezultatai tarp padidėjęs deguonies suvartojimo sparčiai dviračių vėžinių ląstelių ir nepakankamo deguonies tiekimo pusiausvyros dėl to, kad fiziologinio kraujagyslių tinklo trūkumas. Daugialąsčiai organizmai vystėsi ląstelių mechanizmus, kad tarpininkauti dėl adaptacinių molekulinės atsakymų į hipoksija kaskados. HIF-1α yra transkripcijos faktorius, aktyvuoja genų ekspresiją, prisijungdamas prie hipoksijos reaguoja elementą (HRE), cis-veikiantis DNR seka šiuo Upstream kelių genų svarbius ląstelių atsakas į hipoksija [1]. HIF-1α reaguoja genai taip pat veikia į glikolizės keliu ir kraujodaros ir angiogenezę, per kurios visos ląstelės įgyja hipoksijos pritaikyti metabolizmą ir padidinti deguonies [2]. Neseniai HIF-1α tapo pagrindiniu reguliatoriumi į skrandžio vėžio augimo [3].
Apoptozę yra evoliuciškai išsaugota ląstelių mirtis mechanizmas, taip pat įvyksta prisitaikanti mobiliojo ryšio atsakas į hipoksinio streso. Apoptozę, taip pat yra svarbi apsaugos priemonė prieš auglių vystymuisi. Navikai, kad eksponuoti praradimą p53 naviko slopintuvas genų eksponatas mažesnio hipoksija sukelta ląstelių mirties ir atitinkama padidėjimą naviko progresavimo [4]. P21 genas (WAF1) buvo klonuotas genetinės ekrane tolesniems vykdomuosius p53 ir atskirai skirtame tiekėjų reguliatoriai cikloniniai priklausoma kinazės (CDKs) kaip CDK-bendrauja baltymų (CIP1) ekrane [5]. P21 promotorius gali būti transactivated pagal HIF-1 žmogaus prostatos vėžio ląstelių linijos, nurodant, kad p21 yra HIF-1 tikslinio geno [6]. Be to, hipoksija sukeltos P21 išraiška buvo panaikinta ląstelėse trūksta HIF-1α, bet ne tėvinės ląstelės [7].
HIF-1α todėl gali skatinti tiek ląstelių išlikimo ir augimo sustojimas per hipoksijos reaguoja genų indukcija. Šiame tyrime mes išnagrinėjo HIF-1α į hipoksinio kontrolės naviko progresavimo vaidmenį nagrinėjant tarp HIF-1α išraiškos, p21 saviraiškos ir apoptozės santykius audinių pavyzdžius iš pacientų, sergančių skrandžio vėžiu.
Medžiagos ir metodai
Klinikiniai medžiagos
tiriamieji buvo 126 pacientai, sergantys skrandžio vėžio (85 vyrai, 41 moterys; amžiaus ribos, nuo 27 iki 88 metų, kurių vidutinis amžius, 65.2 metų), kuriems buvo pašalintas skrandis mūsų institucijoje 1994 Gydomasis rezekcija atlikta 77 pacientų ir ne gydomasis rezekcija in 49. rezekcijos audinių mėginių buvo nustatyta 10% formaldehido tirpalu ir įdėta į parafiną. Profiliai (4 mkm storio) buvo montuojamas ant stikliukų. Visi mėginiai buvo tiriami mikroskopiškai ir histologiškai, remiantis pasiūlytų bendrųjų taisyklių skrandžio vėžiu ir tyrimo [8] nustatytus kriterijus. Histologinio tyrimo buvo atliktas audinių preparatų dažytų hematoksilinu ir eozinu (H & E). Atsižvelgiant į dabartinę studijų, augliai buvo suskirstyti į dvi histologinių tipų: diferencijuoti tipo, susidedantis spenelių adenokarcinoma ir kanalėlių adenokarcinoma, ir neišrūšiuotos tipo, susidedantis blogai diferencijuotą adenokarcinoma, antspaudo žiedas ląstelių karcinoma ir adenokarcinoma mucinous. Du parafino blokai buvo paruošti visiems pacientams "vieno turinčių ir naviko audinį ir gretimuose normaliuose audiniuose, ir kitas, kuriame naviko audinį invazija į giliausią lygį skrandžio sienelės.
