Nesfatin-1 ass secreted, Iessen-responsiven anorexigenic peptide zu Virleefer encoded nucleobindin-2 [NUCB2]. Libre nesfatin-1 vergréissert Post-prandially, mä de Nahrungszousaz Komponente datt NUCB2 /nesfatin-1 bleiwen onbekannte well. Mir Hypothes, datt rechnen, Fett an FAQ differentially Otemschwieregkeeten spezifesch Ausdrock vun nesfatin-1 regléieren. NUCB2, prohormone convertases an nesfatin-1 waren an Maus Mo. ghrelinoma fonnt [MGN3-1] Zellen. NUCB2 mRNA an FAQ sech och an Maus Liewer erwëscht, a kleng a grouss intestines. MGN3-1 Zellen sech mat Zocker, fatty Saieren oder Aminosaier Saieren behandelt. Männlech C57BL /6 Mais sech chronically Fett, héich rechnen an héich FAQ Bierger fir 17 Wochen es. Chemeschen Hinnen alleguer an nesfatin-1 assays sech benotzt nesfatin-1 op mRNA an FAQ Niveauen ze bestëmmen. Zocker stimuléiert NUCB2 mRNA Ausdrock vun MGN3-1 Zellen. L-hun kee gudd Gefill fräi och NUCB2 mRNA Ausdrock an ghrelin mRNA Ausdrock, an nesfatin-1 secretion. Oleic Seier inhibited NUCB2 mRNA Ausdrock, iwwerdeems ghrelin mRNA Ausdrock an secretion verstäerkt gouf. NUCB2 mRNA war Ausdrock vill manner an der Liewer vun Mais eng héich FAQ Ernährung z'iesse Verglach zu Mais z'iesse anere Bierger. Chronescher ofgeroden Fett iessen ëmmer en däitleche Minus am NUCB2 mRNA an de Mo, iwwerdeems héich FAQ a Fett iessen ähnlechen Ennerdréckung vun NUCB2 mRNA vun der grousser Daarm verursaacht. Nee Differenzen an serum nesfatin-1 Niveau sech zu Mais um 7 a.m, um commencement vun der Luucht Phase fonnt. Héich rechnen Ernährung z'iesse Mais awer bedeitend nesfatin-1 Niveau bei 1 p.m. Serum nesfatin-1 war nik vill manner an Mais Fett, FAQ oder rechnen, am Verglach zu den Kontrollen um 7 p.m es, just virun der donkel beliichten. Mais datt eng héich Korrektiounsdodis vun Fett dobäi hu nesfatin-1 /NUCB2 bei all Zäit Punkten getest Post-gavage vill erhuewen, am Verglach Mais ze kontrolléieren an Mais z'iesse anere Bierger. Eis Resultater fir déi éischt Kéier uginn, datt nesfatin-1 vun nährstoffaarme modulated ass VerfÜgung
Fro:. Mohan H, Ramesh N, Mortazavi S, Le A, Iwakura H, Unniappan S (2014) ACTA Differentially regléieren Nucleobindin-2 /Nesfatin-1 kënschtlech VerfÜgung zu Cultured Mo. Ghrelinoma (MGN3-1) BTS an an VIVO VerfÜgung zu Männlech Mais. PLoS NËMMEN 9 (12): e115102. Doi: 10.1371 /journal.pone.0115102 VerfÜgung Redakter: Yvette Tache, Universitéit vu Kalifornien, Los Angeles, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: May 1, 2014; Akzeptéiert: 18. November 2014; Publizéiert: 15. Dezember 2014 zu Copyright: © 2014 Mohan et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Data Disponibilitéit:. D' Auteuren confirméieren datt all Daten d'Conclusiounen si voll sinn ouni Restriktioun Basisdaten. All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung Funding: Dëst Recherche vun engem oppenen Fonctionnementskäschten Zouschoss vun der Kanadierin Insitutes Gesondheetsminister Fuerschung (CIHR finanzéiert gëtt; http:. //www.cihr-irsc. gc.ca/e/193.html) an eng Grënnung Grant aus der riicht Gesondheet Research Foundation (http://shrf.ca/). Su ass eng CIHR New Enquêteur. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren. Funders hu keng Roll an der Fuerschung oder eng mëttelalterlech Handschrëft Virbereedung VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Nesfatin-1 [NEFA /NUCB2 -encoded satiety a Fett-beaflossen FAQ-1] ass e mächtegst anorexigenic peptide zu der Regelung vun Energiebilanz an Zocker homeostasis agebonne [1], [30]. Et ass en 82 Aminosaier peptide aus Virleefer FAQ ofgeleet, nucleobindin-2 (NUCB2) [1]. NUCB2 ass vun 396 Aminosaier Saieren komponéiert, aus zwee EF dem motifs an e DNA bindend public [1], [3]. Post-respektiv Ofwécklung vun prohormone convertases (PC 1/3 an PC 2) bewierkt NUCB2 an dräi peptides eenalecn gin, nesfatin-1 (1-82 Aminosaier Saieren), nesfatin-2 (85-163 Aminosaier Saieren), an nesfatin- 3 (166-396 Aminosaier Saieren). NUCB2 /nesfatin-1 Aminosaier Haaptrei ass héich ganze vertebrates conserved [6], [7], [31]. NUCB2 /nesfatin-1 ass zu verschiddenen hypothalamic Käre fonnt, déi an Energie ukuerbelt, wéi d'arcuate Keimzell, paraventricular Keimzell, supraoptic Keimzell, lateral hypothalamic Géigend an zona increta Équipe sinn [8], [9]. Insulin produzéiert Beta-Zellen Co-auszedrécken nesfatin-1 an der pancreatic Schëff vun deër an Mais [2], [4], [11], suggeréiert datt nesfatin-1 konnt eng wichteg Roll an Insulin secretion an Zocker homeostasis Leeschtung [4], [29]. Ghrelin an NUCB /nesfatin-1 sinn an der gastric oxyntic mucosal Glands am Nager [13] a Mënschen [16] colocalized. NUCB2 mRNA Ausdrock vun sidd gastric mucosal endocrine Zellen war wéi am Gehir vun deër héich gin fonnt [13]. D'voll Längt NUCB2 FAQ war an der klenger a grousser intestines a Liewer vun männlech deër, an ICR Mais [5] observéiert. Déi grouss Verdeelung vun NUCB2 /nesfatin-1 zu Mëtt an Randerscheinung Stoffer Punkten op eng Roll fir nesfatin-1 zu ukuerbelt Regulatioun. VerfÜgung Daily Administratioun vun nesfatin-1 ëmmer verlängert Reduktioun vun Haaptmoolzecht an Kierpergewiicht [1] . Intracerebroventricular Administratioun vun NUCB2 Hien Haaptmoolzecht, Kierpergewiicht an subcutaneous, mesenteric an epididymal Fett Mass am Erwuessenen deër an enger Portioun ofhängeg täteg. Zousätzlech, ëmmer NUCB2 knockdown an deër vun antisense morpholino oligonucleotide Twist (als-MON) eng Erhéijung vun Hausaufgabe an Kierpergewiicht [1]. Zollformalitéiten-paraventricular Keimzell Sprëtz vun nesfatin-1 verklengert entwéckele Haaptmoolzecht um 1 an 3 Stonnen [9]. Intraperitoneal injections vun nesfatin-1 duerchgesat an enger Reduktioun vun Haaptmoolzecht zu leptin resistent DB /DB VerfÜgung Mais a Fett iessen z'iesse Mais [8]. Nesfatin-1 gëtt vun 3 strukturell Brochstécker besteet an nëmmen der Mëtt-ofgesprengt (Reschter 24-53; M30) vun nesfatin-1 ass an produzéiert anorectic Äntwerte Équipe [15], [28]. Zesumme, déi dës Resultater kloer Beweiser datt satiety Auswierkunge vun nesfatin-1 Ënnerstëtzung. VerfÜgung Nesfatin-1 ass en Iessen responsiven glucoregulatory Hormon [12], [13], an pancreatic Schëff vun deër NUCB2 an Äntwert fräiginn Zocker [14]. Am Mënsch Studien, déi Zocker behandelt Sujeten héich basal nesfatin-1 Niveauen am Verglach zu Kontroll Sujeten [10]. An MIN6 Zellen, eng 4-fantastesch Erhéijung vun nesfatin-1 Niveauen observéiert gouf, wou d'Zellen am héijen Zocker (16.7 mm) am Verglach zu niddereg Zocker (2.0 mm) incubated waren [4]. Nesfatin-1 verstäerkte Zocker stimuléiert Insulin secretion aus cultured MIN6 Zellen datt wéi an enger Portioun ofhängeg Fassong niddereg Zockerspigel am héijen Zocker incubated waren [4]. An der Bauchspaicheldrüs vun streptozotocin (STZ) -injected Mais mat Typ 1 Diabetes, war et fonnt dass souwuel NUCB2 an preproinsulin mRNA Ausdrock wesentlech méi niddreg waren [4]. Am Géigesaz, verstäerkte nesfatin-1 Co-Lokalisatiouns mat Insulinemfindlechkeet sech am islet Beta-Zellen vun héich-Fett iessen-entschlof mockeleg Mais mat Typ 2 Diabetes fonnt. Nesfatin-1 huet Otemschwieregkeeten speziell Effekter op Zocker Notzong vun Grenzwäerter adipocytes a Fleesch [30]. Am Allgemengen, nesfatin-1 enormen wichteg Roll am ganze Kierper Zocker an Energie homeostasis Regulatioun. VerfÜgung Iwwerdeems nesfatin-1 ass als eng wichteg Iesse responsiven peptide entstanen [1], [12], [13], [30] , wat kontrolléiert seng secretion bleift onkloer. Wat Ernährung Komponente ausgeléist Post-Iesse secretion vun nesfatin-1? Dëser Fro bleift unaddressed. D'Haaptfokus vun dëser Etude ass ze bestëmmen wéi verschidde nährstoffaarme NUCB2 /nesfatin-1 kënschtlech VerfÜgung zu cultured Mo. ghrelinoma (MGN3-1) Zelle