Ageschalt mammalian Zilscheif vun rapamycin e Potential therapeutesch Zilscheif vun gastric cancer

ass ageschalt mammalian Zilscheif vun rapamycin e Potential therapeutesch Zilscheif vun gastric Kriibs VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background ass VerfÜgung D'mammalian Zilscheif vun rapamycin (mTOR) spillt eng wichteg Roll am bewosst Wuesstem an homeostasis. Den Zweck vun eisem presentéieren Etude ass den Ausdrock vun der Aktivatioun mTOR (p-mTOR) zu gastric Kriibs Patienten, hir prognostic Bedeitung an d'inhibition Effet vun RAD001 op entholl Wuesstem ze ermëttelen an ze bestëmmen, ob geziilte inhibition vun mTOR therapeutesch Trainer e Potential kéint fir gastric Kriibs. VerfÜgung Method VerfÜgung Den Ausdrock vun p-mTOR war an uplanzen vun 181 gastric Cancers fonnt deen duerch immunohistochemistry radikal resection (R0) mécht. D'Korrelatioun vun p-mTOR Ausdrock ze clinicopathologic Fonctiounen an Iwwerliewe vun gastric Kriibs studéiert. Mir sech och d'inhibition Effet vun RAD001 op entholl Wuesstem BGC823 an AGS Mënsch Linnen gastric Kriibs Zell benotzt. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Immunostaining fir p-mTOR an 93 vun 181 (51.4%) gastric Cancers positiv war, enk mat lymph soll Node Status an pTNM Etapp. Patienten mat p-mTOR positive zougedréckt a vill méi kuerz Krankheet-gratis Iwwerliewe (DFS) a Punkto Iwwerliewe (OS) Tariffer wéi déi mat p-mTOR-negativ erhéijen an univariable analyséiert, an et war e Trend bei engem Korrelatioun tëscht p-mTOR Ausdrock an Iwwerliewe vun multivariable analyséiert. RAD001 Ofstand inhibited Portioun-dependently Prolifératioun vu mënschlechen gastric carcinoma Zellen vun verwandelt-Regulatioun Ausdrock vun p70s6k, p-p70s6k, C-myc, CyclinD1 an BCL-2, erop-Regulatioun Ausdrock vu P53. VerfÜgung Konklusiounen VerfÜgung An gastric Kriibs, p-mTOR ass eng potentiell therapeutesch Zil- a war RAD001 eng villverspriechend Behandlung Agent mat Zell Zyklus verhaft an apoptosis vun verwandelt-Regulatioun Pinguin Ausdrock vun C-myc, CyclinD1 an BCL-2, erop-Regulatioun Ausdrock vu P53. VerfÜgung Background VerfÜgung Gastric carcinoma ass de véiert stäerkste gemeinsam Kriibs an der zweeter Virwaat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit, dorënner 1 Milliounen nei Fäll pro Joer uechter d'Welt [1]. Iwwer 60% vun neie Fäll vu Kriibs gastric geschéien am Nordoste Asien [2], virun allem an China. Chirurgesch resection ass déi effektiv Behandlung fir gastric Kriibs an d'Efficacitéit vun Chimiotherapie bleift limitéiert [3]. Vill Studien hu kloer dass d'Déift vun Truppen an d'Zuel vun metastatic lymph Wirbelen déi wichtegst mächteg dacks Iwwerliewe fir gastric Kriibs Patienten sinn [4, 5]. Zum Beispill, an virdrun Studien [6, 7], hunn mir positiv lymph Node Verhältnis fonnt ass eng onofhängeg prognostic Luucht der D2 resection an intraperitoneal Chimiotherapie kënnen ze gastric Kriibs Patienten positiv sinn. Allerdéngs, läit eng fundamental Schrëtt a Richtung Medeziner Resultat verbesseren an d'fräi Versteesdemech vun der entholl biologescher gelooss, wat de méiglech Ziler fir eenzel Therapie [8, 9]. VerfÜgung An de leschte Joren zu identifizéiere kann hëllefen, molecularly baséiert Approche fir Behandlung an gastric Kriibs ass grouss Beonrouegung entscheet. Puer Artikelen hunn e puer potentiell molekulare Ziler fir Therapie zu gastric Kriibs, wéi epidermal Wuesstem Faktor receptor (EGFR) [10-13], wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF) beschriwwen [14], recepteur d'origine