| Stomach Health > Mo. Gesondheet >  > Stomach Knowledges > Fuerschunge

ZIC1 modulates Zell-Zyklus distributions an Zell Wanderung duerch Regulatioun vun sonic Kéiseker, PI3K an MAPK sécher Weeër an gastric Kriibs

ZIC1 modulates Zell-Zyklus distributions an Zell Wanderung duerch Regulatioun vun sonic Kéiseker, PI 3K an MAPK sécher Weeër an gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung ZIC1, eng kruzial Transkriptiouns Faktor mat Zénk Fanger Beräicher, huet schonn an de Prozess vun Mä Entwécklung agebonne. Mir weisen virdrun dass ZIC1 zu gastrointestinal Cancers als entholl suppressor Funktioun kënnen. Allerdéngs bleift d'molekulare Mechanismus Basisdaten ZIC1 Participatioun an entholl Werdegang onbekannt. VerfÜgung Method VerfÜgung D'Roll vun ZIC1 op Zell Prolifératioun a Migratioun sech iwwerpréift. D'Regulatioun vun sonic Kéiseker (Pabeiren), phosphoinositide 3-kinase (PI 3K) an mitogen-ageschalt FAQ kinase (MAPK) sécher Weeër no ectopic Ausdrock vun ZIC1 vun Zellen gastric Kriibs bewäert huet. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Overexpression vun ZIC1 dréit zu der inhibition vun Zell Prolifératioun Wanderung an Zell-Zyklus Verdeelung vun gastric Kriibs. D'modulation vun G1 /S Bomm duerch ZIC1 ass haaptsächlech duerch d'Regulatioun vun cyclin-ofhängeg kinases (p21 Waf1 /Cip1, p27 Kip1 an cyclin D1) mediated. Ausserdeem, um Niveau vun phospholated Akt an Erk1 /2, an transcriptionally regléieren sonic Kéiseker (Pabeiren) sécher, also Virwaat den Ausdrock vun p21 ze regléieren Waf1 /Cip1 an cyclin D1 inactivate ZIC1 kann. Endlech hun mir systemesch ZIC1 afgerappt Ziler vun cDNA microarray Analyse identifizéiert a verroden, datt 132 Genen sinn verwandelt-reglementéiert an 66 Gene weider-reegelen der transfection mat ZIC1 zu gastric Kriibs Zellen sinn. Dës Kandidat Genen kritescher Rollen zu Zell Prolifératioun, Zell Zyklus a Zell motility Leeschtung. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Overexpression vun ZIC1 Resultater am inactivation vun Pabeiren, PI 3K an MAPK sécher Weeër, wéi och Regulatioun vun Multiple afgerappt Ziler déi sinn wichteg fir d'Entwécklung an de Werdegang vun gastric Kriibs. ZIC1 déngt als potentiell therapeutesch Zil fir gastric Kriibs. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung ZIC1 Sonic Kéiseker Zell Zyklus klinescher suppressor Background VerfÜgung ZIC1, eent vu fënnef ZIC Famill Genen, zu enger Rei vu Entwécklungsphase Prozesser Équipe ass, dorënner neurogenesis an myogenesis [1, 2]. Kuerzem, ZIC1 gouf an de Werdegang vun mënschlech erhéijen dorënner medulloblastoma, endometrial Cancers, mesenchymal neoplasms an liposarcoma Cancers [3-6] matmaachen dokumentéiert. Mir hun virdrun gewisen, datt ZIC1 Gentherapie bedeitend an gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen wou mat deem vun normal gastric Stoffer Verglach downregulated ass. Zousätzlech, déngt als entholl suppressor ZIC1 potenziell Zell Verbreedung zu gastric an colorectal Kriibs Zellen [7, 8] vun inhibiting. Wéi eng wichteg Reunioun Faktor, ass ZIC1 zu der Regelung vun Hues sécher (Hausfra) essentiel, Bone morphogenetic FAQ (Name), an eng top sécher Weeër an Mä Entwécklung [2, 9]. Mä, ass wéineg bekannt wéi ZIC1 reguléieren Signal Weeër an hir wëssenschaftlech afgerappt Ziler an Kriibs Werdegang. VerfÜgung Gastric Kriibs ass den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit [10, 11]. Hh sécher ass eent vun de wichtegsten oncogenic sécher Weeër an gastric carcinogenesis Équipe [12, 13]. Sonic Kéiseker (Pabeiren), e Member vun der mammalian hh Famill [14], huet bewisen gouf souwuel zur fir de Werdegang vun gastric Kriibs [13, 15] zu situ hybridization assay a wesentleche zu gastric Kriibs Stoffer upregulated gin. Hh sécher