vu Mais a zu VIVO VerfÜgung zu männlech well kann Mais. Eis Resultater vun eise kënschtlech VerfÜgung Studie weisen, dass MGN3-1 Zellen z'äntwerten anescht ze nährstoffaarme zu secreting NUCB2 /nesfatin-1 an ghrelin. Zerfall Fouss oder chronesch ofgeroden nährstoffaarme heescht Afloss NUCB2 mRNA Ausdrock an NUCB2 /nesfatin-1 release zu engem Regime spezifesch Manéier. VerfÜgung IFLA- breakpoint VerfÜgung All Studien Déieren respektéiert mat de kanadesche Conseil vun Déieren Care Richtlinnen, a sech duerch d'Déieren Research IFLA- Verwaltungsrot vun der Uni riicht (Protokoll Number 2012-0033) abruecht. VerfÜgung kënschtlech VerfÜgung Etude benotzt VerfÜgung Mouse Mo. ghrelinoma (MGN3-1) Zellen [17] huet cultured zu DMEM (Invitrogen, Ontario, Kanada; Katalogw95-040) dass mat 10% an et Bovine serum (Invitrogen nà war; 12484 Katalog # ) an 1% penicillin (100 U /ml) an streptomycin (100 μg /ml) (Invitrogen; Katalog—40-122) bei 37 ° C an 10% CO 2. Bei 80% confluency, goufen MGN3-1 Zellen rakommen um 6 × 10 An VIVO VerfÜgung Ënnersich VerfÜgung fir d'chronescher erofzesetzen vu Bierger verännerlech Montanten vun spezifesch nährstoffaarme, Alter a Gewiicht-stemmt mat (5 Wochen al, duerchschnëttlech Kierper Gewiicht: 20 Gramm) männlech C57BL /6 Mais (Charles River Laboratoiren, Québec, Canada) goufen individuell Haffbibliothéik fir 17 Wochen an engem 12 Stonnen Luucht: 12 Stonne donkel Zyklus (Luuchten um 7 Auer an op um 7 Auer ugefaangen), Temperatur an Fiichtegkeet kontrolléiert vivarium. Mais sech an véier Gruppen ënnerdeelt op enger Kontroll z'iesse (n = 6), héich rechnen (n = 7), héich FAQ (n = 7), a Fett (n = 7) Ernährung mat ad libitum VerfÜgung Accès zu Waasser, an hir spezifesch Nahrung. All Bierger huet aus Research Bierger (New Brunswick, NJ) kaaft. D'Kalorie Inhalt vun Bierger sech: Kontroll (Product # D12451): 4,73 kcal /GM mat 20% Energie aus FAQ ofgeleet, 35% Energie aus rechnen, an 45% Energie aus Fett ofgeleet ofgeleet; héich rechnen (Product # D12450J) huet 3,8 kcal /GM mat 20% Energie aus FAQ ofgeleet, 70% Energie aus rechnen, an 10% Energie aus Fett ofgeleet ofgeleet; héich FAQ (Product # D08091802) huet 3,8 kcal /GM mat 60% Energie aus FAQ ofgeleet, 30% Energie ofgeleet vun rechnen, an 10% Energie aus Fett ofgeleet, an Fett (Product # D12492) haten 5.2 kcal /GM mat 20% Energie aus FAQ ofgeleet, 20% Energie aus rechnen, an 60% Energie aus Fett ofgeleet ofgeleet. All Mais sech fir eng Woch mat der Kontroll Ernährung z'iesse virun hir spezifesch Bierger Start. Haaptmoolzecht, Gewiicht, an Bluttzocker Moossungen Post 4 Stonnen schnell gemooss goufen eemol d'Woch fir 17 Wochen VerfÜgung Fir de Fouss dohinner Administratioun vun nährstoffaarme, Alter a Gewiicht-stemmt (5 Wochen al, duerchschnëttlech Kierpergewiicht.: 20 Gramm) männlech C57BL /6 Mais (Charles River Laboratoiren, St Constant, Qu, Kanada) goufen individuell fir 1 Woch an 2 Deeg zu engem 12 h Liicht Haffbibliothéik: 12 h donkel Zyklus (Luuchten um 7 Auer an op um 7 Auer ugefaangen ), Temperatur an Fiichtegkeet kontrolléiert vivarium. Mais sech fir 1 Woch op Arrivée acclimatized an hat ad libitum Accès zu Waasser a regelméissegen Maus Chow fir 11 Deeg. Well mir eng grouss Ernährung Etude sinn leeschtungsfäeg, waren mir d'Déieren an d'mëndlech gavage Prozedur ze acclimatize. Mir acclimatized de Mais zu dëser Prozedur vun hinnen mat fléissendem Waasser fir 2 Deeg virun der experimentell Dag gavaging. Op der 12 Total RNS erauszéien a cDNA Synthes VerfÜgung BTS oder Stoffer aus all Etude gesammelt goufen NUCB2 mRNA Ausdrock ze vergläichen. Vun de Mais dat waren der chronescher Ernährung studéieren, Stoffer (Mo, kleng Daarm, grouss Daarm a Liewer) mécht direkt no Euthanasie recoltéiert. Total RNS war vun der MGN3-1 Zellen an Stoffer ofgebaut, mat der TRIzol RNS Isolatioun reagent (Invitrogen). RNS