PLoS ONE: Records stomaco temperatura Reveal Comportamento Infermieristica e transizione al consumo di alimenti solidi in un non svezzati Mammifero, il Porto Piccolo di foca (Phoca vitulina)

Estratto

La conoscenza del trasferimento di latte dalla madre alla prole e l'inizio del solido ingestioni di cibo nei mammiferi consente una maggiore comprensione dei fattori che influenzano la transizione verso l'indipendenza nutritivo e della crescita pre-svezzamento e la sopravvivenza. Eppure gli studi di monitoraggio condotta da latte hanno spesso fatto affidamento su osservazioni visive, che potrebbe non rappresentare accuratamente l'assunzione di latte. Abbiamo valutato l'uso della temperatura dello stomaco telemetria per monitorare da latte e il comportamento di foraggiamento in porto sigillo ruspante ( Phoca vitulina
) cuccioli durante l'allattamento. cali di temperatura dello stomaco sono stati analizzati utilizzando componenti principali e analisi cluster, così come le prove utilizzando lo stomaco simulati con conseguente una classificazione precisa della temperatura dello stomaco scende nel latte, acqua di mare e ingestioni alimentari solidi. L'acqua di mare e ingestioni alimentari solidi rappresentato in media 15,3 ± 1,6% [0-40,0%] e 0,7 ± 0,2% [0-13,0%], rispettivamente, di singoli ingestione. Complessivamente, il 63,7% di ingestione latte verificato mentre i cuccioli erano in acqua, di cui 13,9% è stato preceduto da acqua di mare ingestione. Il tempo medio tra ingestioni successive era significativamente meno per l'acqua di mare che per ingestione di latte. Questi risultati suggeriscono che l'acqua di mare ingestione potrebbe rappresentare l'ingestione garanzia durante i tentativi di suzione acquatici. In alternativa, ingestione di cibo come solidi ( n
= 19) sono stati osservati tra i 7 cuccioli, acqua di mare ingestione potrebbe derivare da mancati tentativi di catturare le prede. Questo studio dimostra che alcune foche iniziano ingestione di prede, mentre ancora in fase di allattato, indicando che lo svezzamento avviene in modo più graduale di quanto si pensasse in questa specie. Temperatura di stomaco telemetria rappresenta un metodo promettente per studiare il comportamento da latte dei mammiferi selvatici e la transizione verso l'indipendenza alimentare in varie specie endotherm

Visto:. Sauvé CC, Van de Walle J, Hammill MO, Arnould JPY, Beauplet G (2014 ) Records stomaco temperatura Reveal Comportamento Infermieristica e transizione al consumo di alimenti solidi in un non svezzati Mammifero, il Porto Piccolo di foca ( Phoca vitulina
). PLoS ONE 9 (2): e90329. doi: 10.1371 /journal.pone.0090329

Editor: Yan Ropert-Coudert, Institut Pluridisciplinaire Hubert Curien, Francia |

Ricevuto: 17 settembre 2013; Accettato: 29 Gennaio 2014; Pubblicato: 26 feb 2014

Copyright: © 2014 Sauvé et al. Questo è un articolo ad accesso libero distribuito sotto i termini della Creative Commons Attribution License, che permette l'uso senza restrizioni, la distribuzione e la riproduzione con qualsiasi mezzo, a condizione che l'autore originale e la fonte sono accreditati

Finanziamento:. Questo lavoro è stata sostenuta da scienze naturali e ingegneria Research Council of Canada (URL: http://www.nserc-crsng.gc.ca/index_fra.asp; concede numero 355.536-2.008, 358.856-2.008, 390.930-2.010 a GB e 431802- 2012 al CCS); e Fonds de recherche et Nature Technologies du Québec (URL: http://www.fqrnt.gouv.qc.ca/; concessione numero 2010-NC-132.906 per GB). Québec-Océan (URL: http://www.quebec-ocean.ulaval.ca/) e il Dipartimento canadese della Pesca e degli Oceani (URL: http://www.dfo-mpo.gc.ca/index-eng. htm) ha fornito il supporto scientifico e logistico nel corso di questo progetto. Pesca e degli Oceani Canada hanno contribuito alla raccolta dei dati e la preparazione del manoscritto tramite l'esperienza di MO Hammill, P Carter, J-F Gosselin e S Turgeon. Oltre a ciò, i finanziatori hanno avuto alcun ruolo nel disegno dello studio, la raccolta e l'analisi dei dati, la decisione di pubblicare, o preparazione del manoscritto