Passerelle vun Pabeiren ageschalt ass mat dem Material (Ptch) bindend - Smoothened (Smo) Membran-receptor komplex [16]. Der Aktivatioun vun Pabeiren ënnerstëtzt gastric Kriibs Zell dat an Prolifératioun. Et ass confirméiert datt ZIC1 konnt den Ausdrock vun PTCH1 VerfÜgung an déi Pabeiren VerfÜgung Genen vun Mä Otemschwieregkeeten während forebrain Entwécklung [17] reduzéieren. Am Géigesaz, huet Beweiser gewisen, datt d'Pabeiren den Ausdrock vun ZIC1 während Mä Rouer Entwécklung represses [18]. Trotzdem bleift de Afloss vun ZIC1 op der hh sécher Passerelle an gastric Kriibs onbekannt. VerfÜgung ZIC1 och vill Ziler dorënner cyclin D1, p27, Wnt1 an Wnt7a während Mä Entwécklung vun xenopus ectodermal explants an Mann- Mais Modeller [9, 19 reguléieren, 20]. Mir si virun allem interesséiert Zell-Zyklus Legislateuren wichteg fir Kriibs Zell Prolifératioun an dat. Mir hun virdrun dass overexpression vun ZIC1 dës kann G1 /S Iwwergank zu gastric Kriibs Zellen [8] ofzeänneren. Puer Mechanismen vun Cyclin ofhängeg kinases (CDKs) sinn an d'Regulatioun vun G1 /S Bomm mënschlechen Cancers [21] Équipe. Während Iwwergank vum G1 bis S Phas, cyclin D déi aktiv investéiert mat CDK4 Formen ass weider-reglementéiert gastric Kriibs [22, 23]. Verloscht vun cyclin ofhängeg kinase inhibitors wéi p21 Waf1 /Cip1 an p27 Kip 1 CDK2 Aktivitéit Promotioun an der G1 /S Transitioun [12, 24] regléieren. Rezent Studien hu bewisen, datt Mann- ZIC1 oder force overexpression vun ZIC1 den Ausdrock vun p27 reguléieren Kip 1 zu Mais cerebellar Stoffer an liposarcoma Zellen [3, 20]. Spannen, reguléieren déi Pabeiren sécher Passerelle negatif p21 Waf1 /Cip1 an cyclin D1 an enger GLI1-ofhängeg Manéier [16, 25]. Mä, ob ZIC1 mat Pabeiren Passerelle an der Regulatioun vun Zell Zyklus distributions definéiert huet Säite kann net ginn. Opkläerungsaarbecht vun dëser sécher Reseau weider Asiicht an gastric Kriibs an der Roll vun ZIC1 suerge kann. VerfÜgung An eis heiteg studéieren, beweisen mer dat overexpression vun ZIC1 gastric Kriibs Zell Wanderung an Invasioun, souwéi Mäe der Zell-Zyklus distributions Hien. ZIC1 kann transcriptionally déi Pabeiren sécher downregulate an de Niveau vun phospholated Akt an Erk oofgesinn, féiert also zu der Regelung vun der Zell-Zyklus regulator kinases p21 Waf1 /Cip1, p27 Kip1 an cyclin D1 an gastric Kriibs Zellen. Mir méi wichteg ZIC1 afgerappt Ziler an gastric Kriibs Zellen vun cDNA microarray Analyse. VerfÜgung Resultater VerfÜgung ZIC1 bremst Prolifératioun, Migratioun an Invasioun vun gastric Kriibs Zellen och den Effet vun ZIC1 op Zell Prolifératioun ze bestëmmen VerfÜgung identifizéiert mir standing Zell Nuetsvolen Analyse vun MTS assays zu gastric Kriibs Zellen. Gastric Kriibs Zell Linnen (AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901) sech mat pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure transfected. D'transfection Effizienz war vun RT-Hinnen alleguer a westlech blot bzw. (Dorënner 1A) confirméiert. Resultater weisen, dass d'Zuel vun liewensfäeg Zellen vill vun ectopic Ausdrock vun ZIC1 an engem 5-Dag Observatioun vun BGC823 Zellen (Dorënner 1B) opgeléist gouf. D'Ophiewe vun Zell Prolifératioun vun ZIC1 war konsequent mat eis virdrun Observatioune vun AGS an MKN28 gastric Kriibs Zellen, souwéi Colon Kriibs Zellen [7, 8]. Figur 1 ZIC1 Hien Zell Prolifératioun a Migratioun zu gastric Kriibs. (A) Gastric Kriibs Zell Linnen (AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901) sech mat pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure stably transfected. Den Ausdrock Niveau vun ZIC1 mRNA an FAQ sech duerch RT-Hinnen alleguer (ieweschte Diagramm) a Western blot (Niddereg Diagramm) gesuergt. GAPDH an β-actin sech als intern Kontrollen benotzt. (B) D'Zell