Bactericidal Aktivitéiten vun der cationic Arméi CSA-13 an d'cathelicidin peptide LL-37 géint Helicobacter pylori zu surfen gastric juice

Bactericidal Aktivitéiten vun der cationic Arméi CSA-13 an d'cathelicidin peptide LL-37 géint Helicobacter pylori VerfÜgung zu surfen gastric Jus
wat VerfÜgung Background VerfÜgung de weltwäit Ausgesin vum Medellin-resistent analyséieren vun H. pylori VerfÜgung motivéiert enger Sich no neien Agenten mat therapeutesch Potential géint dës Famill vun Bakterien datt de Mo bewunnt, an ass mat adenocarcinoma Entwécklung assoziéiert . Dës Etude konzipéiert kënschtlech VerfÜgung der anti-H ze bewäerten. pylori VerfÜgung Potential vun cathelicidin LL-37 peptide, wat natierlech och präsent an gastric Jus ass, seng optimiséiert syntheteschen Analog WLBU2, an d'Net-peptide antibacterial Agent ceragenin CSA-13. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Am Accord mat virdrun Studien , fräi Meenungsäusserung vun hCAP-18 /LL-37 war am gastric mucosa kritt vum H. pylori VerfÜgung Krankheet Sujeten observéiert. MBC (minimum bactericidal Konzentratioun) Wäerter an Nährwert-haltege Medien Gamme vun 100-800 μg /ml fir LL-37 alles, 17.8-142 μg /ml fir WLBU2 an 0.275-8.9 μg /ml fir ceragenin CSA-13. Dës Donnéeë weg substantiell, mee dicht ënnerscheedlecher antibacterial Aktivitéite géint Krankheete isolates vun H. pylori VerfÜgung. No incubation zu surfen gastric Jus (Niddereg pH mat Präsenz vun pepsin) CSA-13, mee net LL-37 oder WLBU2, erëmgewielt antibacterial Aktivitéit. Am Verglach zu LL-37 an WLBU2 peptides, CSA-13 Aktivitéit war och méi resistent inhibition vun isoléiert Provider gastric mucins. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Dës Donnéeë weisen, datt cholic Seier-baséiert antimicrobial Agenten wéi CSA-13 proteolytic ofgeschnidden widderstoen an inhibition vun mucin an hunn Potential fir Behandlung vun H. pylori VerfÜgung Aids, dorënner déi ëmmer vun der clarithromycin an /oder metronidazole-resistent analyséieren. VerfÜgung Background VerfÜgung Helicobacter pylori VerfÜgung vun méi ewéi d'Halschent gedroen ass vun der erwuessener Populatioun d'Welt [1]. Et kann chronically de Mënsch gastric mucosa colonize, wou et an der mucus futti fonnt gëtt an ass bis epithelial Zellen Directioun respektéiert [2]. Obwuel déi Krankheet Sujeten asymptomatic bleiwen, Wonn mat H. pylori VerfÜgung schwéieren gastritis Promotioun ka [3] an däitlech de Risiko vun gastric malignancies Erhéijung [4, 5]. An e puer epidemiological Studie, war H. pylori VerfÜgung Kampf zu gastric Kriibs Préventioun ze gin effektiv dës [6, 7]. Zousätzlech war H. pylori VerfÜgung Kampf fonnt d'Heefegkeet an d'Gravitéit vun lesions mat carcinogenic Potential an Déier Modeller [8, 9] geloss. Natural Mechanismen datt de Provider vum H. pylori VerfÜgung Aids hänkt op der Funktioun vun de Leitmotiv Ofwier System an déi antibacterial peptides wéi cathelicidin LL-37 [10, 11] an O-glycans zu gastric mucin [12] Leeschtung engem schützen Schlësselroll. VerfÜgung LL-37 ass e proteolytically Filteren peptide vun der C-Uschloss Domän vum Mënsch cathelicidin ofgeleet (hCAP-18 /LL-37), déi constitutively vun phagocytic granulocytes an epithelial Zellen zu der extracellular Plaz verëffentlecht ass [13] . Virtrag zu LL-37 hinnen och Préventioun vun bakteriell Wuesstem [14], neutralization vun bakteriell Mauer Protein bioactivity [15], an Aktivéierung vun Provider Zellen duerch spezifesch Zell Membran kenne bindend [16-18]. H. pylori VerfÜgung upregulates der Produktioun vun LL-37 /hCAP18 vun der gastric epithelium suggeréiert datt cathelicidin oder seng ADR LL-37 dréit zu der Balance tëscht Provider mucosal Ofwier