Imunohistocheminį dažymo
Visi egzemplioriai buvo immunostained su monokloninis antikūnai prieš p21 WAF1 /CIP1 (SX118, skiesti 1:50, DaKo, Glostrup, Danija), p53 (do-7, skiesti 1:50, DAKO, Glostrup, Danija), ir HIF-1α (NB 100- 105, praskiestas 1:. 100, Novus Biologicals, Littleton, CO, JAV) [9] Po deparaffinization ir rehidratacija, už p21 ir p53 imunodažymu skaidres buvo autoklavinio į citrato buferio (0,01 M, pH 6,0) esant 120 ° C temperatūroje 10 minučių;.. 0,001 M EDTA (pH 8,0) buvo naudojamas HIF-1αimmunostaining, kad būtų lengviau reaktyvumą fiksuoto patalpinto audinio antigeno su antikūno endogeninio peroksidazės buvo užblokuotas inkubavimą metanolyje mėginius, kurių sudėtyje yra 0,3% vandenilio peroksido 10 minučių mėginiai buvo tada skalaujami tirpalo fosfato buferio druskų tirpalo (PBS) ir inkubuojama su normaliu triušio serumo 30 minučių. Dalys buvo inkubuotos su minėtų pirminių antikūnų 2 valandas kambario temperatūroje, tada skalaujami tris kartus PBS. Norint nustatyti, mes panaudojome Histofine SAB-pašto (M) komplektas (Nichirei Corp., Tokijas, Japonija). tada dalys buvo inkubuotos su biotinilintu triušio prieš pelės immunogloblin (Ig; IgG, IgA, ir IgM; Nicchirei Corp) 10 minučių, triskart plaunami PBS ir apdorojimo su peroksidaze konjuguotų streptavidinu 10 minučių. Po galutinio plovimo PBS, peroksidazė etiketė buvo aptikta inkubaciją diamino-benzidinas tetrahidro-chlorido (DAB) skyrius 3 minutes. Branduolinė skaitliukas dažymo buvo padaryta naudojant Mayer hematoksilinu sprendimą. Dėl neigiamos kontrolės, pirminiai antikūnai buvo pakeistos ne imuninė, normalus kraujo serume. Automatizuotas imunohistocheminis taip pat buvo atliktas remti pirmiau aprašytą imunodažymu, naudojant Ventana Discovery ™ sistema (Ventana Medical Systems, Inc., Tucson, AZ, USA).
Vertinimas imunodažymu
p21 baltymo buvo pateikti branduoliais naviko ląstelių (1A pav.) Kai kuriais atvejais, normalus skrandžio gleivinės išreikštas P21 baltymo, o branduolinė dažymo galėtų būti aptikta paviršinių pasiekia iš naviko, bet ne į gilesnius regionuose. Mes suskaityti P21-teigiamas ląstelių skaičių visoje naviko skyriuje, o įvertino P21-postive ląstelių skaičių pagal sluoksnių gylio. Iš HIF-1α imunodažymu modelis navikas buvo branduolinės ir /arba citoplazmos (1B pav.) Branduolinė dažymo HIF-1α buvo išvykęs į normalaus audinio išskyrus citoplazmos dažymo. Visuose mėginiuose, Baltymas p53 neberasta normalaus audinio ir dalyvauja naviko ląstelių (1c pav) branduolių. Mobilųjį su branduoline imunodažymu už p21, p53 ar HIF-1α (silpna ar stipria) pelnytas teigiamas. Remiantis šiais kriterijais, buvo apskaičiuota sritys židinio dažymą su didžiausiu procentu p53- ir p21 teigiamas branduolinės dažymo per giliai naviko audinyje. Auglys buvo gavo kaip p21- arba p53 teigiamas, kai daugiau nei 10% naviko ląstelių turėjo branduolinę dažymo, laikantis ankstesnėse ataskaitose [10]. HIF-1α išraiška buvo dažnai pastebima regionų visame invazija kraštų naviko ir nudžiūvusiuose srityse, kaip antai arti giliai opa. Mes gavo navikai kaip teigiami už HIF-1α raiškos jei branduolinė dažymo buvo aptikta daugiau nei 10% vėžinių ląstelių, nepriklausomai nuo citoplazmos reaktyvumo bet kokiu lygmeniu [9, 11]. 1 paveikslas) P21 raiška greta naviko audinyje. Branduolinė imunodažymu yra akivaizdus (originalas didinimas, 100 ×). B), HIF-1α išraiška užplūsta regionus naviko. Kintamumas intensyvumo branduolinės imunodažymu akivaizdu, lydimas citoplazmos dažymo (originalas priartinimas, 100 ×). C), Branduolinės imunodažymu p53 auglio audinyje (originalas priartinimas, 100 ×). D), vėžinių audinių tamsintas su H & E (originalas didinimas, 200 ×).