Nuetsvolen vun gastric Kriibs Zell Linn (BGC823) war vun MTS Zell Prolifératioun assay alles. De Stär beweist statistesch Bedeitung (** p &Si besteet; 0 an 01). (C) Zell Wanderung war vun évaluéieren geännert Boyden transwell CHAMBERS assays der incubation fir 16 h. Zellen, datt bis ënnen vun der Membran migrated sech mat DAPI Kierchefënster. (D) D'Zuel vun siichtbar Opbau Zellen (mengen ± S.D) war vun Zielen fënnef zoufälleg héich Muecht Felder (× 400 Vergréisserung) geschat. Dës Experimenter waren am triplicate gesuergt. D'Vertrieder Daten sinn gewisen. De Stär beweist statistesch Bedeitung (*** p &Si besteet; 0.001). VerfÜgung Zousätzlech, sech mir d'Roll vun ZIC1 zu Zell Wanderung an Invasioun an gastric Kriibs. Zell Wanderung an Invasioun assays sech zu transwell Migratioun standing an Invasioun assay Systemer-Matrigel bedeckt sinn, respektiv. Mir gesinn, datt s-Ausdrock vun ZIC1 vill Zell Migratioun zu AGS, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zell Linnen (p &Si besteet; 0.001) Trupen (Dorënner 1c, D). Zousätzlech, ugewisen sidd-Ausdrock vun ZIC1 e wesentlech méi Aktivitéit vun bewosst Invasioun wéini déi eidel Vecteure transfectants zu AGS Zellen am Verglach (p &Si besteet; 0,05) (Zousätzleche Fichier 1: Dorënner S1). Dës Donnéeë hindeit, datt ectopic Ausdrock vun ZIC1 Hien gastric Kriibs Zell Wanderung an Invasioun. VerfÜgung ZIC1 Mäe Zell-Zyklus distributions a reguléieren den Ausdrock vun cyclin-ofhängeg kinases zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Fir weider d'Mechanismen verstoen Basisdaten d'inhibition vun Zell Prolifératioun vun overexpression vun ZIC1, mir bewäert Zell-Zyklus distributions zu gastric Kriibs Zellen. Mir observéiert engem Undeel vun Zellen an G1 Phase vun AGS (42.74%) an SGC7901 (54.03%) Zell Reien overexpression vun ZIC1. Allerdéngs, an de mat enger Kontroll Vecteure transfected Zellen, war den Undeel ofgeholl souwuel zu AGS (32.66%) an SGC7901 (47.00%) an den Undeel vun Zellen am S Phase war relativ fräi (Dorënner 2A). Et ass gutt, datt p21 akzeptéiert (och als p21 bekannt Waf1 /Cip1) an p27 (och als p27 bekannt KIP1), zwee Haaptgrënn cyclin-ofhängeg kinase inhibitors, sinn fir Astelle während der Entrée ze S-Phase néideg [26]. Der Aktivatioun vun Cyclin D1, ass awer, haaptsächlech verantwortlech fir Regulatioun der G1-S Phase Transitioun [23]. Mir bewisen, datt de Wëllen Niveau vun cyclin D1 FAQ reduzéiert huet iwwerdeems p21 an p27 Ofstand zu gastric Kriibs Zellen mat pCDNA3.1-ZIC1 transfected entschlof waren, wann zu deenen pCDNA3.1 eidel Vecteure transfectants (Dorënner 2B) am Verglach. Mir évaluéiert och d'Zell apoptosis distributions zu pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 Vecteure transfectants zu AGS an MKN28 Zellen, mä keng kloer Ënnerscheeder vun Zell apoptosis goufen observéiert (Zousätzleche Fichier 2: Dorënner S2). Dofir, ënnerstëtzt dës Resultater datt overexpression vun ZIC1 der Zell Zyklus distributions duerch Regulatioun vun cyclin-ofhängeg kinases p21, p27 souwéi cyclin D1 an gastric Kriibs Zellen Mäe. Figur 2 ZIC1 Mäe Zell-Zyklus distributions vun Regulatioun vun p21, p27 an cyclin D1 an gastric Kriibs Zellen. (A) Zell Zyklus distributions sech duerch onkontrolléiert cytometry Analyse vun AGS erwëscht an SGC7901 Zellen der flüchteg transfection mat pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure fir 24 h. (B) Den Ausdrock Niveau vun p21, p27 an cyclin D1 sech duerch Western blot alles. β-actin war als Luede Kontroll fonnt. Densitometry Wäerter sinn als fantastesch Verännerung am Verglach mat pCDNA3.1 Vecteure Kontroll Wäerter normalized ze 1. (C) Den Ausdrock Niveau vun phospholated Akt an Erk1 /2, souwéi total Akt an Erk1 /2 goufen iwwerpréift vun Western blot ausgedréckt.
