PLoS One: Tápanyagok eltérően szabályozzák Nucleobindin-2 /Nesfatin-1 in vitro tenyésztett Gyomor Ghrelinoma (MGN3-1) sejteket és in vivo Férfi Mice

absztrakt katalógusa

Nesfatin-1 kiválasztódik, étkezés reagáló táplálkozást kódolt peptid a prekurzor nucleobindin-2 [NUCB2]. Keringő nesfatin-1 fokozza Postprandialisan de az étrendi összetevők, amelyek befolyásolják NUCB2 /nesfatin-1 továbbra is ismeretlen. Feltételeztük, hogy a szénhidrát, zsír és fehérje differenciálisán szabályozza a szövet-specifikus expresszióját nesfatin-1. NUCB2, prohormon konvertázok és nesfatin-1 mutattunk egér gyomor ghrelinoma [MGN3-1] sejteket. NUCB2 mRNS és fehérje is kimutatható egér máj, és a vékony- és vastagbelet. MGN3-1 sejteket kezeltünk a glükóz, a zsírsavak vagy aminosavak. Hím C57BL /6 egereket krónikusan táplált magas zsírtartalmú, magas szénhidrát és a magas fehérjetartalmú étrend 17 hétig. Kvantitatív PCR és nesfatin-1 vizsgálatot használták, hogy meghatározzák nesfatin-1 mRNS és fehérje szinten. A glükóz által stimulált NUCB2 mRNS expressziójának MGN3-1 sejtekben. L-triptofán is növekedett NUCB2 mRNS expresszió és ghrelin mRNS expressziója, és nesfatin-1-kiválasztás. Olajsav gátolta NUCB2 mRNS expresszió, míg a ghrelin mRNS expressziója és szekréciója fokozódott. NUCB2 mRNS expressziója szignifikánsan alacsonyabb volt a májban egerekben a magas fehérjetartalmú étrend képest egerekben más étrend. Krónikus bevitel magas zsírtartalmú étrend okozta jelentős csökkenését NUCB2 mRNS a gyomorban, míg a magas fehérje és magas zsírtartalmú étrend okozta hasonló elnyomása NUCB2 mRNS a vastagbélben. Nem volt különbség a szérum nesfatin-1 szinteket találtak egerekben 7 a.m, kezdetekor a világos fázis. Magas szénhidrát diéta táplált egerek szignifikánsan emelkedett nesfatin-1 szintek 13:00 szérum nesfatin-1 szignifikánsan alacsonyabb volt a egerekben nagy zsírtartalmú, fehérje vagy szénhidrát a kontrollhoz képest a 7 p.m, közvetlenül azelőtt, hogy a sötét fázis. Kapott egerek bolus magas zsírtartalmú volt szignifikánsan emelkedett nesfatin-1 /NUCB2 minden időpontban vizsgált utáni gyomorszondán át, a kontroll egerekhez képest, és egerekben más étrend. Eredményeink az első alkalommal mutatják, hogy nesfatin-1 által modulált tápanyagokat.

bevezető hivatkozás: Mohan H, Ramesh N, Mortazavi S, Le A, Iwakura, H Unniappan S (2014) Tápanyagok eltérően szabályozzák Nucleobindin-2 /Nesfatin-1 in vitro katalógusa tenyésztett Gyomor Ghrelinoma (MGN3-1) sejtek és in vivo katalógusa hím egerekben. PLoS ONE 9 (12): e115102. doi: 10,1371 /journal.pone.0115102 katalógusa

Szerkesztő: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: 1. május 2014; Elfogadva: november 18, 2014; Megjelent: december 15, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Mohan et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden lényeges adat a papír és az azt támogató információs fájlokat. Katalógusa

Forrás: A kutatás által támogatott nyílt működési támogatást a kanadai képzőiskolák Egészségügyi Intézet (CIHR; http: //www.cihr-irsc. gc.ca/e/193.html) és egy Establishment Grant a Saskatchewan Health Research Foundation (http://shrf.ca/). SU egy CIHR Új nyomozó. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. A finanszírozók nem játszanak szerepet a kutatás vagy kézirat előkészítése. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető katalógusa

