PLoS ONE: Mage Temperatur Records Avslør Nursing Atferd og overgang til Solid matforbruket i en Unweaned Mammal, Harbour Seal Pup (Phoca vitulina)

Abstract

Kunnskap om melk overføring fra mor til avkom og tidlig fast mat inntak hos pattedyr åpner for en større forståelse av de faktorer som påvirker overgangen til ernæringsmessig uavhengighet og pre-avvenning vekst og overlevelse. Likevel studier overvåking diende atferd har ofte støttet seg på visuelle observasjoner, noe som kanskje ikke nøyaktig representerer melk inntak. Vi vurdert bruk av magen temperatur telemetri for å overvåke dier og beite atferd i frittgående steinkobbe ( Phoca vitulina
) valper under amming. Mage temperaturen avtar ble analysert ved bruk av hovedkomponenten og cluster-analyse, så vel som forsøk ved hjelp av simulerte magene som resulterer i en nøyaktig klassifisering av mage temperaturen faller inn i melk, sjøvann og bulk inntak. Sjøvann og bulk inntak som er representert i gjennomsnitt 15,3 ± 1,6% [0 til 40,0%] og 0,7 ± 0,2% [0 til 13,0%], henholdsvis, av de enkelte inntak. Samlet, 63,7% av melke inntak skjedde mens valpene var i vannet, hvorav 13,9% ble innledet av sjøvann inntak. Den gjennomsnittlige tiden mellom påfølgende inntak var betydelig mindre for sjøvann enn for melk inntak. Disse resultatene tyder på at sjøvann inntak kan representere sikkerhet inntak under vannlevende dier forsøk. Alternativt, som fast føde inntak ( n
= 19) ble observert mellom 7 valper, kan sjøvann inntak skyldes tapte byttedyr fangstforsøk. Denne studien viser at noen steinkobbe starte inntak byttedyr mens det fremdeles blir ammet, noe som indikerer at avvenning skjer mer gradvis enn tidligere antatt i denne arten. Magen temperatur telemetri representerer en lovende metode for å studere diende atferd ville pattedyr og overgang til ernæringsmessig uavhengighet i ulike endoterm arter

Citation. Sauvé CC, Van de Walle J, Hammill MO, Arnould JPY, Beauplet G (2014 ) magen Temperatur Records Avslør Nursing atferd~~POS=HEADCOMP og overgang til Solid matforbruket i en Unweaned Mammal, Harbour Seal Pup ( Phoca vitulina
). PLoS ONE 9 (2): e90329. doi: 10,1371 /journal.pone.0090329

Redaktør: Yan Ropert-Coudert, Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, Frankrike

mottatt: 17 september 2013; Godkjent: 29 januar 2014; Publisert: 26 februar 2014

Copyright: © 2014 Sauvé et al. Dette er en åpen-tilgang artikkelen distribueres under betingelsene i Creative Commons Attribution License, som tillater ubegrenset bruk, distribusjon og reproduksjon i ethvert medium, forutsatt den opprinnelige forfatteren og kilden krediteres

Finansiering:. Dette arbeidet ble støttet av naturvitenskap og Engineering Research Council of Canada (URL: http://www.nserc-crsng.gc.ca/index_fra.asp; bevilger nummer 355536-2008, 358856-2008, 390930-2010 til GB og 431802- 2012 til CCS); og Fonds de recherche Nature et Technologies du Québec (URL: http://www.fqrnt.gouv.qc.ca/; stipend nummer 2010-NC-132 906 GB). Québec-Océan (URL: http://www.quebec-ocean.ulaval.ca/) og Canadian Department of Fisheries and Oceans (URL: http://www.dfo-mpo.gc.ca/index-eng. htm) gitt vitenskapelig og logistisk støtte gjennom dette prosjektet. Fiskeri- og Oceans Canada bidratt til datainnsamling og manuskript forberedelse via kompetansen til MO Hammill, P Carter, J-F Gosselin og S Turgeon. Utover det, finansiører hadde ingen rolle i studiedesign, datainnsamling og analyse, beslutning om å publisere, eller utarbeidelse av manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklært at ingen konkurrerende interesser eksisterer