Puritéit war déi optesch Dicht (sel) Tellur Verhältnis (sel 260 nm /sel 280 nm) mat engem NanoDrop 2000c (Thermo, Ex-, Finnland) validéiert. Nëmmen Echantillon mat enger Tellur Verhältnis méi wéi 1,8 sech fir cDNA Synthes benotzt. Synthes vun cDNAs war mat iScript cDNA Synthes Kit gehaal wéi déi vun den Hiersteller française (BioRad, Kanada). VerfÜgung RT-Hinnen alleguer an Chemeschen Real Time-Hinnen alleguer VerfÜgung RT-Hinnen alleguer an qRT-Hinnen alleguer fir NUCB2, ghrelin, an RT-Hinnen alleguer fir PC 1/3 an PC 2 sech als pro Konditiounen gehaal 1 zu Table duergestallt, d'CFX Connect Real-Time Hinnen alleguer Detektioun System (Bio-Rad) benotzt. Fir d'qRT-Hinnen alleguer Analyse, mRNA Ausdrock vun NUCB2 war mat Beta-actin als housekeeping Gentherapie normalized. Hinnen alleguer Produiten fir NUCB2 an de Mo, Liewer a grousse Daarm an dës Genen (NUCB2, ghrelin, PC 1/3 an PC 2) an der MGN3-1 Zellen sech an 1% agarose gelies electrophoresed Implikatioune ungen z'iwwerpréiwen. Baséierend op virdrun Studien [4], déi mir Beta-actin wéi eng intern Kontroll d'Signal vun NUCB2 mRNA ze normaliséieren. Wann total RNS benotzt wou mRNA quantification ganz genee war, huet de kriteschen loung Wäerter fir Beta-actin kee Verännerlechkeet. Relativer NUCB2 mRNA Ausdrock war mat Beta-actin aus der selwechter Prouf normalized no der Livak Method [31]. VerfÜgung Immunocytochemistry an Microscopy VerfÜgung MGN3-1 Zellen sech cultured zu engem Labtek Chamber Slide System (Nalge Nunc International, Rochester, NY) a sech un bei confluency ze wuessen erlaabt. Zellen sech mat 1x phosphate gefiermt Léisung Katakombe (PBS; 2 × 5 Minutten, 25 ° C) an bei 25 ° C fir 10 Minutten an engem 4% paraformaldehyde (PFA) Léisung an 1x PBS fix, gefollegt vun engem anere wäschen mat 1x PBS ( 3 × 5 Minutten, 25 ° C). Déi fix Zellen sech zu enger Léisung vun 0.3% Triton-X (Bioshop, haaptsächlech, Ontario, Kanada) an 1x PBS fir 5 Minutte bei Raumtemperatur permeabilized. Drënner waren an ëmmer un déi 10% Geess serum an 1x PBS fir 1 Stonn bei Raumtemperatur incubated. Zellen sech dann Iwwernuechtung am primäre antibody (Table 2) bei 4 ° C incubated. Drënner waren mat PBS (3 × 5 Minutten, 25 ° C) gewäsch an incubated mat Première antibody (Table 2; d'PC1 /3 antibody war eng generéis Geschenk vum Dr. Iris Lindberg, Universitéit vu Maryland School vun Medezin) fir 4 Stonnen am Raumtemperatur. Endlech, sech drënner mat PBS (3 × 5 Minutten, 25 ° C) gewäsch an Descher mat Vectashield mëttelfristeg Opriichte 4 'wouvun, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) (Vecteure Laboratoiren, haaptsächlech, Ontario, Kanada). BTS mat enger Nikon Sonnendäischtert-Ti Inverted fluorescence microscope (Nikon, Mississauga, Ontario, Kanada) a Biller gekuckt waren eng Nikon DS-Qi1 MC Kamera (Nikon) ageholl benotzt. Biller waren benotzt analyséiert Nis-Elements fundamental Fuerschung Software (Nikon) op engem Dell HP Workstation. Biller gewise ginn Vertrieder Kierchefënster Zellen fir ghrelin, NUCB2, PC 1/3 an PC2. Fir Héichopléisende Imaging, goufen d'Zellen gekuckt, analyséiert a Biller mat enger Leica TCS SP5 confocal microscope ageholl. VerfÜgung Western Blot Analys, Immunohistochemistry an Fluorescence Microscopy VerfÜgung fir d'Präsenz vun nucleobindin-2 confirméiert (NUCB2) am Daarm a Liewer, dräi, 3 Méint ale C57BL /6 männlech Mais benotzt goufen. Kuerz, Liewer, a kleng a grouss intestines sech gesammelt, an fir Western Analyse oder immunohistochemistry getrennt. Stoffer fir Western blot homogenized vun T-PRO Otemschwieregkeeten FAQ Extraktioun reagent (Thermo Wëssenschaftlech,̑10) duerno FAQ Konzentratioun Determinatioun vun Bradford assay. D'Echantillon waren an 1x Laemmli gefiermt mat 0,2% 2-mercaptoethanol (Bio-Rad,¡-0737 a -0710) virbereet an huet fir 5 min duerch vortexing duerno op 95 ° C dono gekacht. De