Nesfatin-1 [NEFA /NUCB2 kódolású jóllakottság és a zsír-befolyásoló protein-1] egy erős anorexigén peptid szerepet játszik a szabályozás az energia-egyensúly és a glükóz homeosztázisban [1], [30]. Ez egy 82 aminosavból álló peptid származó prekurzor protein, nucleobindin-2 (NUCB2) [1]. NUCB2 áll 396 aminosavból álló, két EF hand motívumok és egy DNS-kötő domént [1], [3]. Transzláció utáni feldolgozást a prohormon konvertázok (PC 1/3 és PC-2) okozza NUCB2 hogy hasítható három peptidek nesfatin-1 (1-82 aminosav), nesfatin-2 (85-163 aminosav), és nesfatin- 3 (166-396 aminosav). NUCB2 /nesfatin-1 aminosav szekvencia nagymértékben konzervált fölött gerincesek [6], [7], [31]. NUCB2 /nesfatin-1 megtalálható különböző hipotalamusz atommagok, amelyek részt vesznek az energia-anyagcsere, például a nucleus arcuatus, nucleus paraventricularis, nucleus supraopticus, hipotalamusz laterális területe és a zona increta [8], [9]. Inzulintermelő béta-sejtek ko-Express nesfatin-1 a hasnyálmirigy-szigetek a patkányok és az egerek [2], [4], [11], ami arra utal, hogy a nesfatin-1 játszhat fontos szerepet inzulinszekréció és a glükóz homeosztázisban [4], [29]. A ghrelin és NUCB /nesfatin-1 kolokalizált a gyomor corpus típusú nyálkahártya mirigyekben rágcsálókban [13] és emberekben [16]. NUCB2 mRNS expresszióját a tisztított gyomornyálkahártya endokrin sejtek találták magasabb lesz, mint az agyban patkányok [13]. A teljes hosszúságú NUCB2 fehérje volt megfigyelhető a kis és nagy belek és a máj hím patkányok, és ICR egereket [5]. A széles eloszlása ​​NUCB2 /nesfatin-1 a központi és perifériás szövetekben arra utal, hogy szerepet nesfatin-1 szabályozásában az anyagcsere.

napi beadása nesfatin-1 okozta kiterjesztett csökkenését táplálékbevitel és a testsúly [1] . Intracerebroventrikuláris beadása NUCB2 elnyomja táplálékfelvétel, a testsúly és a bőr alatti, mesenterialis és epididymalis zsírtömeg felnőtt patkányokban a dózisfüggő módon. Ezen túlmenően, NUCB2 knockdown patkányokban forrázással antiszensz morfolino oligonukleotid (AS-MON) okozott az étvágy növekedése és a testsúly [1]. Intra-nucleus paraventricularis injekciót nesfatin-1 csökkenti az összesített táplálékbevitelt 1 és 3 óra [9]. Intraperitoneális injekciót nesfatin-1 csökkenését eredményezte a táplálékbevitel leptin rezisztens db /db
egerekben és a magas zsírtartalmú diéta táplált egerek [8]. Nesfatin-1 áll 3 szerkezeti fragmentumok, és csak a középső fragmenst (maradékok 24-53; M30) a nesfatin-1 részt vesz a termelő anorektikus válaszok [15], [28]. Együttesen ezek az eredmények egyértelműen bizonyítják, hogy támogassa a jóllakottság hatásai nesfatin-1.

