PLOS ONE: Mage Temperatur Records Reveal Nursing Beteende och Övergång till fast föda Konsumtionen i en Diande däggdjur, hamnen Seal Pup (Phoca vitulina)

Abstrakt

Kunskap om mjölk överföring från mor till avkomma och tidigt fast mat intag hos däggdjur ger en större förståelse för de faktorer som påverkar övergången till närings oberoende och före avvänjnings tillväxt och överlevnad. Ändå studier övervakning diande beteende har ofta förlitat sig på visuella observationer, som kanske inte ger en rättvisande mjölkintag. Vi bedömde att använda magen temperatur telemetri för att övervaka diande och födosöksbeteende i frigående knubbsäl ( Phoca vitulina
) valpar under amning. Mage temperaturen sjunker analyserades med hjälp av huvudkomponent och klusteranalyser, liksom försök med simulerade magar som resulterar i en exakt klassificering av magen temperaturen sjunker till mjölk, havsvatten och fasta livsmedel intag. Havsvatten och fasta livsmedel intag representerade i genomsnitt 15,3 ± 1,6% [0-40,0%] och 0,7 ± 0,2% [0-13,0%], respektive, individuella intag. Totalt inträffade 63,7% av mjölk intag medan valparna var i vattnet, varav 13,9% föregicks av havsvatten förtäring. Den genomsnittliga tiden mellan efterföljande intag var betydligt mindre för havsvatten än för mjölk intag. Dessa resultat tyder på att havsvatten intag kan representera säkerheter intag under diande försök vatten. Alternativt, som fasta livsmedel intag ( n
= 19) observerades bland 7 valpar, kan havsvatten intag resultera från missade bytes fånga försök. Denna studie visar att vissa knubbsälar börjar intag byte medan det fortfarande är vårdade, vilket tyder på att avvänjning sker mer gradvis än man tidigare trott i denna art. Mage temperatur telemetri representerar en lovande metod för att studera diande beteende vilda däggdjur och övergången till närings självständighet i olika endoterma arter

Citation. Sauvé CC, Van de Walle J, Hammill MO, Arnould JPY, Beauplet G (2014 ) magen Temperatur Records Reveal Nursing Beteende och Övergång till fast föda Konsumtionen i en Diande däggdjur, hamnen Seal Pup ( Phoca vitulina
). PLoS ONE 9 (2): e90329. doi: 10.1371 /journal.pone.0090329

Redaktör: Yan Ropert-Coudert, Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, Frankrike

Mottagna: 17 september 2013, Accepteras: 29 januari 2014. Publicerad: 26 februari 2014

Copyright: © 2014 Sauvé et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Detta arbete stöddes av naturvetenskaplig och teknisk forskning Council of Canada (URL: http://www.nserc-crsng.gc.ca/index_fra.asp; beviljar nummer 355.536 till 2008, från 358.856 till 2008, från 390.930 till 2010 till GB och 431802- 2012 till CCS); och Fonds de recherche Nature et Technologies du Québec (URL: http://www.fqrnt.gouv.qc.ca/; licensnummer 2010-NC-132.906 till GB). Québec-Océan (URL: http://www.quebec-ocean.ulaval.ca/) och Canadian Department of Fisheries och Oceans (URL: http://www.dfo-mpo.gc.ca/index-eng. htm) gav vetenskapligt och logistiskt stöd under hela projektet. Fiskeri- och ocean Kanada bidrog till datainsamling och manuskript förberedelse via expertis MO Hammill, P Carter, J-F Gosselin och S Turgeon. Utöver detta, hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet
finansiärerna

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Inledning

under perioden föräldraledig beroende, avkomma tillväxt och överlevnad är beroende av föräldrarnas närings provisioning, främst bestäms av modersmjölk överföring i däggdjur [1], [2]. Vid närings självständighet, avkomma överlevnad är beroende av miljöförhållanden, befolkningstäthet, kroppens reserver och förmåga att föda effektivt i en viss miljö [3], [4], [5], [6], [7]. En sådan markant förskjutning av de faktorer som påverkar avkomman överlevnad gör övergången till närings oberoende en kritisk process i livet historien om vilda djur [1], [8], [9].