nantais (RON) [15 ]. D'mammalian Zilscheif vun rapamycin (mTOR) ass eng nei potentiell molekulare Zil fir anticancer Therapie VerfÜgung. Seng Ausdrock gouf zu verschiddenen Zell Linnen an entholl uplanzen, wéi Liewer neoplasms [16], Broscht Kriibs [17], biliary TRACT adenocarcinoma [18], an cervical Kriibs [19, 20] bewisen. Des Studie weisen dass mTOR Ausdrock mat aarmséileg Medeziner hätt verbonne war. Lang et al [21]. mTOR Aktivéierung am mënschleche kënschtlech hunn observéiert och zu gastric Kriibs an am VIVO. Si uginn mTOR dacks zu Mënsch gastric Kriibs ageschalt ass. Kuerzem, eng mëndlech bioavailable ADR vun rapamycin, RAD001 (everolimus; Novartis Pharma AG), entwéckelt gouf. A Phas III Prozess réischt Behandlung mat everolimus prolongs Werdegang-gratis Iwwerliewe vun Patienten mat metastatic keen Auto Zell carcinoma dass op aner cibléiert Therapien [22] entwéckelt haten. RAD001 gouf och d'Verbreedung vun entholl Zell Wuesstem zu puer carcinomas zu inhibit dës [23, 24]. Mä d'Roll vun RAD001 zu Zell gastric Cancers ass net kloer. VerfÜgung D'Ziel vun dëser Etude sech ze weider analyséieren d'Relatiounen der mTOR Ausdrock mat der Iwwregens hätt Wäert vun ageschalt mTOR (p-mTOR), den Effet vun RAD001 op de Wuesstem an Zell Zyklus vum Mënsch gastric Kriibs Zellen kënschtlech an festzestellen, ob gastric Kriibs e gudde Kandidat fir Zil- Therapie mat mTOR inhibitors ass. VerfÜgung Method VerfÜgung kennen studéiert VerfÜgung Dëst Retrospektiv Etude vun 181 Patienten bestoung déi radikal resection mécht ( R0) fir histologically bestätegt gastric carcinoma aus Cancer Center vun Sun Yat-sen University tëscht Januar 1997 an Dezember 2002 All Patienten mat histologically bestätegt adenocarcinoma vun de Mo. entweder proximal partiell gastrectomy, distal partiell gastrectomy oder total gastrectomy weiderentwéckelt huet. Ethesch averstaane war vum Sun Yat-sen University Cancer Center Fuerschung Ethik Comité kritt. VerfÜgung Déi mat adequate histological Material a komplett Medeziner Date goufen fir Inclusioun beliwwert. Der Zoulag Kritären agebaut och histologically R0 resection confirméiert, wat als keng macroscopic an microscopic Reschtoffall entholl an Thes Iwwerliewe Zäit ≥ 6 Méint definéiert war. Patienten mat fernen Investitiounen an carcinoma vun gastric auszeschléissen der resection fir benign Krankheet sech aus der Etude ausgeschloss. De Grond ass, datt d'Iwwerliewe vun de Patiente mat fernen Investitiounen oft vun villen anere Facteuren, wéi preoperative Chimiotherapie oder dogéint betraff ass VerfÜgung All Patienten hu Suivi an der Chirurgie bei 6 bis 12 Méint resp. der Finale Datum vum Suivi war Dezember 2008. Paracetamol Suivi Period war 50 (heeschen: 50.66; Gamme 10 bis 128) Méint fir all seng Patienten, an 74 Méint (heeschen: 72.80; Gamme 27 bis 128) fir Iwwerliewensfro. Paracetamol Dauer vun Suivi war 40 (heeschen: 43,71; Gamme 11 bis 125) fir Patienten déi erhéijen vum p-mTOR positiven Ausdrock haten, a 60,5 Méint (heeschen: 58,01; Gamme 10 bis 128) fir negativ Ausdrock. Survival war aus dem Datum vun Diagnos bis den Datum vum Doud oder leschten Suivi berechent. VerfÜgung Specimen Kollektioun an Immunostaining fir p-mTOR VerfÜgung All entholl uplanzen sech aus surgically resected gastric Cancers virun adjuvant Therapie krut. Formalin-fix, paraffin-Ënnerbewosstsinn Otemschwieregkeeten Bleck sech op Raumtemperatur duerch eng Identifikatioun Zuel identifizéiert gespäichert. Fënnef-μm-décke Otemschwieregkeeten Rubriken sech aus der paraffin Bleck Géigewier, deparaffinized