ganze Prouf Volumen (20 μL) all mat 50 μg FAQ oder syntheteschen Grenzwäerter nesfatin-1 (ABGENT, 1μg /μL; benotzt virdrun zu 4, 29) gouf op engem gelies iwwerlaascht, an 8-16 an engem Mini-PROTEAN TGX lafen % packt gelies (Bio-Rad,Lj-1104). Der Trennung, goufen d'Proteinen zu enger 0,2 μm BioTrace nitrocellulose Membran (Pall Life Sciences,đ77-000) transferéiert an duerno war Membran an 1x RapidBlock Léisung (AMRESCO, # M325) gespaart. NUCB2 FAQ erkennen war mat standing Kanéngchen anti-nesfatin-1 (Katalog Nummer H-003-22; 1:500 dilution; Phoenix Medikamenter, California) an GAPDH FAQ war vun Gebrauch vun Kanéngchen antiserum fonnt ausernee géint Maus GAPDH (AbDSerotec, # AHP1628 ) verdënntem 1:1000. Als sekondär antibody, Geess anti-Kanéngchen IgG (H + L) HRP conjugate (Bio-Rad,ª-6515) verdënntem war 1:3000 benotzt. Fir FAQ visualization war d'Membran fir 5 min zu Kloerheet Western ECL Realitéiten (Bio-Rad,ª-5061) incubated an Radioberäich ChemiDoc MP Imaging System (Bio-Rad,ª-8280) mat chemiluminescence erkennen benotzt. Membran ufänkt an tëscht FAQ erkennen war mat gehaal Noënnen PLUS westlech blot ufänkt Prellbock (Thermo Wëssenschaftlech,ǐ30). Präzisioun plus FAQ duebel xtra Standarden (Bio-Rad,¡-0377) waren wéi molekulare Gewiicht lues benotzt. VerfÜgung Fir immunohistochemical Studien, déi gesammelt Stoffer sech fir 24 Stonnen bei 4 ° C zu 4% formaldehyde fest. Fixative war mat Ethanol (dräi 70% Ethanol) ersat, all gefollegt vun engem 10 Minutt incubation bei 4 ° C. Stoffer sech dann bei 4 ° C zu 70% Ethanol gespäichert a sech Filteren an der Prairie Diagnostic Services Galaxy (KPL Galaxy Western College vun Veterinary Medezin, Universitéit riicht) sectioned. Paraffin Rubriken vun 4 μm deck sech fir immunostaining virbereet. an rehydrated zu engem graded Ethanol Serie (incubated zweemol zu 100% Ethanol, an eemol zu all 95% Ethanol, 70% Ethanol, 50%; dës Rubriken sech mat xylene (5 Minutten, 25 ° C incubated zweemol zu 100% xylene) deparaffinized Ethanol; 2 Minutten eenzel, 25 ° C). D'Sektiounen sech dann mat 3% Waasserstoff Hem zu destilléiert Waasser incubated endogenous peroxidase Aktivitéit (30. Minutt bei Raumtemperatur) ze blockéieren. D'Sektiounen sech dann mat serum-gratis FAQ Spär reagent (DAKO Corporation, California) fir 10 Minutten blockéiert ier mat der Primärschoul antibodies incubated ginn. Dës Rubriken sech dann mat Kanéngchen anti-nesfatin-1 incubated (Katalog Nummer H-003-22; 1:500 dilution; Phoenix Medikamenter, California) fir 24 Stonnen bei Raumtemperatur. All drënner waren Katakombe dono dräi Mol mat 1x PBS an incubated mat Geess anti-Kanéngchen Texas Red IgG (Red-Nesfatin-1; Katalog Nummer TI-1000; 1:100 dilution; Vecteure Laboratoiren, California) Secondaire antibody fir 1 Stonn am Sall Temperatur. All Primär- a Secondaire antibodies sech zu antibody der Mindeststeier reagent (DakoCytomation, Mississauga, Ontario) verdënntem. D'drënner waren dräi mol mat 1x PBS a siwe Mol mat destilléiert Waasser gewäsch. Endlech, waren der drënner mat Vectashield mëttelfristeg schéi déi nuklear Hoerfaarw DAPI enthalen (Blue; Vecteure Laboratoiren, Burlingame, California). Sektiounen goufen ënner engem passende Sonnendäischtert Ti-E Inverted fluorescence microscope (Nikon Kanada, Mississauga, Kanada) klicken. Biller waren zu engem Dell HP Workstation Computer an Nis Elementer fundamental Fuerschung Imaging Software (Nikon Kanada, Mississauga, Kanada) verbonne mat enger Nikon DS-QI1 MC gi si gestiermt Kamera ageholl. Nëmmen Vertrieder Biller vu klengen a grousse Daarm staining fir NUCB2 /nesfatin-1 mat DAPI sinn an d'Resultater Rubrik gewisen. VerfÜgung Nesfatin-1 /NUCB2 Niveauen am Serum a Media VerfÜgung Fir Nährwert ofhängeg ermëttelen Ännerungen an NUCB2 /aus MGN3-1 Zellen nesfatin-1 secretion, Medien no spezifesche incubation Perioden