Bestëmmung an H. pylori VerfÜgung Iwwerliewe Mechanismen datt chronescher regéieren Krankheet mat dësem gastric pathogen [10, 11]. VerfÜgung Cationic antibacterial peptides (Mutzen) dorënner LL-37 gewiescht wéi eng potentiell Quell vun neie antibacterial Molekülle extensiv propagéieren. D'esou WLBU2 peptide hir Reschter si arrangéiert eng amphipathic helical Struktur mat optimal Vitesse an hydrophobic Dicht zu Form, overcomes puer Aschränkungen vun natierleche LL-37 wéi Sensibilitéit fir MG 2+ oder Ca 2+ an inactivation vum Blutt serum [19]. Dofir hätt WLBU2 Aids Plëséier wou LL-37 effikass ass. Fir Molekülle kënnen ze generéieren Mutzen 'Fäegkeet rescht bakteriell Membran Integritéit, Net-peptide ceragenins mat cationic, facially amphiphilic Strukturen Charakteristik vun stäerkste antimicrobial peptides fir Kompromëss sech entwéckelt. Ceragenins wéi CSA-13 britt déi néideg CAP Wirklechkeet eng Bile-Seier Steeen an do Amine Gruppen benotzt [20]. Si sinn bactericidal géint zwee Gramm-positiven an Gramm-negativ Organismen, dorënner och Medellin-resistent géint Bakterien wéi klinesch relevant methicillin-resistent Staphylococcus aureus VerfÜgung (MRSA), an enger viregter waat Etude bewisen, dass CSA-13 e Flicken /MBC 50 Verhältnis vun 1 [21, 22]. An dëser Etude vergläichen mir de bactericidal as vun LL-37, WLBU2 an CSA-13 géint Krankheete isolates vun H. pylori VerfÜgung. D'Resultater hindeit, datt cholic Seier-baséiert mimics vun antimicrobial peptide wéi CSA-13 Potential hun fir Behandlung vun H. pylori VerfÜgung Wonn, ëmmer déi och vun der clarithromycin an /oder metronidazole-resistent analyséieren. VerfÜgung Resultater
immunohistochemical vum Mënsch gastric mucosa Sektiounen mat anti-hCAP-18 Betong /LL-37 antibody VerfÜgung Microscopic Biller vun mucosal biopsies der immunohistochemical Evaluatioun mat anti-hCAP-18 /LL-37 antibody zu Dorënner gewise ginn 1. D'DAB- positiv staining beweist d'Präsenz vun der LL-37 peptide an /oder seng Elteren FAQ hCAP-18. Héich Intensitéit botzt staining (déi brong Faarf uginn) op der mucus-produzéiert epithelial Zellen an fundic Glands beweist héich Heefung vun hCAP-18 /LL-37 peptide Wahrscheinlechkeet Hausse vun LL-37 spezifesch dÉxistenz mucin, déi vun virdrun Studien gemellt huet [23, 24]. D'Verdeelung vun hCAP-18 /LL-37 an méi ënnerscheet epithelial Zell Bevëlkerung vun der gastric mucosa Ënnerscheed datt fir Mënscherechter β-defensin 2 [10] oder lysozyme fonnt [25] awer ass gläicht, datt am Colon observéiert [26 ]. Gastric mucosal biopsies vu Patienten mat H. pylori Krankheet VerfÜgung weisen héijer Intensitéit vun botzt staining am Verglach zu deene vun Net-Krankheet Sujeten kritt. Laut virdrun Rapporten, bedeit dëst Resultat engem Provider Ofwier Äntwert ze H. pylori VerfÜgung [11], déi op fräi Meenungsäusserung vun hCAP-18 /LL-37 vun gastric epithelial Zellen deelweis baséiert ass. Figur 1 Präsenz vun hCAP-18 /LL-37 peptide zu mucosal biopsies vun der mënschlecher Mo. erwëscht andeems immunohistochemical Analyse mat monoclonal antibodies zu Mënsch CAP-18 /LL-37. Echantillon A /B an C /D vertrieden kritt uplanzen aus Net-Krankheet an H. pylori VerfÜgung Krankheet Themen ofginn. Donnéeën gewise ginn Vertrieder vu fënnef Experimenter. VerfÜgung Bactericidal Aktivitéit vun LL-37, WLBU-2 peptides an ceragenin CSA-13 géint verschidden analyséieren vun H. pylori