naviko audinio yra ląstelės (rodyklė) su būdingų bruožų apoptozės Įvertinimas pagal apoptozės
Mes vartus apoptozinių ląsteles, kaip ir rodo tipines charakteristikas apoptozės, kai audinio mėginiai buvo tamsintas su H &. E (1d pav). buvo identifikuoti Apoptozinės ląstelės remiantis būdingų bruožų apoptozės: sutankinimo ir migracijos branduolinių ir ląstelių kontūrų, branduolinės fragmentacija ir gumburo, o apoptozinių įstaigoms [12] buvimą. Apoptozinės ląstelės skaičiuojami audinių pavyzdžius iš visų pacientų. Penki didelės galios laukai (× 400) su gausiausio platinimo vėžinių ląstelių buvo atrinkti skaičiaus ir buvo skaičiuojami tarp 1000 ir 1500 naviko ląstelės. tada apoptozės indeksas apskaičiuotas kaip apoptozinių ląstelių procentais. buvo vengiama sritys, turintys didelę nekrozė. Vienas patologas ne kiekvienai institucijai peržiūrėjo skaidres ir skaičiuojami apoptozinių ląsteles pagal pirmiau aprašytų kriterijų.
Statistinė analizė
BMDP statistiniu paketu programos (BMDP, Los Andželas, Kalifornija) IBM (Armonk, NY) 3090 mainframe Kompiuteriai buvo naudojami visų statistinės analizės [13]. Duomenų rinkiniai buvo lyginamos pagal chi kvadrato ir Stjudento t bandymų naudojant BMDP 4F ir 3S programas. BMDP 1L programa buvo naudojamas analizuoti išgyvenimo laikas naudojant Kaplan-Meier metodu. Statistinis reikšmingumas buvo nustatomas P < 0,05 lygį.