Studiet av omvårdnad och födosökande beteende hos däggdjur innehåller viktig information relaterad till överföring av energi från mor till avkomma, liksom övergången till närings självständighet. Sälar (phocids, otariids och valrossar) är en utmärkt modell för jämförande studier av diande beteende och övergång till närings självständighet eftersom kvinnor föder enda ung, är fylogeni acceptabelt upprättas mellan familjer [10], och differential parning och moderns strategier är väl dokumenterade mellan de två stora familjer [11]. Bland phocids (sanna tätningar), kvinnor vanligtvis snabbt på land under en kort (4-50 d
) amningsperioden [11], [12]. Avvänjning anses vara abrupt i phocids och följs av en fasteperiod under vilken fysiologisk utveckling fortsätter och födosök färdigheter förbättras [12], [13], [14], [15]. I otariids (pälssälar och sjölejon), kvinnlig växlar mellan episoder på land i första hand för omvårdnad och födosökande resor till sjöss [11], [16]. Otariid valpar börjar konsumera fast föda i slutet av laktationsperioden [12], [16], vilket gör övergången till närings självständighet mer gradvis otariids än i phocids. Trots dessa fylogenetiska distinktioner behöver honor av vissa phocid arter som inte följer den typiska phocid moderns strategi som de forage under amningsperioden [17], [18], [19], [20,]. Följaktligen knubbsäl honor åtar foraging resor till havs utanför den första veckan av amning [19], [21]. Denna "otariid-typ" moderns strategi tros bero på oförmåga kvinnor att lagra tillräckligt med energi och stöd mjölkproduktion under amningsperioden [11]. Harbour sälungar är också exceptionellt bland phocids eftersom de tar till vattnet strax efter födseln [22], [23], [24], utföra dyk som vanligtvis förknippas med föda innan avvänjning [24] och ibland följa med sin mamma till havs under födosökande resor [23]. Det är dock allmänt att avvänjning i denna art är abrupt som i de flesta phocids [25].

Studier undersöker diande beteende har förlitade sig främst på direkta observationer [26]. Men visuella observationer av frigående djur ofta begränsad till dagsljus och påverkas av väderförhållanden, ställning observatören, och tillgång till ammande platser. Nattliga och undervattens diande händelser har rapporterats hos många däggdjursarter ( t.ex.
. [27], [28], [29], [30]). Dessutom kan skanna frekvenser inte vara representativa för diande framgång [31], [32], vilket hindrar korrekt karakterisering av vårdmönster. Även har bedömts energierna amning med hjälp av indirekta metoder såsom isotoputspädning och dubbelmärkt vatten i flera arter ( t.ex.
. [33], [34], [35], [36], [37 ], [38]), sådana metoder bara ge information om genomsnittliga energiöverföring mellan två tidpunkter.