MAPK an PI 3K Weeër Leeschtung kruzial Roll an d'Regulatioun vun der Zell-Zyklus kinases. Mir Uschléi Ausdrock vun Haaptstrooss afgerappt effectors vun dësen zwee Weeër, Erk1 /2 an Akt, no pCDNA3.1-ZIC1 zu AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zellen (Dorënner 1A) stably anzeféieren. Mir hunn erausfonnt, datt d'phosphorylation Niveau vun Erk1 /2 an Akt Trainer vun overexpression vun ZIC1 zu all virun Zell Linnen getest (Dorënner 2C) opgeléist goufen. Dës Resultater ugeholl, datt d'Regelung vun Zell-cylce Verdeelung vun ZIC1 duerch PI mediated kann 3K an MAPK Weeër an hir afgerappt cyclin-ofhängeg kinases p21, p27 an cyclin D1 an gastric Kriibs. VerfÜgung ZIC1 Hien den Ausdrock vun Sonic Kéiseker (Pabeiren) zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung cuisine characterization datt ZIC1 gewisen huet VerfÜgung Zénk-Fanger Beräicher huet a mat GLI1 vun verbindlech bis GC-räiche Message Krise konnten [2]. GLI1 ass eng matgeholl Zilscheif vun Kéiseker (hh) sécher Passerelle déi zu gastric Kriibs Entwécklung essentiel ass an Werdegang [9, 27]. Mir Hypothes, datt hh sécher Passerelle an der ZIC1 Regulatioun vun gastric Kriibs Zell-Zyklus a Zell Migratioun Équipe kann. Zu dësem Thema Adress, iwwerpréift mir den Ausdrock vun Sonic Kéiseker (Pabeiren), e Schlëssel Member vun hh Famill, an gastric Kriibs Zellen der overexpression vun ZIC1. Mir hu fonnt, dass du-Ausdrock vun ZIC1 verklengert effektiv déi Pabeiren Ausdrock vun BGC823 an SGC7901 Zell Linnen vum südwestlechen blot Analyse (Dorënner 3A). Ausserdeem huet den RT-Hinnen alleguer Analyse, datt déi ët Niveau vun Pabeiren ass och zu gastric Kriibs Zellen vill downregulated mat ZIC1 relativ transfected ze eidel Vecteure transfectants (p &Si besteet; 0.01) (Dorënner 3B) (Zousätzleche Fichier 3: Dorënner S3). . Geholl zesummen, eis Resultater hindeit, datt ZIC1 transcriptionally den Ausdrock vun Pabeiren zu gastric Kriibs Zellen regléieren kann. Figur 3 ZIC1 bremst den Ausdrock vun Sonic Kéiseker (Pabeiren). (A) Den Ausdrock vun Pabeiren FAQ war vun Western blot an BGC823 analyséiert a SGC7901 Zellen stably transfected mat pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure. (B) Den Ausdrock Niveau vun Pabeiren mRNA war vun real-Zäit grouss RT-Hinnen alleguer Analyse alles. Der relativer Ausdrock Niveau war wéi fantastesch änneren (mengen ± Sem) ausgedréckt Verglach mat pCDNA3.1 eidel Vecteure normalized ze 1. VerfÜgung Hues (Hausfra) sécher Passerelle an der ZIC1 Regulatioun vun Zell-Zyklus a Zell Migratioun zu gastric Kriibs betraff ass Zellen VerfÜgung den Effet vun Pabeiren op Zell-Zyklus distributions fir erauszefannen, géng mir d'Effete vun pharmacologic inhibitor vun hh sécher op den Ausdrock vun p21 an cyclin D1 ënnersicht. AGS, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zell goufe mat cyclopamine (10 μM) behandelt, e steroidal alkaloid dat direkt mat Smo openee fir 24 h hh sécher [28], oder DMSO Kontroll ze inhibit. Mir gesinn, datt den Ausdrock Niveau vun p21 Ofstand weider-reegelen, iwwerdeems cyclin D1 verwandelt-reegelen der entholl Zellen mat cyclopamine (Dorënner 4A) behandelt goufen. Vun Note, Passerelle déi Pabeiren sécher Outil vun Administratioun vun cyclopamine Afloss net de Ausdrock Niveau vun ZIC1 mRNA zu BGC823 an SGC7901 Zellen vun RT-Hinnen alleguer assays (Dorënner 4B). D'Vakanz oder niddereg Ausdrock vun ZIC1 mRNA zu gastric Kriibs Zellen war haaptsächlech duerch Promoteur DNA methylation meditated wéi mir virdru beschriwwen [8]. Figur 4 hh sécher Passerelle ass am Ausdrock vun p21, cyclin D1 a Regulatioun vun Zell Migratioun Équipe. AGS, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zellen sech mat cyclopamine (10 μM) behandelt, e steroidal alkaloid dat direkt mat Smo openee fir 24 h hh sécher, oder DMSO Kontroll ze inhibit. (A) Den Ausdrock Niveau vun p21 an cyclin D1 sech duerch westlech blot an AGS, BGC823 alles an SGC7901 Zellen. (B) Den Ausdrock Niveau vun ZIC1 mRNA war duerch konventionell RT-Hinnen alleguer iwwerpréift. (C) Zell Wanderung war vun évaluéieren geännert Boyden transwell CHAMBERS assays. Zellen, datt bis ënnen vun der Membran migrated sech mat DAPI Kierchefënster. (D) De mengen Zuel vun siichtbar Opbau Zellen (mengen ± S.D) zu fënnef zoufälleg héich Muecht Felder berechent war (× 400). De Stär beweist statistesch Bedeitung (*** p &Si besteet; 0.001). VerfÜgung Mir och d'Auswierkunge vun Pabeiren sécher op gastric Kriibs Zell Migratioun bewäert. Als zu Dorënner 4 C an D gewisen, AGS, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zell Linnen huet drastesch ofgeholl an bewosst Migratioun der Administratioun mat cyclopamine (10 μM) fir 24 h (p &Si besteet; 0.01). Erginn des Resultater weisen, datt ZICI der Zell-Zyklus Legislateuren an eng Zell Wanderung duerch déi Pabeiren sécher an gastric Kriibs Zellen kann well. VerfÜgung Gene Ausdrock Profil Ännerunge vun ectopic Ausdrock vun ZIC1 VerfÜgung systematesch Fir afgerappt Ziler vun ZIC1 festzestellen, gehaal mir eng affymatrix oligonucleotide microarray zu MKN28 gastric Kriibs Zellen mat oder ouni pCDNA3.1-ZIC1. Mat Hëllef vun engem präventive vu > 1,5 fantastesch fir statistesch Bedeitung, engem microarray Teamchef 132 Genen sinn verwandelt-reegelen während 66 Gene weider-reegelen exogenous Ausdrock vun ZIC1 (Vertrieder Genen dës Distanz an Dorënner 5A) sinn. Vill Genen hunn gemellt ginn kritescher Rollen zu Zell Prolifératioun, Zell Zyklus a Zell Migratioun ze spillen no der Gentherapie funktionell Analyse (http:.. //Www genecards org) (Dorënner 5B). tranfected mat pCDNA3.1-ZIC1 Zum Beispill, zwee Schlësselwierder Zell-Zyklus Legislateuren TP53INPI VerfÜgung an CDKN2B VerfÜgung fonnt ginn bis zu MKN28 Zellen dereguléierte ginn. Eis Resultater weisen, datt ZIC1 potenziell Multiple afgerappt Genen vun gastric tumorigenesis Équipe reguléieren. Figur 5 Gene Ausdrock Profil Ännerungen der ectopic Ausdrock vun ZIC1. (A) D'Gentherapie Ausdrock Profiler an pCDNA3.1-ZIC1 oder eidel pCDNA3.1 Vecteure stabil transfectants sech zu MKN28 Zellen vun cDNA microarray analyséiert. Vertrieder Genen sinn op der rietser Säit vun der heatmap Bild illustréiert mat e präventive > 1,5 oder &Si besteet; -1,5 Fantastesch als groussen Ënnerscheed ,. (B) Genen zu Zell Zyklus Équipe, Zell Prolifératioun an Zell Migratioun no Gentherapie funktionell Analyse (http:.. //Www genecards org) ginn. Relativer fantastesch Ännerung ass mat Verhältnis vun pCDNA3.1-ZIC1 versus pCDNA3.1 Kontroll ausgedréckt. (C) D'Verständnis vun Weeër fir ZIC1 Regulatioun vun sécher an Zil- Genen vun der Entwécklung an Werdegang vun gastric Kriibs. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Volume Beweiser huet gewisen, datt ZIC1 an de Werdegang vun e puer erhéijen Équipe ass [3-8] . Et schéngt, datt ZIC1 aberrantly zu bestëmmten Zorte vu Kriibs a differentially Funktiounen als entholl suppressor oder oncogenic Gene ausgedréckt gëtt. Zum Beispill, war ZIC1 Ausdrock Rapport gastrointestinal an haett Kriibs Zell Linnen niddreg oder veréiert ze ginn, an huet fonnt, fir gastrointestinal Kriibs Zell Prolifératioun [7, 8, 29] oofgesinn. Am Géigesaz, war overexpression vun ZIC1 zu liposarcoma fonnt Zell Prolifératioun an Invasioun [3] ze förderen. Mir an anerer hunn jo bewisen, dass d'epigenetic modulations anerem DNA methylation an histone Remodeling, an genetesch Projet'en fir seng Ënnerscheed Ausdrock Musteren an Cancers bäidroen kënnen [3, 4, 7, 8]. Et gëtt ëmmer kloer, datt esou e Zénk Fanger Transkriptiouns Faktor, ZIC1 Multiple afgerappt Genen vun Mä Otemschwieregkeeten well kann, colorectal Kriibs an liposarcoma Zellen [2, 3, 7, 9]. Allerdéngs ass, wéineg iwwert de Mechanismus Basisdaten ZIC1 Funktioun vun der Entwécklung an Werdegang vun gastric Kriibs bekannt. Underscoring de Schlëssel Weeër a matgeholl Ziler reegelen ZIC1 kann eis Verständnis vun hirer Roll an tumorigenesis vereinfachen. Hei, hun mir dat overexpression vun ZIC1 Resultater am wesentleche inhibition vun Zell Iwwerliewe an Doudesfall vun Zell Migratioun bewisen. ZIC1 Hien de Pabeiren, PI3K an MAPK sécher Weeër, déi fir d'Reglementatioun vun Zell-Zyklus distributions an Zell Migratioun zu gastric Kriibs kritesch sinn. ZIC1 bremst Zell Zyklus reglementaresche kinases, p21, p27 an cyclin D1, also flénke G1 /S Zell Zyklus oennert zu gastric Kriibs Zellen Desweideren,. ZIC1 Hien de Pabeiren sécher Passerelle, déi fir d'Reglementatioun vun Zell-Zyklus distributions an Zell Migratioun