gesammelt. Fir Zell Stëps ze verhënneren, goufen centrifuged Echantillon (13000 Ziichter fir 10 Minutte bei 4 ° C) an den Top 700 μL war bis Miessung nesfatin-1 bei -20 ° C gespäichert. Fir Moossen libre NUCB2 /nesfatin-1, Blutt war um 7 a.m gesammelt (kuerz no der Luucht Phase fänkt), 1 p.m. (Mëtt vun der Luucht Phase) an op 7 p.m (virun der commencement vun der donkel beliichten). Bluttprouwen sech erlaabt op Äis ze Bluddung, a serum vun centrifugation (7000 Ziichter fir 9 Minutte bei 4 ° C) an gespäichert bei -20 ° C getrennt huet, bis assays gehaal huet. NUCB2 /Nesfatin-1 secretion Niveau vun de Medien sech gemooss der Nesfatin-1 benotzt (1-82) (sou) Elisa Kit (Katalog Nummer R-003-22, Phoenix Lag Galaxy California). D'Limite vun assay Empfindlechkeet war 1,2 Dummeldéng /ml fir nesfatin-1, mat Magnéitfeld Gamme vu 0.1-1000 Dummeldéng /ML. De Montant vun immunoreactive Material war en Net-linear Réckgang rop-fit sech benotzt, déi gebraucht gouf d'Konzentratioun vun NUCB2 /nesfatin-1 secretion am serum a Medien Echantillon. VerfÜgung NUCB2 /Nesfatin- zu ofgedonkelt an vergläichen 1 Niveauen am Serum a Medien a Total Ghrelin Niveauen an Medien VerfÜgung fir Nährwert ofhängeg Ännerungen am NUCB2 /nesfatin-1 an total ghrelin secretion aus MGN3-1 Zellen ermëttelen, Medien no spezifesche incubation Perioden gesammelt. Fir Zell Stëps ze verhënneren, goufen centrifuged Echantillon (13000 Ziichter fir 10 Minutte bei 4 ° C) an den Top 700 μL war bei -20 ° C bis NUCB2 /Nesfatin-1 an total ghrelin Miessung gespäichert. Bluttprouwen sech erlaabt op Äis ze Bluddung, a serum vun centrifugation (7000 Ziichter fir 9 Minutte bei 4 ° C) an gespäichert bei -20 ° C getrennt huet, bis assays gehaal huet. NUCB2 /Nesfatin-1 secretion Niveauen an der serum an Medien sech gemooss der Nesfatin-1 benotzt (1-82) (sou) Elisa Kit (Katalog Nummer R-003-22, Phoenix Lag Galaxy California). D'Limite vun assay Empfindlechkeet war 1,2 Dummeldéng /ml fir nesfatin-1, mat Magnéitfeld Gamme vu 0.1-1000 Dummeldéng /ML. Den Zerfall, war de ganzen ghrelin secretion Niveau vun de Medien gemooss der Ghrelin benotzt (sou, Mouse) EIA Kit (Katalog Nummer R-031-31, Phoenix Lag INC, California). D'Limite vun assay Empfindlechkeet war 1.16 Dummeldéng /ml fir am Ganzen ghrelin, mat Magnéitfeld Gamme vun 0-100 Dummeldéng /ML. De Montant vun immunoreactive Material alles war en Net-linear Réckgang rop-fit Hëllef, déi gebraucht gouf d'Konzentratioun vun NUCB2 /nesfatin-1 secretion am serum a Medien Echantillon. VerfÜgung statistique Analys Analysen vun der laachen qRT-Hinnen alleguer an Elisa Date goufen duerch Tukey d'Pluralitéit Verglach Test duerno One-Way ANOVA gehaal benotzt. GraphPad Prism Versioun 5 (GraphPad Software Uerden, San Diego, CA, USA) war fir statistesch Analyse an Grafike benotzt. Bedeitung Attaché wann p &Si besteet; 0,05. Date sinn als mengen ± Sem ausgedréckt. VerfÜgung NUCB2, PC 1/3 an PC 2 mRNAs sinn ausgedréckt an MGN3-1 Zellen an NUCB2 mRNA ass an de Mo, Liewer ausgedréckt, kleng Daarm a grousse Daarm vun männlech Mais VerfÜgung Mir identifizéiert Ausdrock vun NUCB2 (202 BP), prohormone convertase 1/3 (400 BP), an prohormone convertase 2 (406 BP) mRNAs zu MGN3-1 Zellen (Figebam. 1A). NUCB2 (202 BP) mRNA Ausdrock war och am Mo, Liewer, kleng Daarm a grousse Daarm vun männlech C57 /BL6 Mais (Figebam. 1B) fonnt. Absolut Niveau vun NUCB2 mRNA Ausdrock am Mo. sech méi wéi NUCB2 mRNA Ausdrock an der Liewer, kleng Daarm a grousse Daarm (Figebam. 1c). VerfÜgung MGN3-1 Zellen immunopositive sinn fir ghrelin, NUCB2 /Nesfatin-1 , PC 1/3 an PC 2 VerfÜgung Fluorescence microscopy ugewisen MGN3-1 Zellen Kierchefënster mat anti-nesfatin-1 antibody (Texas-Red;. Lalumi 2B) an Anti-ghrelin antibody (FITC-Green; Figebam. 