Fir resistent analyséieren identifizéieren, Medeziner isolates vun H. pylori VerfÜgung zu Flicken Evaluatioun (Table 1) mat e puer Antibiotiken Moment zu Medeziner Behandlung vun H. pylori VerfÜgung Wonn benotzt ënnerworf waren. Dorënner siwen getest isolates aus verschiddene Sujeten kritt, Deformatioun 4 war resistent metronidazole an analyséieren 5, 6, 7 sech béid resistent metronidazole an clarithromycin. All isolates sech Rief Brauche an tetracycline. Konsequent mat virdrun Rapporten iwwert d'Auswierkunge vun hBD-1, h-BD-2 an LL-37 peptides géint H. pylori VerfÜgung [10, 11] all eenzele analyséieren vun H. pylori VerfÜgung sech no 6 Stonnen incubation ëmbruecht mat LL-37, WLBU2 an CSA-13 mat der Moyenne MBC (μg /ml) Wäerter 8,9 ± 4,03; 5,23 ± 2,7 an 0,31 ± 0,25 wann MBC zu HEPES gefiermt bewäert gouf, oder 300 ± 232, 53 ± 41 an 2,98 ± 3,11 wann MBC zu Brucella läschen Bullion bewäert huet respektiv (Dorënner 2). Evaluatioun vun MBC Wäerter an HEPES mat Zousätzlech vun 2 mm MgCl gefiermt 2 fir H. pylori VerfÜgung ATCC 43504 réischt en aacht fantastesch Erhéijung fir LL-37, an engem véier fantastesch Erhéijung fir béid WLBU2 an CSA-13 (Donnéeën show net). Figur 2 Bactericidal Aktivitéit géint H. pylori. Minimum bactericidal Konzentratioun (MBC) vun LL-37 (wäiss Kolonn), WLBU2 (gro Kolonn) an CSA-13 (schwaarz Kolonn) géint H. pylori VerfÜgung (ATCC 43504 Efforten a siwen Medeziner isolates aus mucosal Echantillon aus verschiddene Sujeten kritt ) an HEPES (erschéngt a) oder Brucella läschen Bulion (erschéngt B bewäert). MBC beweist Konzentratioun op déi awer misst eng inoculum vun H. pylori VerfÜgung z'encouragéieren. VerfÜgung Table 1 Evaluatioun vun Empfindlechkeet vun Medeziner analyséieren vun H. pylori VerfÜgung ze versuergen. VerfÜgung H. pylori VerfÜgung analyséieren
Antibiotiken
AMX VerfÜgung CLR VerfÜgung Mierwaasser VerfÜgung Metronidazole VerfÜgung ATCC 43504 VerfÜgung 0,016 VerfÜgung 0,094 VerfÜgung 0,25
64,0 ®
1
0.094
0.125
0.75
0.19
2
<0.016
0.19
0.125
0.094
3
0.016
0.25
3.0
0.5
4
0.032
0.047
2.0
32.0 ® VerfÜgung 5 zur VerfÜgung 0,25 VerfÜgung 64,0 ® VerfÜgung 1.0 VerfÜgung 96,0 ® VerfÜgung 6 VerfÜgung 0,032 VerfÜgung 1,5 ® VerfÜgung 1,5 VerfÜgung 32,0 ® VerfÜgung 7
0,047 VerfÜgung 1,5 ® VerfÜgung 2.0 VerfÜgung 48,0 ® VerfÜgung Flicken Wäerter (μg /ml) (AMX-Brauche, CLR-clarithromycin, Mierwaasser-tetracycline) VerfÜgung Antibacterial Aktivitéit vun LL-37, WLBU2 an CSA-13 an der Pre-incubation um niddereg pH mat pepsin oder mucin VerfÜgung Nieft bekannt inhibition vun Mutzen antibacterial Aktivitéit vun divalent signéieren wéi MG 2+ an Ca 2+, d'Aktivitéit proteolytic vläicht och Mutzen Funktioun an der gastric Jus Ëmwelt mat der Präsenz vun mucins, an niddreg pH vun pepsin Kompromëss. Fir dës Méiglechkeet Adress bewäert mir de antibacterial Aktivitéit géint Escherichia belaascht VerfÜgung MG1655 no 3 Stonnen am viraus-incubation vun LL-37, WLBU2 an CSA-13 zu surfen gastric Jus am Verglach zu Aktivitéit no hire Pre-incubation vun PBS um pH 7,4 . Ier de Märder assay Dirigent, de pH vun Echantillon mat niddereg pH an niddreg pH /pepsin war bis 7.4 ugepasst. D'antibacterial Aktivitéit vun LL-37 an WLBU2 peptides géint Kolibakterie VerfÜgung MG1655 war um pH der Pre-incubation net vill geännert ~ 1,5, mee war no Pre-incubation um pH ~ 1,5 an der Präsenz vun pepsin (Dorënner 3A verluer an 3B). Am Géigesaz, huet de antibacterial Aktivitéit vun CSA-13 dropp vun Pre-incubation um pH ~ 1,5 mat oder ouni pepsin (Dorënner 3C). Wéinst dem waren bactericidal Aktivitéite vun all Komponente fir verschidde Geoportal kompromettéiert wann Dir eng bakteriell Märder assay an der Präsenz vun sidd gastric mucin getest. An enker Accord mat de Resultater vun dëser Kolibakterie VerfÜgung MG1655 studéieren, MBC Wäerter vun LL-37 peptide der 1H Pre-incubation mat gefiermt um niddereg pH wouvun pepsin oder mucin war bewäert kritt huet, mä déi vun CSA-13 waren bal onverännert (Well 3D). All bewäert Agenten verluer antibacterial