PLoS ONE: Tonic und Phasic Kontraktion der glatten Muskulatur ist nicht geregelt durch die PKCα - CPI-17 Pathway in Swine Magen Antrum und Fundus

Abstrakt

Regulation der Myosin Light Chain Phosphatase (MLKP) über die Proteinkinase C (PKC) und dem 17 kDa PKC-Potenzierung Inhibitor der Myosin Light Chain Phosphatase (CPI-17) wurde als Ca berichtet ^{2 + Sensibilisierung Signalweg in der glatten Muskulatur (SM) und kann somit in Tonikum vs. phasische Kontraktionen beteiligt sein. Diese Studie untersuchte die Proteinexpression und räumlich-zeitliche Verteilung von PKCα und CPI-17 in intakten SM Geweben. KCl oder Carbachol (CCh) Stimulation der Tonika Magenfundus SM erzeugt eine anhaltende Kontraktion während der phasischen Magen Antrum eine vorübergehende Kontraktion erzeugt. Darüber hinaus erzeugt der Tonika Fundus größere relative Kraft als phasic Antrum mit 1 uM Phorbol 12, 13-dibutyrat (PDBu) Stimulation, die die PKCα zu aktivieren gemeldet wird - CPI-17-Weg. Western-Blot-Analysen zeigten, dass diese Kontraktionsunterschied nicht durch einen Unterschied in der Proteinexpression von PKCα oder CPI-17 zwischen diesen beiden Geweben verursacht wurde. Immunhistochemischen Ergebnisse zeigen, dass die Verteilung von PKCα in Längs- und in kreisförmigen Schichten des Fundus und Antrum nicht unterscheiden, vor allem in der Nähe des SM Zellplasmamembran lokalisiert ist. Die Stimulation der beiden Gewebe mit 1 uM PDBu oder 1 &mgr; M CCh nicht ändert diese periphere PKCα Verteilung. Es gibt keine Unterschiede zwischen diesen beiden Geweben für die CPI-17-Verteilung, aber anders als die PKCα Verteilung CPI-17 scheint diffus über das Zytoplasma unter entspannten Gewebebedingungen verteilt wird, sondern verschiebt sich zu einer im Wesentlichen peripheren Verteilung in der Plasmamembran mit Stimulation von die Gewebe mit 1 uM PDBu oder 1 &mgr; M CCh. Ergebnisse von Doppelmarkierung zeigen, dass weder PKCα noch CPI-17 am adherens Übergang (Vinculin /Talin) an der Membran co-lokalisieren, aber sie untereinander und mit caveoli (Caveolin) an der Membran zusammen lokalisieren. Dieser Mangel an Unterschied legt nahe, dass die PKCα - CPI-17-Weg nicht verantwortlich für die Tonika vs. phasische Kontraktionen im Magenfundus und Antrum beobachtet wurde, ist}

Citation: Zhang Y, Hermanson ME, Eddinger TJ (2013) Tonic. und Phasic Kontraktion der glatten Muskulatur ist nicht geregelt durch die PKCα - CPI-17 Pathway in Swine Magen Antrum und Fundus. PLoS ONE 8 (9): e74608. doi: 10.1371 /journal.pone.0074608

Editor: Wenhui Hu, Temple University School of Medicine, Vereinigte Staaten von Amerika

Empfangen: 13. März 2013; Akzeptiert: 4. August 2013; Veröffentlicht: 18. September 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Dies ist eine Open-Access-Artikel unter den Bedingungen der Lizenz Creative Commons, die uneingeschränkte Nutzung erlaubt, die Verteilung und Vervielfältigung in jedem Medium, vorausgesetzt, der ursprüngliche Autor und Quelle genannt werden

Finanzierung:. Diese Arbeit wurde von der National Science Foundation (NSF), Biological Sciences Department und Graduate School, Marquette University unterstützt. Die Geldgeber hatten keine Rolle in Studiendesign, Datenerfassung und Analyse, Entscheidung oder Vorbereitung des Manuskripts zur Veröffentlichung

Konkurrierende Interessen:.. Die Autoren haben erklärt, dass keine Interessenkonflikte bestehen