Nesfatin-1 egy étkezés reagáló glükózszabályozási hormon [12], [13], és a hasnyálmirigy szigetecskék patkányok engedje NUCB2 válaszul glükózra [14]. Humán vizsgálatokban glükóz kezelt betegeknél nagyobb volt a bazális nesfatin-1 szint, mint a kontroll. [10] A MIN6 sejtekben, egy 4-szeres növekedését nesfatin-1 szint volt megfigyelhető, amikor a sejteket magas glükóz (16,7 mM), mint az alacsony glükóz (2,0 mM) [4]. Nesfatin-1 fokozott glükóz stimulált inzulin szekréciót a tenyésztett MIN6 sejtek inkubáljuk magas glükóz, mint az alacsony glükóz dózisfüggő módon [4]. A hasnyálmirigyben streptozotocin (STZ) -injected egerekben, 1. típusú, azt találtuk, hogy mind a NUCB2 és preproinzulin mRNS expresszió szignifikánsan alacsonyabb [4]. Ezzel szemben, a fokozott nesfatin-1 ko-lokalizációs inzulinnal találtak a szigetecske béta-sejtek a magas zsírtartalmú étrend által indukált elhízott egerek 2. típusú cukorbetegség. Nesfatin-1 szöveti különleges hatásait a glükóz felvételét a patkány adipociták és izom [30]. Összességében nesfatin-1 fejt fontos szerepet szabályozásában teljes test glükóz és az energia homeosztázis. Katalógusa

Bár nesfatin-1 van kialakulóban, amely fontos étkezés reagáló peptid [1], [12], [13], [30] , hogy mi váltja ki a váladék még tisztázatlan. Milyen diéta alkatrészek kiváltó étkezés utáni szekrécióját nesfatin-1? Ez a kérdés továbbra is megválaszolatlan. A fő hangsúly a tanulmány célja, hogy meghatározza, hogy a különböző tápanyagok modulálhat NUCB2 /nesfatin-1 in vitro katalógusa tenyésztett gyomor ghrelinoma (MGN3-1) sejtek egerek és in vivo katalógusa hím egerekben. Eredményeink a mi in vitro vizsgálatok azt mutatják, hogy katalógusa MGN3-1 sejtek eltérően reagálnak a tápanyagok kiválasztó NUCB2 /nesfatin-1 és a ghrelin. Hasonlóképpen, akut vagy krónikus tápanyagbevitel, befolyásolja NUCB2 mRNS expresszió és NUCB2 /nesfatin-1 kiadás egy diéta specifikus módon. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

Minden vizsgálatok során az állatok teljesítette a kanadai Tanács Animal Care előírásai, és hagyta jóvá az Animal etikai bizottság, a University of Saskatchewan (jegyzőkönyv száma 2012-0033). katalógusa

In vitro katalógusa Studies

egér gyomor ghrelinoma (MGN3-1) sejtek [17] tenyésztettünk DMEM-ben (Invitrogen, Ontario, Kanada; Katalógusszámw95-040), amit kiegészítettünk 10% borjúembrió-szérumot (Invitrogen; Katalógusszám|84 ) és 1% penicillinnel (100 U /ml) és sztreptomicin (100 ng /ml) (Invitrogen; Katalógusszám—40-122), 37 ° C-on 10% CO _{2. A 80% -os összefolyásig, MGN3-1 sejteket oltottunk 6 × 10 ^{6 sejt /lyuk 12 lyukú lemezre, és a vizsgálatokat végeztünk, ha a sejteket 80-90% összefolyt. Minden kísérletet megismételtük háromszor, és az adatokat a három tanulmány egyesítjük, így n = 9-12 kutak /kezelés. Annak meghatározására, hogy a glükóz volt hatása a dózistól és időfüggő módon, a sejteket 1 órán át inkubáltuk, és 2 órán át 5,6, 25, 50 és 100 mM glükóz DMEM közegben. A teljes tápoldatok MGN3-1 sejtek megköveteli, hogy a növekvő magas glükóz szintet, ami 25 mm. Kapcsolatban elvégzett vizsgálatok a zsírsavak és az aminosavak, végeztünk ezek a vizsgálatok alkalmazásával DMEM alacsony glükóz szint (5,6 mM), mivel egy magas glükóz közegbe (25 mm) elfedheti a hatás a megfelelő tápanyagok NUCB2 /nesfatin -1 szekrécióját és szintézisét. Tekintettel a hosszú szénláncú zsírsavak, teszteltük a hatását három különböző zsírsavak alkalmazásával linolénsav (Sigma-Aldrich, Ontario, Kanada; Product # L2376), oktánsav (Sigma-Aldrich; Product # C2875), és olajsav (Sigma -Aldrich; Product # O1383). A sejteket 4 órán át inkubáljuk az egyes zsírsavak 0, 1, 10, 100 um. Mi használt L-triptofánt (Sigma-Aldrich; Product # T8941), hogy teszteljék a hatását egy aminosav a NUCB2 szekrécióját és szintézisét. A sejteket 4 órán át inkubáljuk L-triptofán 0,7, 1, 10 mM. L-triptofánt van jelen a kontroll közegben (5,6 mM glükóz DMEM) egy minimális dózis 0,7 mm, ami elengedhetetlen a növekedésükhöz állapotban.}}