Mage temperatur telemetri har utvecklats och i stort sett används för att övervaka födosöksbeteende marina endoterma rovdjur ( t.ex.
, [39], [40], [41], [42], [43]). Eftersom deras kroppstemperatur är högre än för deras offer, matkonsumtion av endotermer livnär sig på svalare objekt resulterar i en mage temperaturvariation som kännetecknas av en brant nedgång och efterföljande exponentiell ökning (PDER händelse, [39]). På samma sätt är mjölkkörtlar ligger i dermis vävnad, som är kallare än djuret kärntemperatur ( t.ex.
. [44]). Suckling resulterar därför i en PDER händelse hos avkomman magen Temperatur [28]. Mage temperatur telemetri har visat sig vara en värdefull teknik för att upptäcka diande händelser i både fångenskap [28] och frigående [29] hamn sälungar, som representerar en lovande metod för att studera omvårdnad beteende i olika vilda däggdjur. Tolkningen av data magen temperatur från ammande däggdjur kräver en valideringsteknik för att diskriminera de PDER händelser i samband med diande från de som orsakas av havsvatten eller fast föda. Modersmjölk, havsvatten och ectothermic organismer har olika temperaturer och /eller termodynamiska egenskaper så att deras intag borde ge upphov till distinkt PDER curve mönster (Fig. 1). Förtäring av modersmjölk från sälungar har visat sig resultera i PDER händelser betydligt lägre amplitud jämfört med havsvatten eller byte förtäring [28], [29]. På liknande sätt har havsvatten större värmeledningsförmåga och lägre viskositet än byten ( t ex.
Fisk), vilket resulterar i PDER händelser med snabbare återhämtning magen Temperatur [45], [46]. Följaktligen har mjölkintag tidigare skiljer sig från intag av kallare material i hamnen sälungar baserade på graden av magen temperatursänkning [28], [29]. På samma sätt har ett index av temperaturåtervinningsgraden tidigare utvecklats för att effektivt skilja fiskkonsumtionen från havsvatten dricka hos vuxna sälar och sjöfåglar [41], [47]. Genom att kombinera dessa två metoder kan diskriminering mellan de tre möjliga intag typer (mjölk, havsvatten och fast föda) därför vara möjligt i ammande valpar. En sådan diskriminering är av största vikt att noggrant undersöka vård beteende och övergång till närings självständighet hos däggdjur.

Huvudsyftet med denna studie var att tillhandahålla en metod för att effektivt diskriminera de tre möjliga intag typer (mjölk, havsvatten och fast föda) hos ammande däggdjur som livnär sig på svalare objekt. Vi antar intag typer kan särskiljas baserat på egenskaperna hos de PDERs de genererar genom att använda en kombination av multivariat dataanalystekniker och laboratorie magen simuleringar [28], [46]. Som havsvatten intag var ofta observerats i magen temperatur poster från ett litet urval av frigående hamn sälungar [29], testade vi också olika hypoteser förklarar havsvatten konsumtion av på förhand avvanda valpar. Vi förväntade oss att om valparna dricker havsvatten när uttorkad, förekomst av havsvatten intag skulle vara positivt korrelerad med den tid som förflutit sedan den senaste mjölkintag. Alternativt, om havsvatten intag representerar en följd av vattens diande försök, skulle det sannolikt att följas av en efterföljande intag strax efter. Slutligen undersökte vi förekomsten av pre-avvänjning fast livsmedelskonsumtion i hamn sälungar.

Material och metoder

Etik uttalande

djurhantering förfaranden godkändes av Animal Care kommittéer Université Laval (tillstånd nummer: 200844 och 2011020) samt fiske och hav Kanada (tillstånd nummer: IML 2010-030, IML 2011-004, och IML 2012-003) katalog

djurhantering och instrumentering <. br>

Denna studie genomfördes på Bic Island knubbsäl koloni (48 ° 24 'N, 68 ° 51' V), som ligger runt en privat ö i St Lawrence-floden mynning, under 2010-12 häckningssäsonger . Harbour sälungar fångades med en lång dopp netto [48] under amningsperioden (från mitten av maj till juli). Vid första fånga, valp kön, naveln tillstånd och massa (± 0,5 kg, Salter våren skala, West Bromwich, England) registrerades. För att underlätta återerövrar har personer märkta med en färgad och numrerade head-taggen (Seal Hat, Dalton, England) limmade (LoctiteƦcyanoakrylatlim och˩2 Accelerator, Loctite Corp., Mississauga, ON, Kanada) på huvudet och taggade med en unik numrerad tag i en hind flipper (Jumbotag, Dalton, England). Återerövrar av valpar utfördes så ofta som möjligt tills avvänjning, med en 48 h minimiintervall mellan successiva fångar.