Aktivitéit vun PBS mat 10% Mënsch Bile nà (eng Konzentratioun datt mat Kolibakterie net VerfÜgung MG1655 Wuesstem Amëschung - Donnéeën net gewisen). Dëst Resultat hindeit datt physico-chemeschen Eegeschafte vun antibacterial Molekülle hir Enregistréiere vun Bile lipoprotein förderen, domat hir Interaktioun mat der bakteriell Mauer lagert. Et gouf zu ausléisen Jus keng Etude ze diskutéieren antibacterial Aktivitéit vun Mutzen, mä dës Resultater weisen, datt Bile reflux an de Mo mat Mutzen Aktivitéit Amëschung kann. Figur 3 Antibacterial Aktivitéit géint Kolibakterie MG1655 an H. pylori ATCC Deformatioun 43504. Antibacterial Aktivitéit vun LL-37 (erschéngt A), WLBU2 (erschéngt B) an CSA-13 (erschéngt C) géint Kolibakterie VerfÜgung MG1655 der Pre-incubation (3 h bei 37 ° C) an PBS (oppen Kreeser), surfen gastric Jus op pH ~ 1,5 (Plaatzen), surfen gastric Jus mat pepsin (Diamante), surfen gastric Jus mat mucin (triangles) an PBS mat Mënscherechter Bile (10%) kritt vun der gallbladder (gefëllt Krees). Donnéeën gewise ginn heescht ± Fils vun dräi bis véier Experimenter. MBC vun LL-37 (wäiss Kolonn) an CSA-13 (schwaarz Kolonn) (erschéngt D) géint H. pylori VerfÜgung (ATCC 43504) an der Pre-incubation (1 h bei 37 ° C) an surfen gastric Jus op pH ~ 1,5 (a), surfen gastric Jus mat pepsin (B) an an Präsenz vun mucin (C) VerfÜgung analytesch characterization vun LL-37 an CSA-13 no incubation mat pepsin VerfÜgung Mass spectrometry Analyse (Dorënner 4) verréid déi dräi Stonnen incubation mat pepsin Resultater an extensiv ofgeschnidden vum LL-37. Allerdéngs, am niddereg pH, ass pepsin unzereegen héich spezifesch an LL-37 peptide Rëss ass mat hydrophobic Aminosaier Saieren zu de Site limitéiert. Potential Rëss Siten duerch PeptideCutter characterization Software http virausgesot:.. //Mënsche expasy org /Handwierksgeschir /peptidecutter /, proposéiere datt LL-37 unzereegen mat pepsin an eiser experimentell Konditiounen sollen 11 Produiten release, dorënner 3 kuerz peptides (RKSKEKIGKE, FKRIVQRIKD an LVPRTES). Dës Prognosen sinn konsequent mat Mass Spektralklass Analyse, déi weisen net der Präsenz vun all intakt LL-37 weider folgenden incubation mat pepsin um niddereg pH, mä et léist d'Entstoe vu multiple nei Moundalpen mat verschiddene Reklassement Mol. Déi reschtlech antibacterial Aktivitéit vun LL-37 folgenden Behandlung mat pepsin (Dorënner 3A an 3D) am Réck assays duerstellt wahrscheinlech de Reschtoffall Aktivitéit vun dësen LL-37 Fragmenter. Am Géigesaz zu der observéiert ofgeschnidden vum LL-37, CSA-13 analytesch characterization war net no incubation mat pepsin um niddereg pH geännert. Figur 4 Mass spectrometry Analyse. Mass spectrometry Analyse vum LL-37 (erschéngt A) an CSA-13 (erschéngt B) an PBS (Linn 1) niddereg pH Prellbock (Linn 2) an niddreg pH gefiermt mat Präsenz vun pepsin (Linn 3). D'total ioun chromatogram (In-) ass fir all Prouf Conditioun mat enger inset Mass-ze-Vitesse (m /Z) Spektren weist Intensitéit vun der Statue In- Moundalpen presentéiert. D'molekulare Gewiicht vun intakt LL-37 ass 4494, dat mat méi Käschten (m /Z = 4 MW = 1124, m /Z = 5 MW = 900, etc) observéiert ka zu positive ioun Modus. D'molekulare Gewiicht vun CSA13 ass 678, déi direkt a mat Multiple charges observéiert kënne ginn. Daten aus ee Experimenter si gewisen. VerfÜgung Toxicity vun LL-37, WLBU2 an CSA-13 géint RBC a mënschlech adenocarcinoma Zellen VerfÜgung Non-spezifesch Enregistréiere vun antibacterial peptides an hir mimics an Provider Zell Schläimhait kann toxicity féieren. Provider Zell Membran permeabilization kënnt vun der Verëffentlechung vu Proteinen wéi glycosilée an LDH aus dem Zytosol, fir d'extracellular Plaz gemooss