Innledning

i løpet av foreldrenes avhengighet, avkom vekst og overlevelse er avhengige av foreldrenes ernæringsmessig klargjøring, hovedsakelig bestemt av morsmelk overføring hos pattedyr [1], [2]. Ved ernæringsmessig uavhengighet, avhenger avkom overlevelse på miljøforhold, befolkningstetthet, kroppsreserver og evnen til fôr effektivt i et gitt miljø [3], [4], [5], [6], [7]. En slik markert dreining av faktorene som påvirker avkom overlevelse gjør overgangen til ernæringsmessig uavhengighet en kritisk prosess i livshistorien til ville dyr [1], [8], [9].

Studiet av pleie- og beite adferd hos pattedyr gir viktig informasjon knyttet til overføring av energi fra mor til avkom, samt overgangen til ernæringsmessig uavhengighet. Pinnipeds (phocids, otariids og hvalross) er en utmerket modell for komparative studier av diende atferd og overgang til ernæringsmessig uavhengighet siden kvinner føder én unge, er fylogeni akseptabel etablert mellom familier [10], og differensial parring og maternelle strategier er godt dokumentert mellom de to store familier [11]. Blant phocids (true sel), kvinner vanligvis raskt på land i løpet av en kort (4-50 d
) dieperioden [11], [12]. Avvenning anses å være brå i phocids og etterfølges av en fasteperiode i løpet av hvilken fysiologisk utvikling fortsetter og foraging ferdigheter er forbedret [12], [13], [14], [15]. I otariids (pelssel og sjøløver), hunner alternative mellom episoder på land primært for pleie- og foraging turer på sjøen [11], [16]. Otariid valper begynne å konsumere fast føde nær slutten av ammeperioden [12], [16], noe som gjør overgangen til ernæringsmessig uavhengighet mer gradvis i otariids enn i phocids. På tross av disse fylogenetiske distinksjoner, trenger kvinner i enkelte phocid arter som ikke følger den typiske phocid mors strategi som de fôr i løpet av ammeperioden [17], [18], [19], [20,]. Følgelig steinkobbe hunner foreta foraging turer på sjøen utover den første uken av amming [19], [21]. Denne "otariid-type 'mors strategi er tenkt å være på grunn av manglende evne kvinner til å lagre nok energi og støtte melkeproduksjonen i hele ammeperioden [11]. Harbour selungene er også enestående blant phocids fordi de tar til vannet kort tid etter fødselen [22], [23], [24], utføre dykk som vanligvis forbindes med beite før avvenning [24] og noen ganger følge sin mor til sjøs under foraging turer [23]. Imidlertid er det generelt ansett som avvenning hos denne arten er brå som i de fleste phocids [25].

Studier som undersøker diende oppførsel har stolte for det meste på direkte observasjoner [26]. Imidlertid er visuelle observasjoner av frittgående dyr ofte begrenset til dagslys timer og påvirkes av værforhold, plasseringen av observatør, og tilgang til ammende nettsteder. Nocturnal og undervanns dier hendelser har blitt rapportert i mange pattedyrarter ( f.eks
., [27], [28], [29], [30]). Videre kan skanne frekvensene ikke representativt for diende suksess [31], [32], hindrer nøyaktig karakterisering av sykepleie mønstre. Selv energetics av ​​amming har blitt vurdert ved hjelp av indirekte metoder som isotopfortynning og dobbelt merket vann i flere arter ( f.eks
., [33], [34], [35], [36], [37 ], [38]), slike metoder bare gi opplysninger om gjennomsnittlig energioverføring mellom to tidspunkter.