zu gastric Kriibs kritesch ass. VerfÜgung MAPK an PI 3K Weeër Leeschtung kritescher Rollen zu Zell Prolifératioun, dat, an Werdegang vun enger Rei vu Mënsch Cancers [30]. Kuerzem, et war och confirméiert, datt d'Aktivéierung vun zwee Weeër si wesentlech Zell Zyklus Element zu induce [30, 31]. An dësem Prozess, cyclin ofhängeg kinase inhibitors p21, p27 an cyclin D /E an d'Regulatioun vun p53 entschlof Zell-Zyklus verhaft matmaachen [24, 32]. Der Aktivatioun vun MAPK a seng afgerappt kinase-Erk hätt just net un der Aféierungs- vun cyclin D1 nodeems an Ugrëff duerch G1 /S Bomm, mä och deene Wierder vun p21 datt cyclin E /CDK2 investéiert bremst S-Phase Entrée ze blockéieren [30] . PI 3K /Akt Passerelle konnt de Gsk3-β an FOXO Transkriptiouns Faktoren inactivate, also cyclin D1 inhibit iwwerdeems p27 an p21 zu der Regelung vun der Zell-Zyklus Element induce [31]. Mir hu gewisen, datt s-Ausdrock vun ZIC1 effektiv d'phosphorylated Akt an Erk1 /2 an AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zell Linnen inactivate. An dat wat, war d'CDK1 inhibitor p21 ausgeléist, iwwerdeems cyclin D1 inactivated, no overexpression vun ZIC1 zu gastric Kriibs Zellen. Wann d'Resultater an Zukunft Studien validéiert gin brauchen, hunn eis miroarray Donnéeën verroden, datt aner wichteg Deeler vun Zell Zyklus kinase Legislateuren dorënner TP53INPI VerfÜgung an CDKN2B VerfÜgung, mat gezwongen Ausdrock vun ZIC1 an individuell MKN28 gastric Kriibs Zell dereguléierte sinn Linn (Dorënner 5 a a B). Dofir, proposéieren mir dass ZIC1 G1 /S oennert reguléieren haaptsächlech duerch PI 3K an MAPK Weeër a matgeholl Zell-Zyklus regulator kinases zu gastric Kriibs Zellen. VerfÜgung weideren groussen Opklärung vun eise presentéieren Etude ass, datt ZIC1 transcriptionally reguléieren Sonic Kéiseker (fir déi Pabeiren) sécher an gastric Kriibs Zellen. Parallel aus hirer Mëtt Roll op Regulatioun gastric drüs morphogenesis zu Mënsch Mo, wéi sécher fir déi Pabeiren ass och an der pathogenesis vun gastric Kriibs Équipe [16, 33]. An fir déi Pabeiren ass dacks zu fortgeschratt gastric adenocarcinomas ageschalt an Zesummenhang mat aggressiv entholl Verhalen [13, 15, 33]. Virdrun Etuden hu gewisen, datt déi Pabeiren sécher de motility an invasiveness vun gastric Kriibs Zellen duerch TGF-β-ALK5-Smad3 Passerelle [34] ënnerstëtzt. An fir déi Pabeiren sécher konnt regléieren och den Ausdrock vun p21 an cyclin D1 an enger Gli-ofhängeg Passerelle [16, 25]. Mir hu gesinn, datt inhibition vun Pabeiren sécher duerch Administratioun mat cyclopamine Hien AGS, BGC823 an SGC7901 gastric Kriibs Zell Migratioun, a reguléieren den Ausdrock vun p21 an cyclin D1 (Dorënner 4). Des Resultater sinn konsequent mat virdrun gemellt Studien [25, 34]. Sou, hun mir réischt dass ZIC1 wichteg Roll an gastric Kriibs Werdegang spillt déi Regulatioun vun de Pabeiren sécher Passerelle. VerfÜgung ZIC1 Genen Zil- regléieren kënnen an zwou Haaptrei-spezifesch an onofhängeg Manéieren [9]. ZIC1 konnt de transcriptional Ausdrock vun Ziler dorënner cyclin D1, p27, Wnt1 an Wnt7a, a well top an Name Weeër an Mä Entwécklung [2, 9] regléieren. ZIC1 konnt GLI vun verbindlech bis GC-räiche Message, Krise an den Ausdrock vun GLI-verbindlech Haaptrei ausernee reporter Genen [9, 35] oofgesinn. Mir identifizéiert puer ZIC Potential Zil- Genen vun gastric Kriibs Zellen vun microarray Analyse. Dës Ziler sinn enk Relatioun mat Zell Zyklus, Zell Prolifératioun a Migratioun (Dorënner 5B). D'Associatioun tëscht ZIC an afgerappt Ziler vläicht en Hiweis ginn fir Versteesdemech d'Potential Perspektiv vun ZIC Proteinen an de Werdegang vun gastric Kriibs. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung Summarily, proposéieren mir e Modell, datt d'Weeër duerch dat ZIC1 dréit zu gastric Kriibs duerstellt Werdegang (Dorënner 5C). Overexpression vun ZIC1 Resultater am suppressing Hues (Hausfra) sécher a sengen afgerappt Ziler dorënner p21, p27 an cyclin D1. Wéi engem Faktor Zénk Fanger Transkriptiouns, modulates och ZIC1 potenziell der transcriptional Ausdrock vun Zil- Genen vun bis GC-räiche Message [2] direkt bindend, sou wéi e entholl suppressor vun inhibition vun Zell Prolifératioun, Zell Wanderung an Invasioun an gastric Kriibs analyséieren.