ginn. Vun Evaluéieren glycosilée an LDH release (Dorënner 5A an 5B), weisen mir keen groussen Membran permeabilization vun all getest Molekülle an der Rei, op deenen se bactericidal Aktivitéit zu Salins Baudeeler (Dorënner 2A, Dorënner 3) hunn. Dëst brengt war vun microscopic Evaluatioun vun adenocarcinoma Zell Wirklechkeet bestätegt kee siichtbar Ënnerscheed tëscht der Kontroll Zellen an deenen behandelt mat 10 μg /ml LL-37, WLBU2 oder CSA-13 (Dorënner 5C) weist. Awer eng Erhéijung vun glycosilée an LDH release war mat waarden Konzentratioun observéiert. Vun den dräi Molekülle getest, war WLBU2 stäerkst hemolytic Agent, mee all vun hinnen huet ähnlech Fähegkeet adenocarcinoma Zell Membran Integritéit (Dorënner 5B a 5C) zu Kompromëss. CSA-13 bactericidal Konzentratioune géint H. pylori VerfÜgung an Kolibakterie VerfÜgung MG1655 (Sauerdall 2A, 2B an 3C) zu Salins bewäert souwéi Nährwert wouvun gefiermt waren ënnert seng minimal hemolytic Konzentratioun an ënnert Konzentratioune Viagra vun adenocarcinoma dauernd Zell Schläimhait. Figur 5 Evaluatioun vun Zell toxicity. Glycosilée an LDH Fräiloosse vu mënschlechen rout Blutt Zellen a mënschlech gastric adenocarcinoma Zellen (erschéngt A a B bzw.) no Zousätzlech vun LL-37 (Kreeser), WLBU2 (Diamante), an CSA-13 (triangles), gefollegt vun incubation fir 1 h bei 37 ° C. Donnéeën gewise ginn heescht ± Fils vun dräi Experimenter. Grousse Ganzen vun mënschlech Zellen gastric adenocarcinoma éier (Kontroll) an der LL-37, war vun Phas-Kontrast microscopy (erschéngt C) bewäert WLBU2 an CSA-13 Behandlung. Daten aus ee Vertrieder Experimenter si gewisen. Zwee aner Experimenter réischt ähnleche Resultater. VerfÜgung Diskussioun VerfÜgung Den Taux vun erfollegräich Behandlung vun H. pylori VerfÜgung Mo. Wonn, erreecht mat geschéckt Therapien vun zwee Antibiotiken an enger Proton Pompel inhibitor huet aus méi wéi 90% ze iwwer Fro 80 % während de leschte Jorzéngt [27]. Ausserdeem, ass d'Käschte vun dëser Therapie groussen, an dofir e Besoin fir méi dicht sinn heescht vun bestéet oder Präventioun existéiert H. pylori VerfÜgung Wonn nach [28]. New Agenten H. pylori VerfÜgung Aids sinn néideg och wéinst waarden EPO-Resistenz Problemer vun extensiv Benotzung vun Antibiotiken [29] an de Lycée Iwwerliewe Mechanisme vun pathogenic Bakterien ze Krise Moment benotzt antimicrobials ëmmer unzegesin. Zum Beispill, H. pylori VerfÜgung analyséieren resistent Brauche, metronidazole an clarithromycin muss gemellt ginn [30, 31]. Methode Fleeg fir H. ze verbesseren pylori VerfÜgung zur Asiicht an de natierleche Mechanismen leede kéint vun deenen Kranken an dëser Bakterie an d'Grënn z'äntwerten Krankheet firwat de normal Provider-Ofwier Mechanismen versoen. VerfÜgung Dës Etude enger viregter Rapport dé vun fräi hCAP-18 /LL-37 Ausdrock vun gastric mucosa vun Sujeten Krankheet mat H. pylori VerfÜgung [11]. Dëst brengt hindeit datt waarden Produktioun vun der bactericidal peptide LL-37 kann eng Schlësselroll an Provider Ofwier géint H. pylori VerfÜgung [11] spillen. Mä dëst bactericidal Äntwert zu e puer Sujeten ass genuch an H. pylori VerfÜgung Wonn kann nach eng chronesch Etapp erreechen. D'Feele vun bactericidal Funktioun vun LL-37 zu dësem Kader huet virgeschloen, datt LL-37 peptide zu gastric mucus vun Krankheet Sujeten Ausdrock vun hCAP-18 /fräi zousätzlech Funktioune mussen och als eng anti-demagogesch a Wuesstem Spannend Agent. Tatsächlech war et viru kuerzem gewisen, datt gastric oppent heelen an deër vun cathelicidin-mediated transactivation vun epidermal Wuesstem Faktor kenne (EGFR) via de transforméiert Wuesstem Faktor alpha (TGFα) sécher Passerelle [32] gefördert gëtt. Geff Verloscht