Rezultatai
P21 išraiška ir Klinikos-patologinis veiksniai
1 lentelė rodo išraiškos ar praradimo išraiška p21 koreliaciją su keliais Klinikos-patologinis veiksnių. Apskritai, 71 (56,3%) iš 126 naviko egzemplioriai buvo neigiamas p21 išraiška. Be navikų iš pacientų jaunesniems kaip 65 metų amžiaus, praradimas p21 išraiška buvo žymiai dažnesni nei auglių iš pacientų daugiau nei 65 (p = 0,026) amžiaus. Praradimas p21 išraiška buvo žymiai dažnesni auglių su didelio dydžio (p = 0,03), palyginti su mažesnių navikų. Kalbant apie metastazių, navikai, kurių praradimas p21 išraiškos linkę parodyti padažnėja limfinės invazijos (p = 0,089, 1 lentelė) ir žymiai aukštesnio dažnio limfmazgių metastazių (p = 0,022, 2 lentelė) nei P21-išreikšti navikų. 3 lentelė rodo tarp p21 išraiškos santykį, o p53 ir HIF-1α išraiška. Padidėjusi p53 buvo aptikta 57 (45,2%) navikų ir HIF-1α raiška buvo aptikta 49 (38,9%) navikų. Imunohistocheminis analizė neatskleidė koreliaciją tarp p21 saviraiškos ir p53 išraiškos arba p21 ir HIF-1α raiškos (p = 0,444 ir 0.609, atitinkamai) .table 1 Sąryšis tarp p21 saviraiškos ir klinikos-patologinis veiksnių
veiksnių

P21 (+) (n = 55)
P21 (-) (n = 71)
P vertę

Amžius (metai)
< 65
20
40
0,026
65 ≦
35
31
Lytis
Vyras
38
47
0,731
Moteris
17
24
Gylis invazija
t1
33
35
0,231
t2,3,4
22
36
histologijos
Diferencijuotas
35
39
0,325
Nediferencijuota
20
32
auglio dydį
< 3 cm
23
22
0,03
3 cm ≦
22
49
limfinės invazija
Neigiama
26
23
0.089
teigiamą
29
48
Venų invazija
Neigiama
42
57
0,595
teigiamą
13
14
2 lentelė Ryšys tarp P21 išraiška ir metastazių

p21-neigiamas naviko (%)
p reikšmė
Limfmazgių metastazės pervežimas neigiamas
36/75 (48,0)
0,022
Teigiamas
35/51 (68,6)
metastazių kepenyse
Neigiama
68/122 (55,7)
0.447
teigiamą
3/4 (75,0)
peritoninė sklaida
Neigiama
62/112 (55,4) pervežimas 0.525
teigiamą
9/14 (64,3) pervežimas lentelėje 3 Ryšys tarp p21 ir p53 ir HIF-1α išraiška


p21
<-asis>


teigiamas (N = 55)
Neigiamas (n = 71)
P vertę
p53
teigiamas (N = 57)
27
0,444
Neigiamas 30
(n = 69)
28
41
HIF-1α
teigiamas (N = 49)
20
29 0,608
Neigiama
(n = 77)
35
42
Apoptozę susijęs su HIF-1α ir p21 išraiškos Viesbutis The reiškia aprotoninis indeksas visų 126 navikų buvo 8,95 ± 6,24 (nuo 0-37). Navikai buvo suskirstyti į keturias skirtingų populiacijų remiantis HIF-1α ir p21 raiška ir vidutinio apoptozės indeksas kiekvienoje grupėje buvo apskaičiuotos (4 lentelė). Navikai, kurie buvo HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas turėjo žemiausią Apoptozė indeksą. Ten buvo didelis skirtumas tarp navikų, kurie buvo HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas, ir tie, kurie buvo HIF-1α neigiamas /P21-neigiamas (p = 0,037) .table 4 Apoptozę susijęs su HIF-1α ir p21 išraiškos
Factor "
Apoptozė puslapis
HIF-1α (-), P21 (+), N = 35
9,6 ± 7,33 ***
HIF -1α (-), P21 (-), n = 42
9,83 ± 6,96 **, ***
HIF-1α (+), P21 (+), N = 20
8,85 ± 4,04 * ** ***
HIF-1α (+), P21 (-), n = 29
6,97 ± 4,22 *, **, ***
* p = 0,129 **; P = 0,037 * ** p = 0,078 (vidurkis ± SN)