magen temperatur telemetri er utviklet og mye brukt til å overvåke foraging atferd av marine endoterm rovdyr ( f.eks
, [39], [40], [41], [42], [43]). Fordi deres kroppstemperatur er større enn sine byttedyr, matforbruk av endotermer fôring på kjøligere varer resulterer i en mage temperatur variasjon preget av en stupbratt fall og påfølgende eksponentiell økning (PDER hendelse; [39]). Tilsvarende er brystkjertlene ligger i dermis vev, som er kaldere enn dyret kjernetemperatur ( f.eks
., [44]). Diende resulterer derfor i en PDER hendelse i avkom magen temperatur [28]. Magen temperatur telemetri har vist seg å være en verdifull teknikk for å påvise dier hendelser både i fangenskap [28] og frittgående [29] havn selunger, som representerer en lovende metode for å studere sykepleie atferd i ulike ville pattedyr. Tolkningen av magen temperaturdata fra ammende pattedyr krever en validering teknikk for å diskriminere de PDER hendelser assosiert med diende fra de som er forårsaket av sjøvann eller fast føde inntak. Morsmelk, sjøvann og ectothermic organismer har forskjellige temperaturer og /eller termodynamiske egenskaper slik at deres inntak bør gi tydelig PDER kurvemønster (fig. 1). Inntak av morsmelk ved unger har vist seg å resultere i PDER hendelsene i betydelig lavere amplitude enn sjøvann eller bytte inntak [28], [29]. Tilsvarende har sjøvann større varmeledningsevne og lavere viskositet enn byttedyr ( f.eks.
Fisk), noe som resulterer i PDER arrangementer med hurtigere mage temperatur gjenvinning av [45], [46]. Følgelig har melk fordøyelse har tidligere skilles fra inntak av kaldere materialer i havne selungene basert på forekomsten av mage temperatursenkning [28], [29]. Likeledes er en indeks av temperaturutvinningsgraden tidligere blitt utviklet for effektivt å diskriminere fiskekonsum fra sjøvann drikking hos voksne pinnipeds og sjøfugl [41], [47]. Ved å kombinere disse to metodene, kan diskriminering mellom de tre mulige svelging typer (melk, sjøvann og solid mat) derfor være mulig i ammende valper. Slik diskriminering er det aller viktigste å nøyaktig undersøke sykepleie atferd og overgang til ernæringsmessig uavhengighet hos pattedyr.

Hovedmålet med denne studien var å gi en metode for å effektivt skille de tre mulige svelging typer (melk, sjøvann og solid mat) i sykepleie pattedyr som lever på kjøligere elementer. Vi antok svelging typer kan skilles basert på egenskapene til de PDERs de genererer ved hjelp av en kombinasjon av multivariate dataanalyse teknikker og laboratoriemage simuleringer [28], [46]. Som sjøvann inntak ble ofte observert i magen temperatur poster fra et lite utvalg av frittgående havne selungene [29], vi også testet ulike hypoteser som forklarer sjøvann forbruket med forhånds avvent valper. Vi forventet at hvis unger drikke sjøvann når dehydrert, forekomst av sjøvann inntak vil være positivt korrelert med tiden som har gått siden forrige melk inntak. Alternativt, hvis sjøvann inntak representerer en konsekvens av undervanns dier forsøk, det vil sannsynligvis bli etterfulgt av en etterfølgende svelging kort tid etter. Til slutt undersøkte vi forekomsten av pre-avvenning solid matforbruket i havn selungene.

Materialer og metoder

Etikk uttalelse

Animal håndteringsprosedyrer ble godkjent av Animal Care komiteene~~POS=HEADCOMP Université Laval (tillatelser tall: 200844 og 2011020) og Fiskeri- og Oceans Canada (tillatelser tall: IML 2010-030, IML 2011-004, og IML 2012-003)

Animal håndtering og instrumentering <. br>

Denne studien ble gjennomført på Bic Island steinkobbe koloni (48 ° 24 'N, 68 ° 51' W), som ligger rundt en privat øy i St. Lawrence-elven elvemunning, i løpet av 2010-12 avl sesonger . Harbour selungene ble tatt med en lang dukkert nett [48] gjennom hele ammeperioden (fra midten av mai til juli). Ved første fangst, pup sex, navlen staten og masse (± 0,5 kg; Salter våren skala, West Bromwich, England) ble registrert. For å lette gjenfangster, ble individer merket med en farget og nummerert hodet tag (Seal Hat, Dalton, England) limt (LoctiteƦcyanoakrylatlim og˩2 Accelerator, Loctite Corp., Mississauga, ON, Canada) på hodet og merket med et unikt nummerert tag i en hind flipper (Jumbotag, Dalton, England). Gjenfangster av valpene ble utført så ofte som mulig til avvenning, med en 48 timers minimum intervall mellom påfølgende fanger.