Eftersom de flesta valpar inte fångades omedelbart efter förlossning har två indirekta metoder för att uppskatta valp ålder (d) . När det gäller mycket unga valpar, var ålder bestämmas i enlighet med naveln degeneration stadier [48], [49], [50]. I äldre valpar, var individer vägde mer än en gång under säsongen och ålder bestämdes genom back-beräkning födelse massan med hjälp av en genomsnittlig tillväxttakt för kohorten (beskrivs i [51]).

För att kontrollera magen temperatur förändringar, frigående valpar var utrustade med magen-temperatur pills (STP, icke-modifierad STP3: 32 g, 6,3 cm x 2,2 cm; djurliv Computers Inc., Redmond, WA, USA) infördes genom intubation med användning av en smord (KY Jelly , Johnson &Johnson, New Brunswick, NJ, USA) 2,54 cm diameter flexibel slang in i magen [29]. Var 10 sekunder, var STP uppgifter överförs till en tids djup recorder (TDR, MK10-L, Wildlife Computers Inc.) limmade (5-Cure marinepoxi, Industri Formulerare, Auburn, WA, USA) till valpens rygg päls [ ,,,0],29]. Vi utförde laboratorietkalibreringstester av STP (se [28] för protokoll detaljer) som indikerade en genomsnittlig svarstid på 18 ± 2 s (intervall: 10-27 s) på grund av fördröjningen mellan STP utsläpp och TDR mottagning av temperaturdata. Förutom att underlätta omplacering för recapture var en VHF-sändare (3PN, Sirtrack ltd., Havelock North, Nya Zeeland) också limmas på valpens nacke. Data från enheter fortfarande fäst till djuret laddades ner i fältet vid varje återta med hjälp av en bärbar dator. Hantering överskridits sällan 15 minuter från fångst att släppa.

Databehandling, analys och magen temperatursimuleringar

All databehandling och statistiska analyser utfördes inom R miljön [52], om inte annat anges . Mage temperaturdata (± 0,1 ° C) extraherades från TDR använder Mk10host v1.25.2006 programvara (Wildlife Computers Inc.). Eftersom viktiga intra- och interindividuella variationer i magen temperaturposter förhindrade användning av automatiserade metoder för att identifiera intag ades PDER händelser identifieras visuellt. En genomsökning av magen temperaturen avsatt mot tiden (med Instrument Helper v3.0, Wildlife Computers Inc.) utfördes på varje fil för att lokalisera PDER händelser, definierad som skarpa droppar i magen temperatur på minst 2 standardavvikelser från medeltemperaturen beräknas över föregående 10 min, följt av en exponentiell formad temperaturökning. PDER händelse egenskaper har tidigare beskrivits för havsvatten, byte (vuxna) och mjölk intag ( t.ex.
. [28], [29], [40], [47], [53]). Varje PDER händelse därför preliminärt tilldelas en intag typ ( dvs
mjölk, havsvatten eller fast föda) baserad på amplituden av minskningen och form av återhämtningskurvan (konvex, konkav eller pseudo-linjär, i samband med mjölk fasta livsmedel och havsvatten intag, respektive) visas i temperatur register (Fig. 1B). Även subjektiv denna kategorisering fungerade som en tillförlitlig kriterium för jämförelser av resultaten från följande objektiva klassificeringsmetoder.

För att statistiskt klassificera temperaturen sjunker i de olika intag typer har tre punkter definieras för varje PDER händelse (Fig. 1A, [47], [53]): ( A
) den punkt som föregår uppkomsten av temperatursänkning ( dvs
innan temperaturen sjunker till eller under den tidigare medeltemperaturen (beräknat över. 10 min) minus 2 standardavvikelser (SD); [42]); ( B
) den punkt där den lägsta temperaturen har uppnåtts; och ( C
) den punkt efter vilken temperaturen når stabilitet (± 1 S.D.) i minst 10 minuter. Sex variabler därefter beräknas för varje PDER händelse: (1) amplitud temperaturfall, T _{A-T B
; (2) längd temperaturfall, t B-t A
; (3) temperatur vid halvvägs temperatur återhämtning, T 0,5
där (1) (4) längd från punkt A
till halvvägs temperatur återhämtning, t 0,5
; (5) ett index för temperaturåtervinningsgrad, I
[41], [47] där (2) och (6) graden av temperatursänkning, D där
(3)}