klinikinei baigčiai susijęs su HIF-1α ir p21 išraiškos Viesbutis The vidutinė kontrolinio stebėjimo laikas pacientų buvo 55 ± 28 (± 1 SD) mėnesius (ribos, 1-82 mėnesių). 5 metų išgyvenamumas pacientams, sergantiems P21-neigiamas navikų buvo mažesnis nei p21 teigiamas navikų, tačiau skirtumas nebuvo statistiškai reikšmingas (duomenys neparodyti). 126 pacientai buvo vėl padalinta į keturias populiacijų remiantis HIF-1α saviraiškos ir p21 išraiška, ir mes išnagrinėjo tarp HIF-1α saviraiškos ir prognozės santykius P21-teigiamas ar neigiamojo navikų mėginiuose. 5 lentelėje pateikti 1-, 3- ir 5-erių metų išgyvenimo pacientams ir koreliacijos su HIF-1α ir p21 išraiška. Pacientai, sergantys HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas navikų buvo gerokai prastesne prognozę nei kitų studijų gyventojų. Visų pirma, pacientams, sergantiems HIF-1α teigiamas navikų, tie, kurie neteko išraišką p21 turėjo žymiai prasčiau prognozę nei tie, su p21 išraiškos (p = 0,042) .table 5 metų išgyvenamumas, susijusių su HIF-1α ir p21 išraiškos
Factor
1 metų išgyvenamumas
3 metų išgyvenamumo
5 metų išgyvenamumas

HIF-1αg (-), P21 (+), N = 35
94,1
82,0
82,0 ***
HIF-1α (-), P21 (-), n = 42
92,7
80,0
80,0 **, ***
HIF-1α (+), P21 (+), N = 20
95,0
85,0
70,0 * ** * **
HIF-1α (+), P21 (-), n = 29
68,1
57,4
45,9 * ** ***
* p = 0,042 **; P = 0,003 *** p = 0,003 (%)
Diskusijos
Mūsų išvados rodo, kad nuostoliai p21 išraiškos teigiamai koreliavo su jaunosios paciento amžiaus, ir didesnių naviko. Be to, daugelis pacientų su p21-neigiamas navikų turėjo limfmazgių metastazių, kai, palyginti su tais su p21-teigiamas navikų, buvo gerokai didesnis, dažnį. Šie rezultatai rodo, kad išraiškos p21 nuostoliai dalyvauja naviko augimui ir metastazių procesus, susitarusi su anksčiau ataskaitose [14, 15].
HIF-1α raiška buvo susijęs su prasta klinikinės baigties kai tipus žmogaus vėžio [16-18]. Tačiau, kai ataskaitos parodė, kad auglys išraiška HIF-1α nesuteikia išlikimo pranašumą [18, 19]. Nors dauguma HIF-1 tikslinių genų gali skatinti navikų augimą per savo sustiprinto išraiškos, HIF-1 aktyvuota genai, įskaitant p21, taip pat gali slopinti augimą pagal hipoksinės sąlygomis [20, 21]. Negimdinis išraiška HIF-1α endotelio ląstelių lėmė up-reguliavimo p21, sumažinti CDK veiklą, ląstelės ciklo suėmimo prie G 0 /G 1 Patikrinkite tašką, o tolesnis apoptozę [22]. Atsižvelgiant į dabartinę studijų, mes nustatėme, kad Apoptozinės ląstelės nepakankamai atstovaujamos HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas navikų. Pagal hipoksinių sąlygomis, HIF-1α gali slopinti auglio proliferaciją per p21-sukelto ląstelių ciklo kontrolės, todėl ląstelių, kurios yra atsparios apoptozę ir anti-vėžio gydymo atrankos. Dauguma naviko ląstelės išlaiko gebėjimą Apoptozė reaguojant į hipoksinio streso [23]. Kai apoptozės atsakas į hipoksija yra prarastas, augančios naviko ląstelės gali būti labiau atsparūs gydymui ir todėl gali prisidėti prie tolesnio naviko recidyvo [24]. Mechanizmai, kuriais hipoksija atrenka atsparių apoptozės ląstelių yra neaiški, bet p53 mutacija dalyvavimas buvo ištirta [25]. Ataskaitos parodė, kad hipoksija slopina ląstelių augimą, ir gali sukelti apoptozę per p53-priklauso nuo būdo [26]. HIF-1α taip pat buvo įrodyta, kad skatinti p53 priklauso nuo apoptozę [27], tačiau kiti tyrimai parodė, kad augimas suėmimą reaguojant į hipoksija yra p53 nepriklausomas [26]. Atsižvelgiant į dabartinę tyrime mes nerado ryšio tarp p53 ir p21 išraiškos įrodymus. Mes taip pat įvertino tarp HIF-1α ir p53 išraiškos mobilųjį apoptozės santykius, bet nerado statistiškai reikšmingas tarp HIF-1α ir p53 išraiškos (duomenys neparodyti). Mūsų Ankstesnis tyrimas parodė, kad HIF-1α raiškos su nonfunctional p53 derinys linkę nurodyti niūrus prognozę [28].