Som de fleste valpene ikke ble tatt umiddelbart etter fødselen, ble to indirekte metoder som brukes til å anslå pup alder (d) . I tilfelle av svært små unger ble alder bestemt i henhold til navlen degenerasjon fasene [48], [49], [50]. I eldre unger, ble individer veide mer enn en gang i løpet av sesongen og alder ble bestemt av back-beregning til fødsel masse ved hjelp av en gjennomsnittlig vekstrate for kohorten (beskrevet i [51]).

For å overvåke magen temperatur endringer, frittgående unger ble utstyrt med mage temperatur piller (STP, som ikke er endret STP3: 32 g, 6,3 cm x 2,2 cm, Wildlife Computers Inc., Redmond, WA, USA) introdusert av intubasjon ved hjelp av en smurt (KY Jelly , Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA) 2,54 cm diameter fleksible rør inn i magen [29]. Hver 10 s, STP-data ble overført til en tidsdybde opptaker (TDR, MK10-L, Wildlife Computers Inc.) limt (5-Cure Marine Epoxy, Industrielle Tilvirkere, Auburn, WA, USA) til valpen rygg pels [ ,,,0],29]. Vi utførte laboratorietkalibreringstester av STP (se [28] for protokollen detaljer) som indikerte en gjennomsnittlig svartid på 18 ± 2 s (område: 10-27 s) på grunn av forsinkelsen mellom STP utslipp og TDR mottak av temperaturdata. I tillegg til å legge til rette for flytting for gjenfangst ble en VHF-sender (3PN, Sirtrack ltd., Havelock North, New Zealand) også limt på valpen nakke. Data fra enheter fortsatt festet til dyret ble lastet ned i feltet etter hvert gjenerobre bruker en bærbar datamaskin. Håndtering tid skredet sjelden 15 min fra fangst til å slippe.

Databehandling, analyse og magetemperatur simuleringer

All databehandling og statistiske analyser ble utført i R miljø [52], med mindre annet er angitt . Magen temperaturdata (± 0,1 ° C) ble hentet fra TDR bruker Mk10host v1.25.2006 programvare (Wildlife Computers Inc.). Siden viktige intra- og interindividuelle variasjoner i magen temperatur poster hindret bruk av automatiserte metoder for å identifisere inntak ble PDER hendelser identifisert visuelt. En skanning av magen temperatur plottet mot tid (ved hjelp Instrument Helper v3.0, Wildlife Computers Inc.) ble utført på hver fil for å finne PDER hendelser, definert som skarpe dråper i magen temperatur på minst 2 standardavvik fra gjennomsnittstemperaturen beregnes over av de foregående 10 minutter, fulgt av en eksponensiell formet temperaturøkning. PDER hendelsesegenskaper har tidligere blitt beskrevet for sjøvann, byttedyr (hos voksne) og melk inntak ( f.eks
., [28], [29], [40], [47], [53]). Hver PDER arrangementet ble derfor preliminært tilordnes et inntak type ( ie
melk, sjøvann eller fast føde), basert på amplituden for reduksjonen og formen på utvinning kurven (konveks, konkav eller pseudo-lineær, forbundet med melk , fast føde og sjøvanns inntak, henholdsvis) sett i temperatur poster (fig. 1B). Selv om subjektive, dette kategorisering fungert som en pålitelig kriterium for sammenligning av resultatene fra følgende objektiv klassifiseringsmetoder.