PDER händelser som var svåra att skilja från naturliga kroppstemperaturvariationer noterades så lågt förtroende PDER händelser. Dessa inkluderar temperatur droppar amplituder mindre än 0,7 ° C, eller temperaturen sjunker presentera liknande öka och minska priser eller andra egenskaper inte helt överensstämmer med PDER händelsedefinition [39], [46]. På grund av sina ovanliga form egenskaper, kan de tidigare detaljerade variabler som härrör från låga förtroende PDER händelser inte vara representativa för typiska PDER händelser. På samma sätt, när mer än en mage temperaturfall inträffade innan stabilitet uppnåddes, var de överlappande PDER händelser behandlas tillsammans och definieras som flera PDER händelser [46]. För dessa särskilda händelser, pekar A
, B Mössor och C
bara präglat större droppe av matchen. Men Wilson et al
. [46] fann att STP svar var mindre variabel under första intag jämfört med de efterföljande intag av matchen. Därför variablerna beräknade för flera PDER händelser inte är representativa för typiska PDER händelser antingen och bör behandlas separat. Klustringsmetoder är starkt påverkas av extremvärden. För att säkerställa bildandet av PDER händelsegrupper som korrekt återspeglar de naturliga variationerna i intag beteende har lågt förtroende och flera PDER händelser uteslutna från klusteranalys.

Genom att bara använda de kvarhållna PDER händelser, en principalkomponentanalys (PCA ) utfördes på de centrerade och skalade värdena för de 6 variabler för att generera okorrelerade faktorer som en Varimax rotation (paketet psyk
; [54]) har tillämpats. Faktorer med egenvärden > 1 (Kaiser kriterium) behölls och deras värderingar användes för att utföra en hierarkisk, komplett bindning klusteranalys. Detta tillvägagångssätt gjorde bestämningen av lämpligt antal kluster som finns i datamängden med hjälp av fusionsnivån värden kriteriet [55] samt identifiering av klustercentra. Dessa centra infördes som första frön i en icke-hierarkisk K-means klusteranalys som upprepas tills centrumvärden blev konstant [56]. Kategoriseringen av PDER händelser genom K-medel kluster förfarande jämfördes med deras subjektiva visuella klassificering för att avgöra om de olika grupperna erhållna sammanföll med en specifik intag typ ( dvs
mjölk, havsvatten eller fast föda).

för att ytterligare öka vår effektivitet att skilja mellan konsumtion av vatten och fast föda, var intag artificiellt simulerade. En STP sattes in i en ballong och nedsänktes i ett cirkulerande vattenbad som hålls vid en medeltemperatur simulerar pup mage (37,8 ° C; [28]). Vatten eller fisk (cut, icke-urtagen sill) hölls vid 12,0 ° C, den högsta vattentemperaturen registreras i studieområdet under amningsperioden (St Lawrence Global Observatory, Rimouski Station, 2010-2012). Objekt injicerades sedan in i ballongen under användning av en 530 ml sug pistol och förblev på plats medan de värmas till temperaturen hos vattenbadet. Att efterlikna temperaturfallet mönster som förväntas av ett frigående valp mage, har simuleringar med användning av olika mängder vatten (25-125 g) och fisk (30-300 g). Eftersom syftet med dessa simuleringar var att belysa skillnader i egenskaper temperaturen sjunker genereras av vatten och fisk intag, var den absoluta graden av material uppvärmningen inte viktigt. Inga försök gjordes att imitera värmeledningsförmåga och blandnings mönster av en valp mage. Följaktligen var PDER händelser från laboratoriesimuleringar som kännetecknas av större temperaturen sjunker, följt av långsammare uppvärmningen än de som skulle registreras i levande djur. Eftersom skillnader i PDER händelser upptäcktes i simulera havsvatten och fisk intag, kan relativa jämförelser mellan dessa olika intag typer ändå tillämpas på PDER händelser som extraherats från frigående valpar "inspelningar.