vun Ofwier géint H. pylori VerfÜgung wéinst Verloscht vun antibacterial Funktioun vun LL-37 an d'MILIEU vun der gastric mucosa kann. Demno, Design vun antimicrobial Agenten datt méi efficace an dësem Kader sinn kënne positiv sinn. Vun immunohistological Resultater Motivéiert VerfÜgung, d'Aktivitéit vun LL-37 géint Krankheete isolates vun H. pylori VerfÜgung an Kolibakterie VerfÜgung MG1655 ënner biologically relevant Konditiounen war mat deem vun de syntheteschen peptide WLBU2 an der ceragenin CSA-13 Verglach. Dës Etude weist dass CSA-13, contrairement zu LL-37 an WLBU2 peptides, an der Präsenz vun mucin an der preincubation mat pepsin um niddereg pH staark bactericidal Aktivitéit geréiert. Bedingungen vertrieden eenzegaarteg Erausfuerderungen Zesummenhang mat H. pylori VerfÜgung Behandlung, wéi dës Bakterien am Mo vun der dono Ëmwelt vun engem décke mucus futti geschützt ginn an d'Effikacitéit vun villen antimicrobial Drogen ass immens um dono pH manner [31]. An anere Wierder, pylori d'éischt effektiv Therapie fir H. VerfÜgung Wonn enger Kombinatioun vu relativ pH-Géigestand seng Identitéit verléiert antimicrobial Drogen wéi Bismut, tetracycline an metronidazole [33] war. Zousätzlech, wéi de Mo. periodesch brengt dra steet (Javuier Therapie hautdësdaags gin verdënntem an desinizeiert) Opklärung datt CSA-13 bactericidal Aktivitéit bei vill méi niddreg Konzentratioun dann LL-37, no der selwechter incubation Zäit huet (3-6 Stonnen) [11], hindeit datt CSA-13 therapeutesch Potential VerfÜgung Wonn fir Behandlung vun H. pylori hun kann. D'antibacterial Aktivitéit vun CSA-13, déi eng kleng net Vitesse an eng eenzegaarteg Verdeelung vun dëser Vitesse iwwer eng Arméi scaffold huet den Verglach mat LL-37 an WLBU2 peptides, war och vun mucin vom gastric mucosa gin manner inhibited fonnt. Therapeutesch Potential baséiert op der Fähegkeet vun CSA-13 bis H. z'encouragéieren pylori VerfÜgung ass och ënnerstëtzt vun virdrun antibacterial Aktivitéit Untersuchungshaft géint aner Bakterien analyséieren, dorënner Medeziner isolates vun Pseudomonas aeruginosa VerfÜgung [21] an S. aureus VerfÜgung [22]. CSA-13 ass eenzegaarteg Fähegkeet bakteriell Membran Integritéit an d'chemesch Natur vun dësen niddregen-molekulare-Mass Massa fir Kompromëss datt Käschte vun Synthes Verglach zu cationic antibacterial peptides ze niddreg Iwwersetzer hindeit datt CSA-13 oder vläicht aner ceragenins fir Behandlung vun H. Potential hunn pylori VerfÜgung Wonn, inklusiv deenen ëmmer duerch seng resistent analyséieren. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung Bactericidal Aktivitéit vun ceragenin CSA-13 no preincubation zu surfen gastric Jus haten et an der Präsenz vun mucin. Dës kënschtlech VerfÜgung Evaluatioun bedeit e groussen Potential vun dëser Protein am Traitement vun Mo. mucosal Wonn. VerfÜgung Method VerfÜgung Antibacterial Agenten VerfÜgung LL-37 (NH 2-LLGDFFRKSKEKIGKEFKRIVQRIKDFLRNLVPRTES-COOH) an WLBU2 ( NH 2-RRWVRRVRRWVRRVVRVVRRWVRR-COOH) peptides sech aus Bachem (Kinnek vu Preisen, PA) kaaft. CSA-13 bereet war wéi virdru beschriwwen [34]. Brauche (AMX), clarithromycin (CLR), tetracycline (Mierwaasser) an metronidazole sech aus Fläch kaaft. VerfÜgung Collection vun gastric mucosal an Bile Echantillon VerfÜgung Während gastroscopy, mat entweder enger GIF V2 oder Q145 (Olympus) gastroscope gesuergt, puer gastric mucosal serwéiert sech aus der prepyloric an Corpus Regioune vun de Mo. geholl. H. pylori VerfÜgung Wonn war an der Fro uplanzen mat engem urease Test (CLO-Test) gegrënnt. Mënsch Bile war vun der gallbladder vun Patienten amgaang cholecystectomy kritt. (: 1 1) a gemëscht mat antibacterial Agenten benotzt zu