In Vivo
Studies

a krónikus etetését tartalmazó étrend változó mennyiségű specifikus tápanyagok, kora és testtömege illesztett (5 hetesek, átlagos testsúly: 20 g) hím C57BL /6 egereket (Charles River Laboratories, Québec, Kanada) egyenként helyezzük a 17 hétig 12 óra fény: 12 órás sötét ciklusokban (a világítást le 19:00 és a 07:00), a hőmérséklet és a páratartalom szabályozott akvárium. Az egereket négy csoportra osztottuk etetett kontroll (n = 6), magas szénhidrát (n = 7), magas fehérje (n = 7), és a magas zsírtartalmú (n = 7) étrend ad libitum katalógusa a vízhez való hozzáférést és azok specifikus étrend. Minden étrendek cégtől vásároltuk Research Diets (New Brunswick, NJ). A kalória tartalma diéták, kontroll (Product # D12451): 4,73 kcal /g, 20% -os energia-származzon fehérjéből, 35% -os energiamegtakarítás származó szénhidrát és 45% zsírból származó energia; magas szénhidrát (Product # D12450J) volt 3,8 kcal /g, 20% -os energia-származzon fehérjéből, 70% -os energia származik a szénhidrát és 10% zsírból származó energia; magas fehérje (termék száma D08091802) volt 3,8 kcal /g, 60% -os energia-származzon fehérjéből, 30% -os energia származik a szénhidrát és 10% zsírból származó energia, és a magas zsírtartalmú (Product # D12492) volt 5,2 kcal /g, 20% származó energia fehérje, 20% -os energia származó szénhidrát és 60% zsírból származó energia. Minden egereknek a kontroll étrendet egy héten megkezdése előtt specifikus étrend. A táplálékbevitelt, a testsúly, és a vér glükóz leolvasott elhelyezhet 4 óra gyors mértük hetente egyszer 17 hétig.

Az akut beadása tápanyagok, kora és testtömege illesztett (5 hetesek, átlagos testsúly: 20 g) hím C57BL /6 egereket (Charles River Laboratories, St Constant, Qu, Kanada) egyenként helyezzük 1 hétig és a 2. napon a 12 órás fény: 12 óra sötét ciklussal (a világítást le 19:00 és a 07:00 ), a hőmérséklet és a páratartalom szabályozott akvárium. Egereket hozzászokik 1 hétig érkezéskor, és volt ad libitum hozzáféréssel a vízhez és a rendszeres egér Chow 11 napig. Mivel végzünk akut étrend tanulmányban szükséges az állatok szokniuk az orális szondás eljárás. Mi hozzászokik az egerek ezt az eljárást gavaging őket csapvízzel 2 nappal a kísérlet napján. A 12 ^{th napon az egereket éheztettünk 4 órán át, és azokat szondával egy adott folyadék étrend. Az egereket 4 csoportba osztjuk: magas fehérje (Isopure Protein Drink, Zero Carb - Mango őszibarack ízű természet legjobb, Clifton Park, New York; n = 7), Magas zsírtartalmú (Splendido; hidegen sajtolt extra szűz olívaolaj, elnök választása , Kanada; n = 7), Magas szénhidrát (D-glükóz; BIOSHOP; Catlogue # GLU}

• PLoS One: Milyen kapszulaendoszkóp alkalmas a szabályozható önjáró kapszula endoszkóp? Kísérleti tanulmány segítségével Sertés Gyomor Model for Clinical Application (és videók)
• PLoS One: Gyomor Hőmérsékleti rekord Reveal Nursing viselkedése és átmeneti Solid élelmiszer-fogyasztás egy szopós emlős, a Harbour Seal Pup (Phoca vitulina)