zu xylene, an rehydrated. Antigenic retrieval war mat Natrium citrate Filteren. D'drënner waren duerno fir 60 min an 0.3% H 2O 2 fir 10 min, an ass blockéiert an 1% Bovine serum albumin incubated gefollegt vun engem Kanéngchen monoclonal antibody spezifesch fir p-mTOR (Phospho-mTOR, Ser2448, 49F9; Zell sécher Technology) bei 4 ° C iwwernuecht, an dann mat 3,3-diaminobenzidine Kierchefënster. No visualization vun immunoreactivity, huet de Rubriken mat hematoxylin counterstained an dann Descher. VerfÜgung Evaluatioun vun Immunohistochemical Staining VerfÜgung D'immunostained Rubriken sech bewäert an Stoffer aus mënschlech Aarbecht adenocarcinomas als positive Kontroll. Laut kuerzem beschriwwen Critèrë fir Rating mTOR Ausdrock, war den 0 alles staining Intensitéit (feelen), 1 (schwaach), an 2 (staark) an Ausdrock Niveau vun der biomarkers mat engem immunohistochemistry stoung (Rei, 0-200) waren semiquantified berechent vun staining Intensitéit mat de Prozentsaz vun positive entholl Zellen multiplizéieren [18]. Patienten mat engem immunohistochemistry Virsprong vun ≤ 20 goufen als p-mTOR-negativ an déi mat engem Virsprong vun > 20 als p-mTOR-positiv. All drënner sech onofhängeg vun zwee onofhängegen pathologists ouni Wëssen vun den Patienten Medeziner Informatiounen évaluéieren. Wann d'Meenungen vun den zwou evaluators verschidde waren, war Accord vun virsiichteg Diskussioun erreecht VerfÜgung Zell Linnen a Kultur Konditiounen VerfÜgung Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen BGC823 an AGS (ATCC Number: loosen-1739). Déi Kadoen sech kaum ënnerscheet ginn aus Korea University School of Zukunft (Peking, PR China.) [25]. D'Zell Strecken an RPMI 1640 mëttelfristeg (Invitrogen) ergänzt mat 10% An et Bovine serum (Hyclone), penicillin (100 Unitéiten /ml) an streptomycin (100 Unitéiten /ml) bei 37 ° C a 5% CO2 an engem humidified incubator haten . VerfÜgung Zell Nuetsvolen assay VerfÜgung den Effet vun RAD001 op mënschlech gastric Kriibs Zellen, Zell Nuetsvolen war vun MTT assay alles ze analyséieren. RAD001 war vun Novartis Pharma (Basel, Schwäiz) gëtt. Fir d'Nuetsvolen assay, goufen logarithmically wuessen Zellen mat verschidde Schrëtt vun RAD001 stimuléiert (0, 5, 10, 20 a 40 μM). Um Enn vum Kulturjoer Period, 20 μL vun tetrazolium Hoerfaarw 3- (4,5-dimethylthiazole-2-yl) -2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) (Fläch, USA) Léisung bei 0,2 mg /ml vun PBS ugebaut , déi optesch Dicht op 490 nm (OD490) huet andems en Aktivitéit-Hausnummeren immunosorbent assay (Elisa) Lieser sech. Mengen Wäerter sech aus triplicate Kulturen berechent. VerfÜgung Zell Zyklus Analyse VerfÜgung BTS sech zu 70% Ethanol Nuecht op 4 ° C gesammelt an fix. Zellen sech dann mat propidium Kaliumiodid (PI) (Fläch) 5 μg /ML gewäsch a Kierchefënster. No 30 min bei Raumtemperatur aus Liicht geschützt, goufen d'Zellen via Flux cytometry mat engem Becton Dickinson FACScan. VerfÜgung Annexin V assay VerfÜgung D'Echantillon waren mat phosphate-gefiermt Salins (PBS) a mat Annexin V-fluorescein Katakombe analyséiert isothiocyanate (FITC) an PI staining fir Determinatioun vun phosphatidylserine aussetzt op de baussenzege Plasma Membran. No incubation fir 30 min bei Raumtemperatur aus Liicht geschützt, huet den Echantillon vun Flux cytometry laachen, engem Becton Dickinson FACScan benotzt. VerfÜgung Transkriptiouns-Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS andems TRIzol Method ofgebaut gouf Réckproduktioun. RNS war reversely transcripted eng kommerziell sinn fräihänneg mat (Fermentas, USA). D'Mëschung (25 μL total) fir Hinnen alleguer bestoung vun 0,5 μl cDNA, 0,5 U Taq DNA polymerase, 2,5 μl vun 10 × Hinnen alleguer Prellbock, 2,5 mm dNTP Mëschung, an 50 Auer Sënn an antisense primers all. CyclinD1 5'GAACAGAAGTGCGAGGAGGAG3 "an primer 5'AGGCGGTAGTAGGACAGGAAG3 ëmgedréint";: CyclinD1 an C-myc sech duerch folgend primers analyséiert C-myc, 5 'CGAGCTGCTGGGAGGAGACAT3 "a 5' AGCCGCCCACTTTTGACA GG3 'Actin:. 