Competere interessi:.. Gli autori hanno dichiarato che non esistono interessi in competizione

Introduzione

Durante il periodo di dipendenza dei genitori, la crescita e la sopravvivenza prole si affidano a dei genitori di provisioning nutrizionale, in gran parte determinato dal trasferimento del latte materno nei mammiferi [1], [2]. Dopo l'indipendenza nutrizionale, prole sopravvivenza dipende dalle condizioni ambientali, la densità di popolazione, riserve corporee e la capacità di foraggio efficiente in un dato ambiente [3], [4], [5], [6], [7]. Tale marcato spostamento dei fattori che influenzano la sopravvivenza della prole rende la transizione verso l'indipendenza alimentare un processo critico nella storia della vita degli animali selvatici [1], [8], [9].

Lo studio della cura e foraggiamento comportamento nei mammiferi fornisce importanti informazioni relative al trasferimento di energia dalla madre alla prole, così come la transizione verso l'indipendenza nutrizionale. Pinnipedi (phocids, Otaridi e trichechi) sono un ottimo modello per gli studi comparativi di comportamento da latte e transizione verso l'indipendenza alimentare poiché le femmine danno alla luce il singolo giovane, filogenesi è accettabile stabilito tra le famiglie [10], e l'accoppiamento differenziale e strategie materni sono ben documentati tra le due principali famiglie [11]. Tra phocids (veri sigilli), le femmine di solito veloce a terra nel corso di una breve (4-50 d
) periodo di lattazione [11], [12]. Lo svezzamento è considerato repentina phocids ed è seguito da un periodo di digiuno durante il quale sviluppo fisiologico continua e competenze foraggiamento sono migliorate [12], [13], [14], [15]. In Otaridi (foche e leoni marini), le femmine si alternano tra gli episodi a terra in primo luogo per infermieristico e viaggi di foraggiamento in mare [11], [16]. cuccioli Otariid iniziano a consumare alimenti solidi verso la fine del periodo di allattamento [12], [16], la transizione all'indipendenza nutrizionale più graduale in Otaridi che in phocids. Nonostante queste distinzioni filogenetici, femmine di alcune specie phocid non seguono la strategia materno phocid tipico come foraggio nel corso del periodo di allattamento [17], [18], [19], [20]. Di conseguenza, le femmine porto sigillo effettuano viaggi di foraggiamento in mare oltre la prima settimana di lattazione [19], [21]. Questa strategia 'otariid tipo' materna è pensato per essere a causa della incapacità di femmine per immagazzinare energia sufficiente e la produzione di latte supporto durante il periodo di allattamento [11]. Harbour cuccioli di foca sono anche eccezionali tra phocids perché prendono in acqua subito dopo la nascita [22], [23], [24], effettuare immersioni di solito associati a foraggiare prima dello svezzamento [24] e, a volte accompagnano la loro madre in mare durante i viaggi di foraggiamento [23]. Tuttavia, si ritiene generalmente che lo svezzamento in questa specie è brusca come nella maggior parte phocids [25].

Gli studi che indagano il comportamento da latte hanno per lo più fatto affidamento su osservazioni dirette [26]. Tuttavia, le osservazioni visuali di animali liberi che vanno sono spesso limitati alle ore diurne e sono influenzati dal tempo, posizione dell'osservatore, e l'accesso ai siti di cura. eventi di suzione notturne e subacquei sono stati segnalati in molte specie di mammiferi ( ad es
., [27], [28], [29], [30]). Inoltre, le frequenze di scansione potrebbero non essere rappresentativi di successo da latte [31], [32], ostacolando la caratterizzazione accurata dei modelli di cura. Anche se l'energetica di lattazione è stata valutata utilizzando metodi indiretti come diluizione isotopica e acqua doppiamente marcata in diverse specie ( ad esempio
., [33], [34], [35], [36], [37 ], [38]), tali metodi forniscono solo informazioni sul trasferimento di energia media tra due punti di tempo.