For å statistisk klassifisere temperaturen synker inn i de ulike svelging typer, tre poeng ble definert for hver PDER hendelse (fig. 1A; [47], [53]): ( A
) det punkt forut for den begynnende temperaturreduksjon ( ie
før temperaturen synker til eller under den foregående midlere temperatur (beregnet over. 10 min) minus 2 standardavvik (sd), [42]); ( B
) punktet hvor den laveste temperaturen er nådd; og ( C
) det punkt hvoretter temperaturen kommer opp stabilitet (± 1 S.D.) i minst 10 minutter. Seks variabler ble deretter beregnet for hver PDER hendelsen: (1) amplitude av temperaturfallet, T _{A-T B
; (2) varighet av temperaturfallet, t B-t A
; (3) temperaturen halvveis temperatur utvinning, T 0,5
der (1) (4) varighet fra punkt En
til halvveis temperatur utvinning, t 0,5
; (5) en indeks av temperatur utvinningsgrad, Jeg product: [41], [47] der (2) og (6) frekvensen av temperaturen faller, D hvor product: (3)}

PDER hendelser som var vanskelige å skille fra naturlige kroppstemperaturvariasjoner ble registrert så lav tillit PDER hendelser. Disse inkluderer temperatur dråper amplituder mindre enn 0,7 ° C, eller temperaturen synker presentere lignende minske og øke priser eller andre egenskaper ikke fullt ut i samsvar med PDER arrangementet definisjon [39], [46]. På grunn av deres uvanlige form egenskaper, kan de tidligere detaljerte variablene utledet fra lav selvtillit PDER hendelser ikke representativt for typiske PDER hendelser. Tilsvarende, når mer enn en mage temperaturfall oppsto før stabilitet var nådd, ble de overlappende PDER hendelsene behandles sammen og defineres som flere PDER hendelser [46]. For disse spesielle hendelsene, påpeker En
, B Hotell og C
bare preget større dråpe kampen. Men Wilson et al
. [46] fant at STP responsen var mindre variabel i løpet av den første inntak i forhold til de etterfølgende inntak av anfall. Derfor variablene beregnet for flere PDER hendelser er ikke representative for typiske PDER hendelser heller, og bør vurderes separat. Clustering metoder er sterkt påvirket av uteliggere. For å sikre dannelsen av PDER hendelsesgrupper som nøyaktig gjenspeiler de naturlige variasjonene i inntak oppførsel, ble lav selvtillit og flere PDER hendelser ekskludert fra klyngeanalyse.

Bruk bare de tilbakeholdte PDER hendelser, en prinsipal komponent analyse (PCA ) ble utført på de sentrert og skalerte verdier for de 6 variablene for å generere ukorrelerte faktorer som en VariMAX rotasjon (pakke psykiatrisk
; [54]) ble anvendt. Faktorer med egenverdier > 1 (Kaisers kriterium) ble beholdt og deres score ble brukt til å utføre en hierarkisk, komplett-kobling klyngeanalyse. Denne metoden tillot bestemmelse av det passende antall av grupper som er tilstede i datasettet ved hjelp av fusjon nivå verdier kriterier [55] samt identifisering av klyngen sentre. Disse sentrene ble introdusert som første frø i et ikke-hierarkisk K-betyr klyngeanalysen som ble iterated til sentrum verdier ble konstant [56]. Kategoriseringen av PDER hendelsene etter de k-means prosedyre ble sammenlignet med deres subjektive visuell klassifisering for å avgjøre om de ulike gruppene oppnådde falt sammen med en bestemt inntak type ( dvs.
melk, sjøvann, eller fast føde).

for å ytterligere øke vår effektivitet for å diskriminere mellom forbruk av vann og fast føde, inntak ble kunstig simulert. En STP ble innsatt i en ballong og nedsenket i et sirkulerende vannbad holdt ved en gjennomsnittstemperatur som simulerer pup mage (37,8 ° C; [28]). Vann eller fisk (cut, ikke-sløyet sild) ble holdt ved 12,0 ° C, den høyeste vanntemperaturen registrert i studieområdet i ammeperioden (St. Lawrence Global Observatory, Rimouski Station, 2010-2012). Elementer ble deretter injisert inn i ballongen ved anvendelse av en 530 ml sugepistol og forble på plass mens de oppvarmes til temperaturen i vannbadet. Du kan etterligne temperaturfall mønstre som forventes på et frittgående valp magen, ble simuleringer gjort ved hjelp av ulike mengder vann (25-125 g) og fisk (30-300 g). Siden målet for disse simuleringene var å fremheve forskjellene i egenskapene til temperaturen synker generert av vann og fisk inntak, den absolutte hastighet av materiale oppvarmingen var ikke viktig. Ble ikke forsøkt å imitere varmeledningsevne og blande mønstre av en valp mage. Derfor ble PDER hendelser fra laboratoriet simuleringer preget av større temperaturen synker etterfulgt av langsommere oppvarming enn de som ville bli tatt opp i levende dyr. Siden forskjeller i PDER hendelsene ble påvist i simulere sjøvann og fisk inntak, kan relative sammenligninger mellom disse ulike svelging typer likevel brukes til PDER hendelser hentet fra frittgående unger 'innspillinger.