5'GGCACCCAGCACAATGAA 3" a 5' TAGAAGCATTTGCGGTGG 3 'VerfÜgung Zell lysate a Western blot Analyse VerfÜgung BTS sech zu lysis gefiermt lysed an der Konzentratioun vun FAQ war vun der Bradford Hoerfaarw Method (Bio-Rad Laboratoiren) alles. Gläich Montanten vun Zell Extrait sech ze SDS-PAGE ënnerworf a transferéiert ze PVDF Membran (Bio-Rad). Western blot Analysë sech mat verschidde spezifesch Primärschoul antibodies gemaach. Antibodies ginn phospho-p70S6K (Thr389), p70S6K, phospho-mTOR (Ser2448), BCL-2 an p53 sech aus Zell sécher. VerfÜgung statistique VerfÜgung D'Primärschoul Enn Punkt vun eiser Etude analyséiert war allgemeng Iwwerliewe (OS). Et war wéi den Zäitraum tëscht der Zäit vun Agrëff an Doud definéiert. Krankheet-gratis Iwwerliewe (DFS) war d'Zäit tëschent der Zäit vun Agrëff an Réckwee oder entholl-Zesummenhang Doud. Et war esou eng Première Enn Punkt analyséiert. D'Associatioun vun p-mTOR Ausdrock mat verschiddenen clinicalopathologic Fonctiounen war mat der Chi-Feld Test analyséiert. Entwéckele Iwwerliewe a Krankheet-gratis Iwwerliewe sech duerch d'Kaplan-Meier Method geschat. D'Logbuch-Platz Test war benotzt statistesch Bedeitung vun Differenzen tëscht Iwwerliewe Kéieren ze diskutéieren. A Cox proportional iwwerschloen Modell (hannen, stepwise) fir multivariable Analyse war fir Facteuren applizéiert dass Bedeitung vun univariable Analyse erreecht. Statistesch Analyse huet mat SPSS Software (Versioun 13 fir Windows; SPSS, Chicago, IL) gesuergt. Differenzen um P &Si besteet; .05 Sech als statistesch relevant ze ginn. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Clinicopathologic Fonctiounen VerfÜgung A Ganzen 181 Patienten an dëser Etude Coursë waren. D'Steiren Alter war 59 Joer (Rei, 23-83 Joer). D'clinicopathologic Charakteristiken vun der Etude Populatioun zu Table 1. 129 Patienten zesummegefaasst huet männlech a 52 weiblech. 77 vun 181 erhéijen (42.5) huet aus der ieweschter Mo, 74 vun 181 Patienten (40.9%) aus dem ënneschten Deel vun der Mo huet, an de Rescht erhéijen aus der Mëtt a ganze Kierper vun de Mo huet. 118 vun 181 (65.2%) Patienten entholl Gréisst waren > 4 cm, an 63 (34.8%) waren ≤ 4 cm. An Aklang mat Critèren Weltgesondheetsorganisatioun, 4 vun 181 erhéijen (2,2%) waren gutt ënnerscheet, 55 vun 181 erhéijen (30.4%) waren ënnerscheet mëttelméisseg, 116 Pro ënnerscheet goufen, a 6 goufen Strenz. Post-grënnen chirurgesch Etapp war no der 2002 UICC séiert /AJCC Klassifikatioun [26] .Table 1 Clinicopathologic Korrelatioun vun p-mTOR Ausdrock vun gastric Kriibs VerfÜgung fir op
All Patienten
Nr vun Patienten (%)
P
zu N VerfÜgung = 181 (%)
mTOR negativ
mTOR positive
zu Alter (y) VerfÜgung .256 VerfÜgung &Si besteet; 60 zu 95 (52.5) ​​zu 50 (56.8) zu 45 (48,4) VerfÜgung ≥60 VerfÜgung 86 (47.5) zu 38 (43.2) zu 48 (51.6)
Sex VerfÜgung .926 VerfÜgung Männlech VerfÜgung 129 (71,3) 63 (71,6)