temperatura Stomaco telemetria è stato sviluppato e ampiamente utilizzato per monitorare il comportamento di foraggiamento dei predatori marini endotherm ( ad esempio
, [39], [40], [41], [42], [43]). Perché la loro temperatura corporea è maggiore di quella della preda, consumo di alimenti da endotermi nutrono freddi Articoli traduce in una variazione di temperatura di stomaco caratterizzato da una caduta precipitosa e successivo aumento esponenziale (evento PDER; [39]). Allo stesso modo, le ghiandole mammarie sono situate nel tessuto derma, che è più fredda della temperatura interna degli animali ( ad es
., [44]). Suckling quindi si traduce in un evento PDER di temperatura prole stomaco [28]. Stomaco telemetria temperatura ha dimostrato di essere una tecnica utile per il rilevamento di eventi da latte sia in cattività [28] e senza respiro [29] cuccioli di foca porto, che rappresenta un metodo promettente per studiare il comportamento di cura in vari mammiferi selvatici. L'interpretazione dei dati di temperatura stomaco di mammiferi allattano richiede una tecnica di convalida per discriminare gli eventi PDER associati lattante da quelli causati da acqua di mare o ingestione di cibo solido. Il latte materno, acqua di mare e organismi ectotermici hanno differenti temperature e /o proprietà termodinamiche tali che la loro assunzione dovrebbe produrre modelli curva distinta PDER (Fig. 1). L'ingestione di latte materno da cuccioli di foca ha dimostrato di provocare eventi PDER di ampiezza notevolmente inferiore rispetto all'acqua di mare o ingestione prede [28], [29]. Allo stesso modo, l'acqua di mare ha una maggiore conducibilità termica e viscosità inferiori prede ( ad es.
Pesce), con conseguente eventi PDER con recupero più rapido della temperatura dello stomaco [45], [46]. Di conseguenza, il latte ingestione è stata precedentemente distinto da ingestione di materiali freddi in porto cuccioli di foca sulla base del tasso di diminuzione della temperatura dello stomaco [28], [29]. Allo stesso modo, un indice del tasso di recupero della temperatura è stata precedentemente sviluppato per discriminare in modo efficiente il consumo di pesce da bere acqua di mare in pinnipedi adulti e uccelli marini [41], [47]. Grazie alla combinazione di questi due metodi, discriminazioni tra i tre tipi ingestione possibili (latte, acqua di mare e cibo solido) potrebbe quindi essere possibile in allattamento cuccioli. Tale discriminazione è di primaria importanza per indagare con precisione il comportamento di cura e la transizione verso l'indipendenza nutrizionale nei mammiferi.

L'obiettivo principale di questo studio è stato quello di fornire un metodo di discriminare in modo efficace i tre possibili tipi ingestione (latte, acqua di mare e cibi solidi) nei mammiferi di cura che si nutrono di oggetti più freddi. Abbiamo ipotizzato tipi ingestione potrebbe essere distinti in base alle caratteristiche dei PDERs che generano utilizzando una combinazione di tecniche di analisi multivariata dei dati e simulazioni di laboratorio allo stomaco [28], [46]. Come l'acqua di mare ingestione è stata frequentemente osservata nei registri di temperatura dello stomaco da un piccolo campione di cuccioli di foca porto libero respiro [29], abbiamo provato anche diverse ipotesi per spiegare il consumo di acqua di mare da cuccioli pre-svezzati. Ci aspettavamo che se cuccioli bere acqua di mare quando disidratato, presenza di acqua di mare ingestione sarebbe positivamente correlata con il tempo trascorso dall'ultima ingestione di latte. In alternativa, se l'acqua di mare ingestione rappresenta una conseguenza di tentativi di suzione subacquee, sarebbe probabilmente essere seguita da una successiva ingestione poco dopo. Infine, abbiamo studiato la prevalenza di pre-svezzamento consumo di cibo solido in cuccioli di foca porto.