Method VerfÜgung Zell Kultur a Behandlung VerfÜgung De Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen (AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901) aus Riken Gene Bank (Japan) an amerikanesch Type Kultur Collection (ATCC, Manassas, VA, USA kritt huet ). All Zell Strecken cultured zu RPMI 1640 mëttelfristeg (Invitrogen, CA, USA) ergänzt mat 10% An et Bovine serum (FBS) an op 5% CO incubated 2, 37 ° C an 95% Loftfiichtegkeet. Gastric Kriibs Zell Linnen (AGS, BGC823, an SGC7901) sech fir 24 Stonnen mat 10 μM vun cyclopamine (Fläch, St Louis, MO, USA) zu DMSO behandelt. Eng gläichwäerteg Konzentratioun vun der Gefier (DMSO) war wéi d'Kontroll. VerfÜgung Zell transfection VerfÜgung AGS, MKN28, BGC823 an SGC7901 Zellen fir 24 h cultured sech zu enger 6-gutt zappen benotzt an transfected mat pCDNA 3,1-ZIC1 oder pCDNA 3,1 eidel Vecteure benotzt Fugene HD (Roche) no der Taktik vum Produzent. No 48 h, goufen d'transfectants kontinuéierlech an RPMI 1640 mëttelfristeg wouvun G418 ausgewielt (200-400 μg /ml) (Merck, Däitschland) fir 14 Deeg. VerfÜgung RT-Hinnen alleguer a grouss Total RNS VerfÜgung Hinnen alleguer Analyse real Zäit ( 1 μg) war mat Trizol reagent (Invitrogen) folgenden Fabrikant d'Instruktioune ofgebaut an ëmgedréint ausserdeem an cDNA mat M-MLV RTase cDNA Synthes Kit (Takara, Japan). D'ët Niveau vun ZIC1 an déi Pabeiren sech duerch konventionell RT-Hinnen alleguer mat TaKaRa Taq polymerase (Takara, Japan) oder Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) mat der SYBR Green Master Mix Kit (Takara, Japan) an eng Abi 7500 alles Hinnen alleguer System. Primers benotzt fir ZIC1 sech F: 5'-AAACTGGTTAACCACATCCGC an R: 5'-CTCAAACTCGCACTTGAAGG. An fir déi Pabeiren huet F: 5'-GTAAGGACAAGTTGAACGCTTTG an R: 5'-GATATGTGCCTTGGACTCGTAGTA. Glyceraldehyde-3-; phosohate dehydrogenase (GAPDH) huet als eng intern Kontroll benotzt. D'ët Niveaue gi wéi 2 ausgedréckt -ΔΔCt Wäerter a relativ Ausdrock fantastesch Ännerung ass normalized zu GAPDH. VerfÜgung Zell Nuetsvolen assay VerfÜgung Zell Nuetsvolen mat engem nonradioactive Zell Prolifératioun assay mat 3- fonnt gouf (4,5- dimethylthiazol-2-yl) -5- (3-carboxymethoxyphenyl) -2- (4-sulfophenyl) -2 H-tetrazolium (MTS) reagents (Promega, Madison, USA). Stabil transfected Zellen sech am 96-Meter (2000 Zellen /gutt) fir 6 h, 24 h, 72 h an 120 h plated. D'absorbance war um 490 nm no 1 h incubation gemooss mat CellTiter 96 meng One Solution reagent. VerfÜgung Zell-Zyklus a Zell apoptosis Analyse VerfÜgung Zell Zyklus distributions sech duerch de Flux cytometry Analyse fonnt. Zellen transfected mat pCDNA3.1-ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure sech mat PBS gesammelt an gewäsch. Bewosst DNA huet mat Zell Zyklus staining Léisung mat propidium Kaliumiodid (PI) bei 4 ° C an donkel Kierchefënster. Zell Zyklus huet mat engem FACS Calibur alles a mat der ModFitLT Software (Phoenix, USA) analyséiert. VerfÜgung Zell apoptosis war mat FITC Annexin V Apoptosis Detektioun Kit II (BD Pharmingen) duerch onkontrolléiert cytometry Analyse gesuergt. Transiently transfected Zellen sech am Annexin V bindend Respektiv gespaart. Dunn FITC Annexin V an PI Léisungen sech an der Haaptrei notéiert. No incubation fir 15 min, zirkuléiert d'Kierchefënster Zellen vun Flux analyséiert goufen FACScan cytometry (Becton Dickinson, USA). VerfÜgung Zell Wanderung an Invasioun assays VerfÜgung Zell Wanderung duerch geännert Boyden évaluéieren war transwell CHAMBERS assay (Coring, USA). Kuerz, goufen Zellen fir 24 h am serum-gratis mëttelfristeg cultured a 5 × 10 4 Zellen zu der ieweschter ëmkomm an 300 μL mëttelfristeg mat 5% FBS plated goufen. No 16 h vu incubation, waren