Einführung

Der Mechanismus (n) Bestimmung Tonika (nachhaltig) vs. phasische (transient) der glatten Muskulatur (SM) Kontraktionen bleibt ungelöst. Diverse Innervation und zirkulierenden Signalmoleküle neben einzigartigen Rezeptor und Protein (Isoform) Expression und intrazelluläre Signalwege erschweren das Problem. Nicht unerwartet, gibt es mehrere vorgeschlagenen Hypothesen Tonikum Krafterhaltung in SM einschließlich zu erklären: Slowly- oder nicht-teil glatten Muskulatur Myosin Querbrücken genannt Riegel Brücken [1], [2], [3], [4]; Rekrutierung von nicht-Muskel-Myosin II [5], [6], [7]; Bildung von Caldesmon oder Calponin abhängigen Aktin-to-Myosin Vernetzungen [8], [9]; Bildung von Zytoskelett-Kraft tragenden Strukturen [10], [11], [12]; und Regulierung von Myosin LC _{20 Phosphorylierung über den zweiten Messenger-Pfade Myosin Light Chain-Kinase zu beeinflussen (MLCK) und Myosin Light Chain Phosphatase (MLKP) Aktivität [13], [14], [15], [16], [17] [18]. Diese letzte Kategorie ist von Interesse, weil der gemeldeten unterschiedliche Expression, Lokalisation und Regulation dieser zweiten Botenstoffe in verschiedenen SM Geweben. Variable Regulierung der MLCK und MLKP Aktivität konnte bieten nicht nur ein Mittel zur Ca ^{2 + Sensibilisierung, sondern auch einen möglichen Mechanismus für Tonikum vs. phasische Kontraktion. Die Inaktivierung der MLKP über den PKCα -CPI-17-Weg wäre für hoch gehalten Myosin Light Chain (MLC 20) die Phosphorylierung und damit eine nachhaltige Kontraktionskraft ermöglichen. Ein Ausfall MLKP zu inaktivieren würde MLC 20 Phosphorylierung und Kraft, was zu einer transienten Kontraktion zu reduzieren. Magenfundus SM erzeugt ein Tonikum (nachhaltig) Kontraktion während Magen Antrum SM erzeugt einen phasischen (transient) Kontraktion in Reaktion auf eine Vielzahl von Reizen.}}

Ca ^{2 + Sensibilisierung, die die Aktivierung von G beinhaltet Protein-gekoppelten zweiten Messenger-Pfade, welche die kontraktile Proteine ​​[Ca 2+ _{i] von MLCP Hemmen sensibilisieren kann durch irgendeine von zahlreichen Wegen erfolgen. Einer der berichteten Wege zur Hemmung der Aktivität MLCP umfasst die Proteinkinase C /C-Kinase aktiviert PP1-Inhibitor-Protein von 17 kDa (PKC /CPI-17) -Weg [19], [20]. G-gekoppelten Protein-Rezeptor (GCPR) Aktivierung bei der Aktivierung von Phospholipase C (PLC), die sich hydrolisiert Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphat (PIP 2) Inositol-1,4,5-triphosphat (IP 3) zu erzeugen, und Diacylglycerol (DAG). DAG ist bekannt PKC zu aktivieren, die Phosphorylierung von CPI-17 dazu führen können, selektiv MLKP (Bewertung für Viszeral SM in [17]) zu hemmen. PKC wird angenommen, dass durch die Aktivierung und räumlichen Verteilung in der Zelle reguliert werden, wobei letztere gesteuert durch Proteine ​​Verankerung, die binden und die Lage der PKC an spezifische Regionen der Zelle [21] begrenzen, [22]. Zum Beispiel berichtet von konstitutiv aktiven L-Typ-Ca 2+ -Kanäle und ihre Regulation durch PKC [23], [24] legt nahe, dass PKC in der Nähe der Membran in glatten Muskelzellen lokalisiert ist. Die zelluläre Funktion von CPI-17 in der Zelle könnte auf das Niveau der Proteinexpression variieren und ob es in der Nähe der Plasmamembran befindet, wo PKCα befindet /aktiviert oder mit den kontraktilen Myosin dicken Filamenten zugeordnet wo MLCP befinden würde zu de -phosphorylate Myosin leichte Kette 20 (MLC 20).}}