Materiali e Metodi

dichiarazione etica

procedure di trattamento degli animali sono stati approvati dalla cura degli animali comitati di Université Laval (permessi numeri: 200844 e 2011020) e di pesca e degli oceani Canada (numeri permessi: IML 2010-030, IML 2011-004, e IML 2012-003)

movimentazione degli animali e la strumentazione <. br>

Questo studio è stato condotto sulla Bic isola porto sigillo colonia (48 ° 24 'N; 68 ° 51' W), che si trova intorno a un'isola privata nel fiume San Lorenzo estuario, durante le stagioni riproduttive 2010-12 . Harbour cuccioli di foca sono stati catturati con una lunga nuotata rete [48] per tutto il periodo di lattazione (da metà maggio a luglio). In un primo momento la cattura, il sesso cucciolo, stato dell'ombelico e la massa (± 0,5 kg; Salter bilancia a molla, West Bromwich, Inghilterra) sono stati registrati. Per facilitare ricatture, gli individui sono stati marcati con un tag colorati e numerati testa (Seal Cappello, Dalton, Inghilterra) incollati (LoctiteƦcianoacrilato colla e˩2 Accelerator, Loctite Corp., Mississauga, ON, Canada) sulla testa e contrassegnati con un tag numerata unica in un flipper cerva (Jumbotag, Dalton, Inghilterra). Riprende dei cuccioli sono state eseguite più spesso possibile fino allo svezzamento, con un intervallo minimo di 48 ore tra le acquisizioni successive.

Come la maggior parte cuccioli non sono stati catturati subito dopo il parto, due metodi indiretti sono stati usati per stimare l'età dei cuccioli (d) . Nel caso di giovanissimi cuccioli, età è stato determinato in base alle fasi dell'ombelico degenerazione [48], [49], [50]. In cuccioli più anziani, gli individui sono stati pesati più di una volta durante la stagione e l'età è stata determinata da back-calcolo per la massa nascita con un tasso di crescita media per la coorte (dettagliato in [51]).

Per monitorare la temperatura dello stomaco modifiche, senza che vanno cuccioli sono stati dotati di pillole mal di temperatura (STP, non modificata STP3: 32 g, 6,3 cm × 2,2 centimetri; Wildlife Computer Inc., Redmond, WA, USA) introdotto da intubazione utilizzando un lubrificata (KY Jelly , Johnson & Johnson, New Brunswick, NJ, USA) diametro 2,54 centimetri tubo flessibile inseriti nel loro stomaco [29]. Ogni 10 s, i dati STP sono stati trasmessi ad un registratore di tempo-profondità (TDR; MK10-L, fauna Computer Inc.) incollati (5-Cure Marine Epoxy, Formulatori industriali, Dallas, TX, USA) al pelo dorsale del cucciolo di [ ,,,0],29]. Abbiamo eseguito i test di calibrazione di laboratorio di PST (vedi [28] per il protocollo particolari) che indicavano un tempo medio di risposta di 18 ± 2 s (range: 10-27 s) a causa del ritardo tra l'emissione e la ricezione STP TDR dei dati di temperatura. Inoltre, per facilitare il trasferimento di riconquista, un trasmettitore VHF (3PN, Sirtrack ltd., Havelock North, Nuova Zelanda) è stato anche incollato sul collo del cucciolo. I dati provenienti da dispositivi ancora fissati all'animale sono stati scaricati nel campo su ogni riconquistare utilizzando un computer portatile. Il tempo di trattamento raramente superato 15 minuti dalla cattura di rilasciare.

Elaborazione dei dati, l'analisi e le simulazioni di temperatura dello stomaco

Tutta l'elaborazione dei dati e le analisi statistiche sono state eseguite all'interno dell'ambiente R [52], salvo diversa indicazione . dati della temperatura dello stomaco (± 0,1 ° C) sono stati estratti dal TDR utilizzando il software v1.25.2006 Mk10host (Wildlife Computer Inc.). Dal momento che importanti variazioni intra- ed inter-individuali nella record di temperatura dello stomaco impedito l'uso di metodi automatici per identificare ingestione, gli eventi PDER sono stati identificati visivamente. Una scansione della temperatura dello stomaco funzione del tempo (con strumento Helper v3.0, fauna Computer Inc.) è stato eseguito su ogni file per individuare eventi PDER, definiti come taglienti abbassamenti di temperatura dello stomaco di almeno 2 deviazioni standard dalla temperatura media calcolata sulla precedente 10 min, seguito da un aumento della temperatura a forma esponenziale. caratteristiche dell'evento PDER sono stati precedentemente descritti per l'acqua di mare, preda (negli adulti) e ingestione di latte ( ad es
., [28], [29], [40], [47], [53]). Ogni evento PDER stato quindi preliminarmente assegnato a un tipo ingestione ( ie
latte, acqua di mare o cibo solido) in base alla ampiezza della riduzione e la forma della curva di recupero (convessa, concava o pseudo-lineare associato con latte , ingestione di cibo e di acqua di mare solidi, rispettivamente) hanno visto nelle registrazioni della temperatura (Fig. 1B). Anche se soggettiva, questa categorizzazione servito come criterio affidabile di confronto per i risultati ottenuti con metodi di classificazione oggettivi.