Bakterien Märder assays Echantillon waren ier vun PBS Wiesen verdënntem duerch eng 0,45 μm Membran filter-goen. Déi Etüden sech duerch medezinesch Uni vu Bialystok IFLA- Komitee fir Fuerschung op Mënschen an Déieren guttgeheescht, an all Patienten den Accord fir Participatioun an der Etude schrëftlech informéiert. VerfÜgung Immunohistochemical Studien VerfÜgung Immunohistochemical Studien op formalin-fix gesuergt huet, paraffin- Ënnerbewosstsinn Mënsch gastric mucosal Rubriken enger Kanéngchen anti-LL-37 antibody benotzt (H-075-06, déi bei 1: 100 dilution; Phoenix Pharamceuticals Galaxy). Paraffin-Ënnerbewosstsinn Material sech zu 5 μm deck sectioned an lenks op destilléiert Waasser bei 45 ° C. Sektiounen sech dann op drënner schéi an zu 57 ° C Uewen Iwwernuechtung gesat. D'Sektiounen sech no schëlleg Prozeduren deparaffinized a mat 0,9% Waasserstoff Hem zu methanol fir 30 Minutten quenched. D'Sektiounen sech fir 60 Minutten mat der Primärschoul antibody bei 37 ° C incubated, mat 1% PBSA (1% BSA vun PBS) gewäsch, an haut mat Première antibody (biotinylated Geess anti-Kanengchen IgG, 1: 400 dilution) zu verbindlechen. Amplification war mat engem Vectastain ABC Kit gesuergt, an eng HRP erkennen System benotzt gouf peroxidase Aktivitéit mat engem botzt Realitéiten ze colocalize. D'Sektiounen sech mat hematoxylin counterstained. Echantillon waren ënner 40 × Vergréisserung mat enger Nikon Sonnendäischtert 80 microscope gekuckten. VerfÜgung Evaluatioun vun Flicken an MBC VerfÜgung D'minimal inhibitory Konzentratioun (Flicken) vun konventionelle Antibiotiken géint siwen aner Krankheete isolates vun H. pylori VerfÜgung (9 × 10 8 CFU /ml) huet sech mat Muller-Hinton Agar (MH) mat 5% Schof Blutt. D'incubation war zu microaerophilic Konditiounen bei 35 ° C fir 4 Deeg weider mat Benotzung vun engem Gas haten Pack-Campylobacter Gas generéieren Kit BR60. Séminairen isolates vun H. pylori VerfÜgung sech resistent Betruecht ze respektiven Antibiotiken wann d'Flicken Wäerter uewendriwwer waren 4 μg /ml fir AMX, 1 μg /ml fir CLR an 16 μg /ml fir Mierwaasser an Metronidazole. D'minimal bactericidal Konzentratioun (MBC) vun antibacterial Agenten war mat engem inoculum um 10 8 CFU /ml bewäert. No enger 6-Stonn incubation bei 37 ° C, 10 μl aliquots vun der suspensions sech op Columbia Agar mat Schof Blutt (5%) ergänzt iewer. VerfÜgung Bakterien assay VerfÜgung D'bactericidal Aktivitéite vun LL-37, WLBU2 peptides Märder an ceragenin CSA-13 géint Kolibakterie VerfÜgung MG1655 an der Präsenz vun mucin oder pepsin aus porcine mucus (Fläch) a mënschlech Bile waren gemooss, wéi virdru beschriwwen [35]. Bakterien sech an resuspended vun PBS Prellbock (pH = 7.4) op 37 ° C (vun der Evaluatioun vun optesch Dicht op 600 nm kontrolléiert) bis Mëtt-Logbuch Phase ugebaut. D'Bakterien suspensions sech verdënntem dann 10 mol zu 100 μl vu Léisungen wouvun antibacterial Agenten déi selwer oder mat mucin (1000 μg /ml), oder Bile (d'Finale 1:10 Bile dilution mimics der Ëmwelt vun den ieweschte kleng Daarm an déi Bile ass secreted [36] (pH = 7,4)). An anere Formatioun vun Experimenter antibacterial Aktivitéit vun dëse Voleten war folgenden hir preincubation zu surfen gastric Jus sech [36, 37] um pH ~ 1,5 mat an ouni pepsin (0,5 mg /ml). Bakterien mat antibacterial Molekülle fir eent-Stonn um 37 ° C, déi bakteriell suspensions goufen op Äis geluecht an verdënntem 10- bis 1000- fantastesch No incubating. Aliquots vun all dilution (10 μl) waren bei 37 ° C op LB Agar Placke fir Iwwernuechtung Kultur iewer. D'Zuel vun de Kolonien op all dilution war den folgenden Moien gezielt. D'Kolonie ze grënnen Eenheeten (CFU /ml) vun den eenzelne Echantillon waren aus