För varje experimentellt genererade PDER händelse , 6 variabler som beskrivs ovan beräknades, centrerad och skalad, och infördes i en linjär diskriminantanalys (LDA, paketet MASSA
, [57]) där mängden (g) av injicerade materialet tillsattes som en 7 ^{th variabel. Variabeln med den högsta linjära diskriminantanalys koefficient ansågs som den bästa prediktorn för materialet (vatten eller fisk) som orsakade temperaturfallet [58]. En distributions tomt på denna variabel framställdes därefter för PDER händelser som registrerats på frigående valpar (utom lågt förtroende och flera PDER händelser). Detta möjliggjorde identifiering av avbrott i distributionen som reflekterade olika förtäring typer. PDER händelser därefter klassificerad baserat på deras relativa position inom distribution av den bästa prediktorn variabel av de två icke-mjölkintag typer (havsvatten eller fast livsmedel).}

De resulterande klassificeringar från båda metoderna i kombination med det preliminära visuell klassificering, jämfördes och slås samman för att bilda de tre sista grupperna heter enligt den beräknade intag typ de representerade ( dvs
. mjölk, havsvatten och fast föda). Dessa slutliga kategorier användes som gruppera faktorer för att utföra en LDA på klassificerade ( dvs
enda och högt förtroende) PDER händelser med samma 6 förklaringsvariabler som tidigare använts i klusteranalys. Det prediktiva funktion som genereras av LDA användes därefter för att klassificera de låga förtroende och flera PDER händelser som tidigare varit utestängda från båda klassificeringsmetoder. Detta förfarande ledde alla PDER händelser som ska klassificeras som mjölk, havsvatten, eller fasta livsmedel intag.

Flera faktorer undersöktes för att förklara havsvatten och fast föda intag i förväg avvanda valpar. Individuell tillväxttakten beräknades som koefficienten för en allmän linjär modell på massa och ålder före beräknad avvänjningsåldern (okänd ≤33 d, [48]). Den "halade-out" eller status av valparna "i vatten" bestämdes för varje kännetecknas PDER händelse med hjälp av våt /torr tröskeln deras TDR. Den tid som förflutit sedan den senaste mjölkintag, tid förflutit sedan den senaste intag oavsett intag typ, tid som förflutit tills nästa mjölkintag och förfluten tid till nästa intag beräknades för varje PDER händelse och de medel som jämfördes för varje intag typ.

När det är lämpligt, var normalitet testades med Shapiro-Wilk test och homogenitet av varians med en Levene test på organ (paketet bil
, [59]). När normala kriteriet inte respekterades, randomisering tester (rand-test; modifierats [60]) med 5000 permutationer användes i stället för t-tester
att jämföra statistik mellan grupper. Resultat ansågs signifikanta vid P < 0,05 och presenteras som medelvärden ± standardavvikelser (se), om inte annat anges

Resultat

PDER händelser i frigående valpar och deras preliminära klassificering

totalt 40 frigående valpar var instrumente. Av dessa 35 förutsatt användbara data (tabell 1), vilket gav en total varaktighet av 565 d magen temperaturregistreringen, med en individuell genomsnittlig löptid på 16,1 ± 0,9 d och totalt 1776 PDER händelser. Den genomsnittliga antalet PDER händelser per dag per valp var 3,1 ± 0. 3, med betydande inter-individuella variationer (intervall: 0.6-4.7 PDER händelser per dag). Bland de identifierade PDER händelser, 354 uppvisade amplituder < 0,7 ° C (men ≥0.3 ° C) medan 142 hade ovanliga kurvformer och därmed klassificerats som lågt förtroende PDER händelser. Dessutom, 13 ansågs som multipla PDER händelser, vilket resulterar i 1267 enkel- och högt förtroende PDER händelser.