Net-Opbau Zellen an der ieweschter Chambre virsiichteg mat engem Koteng Swab geläscht. Migrated BTS sech mat DAPI Staining Solution Kierchefënster. D'Zell Zuelen goufen an fënnef Felder (× 400 Vergréisserung) zoufälleg gezielt. VerfÜgung Zell Invasioun gouf zu engem millipore 24-ganz bedeckt mat BD Matrigel gesuergt. No Honger an serum-gratis mëttelfristeg fir 24 h, 1 × 10 5 Zellen zu der ieweschter ëmkomm an 300 μL vun mëttelfristeg mat 5% FBS plated waren, iwwerdeems den ënneschten Chamber mat 600 μL vu Kultur mëttelfristeg mat 15% gefëllt war FBS. Nodeems fir 30 h incubated gouf, waren d'Schläimhait mat Zell Stain Solution (Millorpore, USA) incubated. D'Hoerfaarw Mëschung war vun Extraktioun Respektiv gewäsch a bei 560 nm fir colorimetric Miessung zu engem 96-Meter transferéiert. VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung Total Proteinen vun Zellen ofgebaut goufen Radio-immunoprecipitation assay lysis gefiermt mat protease inhibitor nà benotzt. Lysates sech op 6-12% SDS-PAGE minigels geléist an transferéiert ze PVDF Schläimhait (Millipore, Bedford, MA). Schläimhait sech an 5% Mëllech mat TBST blockéiert an zu 4 ° C Iwwernuechtung mat folgenden antibodies incubated: ZIC1 (1: 500; Abcam), phospho-Akt (1: 1000; Zell sécher), Akt (1: 500; Abcam), phospho-Erk1 /2 (1: 1000; Zell sécher), Erk1 /2 (1: 1000; Zell sécher), p21 Waf1 /Cip1 (1: 1000; Zell sécher), p27 Kip1 (1: 500; Epitomics), cyclin D1 (1: 1000; Zell sécher) an déi Pabeiren (1: 1000; Zell sécher). An anere Wierder, huet Secondaire antibodies kräftegen zu horseradish peroxidise (HRP) mat Las-4000 Imaging System (Fujifilm, Japan) mat engem chemiluminescence visualized. Der relativer Inhaltsverzeechnes vu Proteinen sech mat Image J. Software laachen an normalized zu β-actin. (1: 2500, Multisciences Biotech) VerfÜgung cDNA microarray Analyse VerfÜgung Total RNS aus MKN28 Zellen isoléiert war déi stably mat pCDNA3.1 transfected -ZIC1 oder pCDNA3.1 eidel Vecteure, a war Géigendeel zu cDNA annescht. Fortgeschratten Echantillon waren hybridized mat Agilent ganze Mënsch Nepgen méi wéi 41.000 Ämter wouvun (http:.....? //Www ncbi nlm nih Gov /Geo /fonktionnéiert /zu Enn CGI zu Enn = GSE38924). D'microarray Daten benotzt Agilent Spillfilmer Extraktioun Software analyséiert. Mir ausgewielt eng fantastesch änneren ≥1.5 oder ≤ -1,5 als groussen Ënnerscheed. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Student d't VerfÜgung Test war standing zwee-onofhängeg Donnéeën ze vergläichen, während Chi-Feld oder Fisher genau Test ze benotzt gouf analyséieren Diskussioun Variabelen. A präventive vum p &Si besteet; 0,05 war fir statistesch Bedeitung applizéiert. VerfÜgung Notes VerfÜgung Jing Zhong, Shujie Chen matgehollef gläich un dëser Aarbecht. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Wat VerfÜgung De Projet vum National Natural Science Foundation of China (30900676 ënnerstëtzt gouf, 81071961), National Grondakommes Research plangen vu China (973 plangen) (2012CB945004) a Wëssenschaft an Technologie Key Projet vun Zhejiang Province an China (2009 C03012-3). D'Auteuren sinn dankbar fir Prof. Tianhua Zhou an Prof. Lei Yinan fir hëllefsbereet Suggestiounen an Diskussioun; . An Thomas R. Austin fir kritiséiert a Redaktioun vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung Electronic zousätzlecht Material VerfÜgung 12885_2011_3201_MOESM1_ESM.tiff Weider Fichier 1: Dorënner S1. GAPDH war wéi eng intern Kontroll benotzt.
  • Mo. Artikel
    •   
  • Gastric Struktur
    •   
  • Betreiung vun de Mo.
    •   
  • Fuerschunge

    • Fuerschunge

    Fuerschunge

    Other Languages

    Mo. Gesondheet © https://www.stomachillness.com/lb