dem dilution Faktor alles. VerfÜgung Mass spectrometry VerfÜgung analytesch characterization war mat pepsin op d'CSA-13 an LL-37 suspensions der 3H incubation gesuergt (0,5 mg /ml) op niddereg pH (~ 1,5) bei 37 ° C, de Shimadzu (Columbia, MD) Instrument (den LC-MS System bestoung aus engem LC-20AB Léisungsmëttelbad Liwwerung System an SIL-20A auto-Sampler benotzt zesummen ze duebel Wellelängt UV-Vis heescht an engem LCMS 2010EV Single quadrupole Mass Spektrometer), zesummen un engem Shimadzu Premier C18 Kolonne (150 mm × 4,6 mm id, 5 μm ëm Gréisst). Den Handy Phase Flux Taux war 1 ml /min mat engem Start Verhältnis vun 90% Handy Phase A (Waasser) an 10% Handy Phase B (acetonitrile) souwuel mat 0,1% (v /v) formic Seier. Déi analytesch Method bestoung vun dëse Schrëtt: (ech) Sprëtz Echantillonen an fir 5 min bei 10% B Holding, (II) linear packt vu 10% bis 90% B iwwer 15 Minutten (III) op 90% B mengn fir 5 Minutt, (IV) isocratic Schrëtt zu 10% B an fir 5 Minutten virun d'nächst Prouf Sprëtz dun. Mass spectrometry war vun 160-2000 op der eluent benotzt electrospray Eegeliichten (ESI) am positive ioun Modus mat engem gescannt m /Z Rei gesuergt. VerfÜgung Red Blutt Zell lysis VerfÜgung D'hemolytic Aktivitéit vun LL-37, WLBU-2 an CSA-13 (0-200 μ VerfÜgung g /l), géint Mënscherechter rout Blutt Zellen (RBC) war mat erythrocytes vun PBS suspendéiert getest. RBC bereet aus frësch Blutt (Hematocrit ~ 5%) waren der Zousätzlech vun Test Molekülle bei 37 ° C fir 1 h incubated. Relativer glycosilée Konzentratioun vun supernatants der centrifugation bei 2000 × g gouf duerch Miessunge der absorbance bei 540 nm iwwerwaacht. 100% hemolysis war vun Echantillon vun deenen 2% Triton X-100 ugebaut gouf geholl VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter gastric adenocarcinoma Zellen. (ATCC; loosen-1739) waren an DMEM (BioWhittaker) Kultur ergänzt mat 10% Hëtzt haten -inactivated an et Bovine serum (Hyclone) bei 37 ° C a 5% CO 2. Fir LDH release assay an microscope Evaluatioun Zellen sech zu 24 och Telleren plated an zu Niewebaach ugebaut. An all Experiment, war déi mëttel- bis serum-fräi Medien geännert ~ 12 h virewech Behandlung mat LL-37 zu Zell, WLBU2 an CSA-13 (0-200 μg /ml) an eenzelne Wells, fir 1 Stonn. Zell Kultur mëttelfristeg war dann gesammelt, centrifuged (10 bedeit, 5000 Ziichter, RT) an deen zu LDH Evaluatioun (LDH-cytotoxicity Assay Kit; BioVision Galaxy) VerfÜgung Deklaratioune VerfÜgung Merci VerfÜgung Dës Aarbecht vun NIH ënnerstëtzt gouf Zouschoss HL067286 a medezinesch Uni vu Bialystok Subventioune 3-22458F an 3-18714L VerfÜgung Auteuren 'original deposéiert Fichieren fir Biller VerfÜgung sinn ennen d'Linken op d'Auteuren' original deposéiert Fichieren fir Biller. 12866_2009_858_MOESM1_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 1 12866_2009_858_MOESM2_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 2 12866_2009_858_MOESM3_ESM.pdf Auteuren 'original Datei fir Figur 3 12866_2009_858_MOESM4_ESM.pdf Auteuren' original Datei fir Figur 4 12866_2009_858_MOESM5_ESM.pdf original Datei 'Auteuren fir Figur 5 konkurréiert Interessen VerfÜgung Dr P. Savage ass eng bezuelten Beroder fir Ceragenix Medikamenter, Leitmotiv immun Galaxy an WittyCell. Keen vun der Recherche an dëser Pabeier gemellt war vun Ceragenix Lag oder duerch all aner Gesellschaften Entitéiten ënnerstëtzt. Aner Auteuren: keent ze erklären VerfÜgung.

• Evaluatioun vun de Passage vun Lactobacillus gasseri K7 an bifidobacteria vun de Mo ze intestines enger eenzeger Atomreakter Modell benotzt
• Ballon-occluded wuël transvenous obliteration fir gastric schro: d'Relatioun tëscht de Medeziner Resultat an gastrorenal shunt occlusion