2A) zougedréckt kloer Co-Lokalisatiouns (Yellow;. Lalumi 2C) vun nesfatin-1 an ghrelin immunoreactivity. Allerdéngs goufen eng Rei ghrelin positive Zellen net immunoreactive fir nesfatin-1 (Figebam. 2C). MGN3-1 Zellen zougedréckt PC 1/3 immunoreactivity (Texas Red;. Lalumi 2D) a PC 2 immunoreactivity (Texas Red, Lalumi 2E.). DAPI (Blue) Kierchefënster Keimzell vun all deenen Zellen net positiv fir d'Technik Proteinen dorënner Zellen. Kontroll drënner Kierchefënster mat Première antibody eleng (Figebam. 2F) hu keng immunoreactivity. Confocal Imaging zougedréckt MGN3-1 Zellen Kierchefënster mat anti-nesfatin-1 antibody (Texas-Red; Lalumi 3A.) An Anti-ghrelin antibody (FITC-Green;. Lalumi 3B) zougedréckt kloer Co-Lokalisatiouns (Yellow;. Lalumi 3C) vun nesfatin-1 an ghrelin immunoreactivity. Negativ Kontroll ass Kierchefënster mat nëmmen Secondaire antibodies eleng (Figebam. 3D). VerfÜgung NUCB2 FAQ Ausdrock am groussen Daarm, kleng Daarm a Liewer aus männlech Mais VerfÜgung NUCB2 FAQ ass an der grousser Daarm ausgedréckt, kleng Daarm a Liewer aus männlech Mais weist z'ënnerscheedde Band fir NUCB2 KDa bis ongeféier 50 entspriechend. Grenzwäerter nesfatin-1 peptide als eng positiv Kontroll benotzt gëtt gewise wéi eng eegestänneg Band zu ongeféier 10 kDa entspriechend (Lalumi 4A;. Lénks Bild). Allerdéngs weist Filteren keng Banden déi voll nesfatin-1 op 10 kDa an der Otemschwieregkeeten Echantillon gesi waren (Lalumi 4A;. Lénks Bild). Mir hunn och Gruppen vun ongeféier 47 kDa ënnert der 50. kDa Band vun der klenger Daarm a Liewer, mee net an de grousse Daarm (Lalumi 4A;. Lénks Bild). A verschidde Band fir GAPDH gebraucht wéi d'Kontroll Haus-hält Gentherapie ass um 37 kDa zu all Stoffer dës observéiert (Lalumi 4A;. Riets Bild). a grousse Daarm (Lalumi 4B. riets Bild). VerfÜgung Effects vun Zocker an L-hun kee gudd Gefill op NUCB2; NUCB2 /nesfatin-1 immunoreactivity ass an der mucosal Zellen vun kleng Daarm (. lénks Bild Lalumi 4B) fonnt mRNA Ausdrock an, an NUCB2 /nesfatin-1 secretion aus MGN3-1 Zellen VerfÜgung BTS bei 100 mm Zocker DMEM incubated no engem héichen NUCB2 mRNA Ausdrock wéi incubated Zellen bei 5,6, 25 an 50 mm DMEM Zocker Konzentratioune op 1 Stonn Post-incubation (Figebam. 5A). Um 2 Stonnen Post-incubation, incubated Zellen bei 100 mm DMEM sech vill méi héich an NUCB2 mRNA Ausdrock wéi incubated Zellen op 5,6 a 50 mm Zocker DMEM (Figebam. 5C). Um 1 Stonn (Figebam. 5B) an 2 Stonnen (Figebam. 5D), huet et keen groussen Ennerscheeder an NUCB2 /nesfatin-1 secretion. NUCB2 mRNA Ausdrock war wiesentlech méi héich an Zellen am 10 mm incubated L-hun kee gudd Gefill (Figebam. 5E) am Verglach zu Zellen bei 0,07 an 1.0 mm L-hun kee gudd Gefill incubated. NUCB2 /nesfatin-1 secretion aus incubated Zellen bei 1.0 an 10.0 mm L-hun kee gudd Gefill sech vill méi héich wéi bei 0,7 mm incubated Zellen L-hun kee gudd Gefill (Figebam. 5F). VerfÜgung Effekt vun linolenic Seier, octanoic Seier an oleic Seier op NUCB2 mRNA Ausdrock an, an NUCB2 /nesfatin-1 secretion aus MGN3-1 Zellen VerfÜgung Mir NUCB2 mRNA Ausdrock vill vun Zellen mat 1, 10, an 100 μM oleic Seier (Figebam. 6E) behandelt reduzéiert fonnt am Verglach zu der Kontroll. Keng Ännerunge vun NUCB2 mRNA sech zu Zellen behandelt mat linolenic (Figebam. 6A) an octanoic Seier (Figebam. 6C) observéiert. Weider, war NUCB2 /nesfatin-1 secretion vun Zellen onverännert mat verschiddene Dosis vun linolenic Seier behandelt (Figebam. 6B), octanoic Seier (Figebam. 6D), an oleic Seier (Figebam. 6F). VerfÜgung Effekt vun L-hun kee gudd Gefill, linolenic Seier, octanoic Seier an oleic Seier onofhängeg op ghrelin mRNA Ausdrock an, an total ghrelin secretion aus MGN3-1 Zellen VerfÜgung keng Ännerunge vun ghrelin mRNA (S1A Dorënner) a Ganzen ghrelin secretion (S1B Dorënner ) fonnt goufen, wann Zellen mat verschidde Schrëtt vun Zocker Post 1 Stonn incubation behandelt goufen. Ghrelin mRNA war Ausdrock vill méi héich an op 1 mm L-hun kee gudd Gefill incubated Zellen (Figebam. 