Kännetecken för de ingående faktorerna som erhållits från PCA presenteras i tabell 2. Enligt Kaisers kriterium, 2 faktorer från PCA förklarade 80,3% av den totala variansen och därefter bibehållas. Dessa faktorer infördes i Varimax rotation, som inte påverkar den andel av den totala variansen förklaras, men utjämnas dess fördelning mellan de båda faktorerna. Medan en faktor uppvisade viktiga belastningar för variabler relaterade till varaktigheten av PDER händelser variablerna i samband med temperaturen sjunka tungt lastad på den andra faktorn (tabell 3). Detta tyder på att de två faktorerna gjorde för olika variabler i enlighet med PDER händelser "axelegenskaper. Dessutom avslöjade maximal sannolikhet faktoranalys att de två faktorerna som härrör från den roterade matrisen var tillräckliga i modellen (fit = 0,98, χ ^{2 Review = 662,55, P Hotel < 0,001), stödja deras bevarande för vidare analys. De absoluta värdena för de standardiserade belastningar var > 0,30 på åtminstone en faktor för de sex variabler, vilket indikerar att alla av dem var relevant i PCA (tabell 3, [61]) katalog}

Poäng för två. faktorer för var och en av de 1267 PDER händelser beräknades från den roterade matris och introducerades som variabler i den hierarkiska komplett bindning klusteranalys. Enligt värdet kriteriet fusions nivå, det optimala antalet kluster som finns i data var k
= 5, eftersom det var det första värdet av k
vid vilken ett litet hopp i tomten av nod höjd mot antalet kluster observerades (fig 2;. [55]). Den hierarkiska klusteranalys dendrogram således skära på k
= 5, och medlen för faktorer komponent för varje kluster användes som initiala frön i en icke-hierarkisk K-means klusteranalys (Fig. 3).

När PDER händelser från de resulterande grupperna jämfördes med deras preliminära visuell klassificering, tre grupper innehöll en hög andel av PDER händelser som identifierats som mjölkintag (grupp 1: 87,7%, grupp 3: 99,6% och grupp 5: 100%; fig 3), medan två grupper var större delen består av händelser som identifierats som antingen vatten eller fasta livsmedelsintag (grupp 2:. 99,2% och grupp 4: 100%). Klusteranalysen inte tillåter diskriminering mellan havsvatten och fasta mat intag, men båda förtäring typerna kan effektivt skiljas från mjölkintag, med en total skillnad på 3,9% mellan multivariat analys och den visuella klassificeringsmetoden.

Förtäring simuleringar och korrigerade klassificering av PDER händelser

Alla injektioner av vatten och fisk i den simulerade magar resulterade i plötsliga, följt av en exponentiell ökning av temperaturen som registrerats av STP. Resulterande koefficienterna linjära diskriminanter från LDA på 7 variabler (tabell 4) identifierade I
index som den mest effektiva gruppen prediktor. I
index beräknas för vatteninjektioner var signifikant (rand-testet, P
= 0,002) lägre än för fisk injektioner. Därför I
index distribution avsattes för PDER händelser som klassificeras i grupp 2 och 4 ( n
= 195; vatten och fasta livsmedel intag). Såsom visas i fig. 4, en tydlig diskontinuitet var närvarande i distributionen, med en densitet lika med noll för I
värden som sträcker sig från 77,3 till 108,3 s ° C ^{-1. Den preliminära visuella klassificeringen av PDER händelser från grupperna 2 och 4 med I
värden > 92,8 s ° C -1 (mittpunkt nollområde I
fördelning , se fig 4,. n
= 13) uppgav att de troligen uppstod från fasta livsmedel intag, medan PDER händelser har I
värderingar lt; 92,8 s ° C -1 var mestadels visuellt klassificeras som havsvatten intag.}