Per classificare statisticamente la temperatura scende nelle diverse tipologie ingestione, tre punti sono stati definiti per ogni evento PDER (fig. 1A; [47], [53]): ( a
) il punto che precede l'inizio della diminuzione di temperatura ( cioè
prima temperatura diminuisce o inferiore alla precedente temperatura media (calcolata su. 10 min) meno 2 deviazioni standard (SD); [42]); ( B
) nel punto in cui viene raggiunta la temperatura più bassa; e ( C
) il punto dopo che la temperatura raggiunge la stabilità (± 1 S.D.) per almeno 10 minuti. Sei variabili sono stati successivamente calcolati per ogni evento PDER: (1) l'ampiezza del calo della temperatura, T _{A-T B
; (2) la durata del calo della temperatura, t B-t A
; (3) temperatura a recupero della temperatura a metà strada, T 0.5
dove (1) (4) durata dal punto di A
al recupero della temperatura a metà strada, t 0.5
; (5) un indice di velocità di recupero della temperatura, I
[41], [47] in cui (2) e (6) tasso di diminuzione della temperatura, D dove
(3)}

Il PDER eventi che erano difficili da distinguere da variazioni di temperatura del corpo naturale sono stati notati come eventi PDER scarsa fiducia. Questi includono temperatura scende di ampiezze inferiori a 0,7 ° C, o la temperatura scende presentando simili tassi di diminuire o aumentare o altre caratteristiche non pienamente rispondenti alla definizione dell'evento PDER [39], [46]. A causa delle loro caratteristiche di forma insolita, le variabili precedentemente dettagliate derivati ​​da eventi di bassa fiducia PDER potrebbero non essere rappresentativi di eventi tipici PDER. Analogamente, quando si è verificato più di una goccia temperatura stomaco prima di raggiungere la stabilità, gli eventi PDER sovrapposti sono stati trattati insieme e definiti come eventi multipli PDER [46]. Per questi eventi particolari, punti A
, B
e C
caratterizzato solo il più grande calo del combattimento. Tuttavia, Wilson et al
. [46] hanno trovato che la risposta STP era meno variabile durante la prima assunzione rispetto alle successive ingestione del combattimento. Pertanto, le variabili calcolate per più eventi PDER non sono rappresentativi di eventi tipici PDER sia e devono essere considerati separatamente. metodi di clustering sono fortemente influenzati da valori anomali. Per garantire la formazione di gruppi di eventi PDER che riflettono accuratamente le variazioni naturali nel comportamento ingestione, scarsa fiducia e più eventi PDER sono stati esclusi dall'analisi cluster.

Usando solo gli eventi PDER trattenuti, una analisi delle componenti principali (PCA ) è stato eseguito sui valori centrati e in scala delle 6 variabili per generare fattori non correlati su cui una rotazione varimax (pacchetto psych
; [54]) è stato applicato. Fattori con autovalori > 1 (criterio del Kaiser) sono state mantenute ed i loro punteggi sono stati usati per eseguire un gerarchica, completa-linkage analisi dei cluster. Questo approccio ha permesso la determinazione del numero appropriato di cluster presenti nell'insieme di dati utilizzando il livello di fusione valori criterio [55] e l'identificazione dei centri di cluster. Questi centri sono stati introdotti come semi iniziale in un cluster analysis non gerarchica K-significa che è stato l'iterazione fino a quando i valori di centro divenne costante [56]. La categorizzazione degli eventi PDER di K-means procedura sono stati confrontati con la loro classificazione visiva soggettiva per determinare se i diversi gruppi ottenuti coinciso con uno specifico tipo di ingestione ( cioè
latte, acqua di mare, o cibi solidi).