7A) am Verglach zu incubated Zellen bei 0,07 an 10 mm L-hun kee gudd Gefill. Nee groussen Ënnerscheed am Ganzen ghrelin secretion vun Zellen mat verschidde Schrëtt vun L-hun kee gudd Gefill behandelt (Figebam. 7B). Mir hunn keng Verännerung ghrelin mRNA Ausdrock (Figebam. 7C), mä total ghrelin secretion war héich aus op 100 μM linolenic Seier incubated Zellen (Figebam. 7D) am Verglach zu Kontroll, 1 an 10 μM Schrëtt. Keng Ännerunge vun ghrelin mRNA (Figebam. 7) an total ghrelin secretion (Figebam. 7F) fonnt goufen, wann Zellen mat verschidde Schrëtt vun octanoic Seier behandelt goufen. Mëttlerweil, ghrelin mRNA (Figebam. 7H), an total ghrelin secretion (Figebam. 7I) sech vill méi héich ass an mat 100 μM oleic Seier behandelt Zellen, am Verglach zu der Kontroll, 1 an 10 μM oleic Seier. VerfÜgung Kliniken Effekter vun nährstoffaarme op NUCB2 mRNA Ausdrock an serum NUCB2 /nesfatin-1 zu Mais VerfÜgung D'Gewiicht, Haaptmoolzecht an Bluttzocker Profil vun Mais op verschidde Bierger z'iesse ginn an S2 Dorënner gewisen. Mais op engem héijen Fett iessen es hat vill niddereg Ausdrock vun NUCB2 mRNA am Mo. Verglach zu deenen op enger Kontroll es, héich FAQ oder héich rechnen Bierger (Figebam. 8A). Et war kee groussen Ënnerscheed zu den Ausdrock vun NUCB2 mRNA am klenge Daarm tëscht Mais op enger Kontroll es, héich FAQ, héich rechnen oder Fett Bierger (Figebam. 8B). Mais es op d'héich FAQ a Fett Bierger hunn comparatively niddereg Ausdrock vun NUCB2 mRNA vun der grousser Daarm wéi Mais op Kontroll oder héich rechnen Bierger es (Figebam. 8C). Mais op engem héijen FAQ Ernährung Desert Eagle huet en däitleche niddereg Ausdrock vun NUCB2 mRNA an der Liewer wéi Mais op der aner Bierger es (Figebam. 8D). Um 7 a.m, goufen et keng Ënnerscheeder zu serum nesfatin-1 /NUCB2 Niveauen am Mais z'iesse verschiddene Bierger (Figebam. 9A). Um 1 p.m, déi héich rechnen Ernährung z'iesse Mais déi wiesentlech méi héich serum nesfatin-1 /NUCB2 am Ëmlaf (Figebam. 9B). Serum nesfatin-1 /NUCB2 war wesentlech méi déif an Mais héich rechnen, héich FAQ oder Fett, am Verglach z'iesse Ernährung z'iesse Mais bis Kontroll um 7 Auer (Figebam. 9C). VerfÜgung Fouss Auswierkunge vun nährstoffaarme op NUCB2 mRNA Ausdrock , Bluttzocker an serum NUCB2 /nesfatin-1 zu Mais VerfÜgung Et huet kee groussen Ännerungen an der Expressioun vun NUCB2 mRNA am Mo. (Figebam. 10A), kleng Daarm (Figebam. 10B), grouss Daarm (Lalumi . 10C) a Liewer (Figebam. 10D) tëschent op engem héijen FAQ, héich rechnen, Fett oder Waasser z'iesse Mais.
Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Ass de Coronavirus duerch Feeën verbreet?
Uergelchip Technologie verbessert Studie vum Darm fir personaliséiert Medizin
Vaginale Bakterien verbonne mat virzäiteger Gebuert
Detailléiert Kaart vum mënschlechen Zongmikrobiom
Liewerfunktioun ka wichteg sinn am Risiko vun der Alzheimer Krankheet
Nei Strategie kann d'Gutt-Gehir Kommunikatioun stäerken
Xylitol a Grapefruit Som Extrakt weist Versprieche fir d'SARS-CoV-2 Infektioun ze vermeiden,
Etude fënnt DCoronavirus Krankheet (COVID-19), verursaacht vum schwéieren akuten Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2), huet weltwäit Schued gemaach. Et huet sech verbreet zënter sengem éischten O
DeNovix annoncéiert Gewënner vum Platin DS11 FX+ Spektrofotometer / Fluorometer
DeNovix Inc. ass frou de Gewënner vum Concours matzedeelen fir en Don vun engem eenzegaartegen, platinfarben DS11 FX+ Spektrofotometer / Fluorometer. Zoufälleg aus Dausende vun Entréen ausgewielt, de
De Mikrobiom Verloscht vum Antibiotikum benotzt beaflosst d'Äntwert op d'Gripp Impfung
All lieweg Persoun huet Billiounen u Mikroben, déi an hirem Verdauungstrakt liewen, a méi wéi 400 Aarte vu Bakterien am Darm, méi wéi dZuel vun den Zellen am Kierper. Déi normal Darmflora ass wichteg