eftersom mjölk intag förväntas producera större i
värden jämfört med fasta livsmedel intag (se fig. 1B), PDER händelser från alla grupper med jag
värden lägre än 92,8 s ° C ^{-1 ( n
= 251) klassificerades som havsvatten intag. Däremot PDER händelser med I
värden större än 92,8 s ° C -1 kategoriserades som fasta livsmedel intag ( n
= 13) när tilldelas grupperna 2 eller 4, och som mjölk intag ( n
= 1003) när tilldelas grupperna 1, 3 eller 5 av klusteranalys.}

de resulterande linjära diskriminanter från LDA utförs på 1267 PDER händelser som klassificeras som högt förtroende och enda presenteras i tabell 5. den resulterande prediktiva funktion får klassificeringen av de återstående 517 flera eller låga förtroende PDER händelser med 98,3% av enlighet med preliminära visuell klassificering. Som ett resultat var alla 1776 PDER händelser klassificeras antingen mjölk ( n
= 1478), havsvatten ( n
= 279) eller fasta livsmedels intag ( n
= 19). Den totala avvikelsen i gruppskrivning mellan den kombinerade statistisk analys och den preliminära visuella klassificeringen var 2,4%, och berodde främst på PDER händelser från grupp 1 (Fig. 3) som visuellt ansågs vara fasta mat intag, även om klassificeras som mjölk intag av den statistiska metoden.

Förtäring kategorier och konsumtionsbeteendet

Medan havsvatten och fast föda intag representerade 15,7% och 1,1% av alla PDER händelser, respektive, den relativa betydelsen av varje intag typ varierade avsevärt bland individer (Tabell 6). Inte överraskande, mjölk representerade den vanligaste intag typ för alla valpar, med den relativa andel av de totala individuella intag varierar 60,0-100% (medelvärde = 84,1 ± 1,7%). Havsvatten intag över individer varierade från 0 till 40,0% (medelvärde = 15,3 ± 1,6%) av PDER händelser, medan fast föda representerade 0-13,0% (medelvärde = 0,7 ± 0,2%) av den totala intag mellan individer. Alla utom en individ intas havsvatten åtminstone en gång under registreringsperioden. Sammanlagt 19 fasta livsmedel intag upptäcktes bland 7 valpar. Bland dessa valpar, var 9 fasta livsmedel intag inspelad i en enda individ medan bland de andra 6 djur fast föda intogs på ≤3 tillfällen.

Sammantaget valpar var i vattnet under 63,7% av mjölk intag av som 13,9% föregicks av en havsvatten förtäring händelse. Nästan alla (98,5%) av havsvatten intag inträffade när valparna var i vattnet. Dessutom valpar var vanligtvis kvar i vattnet när du utför den efterföljande intag efter en havsvatten intag (98,6% och 72,2% när dessa intag var havsvatten eller mjölk, respektive). Intressant nog valpar som intas fast föda uppvisade en större förekomst av vatten omvårdnad (mjölk intag medan valpen var i vattnet) än valpar som inte intar fast föda (P < 0,001; medel = 80 ± 4% och 54 ± 6%, respektive).

Mjölk intag inträffade under hela perioden för övervakning magen temperatur, medan den första identifierade konsumtionen av havsvatten och fast föda inträffade vid 4 och 12 dagars ålder, respektive. Såsom illustreras i fig. 5, var andelen intag associerade med diande minskade från 94,4% vid dag 1 till 77,4% vid dag 20, och vidare ökas upp till 90,0%, tills den beräknade avvänjningsålder (dag 33; [48]).

• PLOS ONE: Näringsämnen Differentiellt Reglera Nucleobindin-2 /Nesfatin-1 in vitro i odlade Mage Ghrelinoma (MGN3-1) Celler och in vivo i möss av hankön
• PLOS ONE: Kvantifiering av Kitinas mRNA-nivåer i människa och mus vävnader genom realtids-PCR: artspecifik Expression av Sura Däggdjur Kitinas i magen vävnader