For hver eksperimentelt generert PDER event , 6 variablene som er beskrevet ovenfor ble beregnet, sentrert og skalert, og innføres i en lineær diskriminant analyse (LDA; pakke MASS
; [57]), i hvilken den mengde (g) av injisert materiale ble tilsatt som en 7 ^{th variabel. Den variable med høyest lineær diskriminant koeffisient ble ansett som den beste prediktor for materialet (vann eller fisk) som forårsaket temperaturfall [58]. En fordeling tomt på den aktuelle variabelen ble deretter produsert for PDER hendelser tatt opp frittgående unger (unntatt lav selvtillit og flere PDER hendelser). Dette tillot identifisering av diskontinuiteter i fordelingen som reflekterte ulike svelging typer. PDER hendelsene ble deretter klassifisert basert på deres relative posisjon i fordelingen av de beste prediktor variable av de to ikke-melk svelging typer (sjøvann eller fast food).}

De resulterende klassifikasjoner fra begge metoder, kombinert med den foreløpige visuell klassifisering, ble sammenlignet og slått sammen for å danne de tre siste gruppene navngitt i henhold til den beregnede inntak type de representerte ( dvs.
. melk, sjøvann og fast føde). Disse siste kategoriene ble brukt som gruppering faktorer for å utføre en LDA på klassifisert ( vil si
enkelt og høy tillit) PDER hendelser ved hjelp av de samme 6 forklaringsvariablene som tidligere er brukt i klyngeanalyse. Den prediktive funksjon som genereres av LDA ble senere brukt til å klassifisere de lave tillit og flere PDER hendelser tidligere ekskluderte fra begge klassifiseringsmetoder. Denne prosedyren ledet alle PDER arrangementer for å bli klassifisert som melk, sjøvann, eller fast food inntak.

Flere faktorer ble undersøkt for å forklare sjøvann og solid matinntak i forhånds avvent valper. Individuell vekstrate ble beregnet som koeffisienten til en generell lineær modell av masse og alder før den estimerte avvenning alder (alder ≤33 d; [48]). The 'halt ut "eller" i vann "status av valpene ble bestemt for hver preget PDER hendelse med våt /tørr terskelen til sin TDR. Tiden som har gått siden sist melk inntak, medgått tid siden siste inntak uavhengig av inntak type, medgått tid før neste melk inntak og medgått tid før neste inntak ble beregnet for hver PDER hendelsen og det betyr i forhold til hvert inntak type.

Når det er hensiktsmessig, normalitet ble testet med Shapiro-Wilk test og homogenitet av varians med en Levene test på midler (pakke bil
, [59]). Når normalitet kriteriet ikke ble respektert, randomisering tester (rand-test; modifisert fra [60]) med 5000 permutasjoner ble brukt i stedet for t-tester
å sammenligne statistikk mellom gruppene. Resultatene ble ansett som signifikant ved P < 0,05 og er presentert som gjennomsnitt ± standardfeil (SE), med mindre annet er angitt

Resultater

PDER hendelser i frittgående unger og deres foreløpige klassifiseringen

Det er totalt 40 frittgående unger ble instrumentert. Av disse 35 gitt brukbare data (tabell 1) som resulterer i en total varighet på 565 d av magen temperatur opptak, med en individuell gjennomsnittlig varighet på 16,1 ± 0,9 d og totalt 1776 PDER hendelser. Den totale gjennomsnittlige antall PDER hendelser per dag per valp var 3,1 ± 0. 3, med betydelige interindividuelle variasjoner (område: 0.6-4.7 PDER hendelser per dag). Blant de identifiserte PDER hendelser, 354 utstilte amplituder < 0,7 ° C (men ≥0.3 ° C), mens 142 hadde uvanlige kurveformer, og dermed ble klassifisert som lav selvtillit PDER hendelser. I tillegg 13 ble betraktet som flere PDER arrangementer, noe som resulterer i 1267 enkelt- og med høy pålitelighet PDER arrangementer.