Pacientams, sergantiems HIF-1α teigiamas navikų, tarp praradimo p21 saviraiškos ir prastos klinikinės baigties gali koreliacija atspindi fiziologinę skirtumą tarp p21-teigiamas, lyginant su P21-neigiamas navikų gebėjimą išgyventi hipoksinės sąlygomis. Nors HIF-1α priklauso nuo transkripcijos aktyvavimo buvo susijęs su naviko augimą, mūsų rezultatai rodo, kad kartu išraiška p21 ir HIF-1α gali sulėtinti auglio augimą iki tam tikro laipsnio.
Molekulinio mechanizmo, lemiančio HIF-1α išraišką vėžiu orderių ypač dėmesys [29]. Plačiai atsiradimo aktyvinama HIF-1α bendruose vėžio ir hipoksijos kelius dalyvavimas naviko angiogenezę tikrai ginčytis dėl savo svarbos ir plataus taikymo. Chemoterapija ir radiacija, kad nukreipti HIF-1α gali būti veiksmingas ir realus, ir iš tiesų, buvo pranešta šis metodas [30]. Tačiau kokybiniai ir kiekybiniai skirtumai hipoksinio atsakas skirtingų tipų ląstelių nėra gerai žinomos [31]. Todėl tolesni tyrimai norint įvertinti HIF-1-tarpininkaujant kelius dėl ląstelių proliferaciją ir apoptozės žmogaus vėžiui pagal hipoksinės mikroaplinkos poveikį.
Šiame tyrime mes parodėme, kad HIF-1α raiška ir nuostolis p21expression į skrandžio vėžio koreliuoja su prastos pacientų prognozei, palyginti su navikų, kad nepaskirstytojo P21 išraišką, ar neteko HIF-1α išraiška. Galimas mechanizmas tai buvo pasiūlyta išvada, kad Apoptozinės ląstelės nepakankamai atstovaujamos HIF-1α teigiamas /P21-neigiamas navikų. Agresyvus navikai, kurios nesugeba sukelti p21 į HIF-1α - priklausoma būdas gali padidėjo ląstelių išgyvenimą be apoptozės ir prisidėti prie prastos prognozės pacientams
Finansavimo pagalbą
departamento chirurgijos ir mokslo Graduate School of Medical. Mokslas, Kyushu universiteto, Fukuoka, Japonija.
deklaracijų
Padėka Viesbutis The autorių padėkoti K. Miyamoto techninei pagalbai.
Autoriai pradinis pateiktų failų vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių "originalas pateiktų failų vaizdų. 12957_2006_249_MOESM1_ESM.jpeg Autorių originalus failas 1 pav 12957_2006_249_MOESM2_ESM.tiff Autorių originalaus failo 2 pav 12957_2006_249_MOESM3_ESM.tiff Autorių originalios 3 pav 12957_2006_249_MOESM4_ESM.tiff Autorių originalaus failo 4 pav interesų konfliktas Viesbutis The autoriaus (-ės ) deklaruoja, kad jie neturi jokių konkuruojančių interesų.
  • skrandžio straipsnis
    •   
  • skrandžio struktūra
    •   
  • Priežiūra skrandį
    •   
  • tyrimai

    • tyrimai

    tyrimai

    Other Languages

    skrandžio sveikatos © https://www.stomachillness.com/lt