66 (71.0) VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 52 (28,7) 25 VerfÜgung (28.4) VerfÜgung 27 (29.0) VerfÜgung Site VerfÜgung .053 VerfÜgung Uewerstad VerfÜgung 77 (42.5) zu 33 (37.5) zu 44 (47.3) zu Middle VerfÜgung 28 ( 15.5) VerfÜgung 10 (11,4) 18 VerfÜgung (19,4) VerfÜgung ënneschten VerfÜgung 74 (40.9) zu 43 (48,9) 31 VerfÜgung (33.3) zu 2 VerfÜgung Firwat ( 1.1) VerfÜgung 2 (2,3) VerfÜgung 0 (0.0) VerfÜgung entholl Gréisst VerfÜgung .172 VerfÜgung ≤ 4 cm VerfÜgung 63 (34.8) zu 35 (40.0) VerfÜgung 28. (30,1) VerfÜgung > 4 cm VerfÜgung 118 (65.2) zu 53 (60.0) zu 65 (69.9) VerfÜgung Borrmann Typ VerfÜgung .398 VerfÜgung Early Etapp VerfÜgung 7 (3,9) VerfÜgung 6 ( 6,8) VerfÜgung 1 (1,1) VerfÜgung ech VerfÜgung 4 (2,2) VerfÜgung 2 (2,3) VerfÜgung 2 (2.1) VerfÜgung II VerfÜgung 65 (35.9) zu 31 ( 35,2) VerfÜgung 34 (36.6) VerfÜgung III VerfÜgung 101 (55.8) zu 47 (53.4) zu 54 (58.1) VerfÜgung IV VerfÜgung 4 (2,2) VerfÜgung 2 ( 2,3) VerfÜgung 2 (2.1) VerfÜgung senger Analyse VerfÜgung .999 VerfÜgung 1 VerfÜgung 4 (2,2) VerfÜgung 2 (2,3) VerfÜgung 2 (2.1) VerfÜgung 2 VerfÜgung 55 (30,4) VerfÜgung 27 (30,7) VerfÜgung 28 (30,1) VerfÜgung 3 VerfÜgung 116 (64,1) VerfÜgung 56 (63,6) VerfÜgung 60 (64,5) VerfÜgung 4 VerfÜgung 6 (3,3) VerfÜgung 3 (3,4) VerfÜgung 3 (3,3) VerfÜgung Pathologic T Klassifikatioun VerfÜgung .168 VerfÜgung T1 VerfÜgung 17 (9.4) VerfÜgung 12 (13.6) VerfÜgung 5 (5.4) VerfÜgung T2 VerfÜgung 35 (19.3) zu 18 (20.5) zu 17 (18,3) VerfÜgung T3 VerfÜgung 119 (65.7) zu 55 (62.5) VerfÜgung 64 (68.8) VerfÜgung T4 VerfÜgung 10 (5.5) VerfÜgung 3 (3,4) VerfÜgung 7 (7.5) VerfÜgung Pathologic N Status VerfÜgung .008 VerfÜgung N negativ VerfÜgung 44 ( 24.3) VerfÜgung 29 (33.0) zu 15 (16.1) VerfÜgung N positive VerfÜgung 137 (75.7) zu 59 (67.0) zu 78 (83,9) VerfÜgung Pathologic Etapp (pTNM) VerfÜgung .026 VerfÜgung ech VerfÜgung 26 (14.4) zu 17 (19.3) VerfÜgung 9 (9.7) VerfÜgung II VerfÜgung 47 (26.0) zu 28 (31.8)
19 (20,4 mag) VerfÜgung III VerfÜgung 100 (55.2) zu 41 (46.5) zu 59 (63.4) VerfÜgung IV VerfÜgung 8 (4,4) VerfÜgung 2 (2,3)
6 (6.5) VerfÜgung 129 vun 181 Patienten (71.2%) méi fortgeschratt T Etapp Krankheet (PT3 + PT4) hat, an 137 Patienten (75.7%) lymph Node Metastasen haten. Guer Patienten vun Bühn ech-IV goufen 26, 47, 100 an 8 Fäll, bzw.. VerfÜgung p-mTOR Ausdrock vun gastric Kriibs VerfÜgung Immunostaining vum p-mTOR war cytoplasmatic an deelweis membranous. Figur 1 weist Vertrieder Beispiller vun p-mTOR immunostaining. Déi normal gastric mucosa ass negativ fir p-mTOR. Vun der 181 Patienten, 93 (51.4%) waren p-mTOR-positiv erhéijen. Figur 1 Beispiller vun p-mTOR immunostaining. (A) Déi normal gastric mucosa ass negativ fir p-mTOR (Original Vergréisserung × 200). (B) Déi normal gastric mucosa ass negativ fir p-mTOR (Original Vergréisserung × 400) (C) Positiv Ausdrock vun p-mTOR zu gastric Kriibs (Original Vergréisserung × 200). (D) Negativ Ausdrock vun p-mTOR zu gastric Kriibs (Original Vergréisserung × 200). VerfÜgung traureg Analyse VerfÜgung kennen mat p-mTOR positive gastric Kriibs zougedréckt a vill méi kuerz Krankheet-gratis a Punkto Iwwerliewe Tariffer wéi déi mat p- mTOR negativ gastric Kriibs (DFS, 48,9% mat 30,1%; p = .006; OS, 51,1% mat 34,4%; p = .011; Table 2; Dorënner 2A, B). Univariable Analyse Teamchef Iwwerliewe Zäit och mat héichen PT Klassifikatioun (DFS, p = .001; OS, P = .005) ofgeholl, lymph Node Metastasen (DFS, p &Si besteet; .0001; OS, P = .001) an fortgeschratt pTNM Etapp (DFS, p &Si besteet; .001; OS, P = .001). Et gouf kee Veräin tëscht DFS oder OS a Alter, Geschlecht oder entholl size.Table 2 Univariable Analyse vun Krankheet-gratis a Punkto Iwwerliewe vun gastric Kriibs VerfÜgung zu zu Genau-gratis suivival
Allgemengen survival