per aumentare ulteriormente la nostra efficienza di discriminare tra il consumo di acqua e di cibo solido, ingestioni sono stati artificialmente simulate. Un STP è stato inserito in un pallone e immerso in un bagno di acqua circolante mantenuta ad una temperatura media simulando stomaco del cucciolo (37,8 ° C; [28]). Acqua o pesce (taglio, l'aringa non eviscerati) sono stati tenuti a 12,0 ° C, la temperatura dell'acqua più alta registrata nell'area di studio durante il periodo di allattamento (San Lorenzo globale Osservatorio, Stazione Rimouski, 2010-2012). Gli articoli sono stati poi iniettati nel palloncino utilizzando una pistola 530 mL di aspirazione e rimaste in posto mentre riscaldato alla temperatura del bagno d'acqua. Per simulare i modelli di calo della temperatura previsti nello stomaco di un cucciolo senza respiro, le simulazioni sono state effettuate utilizzando diverse quantità di acqua (25-125 g) e pesce (30-300 g). Poiché lo scopo di queste simulazioni è stato quello di evidenziare le differenze nelle caratteristiche di temperatura scende generati da acqua e di pesce ingestione, il tasso assoluto del riscaldamento materiale non era importante. Nessun tentativo è stato fatto per imitare la conducibilità termica e modelli di miscelazione di stomaco di un cucciolo. Di conseguenza, PDER eventi da simulazioni di laboratorio sono stati caratterizzati da una maggiore temperatura scende seguita dal riscaldamento più lento di quelli che si sarebbero registrati in animali viventi. Dal momento che le differenze di eventi PDER sono state rilevate nella simulazione di acqua di mare e pesce ingestione, i confronti relativi tra questi diversi tipi ingestione potrebbero comunque essere applicati a eventi PDER estratti da registrazioni cuccioli liberi respiro.

Per ogni evento PDER sperimentalmente generati , sono stati calcolati i 6 variabili sopra descritte, centrati e scalati, e introdotti in un analisi discriminante (LDA; pacchetto MASSA
; [57]) in cui la quantità (g) del materiale iniettato è stato aggiunto come 7 ^{th variabile. La variabile con il più alto coefficiente discriminante lineare è stato considerato come il migliore predittore del materiale (acqua o pesce) che ha causato la caduta di temperatura [58]. Una trama distribuzione di tale variabile è stata poi prodotta per gli eventi registrati su PDER cuccioli liberi raggio (ad eccezione di scarsa fiducia e più eventi PDER). Ciò ha permesso l'identificazione di discontinuità nella distribuzione che riflettono i diversi tipi ingestione. eventi PDER sono stati successivamente classificati in base alla loro posizione relativa all'interno della distribuzione dei migliori variabili predittore dei due tipi di ingestione non latte (acqua di mare o cibo solido).}

Le classificazioni derivanti da entrambi i metodi, combinati con il preliminare classificazione visiva, sono stati confrontati e riunito per formare i tre gruppi finali denominati secondo il tipo calcolata ingestione rappresentavano ( ie
. latte, acqua di mare e cibo solido). Queste categorie finali sono state usate come raggruppamento fattori di eseguire una LDA sulla classificati ( i.e
fiducia singolo e alta) eventi PDER utilizzando gli stessi 6 variabili esplicative precedentemente utilizzati in cluster analysis. La funzione predittiva generato dalla ADL è stato successivamente utilizzato per classificare la fiducia e più eventi bassi PDER precedentemente esclusi dalla entrambi i metodi di classificazione. Questa procedura ha portato tutti gli eventi PDER per essere classificati come latte, acqua di mare, o ingestione di cibo solido.

Diversi fattori sono stati studiati per spiegare l'acqua di mare e l'ingestione di cibo solido in cuccioli di pre-svezzati. tasso di crescita individuale è stato calcolato come coefficiente di un modello lineare generale sulla massa e l'età prima dell'età di svezzamento stimata (età ≤33 d; [48]). Il '-out trainato' o lo stato 'in acqua' dei cuccioli è stata determinata per ogni evento PDER caratterizzato utilizzando la soglia di wet /dry del loro TDR. Il tempo trascorso da quando l'ingestione ultima latte, il tempo trascorso dall'ultima assunzione indipendentemente dal tipo di ingestione, il tempo trascorso fino al prossimo ingestione di latte e il tempo trascorso fino al prossimo ingestione sono stati calcolati per ogni evento PDER ei mezzi rispetto per ogni tipo di ingestione.