Die Expression von PKCα und CPI-17 und ihre räumlich-zeitliche Umverteilung auf Gewebe Aktivierung wurden in Ca vorgeschlagen worden ^{2 + Sensibilisierung der glatten Muskulatur (zur Überprüfung [14], [15], [16], [17]). Somit ist es möglich, dass die Unterschiede in ihrer Expression und zelluläre Lokalisation /Translokation könnte vs. phasische kontraktilen Reaktionen bei der Bestimmung Tonikum beteiligt sein. Für diese beiden Proteine ​​in Hemmen MLCP-Aktivität während der Gewebeaktivierung und damit eine stärkende oder phasischen Reaktion verursacht beteiligt Teil eines Weges zu sein, müssen sie auf den entsprechenden Ebenen und positioniert an der richtigen Stelle in der Zelle zur richtigen Zeit ausgedrückt werden. Weil PKC durch DAG (a membrangebundenen Phospholipid) aktiviert ist, muss ebenfalls mindestens zeitweilig an der Membran sein damit dies geschehen kann. Und wenn CPI-17 wird die MLKP von Dephosphorylierung MLC _{20 auf den dicken Filamenten, CPI-17 an einem gewissen Punkt zu hemmen, muss im Cytosol mit den dicken Filamenten vorhanden dort in Verbindung gebracht werden. Mit diesen beiden Schritten in zwei räumlich getrennte Bereiche der Zelle auftretenden, eines oder beide dieser Proteine ​​hat zu dem anderen Bereich zu translozieren ihnen den Weg zu interagieren und zu vervollständigen.}}

Der Zweck dieser Studie war zu testen, die Hypothese, dass die PKCα - CPI-17 Ca ^{2 + Sensibilisierung Weg bei der Bestimmung Tonika (nachhaltig) und phasische (transient) Kontraktionsreaktionen in der glatten Muskulatur beteiligt ist. Dazu stellten wir fest, die Proteinexpression und räumlich-zeitliche Verteilung von PKCα und CPI-17 im phasic Magen Antrum und Tonikum Magenfundus unter entspannt und aktiviert Bedingungen. Die Ergebnisse keine signifikanten Unterschiede in der Expression von einem dieser beiden Proteine ​​zeigt, noch in ihrer peripheren Verteilung zwischen diesen beiden Geweben sind im Widerspruch zu der Hypothese, dass die PKCα- CPI-17 Ca 2 + Sensibilisierung Weg ist der bestimmende Faktor für die Tonikum gegen in diesen Geweben beobachtet Antworten phasic Kontraktions.}

Methoden

Organ- und Gewebebehandlung

Schweinegewebe (Magen) wurden von Hansen Fleisch Service (Franks, WI) erhalten und legte in kalter physiologischer Kochsalzlösung (PSS; (in mm): 140,1 NaCl, 4,7 KCl, 1,2 Na _{2HPO 4, 2,0 MOPS (pH 7,4), 0,02 Na 2EDTA, 1,2 MgSO 4, 1,6 CaCl 2 und 5,6 Glukose). Die Mägen wurden von Blut, lockeres Bindegewebe gereinigt, und in einigen Fällen die Schleimhaut und sofort eingefroren oder in PSS im Kühlschrank 0-2 Tage gelagert. Einige Organe waren frisch eingefroren, so bald wie möglich nach der post-mortem (60-90 Minuten). Einige Organe wurden in PSS und /oder stimuliert mit 1,0 &mgr; M CCh oder PDBu (Sigma) bei 37 ° C für verschiedene Zeitpunkte vor dem Einfrieren inkubiert. Variable Inkubationszeiten und Agonistenkonzentrationen wurden ebenfalls getestet. Für die Immunhistochemie wurde alle Gewebe gefroren gelagert, bis sie geschnitten und eine Immunreaktion. Einfrieren in allen Fällen beteiligt Plazieren Stücke Gewebe oder Gewebestreifen in Isopentan, gekühlt in flüssigem Stickstoff durch Lagerung bei -80 ° C. Fünf bis sechs um Abschnitte der gefrorenen Gewebe auf einem Leica CM1900 Kryostaten geschnitten wurden, nahm auf Glasobjektträger und gefroren gelagert (0-1 Tage), bis eine Immunreaktion.}

Immunreaktionen und Reagenzien

Die Antikörper wurden aus den folgenden Quellen erhalten: PKCα (H-7 und C-20) und CPI-17 (H-60) von Santa Cruz Biotech, Santa Cruz CA; Vinculin und Talin von Sigma, St. Louis, Missouri; Caveolin 1 von BD Biosciences, San Jose, CA; Cy2 und Cy3 Esel anti-Maus oder Kaninchen Sekundär des von Jackson Immuno Research, West Grove, PA; Alexa Fluor 594-Phalloidin und DAPI von Molecular Probes, Eugene, OR. Alle diese Antikörper wurden zuvor in unserem Labor für die Immunhistochemie und Western Blotting wurden, wo sie Spezifität für ein Band des korrekten Molekulargewicht für das jeweilige Protein angegeben [25], [26], [27] zeigen, verwendet. Negative Kontrollen, wo der primäre Antikörper wird zeigen, für diese Bänder und keine Immunfluoreszenz auf Gewebeschnitten keine Reaktivität nicht enthalten.