Characteristic

No.

HR

95%CI

p

HR

95%CI

p

Age(y)
.343 VerfÜgung .583 VerfÜgung &Si besteet; 60 zu 95 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung ≥60 VerfÜgung 86 VerfÜgung 0,834 VerfÜgung 0.573-1.214 VerfÜgung 0,898 VerfÜgung 0.611-1.320 VerfÜgung Sex VerfÜgung. 662 VerfÜgung .950 VerfÜgung Männlech VerfÜgung 129 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 52 VerfÜgung 0,909 VerfÜgung 0.591-1.396 VerfÜgung 0,986 VerfÜgung 0.639-1.521 VerfÜgung entholl Gréisst VerfÜgung .151 VerfÜgung .232 VerfÜgung ≤4 cm VerfÜgung 63 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung > 4 cm VerfÜgung 118 VerfÜgung 1,345 VerfÜgung 0.897-2.016 VerfÜgung 1,287 VerfÜgung 0.851-1.945 VerfÜgung PT Etapp VerfÜgung .001 VerfÜgung .005 VerfÜgung pT1 VerfÜgung 17
1.00 bis 1.00 VerfÜgung pT2
35
1.549
0.558-4.301
.401
1.535
0.553-4.264
.411
pT3
119
3.546
1.437-8.750
.006
3.237
1.310-8.001
.011
pT4
10
4.738
1.547-14.506
.006
4.068
1.289-12.836
.017
pN Etapp VerfÜgung &Si besteet; .0001 VerfÜgung .001 VerfÜgung Negativ VerfÜgung 44 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung Positiv VerfÜgung 137 VerfÜgung 2,617 VerfÜgung 1.538-4.451 VerfÜgung 2,389 VerfÜgung 1.401- 4,075 VerfÜgung pTNM Etapp VerfÜgung &Si besteet; .0001 VerfÜgung .001 VerfÜgung ech VerfÜgung 26 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung II
47
2.920
1.197-7.121
.018
2.860
1.173-6.973
.021
III
100
4.955
2.152-11.409
< .0001 VerfÜgung 4,455 VerfÜgung 1.930-10.281 VerfÜgung &Si besteet; .0001 VerfÜgung IV VerfÜgung 8 VerfÜgung 7,369 VerfÜgung 2.470-21.981 VerfÜgung &Si besteet; VerfÜgung .0001 6,103 VerfÜgung 1.965-18.957 VerfÜgung .002 VerfÜgung p-mTOR VerfÜgung .008 VerfÜgung .013 VerfÜgung Negativ VerfÜgung 88 VerfÜgung 1.00 bis 1.00
positiv VerfÜgung 93 VerfÜgung 1,667 VerfÜgung 1.146-2.454 VerfÜgung 1,644 VerfÜgung 1.112-2.430 VerfÜgung Dorënner 2 Kaplan-Meier Schätzunge vun der Wahrscheinlechkeet vum Survival. Patienten mat p-mTOR positive zougedréckt a vill méi global Iwwerliewe (A) an Krankheet-gratis Iwwerliewe (B) Tariffer wéi déi mat p-mTOR negativ Ausdrock. (P = .011 an p = .006, bzw.) VerfÜgung An multivariable Analyse, lymph Node Metastasen (DFS, p = .018; OS, P = .038). An PT Etapp (DFS, p = .018; OS, P = .046) huet däitlech onofhängeg prognostic Faktor fir Iwwerliewe Zäit. Zousätzlech, uginn multivariable Analyse (Table 3) och en Trend bei engem Korrelatioun tëscht p-mTOR Ausdrock an Iwwerliewe ofgeholl, mä den Trend erreechen rauszesichen statistesch Bedeitung (DFS, p = .059; OS, P = .070) .Table 3 Multivariable Cox Réckgang Analyse vun Krankheet-gratis a Punkto survivals VerfÜgung zu
Genau-gratis suivival
Allgemengen survival

Factors

No.