Karakteristika for komponentfaktorer som oppnås fra PCA er presentert i tabell 2. I henhold til Kaiser kriterium, 2 faktorer fra PCA forklart 80,3% av den totale varians og ble deretter beholdt. Disse faktorene ble innført i VariMAX rotasjon, som ikke påvirker den andel av den totale varians forklart, men utlignet dens skillevegg mellom begge faktorer. Mens en faktor utstilt viktige belastninger for variablene knyttet til varigheten av PDER hendelser, de variabler knyttet til temperatursenkning tungt lastet på den andre faktoren (tabell 3). Dette indikerer at de to faktorene som oppnås scoret for ulike variabler i samsvar med PDER hendelser 'aksen egenskaper. Videre maksimal sannsynlighet faktoranalyse viste at de to faktorene stammer fra den roterte matrisen var tilstrekkelig i modellen (fit = 0,98, χ ^{2
= 662,55, P
< 0,001), støtte deres oppbevaring for videre analyse. De absolutte verdier av de standardiserte ladninger var > 0,30 på i det minste en faktor for de seks variable, som indikerer at alle av dem var aktuelle i PCA (tabell 3, [61])}

poeng for de to. faktorer for hver av de 1267 PDER hendelsene ble beregnet ut fra den roterte matrise og innføres som variabler i den hierarkiske fullstendige-binding klyngeanalyse. Ifølge fusjons nivå verdi kriteriet, det optimale antallet klynger tilstede i data var k
= 5, fordi det var den første verdien av k
før som et lite hopp i plottet av node høyde mot observert antall klynger (figur 2;. [55]). Den hierarkiske klyngeanalyse dendrogram ble derfor kuttet på k
= 5, og midlene for komponentfaktorer for hver gruppe ble brukt som innledende frø i et ikke-hierarkisk K-betyr cluster-analyse (fig. 3).

Når PDER hendelser fra de resulterende gruppene ble sammenlignet med sin foreløpige visuell klassifisering, tre gruppene inneholdt en høy andel av PDER hendelser identifisert som melkeinntak (gruppe 1: 87,7%, gruppe 3: 99,6% og gruppe 5: 100%; figur 3), mens to grupper var hovedsakelig sammensatt av hendelser som identifiseres som enten vann eller faste næringsinntak (gruppe 2:. 99,2% og gruppe 4: 100%). Klusteranalysen tillot ikke for diskriminering mellom sjøvann og fast føde inntak, men begge svelging typer kan effektivt skilles fra melkeinntak, med en samlet avvik på 3,9% mellom multivariat analyse og visuell klassifisering metode.

Svelging simuleringer og korrigert klassifisering av PDER hendelser

Alle injeksjoner av vann og fisk i de simulerte magen resulterte i plutselige fall etterfulgt av en eksponensiell økning av temperaturen på STP. Resulterer koeffisienter av lineære discriminants fra LDA på 7 variabler (tabell 4) identifiserte I
indeksen som den mest effektive gruppen prediktor. Jeg
indeksen beregnet for vann injeksjoner var signifikant (rand-test, P
= 0,002) lavere enn for fisk injeksjoner. Derfor I
indeksens fordeling ble plottet for PDER hendelser klassifisert i gruppe 2 og 4 ( n
= 195; vann og fast føde inntak). Som vist på fig. 4, en åpenbar diskontinuitet var til stede i fordelingen, med en densitet lik null for I
verdier i området 77,3 til 108,3 ° C ^{-1. Den foreløpige visuell klassifisering av PDER hendelser fra gruppene 2 og 4 har I
verdier > 92,8 ° C 1 (midten poenget med null utvalg av I
distribusjon , se figur 4;. n
= 13) indikerte at de sannsynligvis oppsto fra fast føde inntak, mens PDER hendelser har I
verdier < 92,8 ° C -1 var mest visuelt klassifisert som sjøvann inntak.}