Gefrorene Gewebeschnitte nahm auf Glasobjektträger nach oben wurden bei Raumtemperatur aufgetaut und dann mit 2% Paraformaldehyd für 10 fixiert Minuten permeabilisiert in 0,5% Triton X-100 für 10 Minuten und blockiert mit 5 mg /ml BSA für 1 Stunde vor über Nacht (4 ° C) und dann die entsprechenden sekundären Antikörper für eine Stunde bei Raumtemperatur mit dem primären Antikörper zu reagieren. Nach dem sekundären Antikörper wurden die Gewebe mit DAPI (0,5 &mgr; M), Phalloidin (10-50 nM) oder DAPI /Phalloidin gegebenenfalls zur Färbung Kerne und /oder Faden Aktin inkubiert. Mehrere Waschungen wurden im Anschluss an die primären und sekundären Inkubationen verwendet, und die Gegenfärbung. Deckgläser wurden montiert gepuffert mit 75% Glycerin mit 0,2% n-Propylgallat Schwund zu minimieren. , 1% tween-: Alle Immunreaktion Lösungen wurden in PBS-Tween [(NaCl 8,0, KH _{2PO 4 0.2, Na 2HPO 4 1,15, KCl 0,2, in g /l) aus 20, pH 7,4] mit 0,1% BSA. Negative Kontrollen umfassten 0,1% BSA, ohne den primären Antikörper und zeigten keine Immunreaktion.}

Mikroskopie

Die Schnitte wurden unter Verwendung eines Olympus IX70 Mikroskop mit Epifluoreszenz Beleuchtung beobachtet. Digitale Bilder wurden aufgenommen mit einer 16-Bit-Princeton Instruments (Princeton, NJ) CCD-Kamera, gesteuert über einen PCI-Board via IPLab für Windows auf einem PC (Ver 3.6, Scanalytics;. Fairfax, VA). Die Bilder wurden mit entweder 100 × (1,3 NA) oder 60 × (1,25 NA) Öl Linse oder eine auf dem PC × (0,9 NA) Luftlinse und gespeichert 40 genommen. Emissionsfilter verwendet wurden, waren 405, 490 und 570 nm. Die Schnitte wurden auch eine Nikon konfokalen Mikroskop (Nikon A1 konfokalen Eclipse-Ti) angesehen werden. Die Ziele verwendet wurden, waren 100 × (1,4 NA) Öllinse bei 425, 488 und 561 nm. Ähnliche Ergebnisse wurden in Immunofluoreszenz-Distributionen mit diesen beiden unterschiedlichen Systemen beobachtet.

Bildanalyse von Verteilung von PKC /CPI-17 der einzelnen Zellen in Geweben

Profile der Fluoreszenzintensität wurden für die einzelnen Zellen aufgenommen in Quergewebeschnitten. Die Schnitte wurden bei geringer Vergrößerung (10-20x) beobachtet Bereiche scheinbarer Artefakte zu vermeiden (tissue Faltung, Frostschäden, etc.). In einem artefaktfreien Bereich wurde die Vergrößerung auf 40-100x erhöht, und Bilder wurden bei diesen höheren Vergrößerungen genommen. Drei verschiedene Bereiche innerhalb eines Gewebeschnitts wurden ausgewählt, um Bilder aufzunehmen. Z-Stapelreihe wurden individuell für jeden der drei Farbkanäle verwendet genommen. 1 um dicke Z-Schnitte wurden genommen, und 15-25 Z Abschnitte wurden für jeden Gewebeschnitt (Figuren S1 & S2 zeigen Z-Stack Beispiele für CPI-17-Immunreaktivität in Antrum mit und ohne Gewebeaktivierung) entnommen. Jedes Z-Stack-Serie wurde für jeden Abschnitt untersucht die Mitte z Bild zu identifizieren, und dieses Bild wurde umgewandelt a.bmp Datei, die sich auf NIS-Elements AR 3.0 (Nikon) auf einem PC importiert wurde, um die Daten zu analysieren.