HR

95%CI

p

HR

95%CI

p

p-mTOR
0,059 VerfÜgung 0,070 VerfÜgung Negativ VerfÜgung 88 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung Positiv VerfÜgung 93 VerfÜgung 1,452 VerfÜgung 0.986-2.138 VerfÜgung 1,443 VerfÜgung 0.970-2.147
Infiltrating Déift VerfÜgung 0,018 VerfÜgung 0,046 VerfÜgung pT1 VerfÜgung 17 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung pT2
35
1.050
0.366-3.016
0.928
1.078
0.375-3.101
0.889
pT3
119
2.251
0.867-5.845
0.096
2.146
0.823-5.595
0.118
pT4
10
2.926
0.920-9.305
0.069
2.616
2.616-8.580
0.113
Lymph Node Status VerfÜgung 0,018 VerfÜgung 0,038 VerfÜgung Negativ VerfÜgung 44 VerfÜgung 1.00 bis 1.00 VerfÜgung Positiv VerfÜgung 137 VerfÜgung 1,981 VerfÜgung 1.981-3.488 VerfÜgung 1,828
1.034-3.233 VerfÜgung RAD001 Prolifératioun an evitéiert p70S6K phosphorylation VerfÜgung bremst d'Auswierkunge vun RAD001 op d'Prolifératioun vu mënschlechen gastric Kriibs Zell Linnen BGC823 an AGS ze ermëttelen, standing mir Prolifératioun assays mat 48-Stonne aussetzt RAD001. Als Resultat, generéiert RAD001 bedeitendst inhibition op béide Zell Linnen an enger Portioun-ofhängeg täteg. (Well 3A). Figur 3 (A) RAD001 bremst Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen. Gastric Kriibs Zellen sech fir 48 h mat der uginn Konzentratioune vun RAD001 an der Presenz vun 10% FBS behandelt. Zell Nuetsvolen war vun MTT assay évaluéieren. (B) Phosphorylation vun p70s6K war ofgeholl wiesentlech zu enger Portioun-ofhängeg Fassong souwuel AGS an BGC823 Zellen vun der Behandlung mat RAD001. Béid Zell goufe mat Portioun RAD001 fir 48 Stonnen waarden incubated, Zell lysates bis westlech blot Analyse mat phosphorylated p-S6K an S6K antibodies ënnerworf waren. Western blot Experimenter VerfÜgung sech op 0 mat RAD001 gesuergt, 5, 10, 20 μM fir 48 h. P70s6 kinase ass eng wichteg afgerappt Zilscheif vun mTOR a seng mTOR-ofhängeg phosphorylation Iwwersetzung vun ribosomal Proteinen erlaabt. Mir iwwerpréift der phosphorylation Status vun afgerappt Zil- p70s6K vun immunoblotting. Als zu Dorënner 3B gewisen, hunn mir déi Behandlung vu béiden Zell Linnen BGC823 an AGS mat RAD001 vill phosphorylation vun p70s6K verhënneren an enger Portioun-ofhängeg täteg. VerfÜgung RAD001 G0 /G1 Zell Zyklus verhaft an apoptosis zu gastric Kriibs Zellen induces
fir erauszefannen, ob d'Ennerdréckung vun Zell Prolifératioun ze G0 /G1-Phase verhaften oder apoptosis, Zell-Zyklus Verdeelung analyséieren vun FCM wéinst goufen. Figur 4 zougedréckt datt Behandlung vun BGC823 Zellen mat RAD001 fir 48 Stonnen an engem sécherlech G1 verhaft duerchgesat a gefördert apoptosis. Mat der Erhéijung Portioun RAD001, méi a méi blouf Zellen an G1-Phase, iwwerdeems Zell Zyklus Werdegang an S Phase war falender (Dorënner 4A). RT-Hinnen alleguer Analyse réischt RAD001 Portioun-dependently der mRNA Niveau vun Cyclin D1 an C-myc (Dorënner 4B) ofgeholl. Figur 4 RAD001 induces Zell Zyklus verhaft an apoptosis zu BGC823 Zellen. (A) BGC823 Zellen sech fir 48 h zu verschiddenen Konzentratioune vun RAD001 ausgesat. (B) RNS sech aus Zellen ofgebaut. Cyclin D1 an C-myc Ausdrock Niveau sech vun RT-Hinnen alleguer, actin als Luede Kontroll fonnt. (C) Zellen sech fir 48 Stonnen mat uginn Dosis vun RAD001 incubated ier mat annexin V-FITC staining. D'Prozentzuelen vun apoptotic Zelle ugewisen. (D) BTS sech fir 48 Stonnen mat uginn Dosis vun RAD001 incubated. Zellen sech gesammelt, lysed an zu Western blot Analyse mat BCL-2 an p53 antibodies ënnerworf. GAPDH war als Luede Kontroll benotzt. VerfÜgung Annexin-V assays zougedréckt datt RAD001 vill apoptosis zu BGC823 Zellen entschlof. Eng Erhéijung vun apoptosis Taux war vun FCM mat der Erhéijung vun der Dosis (Dorënner 4C) analyséieren. Western blot Analyse zougedréckt RAD001 Portioun-dependently d'FAQ Niveau vun BCL-2 falender a waarden d'FAQ Niveau vun p53 (Dorënner 4D). Ähnlech Resultater goufen am AGS Zellen (Donnéeën net gewisen) observéiert. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung D'mammalian Zilscheif vun rapamycin (mTOR) war an ënnersicht de Mechanismus vun Aktioun vun rapamycin am Ufank 1990 vum entdeckt, déi ursprénglech als fonnt huet Agent antifungal a gouf spéider als anticancer Eegeschafte unerkannt [27]. Als Ser /dëss FAQ kinase, spillt mTOR eng Schlësselroll an bewosst Wuesstem an homeostasis [28]. D'mTOR FAQ Formen engem Komplex mat adapter Proteinen, mTORC1 (mammalian Zilscheif vun rapamycin komplex 1) an mTORC2. Aktivatioun vun mTORC1 reguléieren Zell Wuesstem vun modulating FAQ Synthes, Ribosom biogenesis an autophagy [29]. D'mTORC2 Passerelle spillt eng wichteg Deel vun activating Akt, wéi PDK1 (3-phosphoinositide-ofhängeg FAQ kinase 1) an PI3K, e Potential Drogenofhängeger Zil fir Cancers zu deem Akt Dereguléierung et ass [26]. An der aktueller Etude VerfÜgung, mir observéiert datt 93 (51.4%) Patienten positiven Ausdrock vun p-mTOR zu 181 gastric Kriibs Patienten haten. Konsequent mat eis Resultat, an anere Studium inklusiv 1072 Patienten, ass den Ausdrock vun p-mTOR 46,5% [30]. VerfÜgung virdrun Studien der prognostic Bedeitung vum p-mTOR Ausdrock gemellt hunn. Herberger et al [18]. identifizéiert p-mTOR eng onofhängeg prognostic Faktor fir