Siden melk inntak er forventet å produsere større i
verdier sammenlignet med fast føde inntak (se fig. 1B), PDER hendelser fra alle grupper som har I
verdier lavere enn 92,8 ° C ^{1 ( n
= 251) ble klassifisert som sjøvann inntak. I kontrast, PDER hendelser med I
verdier større enn 92,8 ° C -1 ble kategorisert som fast føde inntak ( n
= 13) når tildelt grupper 2 eller 4, og som melk inntak ( n
= 1003) når tildelt grupper 1, 3 eller 5 ved klyngeanalyse.}

de resulterende lineære discriminants fra LDA utført på 1267 PDER hendelser klassifisert som høy tillit og singel er presentert i tabell 5. den resulterende prediktiv funksjon lov klassifiseringen av de resterende 517 flere eller lav selvtillit PDER hendelser med 98,3% av samsvar med foreløpige visuell klassifisering. Som et resultat ble alle 1776 PDER hendelser klassifisert som enten melk ( n
= 1478), sjøvann ( n
= 279) eller fast food inntak ( n
= 19). Den samlede avvik i gruppe navngi mellom den kombinerte statistiske analysen og den foreløpige visuell klassifisering var 2,4%, og var mest på grunn av PDER hendelser fra gruppe 1 (Fig. 3) som visuelt ble regnet som fast føde inntak, selv om klassifisert som melk inntak av den statistiske metoden.

Svelging kategorier og forbruk atferd

Mens sjøvann og solid mat inntak representerte 15,7% og 1,1% av alle PDER hendelser, henholdsvis den relative betydningen av hver inntak typen variert betydelig blant individer (Tabell 6). Ikke overraskende, melk representerte den hyppigste inntak type for alle unger, med den relative andelen av totale individuelle inntak varierer 60,0 til 100% (gjennomsnitt = 84,1 ± 1,7%). Sjøvann inntak over individer varierte 0 til 40,0% (gjennomsnitt = 15,3 ± 1,6%) av PDER hendelser, mens fast føde representert 0 til 13,0% (gjennomsnitt = 0,7 ± 0,2%) av totale inntak mellom individer. Alle bortsett fra ett individ inge sjøvann minst en gang i løpet av registreringsperioden. Totalt 19 fast føde inntak ble påvist blant 7 valper. Blant disse valpene, ble 9 solid mat inntak registrert i et enkelt individ, mens blant de andre 6 dyr fast føde ble inntatt på ≤ 3 anledninger.

Totalt unger var i vannet i løpet av 63,7% av melke inntak, av som 13,9% ble innledet av en sjøvannsinntak hendelse. Nesten alle (98,5%) av sjøvann inntak skjedde mens valpene var i vannet. Videre unger var vanligvis fortsatt i vannet ved utførelse av etterfølgende inntak etter et sjøvannsinntak (98,6% og 72,2% når disse inntak var sjøvann eller melk, henholdsvis). Interessant, unger som inge fast føde viste en større forekomst av vann sykepleie (melk inntak mens valpen var i vannet) enn unger som ikke får i fast føde (P < 0,001 betyr = 80 ± 4% og 54 ± 6%, henholdsvis).

Milk inntak oppstått gjennom hele perioden av mage temperaturovervåking, hvor den første identifiserte inntak av sjøvann og fast føde oppsto ved 4 og 12 dagers alder, respektivt. Som illustrert i fig. 5, andelen av inntak er forbundet med diende ble redusert fra 94,4% på dag 1 til 77.4% på dag 20, og videre økes til 90,0% inntil den beregnede avvenning alder (dag 33; [48]).

• PLoS ONE: Næringsstoffer Forskjellig Regulering Nucleobindin-2 /Nesfatin-en In Vitro i Cultured Mage Ghrelinoma (MGN3-1) celler og in vivo hos hannmus
• PLoS ONE: Kvantifisering av Chitinase mRNA nivåer i menneske og mus vev ved Real-Time PCR: artsspesifikke uttrykk for Surt pattedyr Chitinase i magen Vev