Profile von PKCα und Phalloidin Fluoreszenzintensität wurden für einzelne Zellen in Gewebeschnitten quer erhalten. Eine Linie wurde über die Mitte des Bildfeldes gezogen. Zehn durch die Linie gekreuzt Zellen wurden für die Messungen ausgewählt. Aufgrund unserer bisherigen Protokolle [25], den ersten fünf Pixeln (~0.7 &mgr; m) auf jeder Seite der Zelle, wo die Phalloidin Intensität stark von der Basislinie erhöht wurden als die Peripherie der Zelle definiert. Für cytosolische Messungen wurde eine Linie, die mindestens 2 &mgr; m entfernt von der Zellperipherie angeordnet. Intensitätsmessungen wurden unter Verwendung eines Bereichs von Interesse (ROI) in etwa in der Mitte der Zelle (für cytosolische Messungen) hergestellt, oder entlang der Membran der Zelle (für periphere Messungen). Aus Gründen der Konsistenz wird die Größe des ROI konstant gehalten für die peripheren und cytosolische Messungen. Zellen in dem Abschnitt mit sehr kleinen Durchmessern oder mit Kernen vorhanden (visible DAPI-Färbung in denen räumliche Beschränkungen und perinukleären Organellen könnte die Verteilung vermengen) (nicht in der Lage cytosolischen ROI mindestens 2 um von der Peripherie zu messen) wurden von der Analyse ausgeschlossen. Für PKCα, das Verhältnis der durchschnittlichen Intensität von PKCα am Umfang über die gesamte PKCα Intensität (Summe von PKCα Intensität von ROI am Umfang und ROI in Cytosol) verwendet. Zehn Zellen pro Feld und drei verschiedene Felder wurden für die Datenanalyse für die einzelnen Gewebebereich einer Messung unterzogen, d.h. dreißig Zellen wurden gezählt und gemittelt für jede Probe (n = 1). Die endgültige Probengröße wurde n = 5. Die gleichen Verfahren wurden angewendet, um die Intensität des CPI-17 zu messen, mit der Ausnahme, dass nur ein Feld von 10 Zellen für jede Probe verwendet wurden (n = 1), mit einer endgültigen Probengröße von n = 3.

Mechanische Messungen

Unmittelbar vor der Verwendung wurden Gewebe Streifen geschnitten und an jedem Ende eingespannt ist, mit den Klammern zwischen den Haken an einem feststehenden Metallstab und einem isometrischen Kraftwandler (Harvard Apparatus gesichert, Holliston, MA), in PSS mit 95% O _{2/5% CO 2 in Wassermantel Muskelkammern (Radnöti Glass Technology, Monrovia, CA) bei 37 ° C. Die Länge der einzelnen Streifen wurde durch Neupositionierung der stationären Metallstab variiert.}

glattem Muskelgewebe Streifen (Magen Antrum und Fundus) wurden für 1 h ins Gleichgewicht gebracht und gestreckt, um eine passive Spannung annähert Lo eine verkürzte Länge Spannungskurve . Kontrahierungszwang Gewebe wurde PSS mit K ersetzt ^{+ - PSS (109 mM KCl ersetzt iso-osmotisch für NaCl) [28]. Die Muskelstreifen wurden wiederholt mit Dehnung des Gewebes zwischen jeder Aktivierung aktiviert, bis keine Spitzenkraft mehr eine deutliche Steigerung gegenüber der vorherigen Kontraktion zeigte. Die Kammern wurden dreimal mit PSS nach jedem Gewebe Aktivierung gespült. Mindestens zwei wiederholbare aufeinanderfolgende K + - PSS Kontraktionen wurden verwendet, um eine Standardkraft Spur mit einer 10 Minuten Pause vor dem Start des Experiments zwischen jeder Kontraktion zu erhalten. Die Gewebe wurden dann mit 1 &mgr; M Carbachol und entspannt wieder aktiviert, wie bei K + durchgeführt wurde - PSS Kontraktionen. Nachfolgende Kontraktionen enthalten alle 1 &mgr; M Phentolamin und Propranolol zu blockieren α- und β - adrenergen Rezeptoren sind. Im Anschluss an die letzte 1 &mgr; M CCh Kontraktion und waschen, wurden die Gewebe mit 1 uM PDBu aktiviert, um ihre mechanische Reaktion aufzeichnen.}

Die Analyse der Kräftedaten

Spannungssignale von Kraftaufnehmer wurden von PowerLab digitalisiert 400 oder 4 SP-Hardware (ADInstruments, Castle Hill, Australien) auf einem Computerbildschirm (Chart v3.6 oder 4.0, ADInstruments) sichtbar gemacht, wie Kraft (g) bei 10 Hz und per Softwarebefehl auf eine Festplatte für spätere Analysen gespeichert. Die Zahlen wurden mit dem Tabellenkalkulationsprogramm Excel 2000 (Microsoft, Redmond, WA) gemacht.