Doud vun Patienten mat biliary TRACT adenocarcinoma gin. An hirer Etude, war allgemeng Iwwerliewe vill méi kuerz bei Patienten mat p-mTOR-positiv erhéijen als Verglach mat Patienten mat p-mTOR-negativ erhéijen (P = .004). An gastric Kriibs, Yu et al. évaluéiert Ausdrock vun p-mTOR zu 1.072 Patienten gastric Kriibs engem Otemschwieregkeeten microarray Musiktherapie- overexpression vum p-mTOR benotzt gouf eng eegestänneg prognostic Faktor [30]. Allerdéngs, an enger Etude abegraff 109 Patienten mat gastric adenocarcinomas deen eng radikal gastrectomy mécht [31], Murayama et al. weder cytoplasmic p-mTOR nach nuklear p-mTOR war onofhängeg prognostic Faktor fonnt, obwuel se Ausdrock cytoplasmic p-mTOR identifizéiert war mat aarmen Iwwerliewe verbonnen a mat der Déift vun entholl Invasioun soll, lymph Wirbelen a entholl Etapp. Am Moment studéieren, confirméiert mir dat PT Klassifikatioun an lymph Node Zoustand sinn onofhängeg prognostic Luucht vu Krankheete Resultat vun gastric Kriibs Patienten vun multivariable analyséiert. Mä, well déi meescht Patienten präsent mat lokalen fortgeschratt Krankheet, anere Lycée prognostic lues, besonnesch p-mTOR, kënnt vun benotzt ginn [13]. Eis Resultater kloer weisen, datt p-mTOR Ausdrock staark mat aarmséileg allgemeng a Krankheet-gratis Iwwerliewe vun univariable Analysë mat engem Trend a Richtung Korrelatioun zu multivariable Analyse soll ass. VerfÜgung haalt mat eiser aktueller Etude, hunn e puer Studien unerkannt och de antiproliferative Auswierkunge vun mTOR inhibitors zu gastric Kriibs Zellen. Zum Beispill, Lang et al [21]. identifizéiert rapamycin gastric Kriibs Zell Wuesstem an engem souwuel subcutaneous entholl Modell inhibit kéint an en experimentéierte Modell. Hir Resultater der suitability vun mTOR inhibitors Highlight bis zu enger antiangiogenic Kontext fir Therapie vun gastric Kriibs benotzt ginn. VerfÜgung Allerdéngs ass RAD001 eng nei mTOR inhibitor als anticancer Agent. De Mechanismus iwwert RAD001 zu gastric Kriibs ass net kloer. Cejka et al. der antiangiogenic Aktivitéit vun RAD001 zougedréckt a mat engem héich Dosis cyclophosphamide kombinéiert géint gastric Kriibs synergistic antitumor Aktivitéit réischt [32]. Si hu fonnt och dass RAD001 Prolifératioun an attenuated Produktioun vun HIF-1α souwéi VEGF zu gastric Kriibs Zellen kënschtlech ofgeholl [33]. An der aktueller Etude, huet eis Daten datt RAD001-Therapie phosphorylation vun p70S6K attenuated an inhibited Ofstand d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zellen duerch Zell-Zyklus verhaft an apoptosis kënschtlech. Mir hunn d'G0 /G1 Phase verhaft RAD001 entschlof, déi mat ofgeholl cyclin verbonne war D1 an C-myc. Ausserdem, huet mir fir d'éischte Kéier, datt RAD001 als nei mTOR inhibitor Portioun-dependently entschlof apoptosis zu gastric Kriibs Zellen vun Annexin V assays. Dësen Effekt kënnt duerch d'bewosst Kontext an afgerappt Ziler dorënner P53 an BCL-2 diktéiert ginn. Dës Conclusiounen kéint weider d'Efficacitéit vun RAD001 erklären. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Am Resumé, mir gehaal systematesch Fuerschung zu mTOR zu gastric Kriibs, beweist d'Relatiounen der Ausdrock mat der Iwwregens hätt Wäert vun ageschalt mTOR (p-mTOR) zu VIVO, den Effet vun RAD001 an den Deel vun de Mechanismen an gastric Kriibs Zellen kënschtlech. Eis Conclusiounen uginn dass p-mTOR als potentiell biologescher Bewaacher déngen wier eng Ënnergrupp vu gastric Kriibs Patienten vun aarme hätt z'identifizéieren. Et huet awer och datt RAD001 eng villverspriechend Agent fir d'Behandlung vun gastric Kriibs mat Pinguin Zell Zyklus verhaft an apoptosis vun verwandelt-Regulatioun Ausdrock vun C-myc, CyclinD1 an BCL-2, erop-Regulatioun Ausdrock vu P53 war. Weider Studien sinn néideg der Roll vun der Aktivatioun vun mTOR, fir an dér mTOR wéi eng konkret Zil fir gastric Kriibs Therapie ze proposéieren VerfÜgung Note Support VerfÜgung Grant:. Ënnerstëtzung vun National High Technology Fuerschung an Entwécklung (863) plangen vun China VerfÜgung Notes VerfÜgung Da-Zhi Xu, Qi-Rong Geng matgehollef gläich un dëser Aarbecht. VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung dës Aarbecht vun der nationaler High Technology Fuerschung an Entwécklung (863) plangen ënnerstëtzt gouf vun China. D'Auteuren schätzen excellent technesch Assistenz vum Li-hui Wang, Fei-MENG Zheng, Zheng-Zhi Zou, Yan Zhang an Laozi-Jie Long. VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen de Linken zu de Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller. 12885_2009_2335_MOESM1_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12885_2009_2335_MOESM2_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 2 12885_2009_2335_MOESM3_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12885_2009_2335_MOESM4_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 4 Wettsträit Interessen VerfÜgung D'Auteuren erklären, datt si keng Competitioun Interessen hunn. VerfÜgung

• D'prognostic Effet vun Herkunft fir gastric an esophageal Kriibs: d'Bevëlkerung-baséiert Erfahrung am British Columbia, Kanada
• Identifikatioun vun prognostic Facteuren an chirurgesch Indikatiounen fir metastatic gastric Kriibs