Gelelektrophorese und Western Blotting

Die Proteinexpression analysiert wurde, wie zuvor beschrieben [29]. Die Gewebe wurden bei 50 mg /ml in 0,125 M Tris, 2% Natriumdodecylsulfat (wt /vol), 20% Glycerin, 0,1% Bromphenolblau (wt /vol) und 20 mM Dithiothreitol homogenisiert. Proteine ​​wurden gelöst auf niedriger Vernetzungs Natriumdodecylsulfat Gelen [30] und Immunoblotting wurde durchgeführt wie zuvor beschrieben [31]. Der PKCα Antikörper entweder ein einzelnes Band oder häufiger ein Dublett bei ~76 kD anerkannt, während die CPI-17-Antikörper eine einzelne Bande bei etwa 17 kD anerkannt. Diese Größen sind konsistent mit der erwarteten Größe für diese Proteine ​​basierend auf Gelmobilität. Um die Genauigkeit der Western-Blots zu gewährleisten, wurden Belastungskurven für beide Magenfundus und Antrum Proben über einen 5-fachen Bereich von Ladungen (4-20 ul) für Aktin (Coomassie-Blau-Färbung) und PKCα und CPI-17 (Western-Blot) durchgeführt . Die Ergebnisse zeigten eine lineare Beziehung über diesen Bereich für alle drei Proteine ​​aus beiden Geweben (R ^{2 > 0,98 für alle Ergebnisse, n = 3). Die Quantifizierung von PKCα und CPI-17-Protein-Expression wurde auf Western-Blots durchgeführt 5-10 ul Ladungen verwenden, die in diesem linearen Bereich war (n = 6).}

Statistik

Statistische Vergleiche wurden durchgeführt mit MINITAB (Minitab Inc. State College, PA). Eine eine Probe t-Test wurde verwendet, um die Verteilung von PKCα /CPI-17 zu testen (eine periphere zu insgesamt ROI-Gehalt von 0,5 weist auf eine "einheitliche" Verteilung in glatten Muskelzellen (SMCs)) in Antrum und Fundus unter Ruhezustand. Eine Möglichkeit, ANOVA wurde durchgeführt, für PKC /CPI-17 Verteilung Unterschiede für die beiden Gewebe mit unterschiedlichen stimulierenden Parameter zu testen. Zwei Stichproben-t-Tests wurden verwendet, um die Bedeutung der Differenz für Expression von PKCα oder CPI-17 in Antrum und Fundus zu testen. A two-tailed F-Test auf Gleichheit von zwei Standardabweichungen (SD) bestimmt PKCα eine signifikant niedrigere SD im Verhältnis von Caveolin wenn sie auf die SD des Verhältnisses von Vinculin zu PKCα verglichen. Ein Wert von P < 0,05 wurde für alle statistischen Tests als signifikant angesehen. Keine statistischen Tests wurden an den Kraftdaten durchgeführt und Figur 1 ist repräsentativ für ähnliche Daten aus 6 verschiedenen Tieren. Western-Blot-Daten von sechs Tieren. PKCα Verteilungsdaten ist ein Durchschnitt von dreißig Zellen gemessen pro Tier und fünf Tieren getestet wurden. CPI-17 die Verteilung von Daten ist ein Durchschnitt von 10 Zellen gemessen pro Tier und drei Tieren getestet wurden. Protein-Co-Lokalisationsdaten basiert auf einem 'n' von mindestens 20 Zellen, die aus mindestens drei Tieren.

Ergebnisse

• PLoS ONE: Nikotin Dämpft Aktivierung von Gewebe Makrophagen in der Maus Magen durch den β2 nikotinischen Acetylcholin Receptor
• PLoS ONE: Chirurgische Behandlung für Patienten mit Krukenberg Tumor des Magen Herkunft: Clinical Outcome und prognostische Faktoren Analysis