Se del caso, la normalità è stato testato con il test di Shapiro-Wilk e l'omogeneità della varianza con un test Levene sui mezzi (pacchetto auto
, [59]). Quando il criterio di normalità non è stato rispettato, i test di randomizzazione (rand-test; modificati dal [60]) con 5000 permutazioni sono stati utilizzati invece di t-test
per confrontare le statistiche tra i gruppi. I risultati sono stati considerati significativi in ​​P < 0,05 e sono presentati come media ± errore standard (SE), salvo diversa indicazione

Risultati

eventi PDER nei cuccioli liberi respiro e la loro classificazione preliminare

Un totale di 40 cuccioli liberi respiro sono stati di strumentazione. Di questi, 35 hanno fornito dati utilizzabili (Tabella 1), con conseguente una durata complessiva di 565 D di registrazione della temperatura dello stomaco, con un individuo durata media di 16,1 ± 0,9 D e un totale di 1776 eventi PDER. Il numero medio complessivo di eventi PDER al giorno per cucciolo era 3.1 ± 0. 3, con sostanziali tra le variazioni individuali (range: 0.6-4.7 eventi PDER al giorno). Tra gli eventi individuati PDER, 354 ampiezze esposte < 0,7 ° C (ma ≥0.3 ° C), mentre 142 avevano forme curve insolite e, quindi, sono stati classificati come eventi PDER scarsa fiducia. Inoltre, 13 sono stati considerati più eventi PDER, con conseguente 1267 eventi PDER singole e alta fiducia.

Caratteristiche dei fattori componenti ottenuti dalla PCA sono presentati nella Tabella 2. Secondo il criterio di Kaiser, 2 fattori dal PCA spiegato 80,3% della varianza totale e sono stati successivamente mantenuto. Questi fattori sono stati introdotti nella rotazione varimax, che non ha influenzato la proporzione di varianza totale spiegata, ma pareggiato sua partizione tra i due fattori. Mentre un fattore esposte carichi importanti per le variabili relative alla durata degli eventi PDER, le variabili associate con la temperatura diminuiscono fortemente caricato sull'altro fattore (Tabella 3). Ciò indica che i due fattori ha segnato per diverse variabili in accordo con le caratteristiche degli assi gli eventi PDER '. Inoltre, massima verosimiglianza analisi fattoriale ha rivelato che i due fattori che derivano dalla matrice ruotata erano sufficienti nel modello (fit = 0,98, χ ^{2
= 662,55, P
< 0,001), sostenendo la loro conservazione per ulteriori analisi. I valori assoluti dei carichi standardizzati erano > 0,30 su almeno un fattore per le sei variabili, che indica che tutti erano rilevante nella PCA (tabella 3; [61])}

I punteggi per i due. fattori per ciascuno degli eventi PDER 1267 sono stati calcolati dalla matrice ruotata e introdotti come variabili nel cluster analysis gerarchica completa-linkage. Secondo il criterio valore del livello di fusione, il numero ottimale di cluster presenti nel data era k
= 5, perché è stato il primo valore di k
prima che un piccolo salto nella trama dell'altezza nodo contro stata osservata numero di cluster (Fig. 2; [55]). La cluster analysis gerarchica dendrogramma è stato quindi tagliato a k
= 5, e dei mezzi di fattori componenti per ogni cluster sono state usate come semi iniziali in un non-gerarchica analisi dei cluster K-Means (Fig. 3).

Quando gli eventi PDER dei gruppi risultanti sono stati confrontati con la loro classificazione visiva preliminare, tre gruppi contenevano un'alta percentuale di eventi PDER identificati come prese di latte (gruppo 1: 87,7%, gruppo 3: 99,6% e gruppo 5: 100%; Fig 3), mentre due gruppi erano prevalentemente composti eventi identificati come acqua o consumo di alimenti solidi (gruppo 2:. 99,2% e gruppo 4: 100%). L'analisi dei cluster non ha permesso per la discriminazione tra acqua di mare e ingestioni alimentari solidi, ma entrambi i tipi ingestione potrebbe efficacemente essere differenziata da prese di latte, con una differenza complessiva del 3,9% tra l'analisi multivariata e il metodo di classificazione visiva
.

simulazioni ingestione e la classificazione corretta di eventi PDER

Tutte le iniezioni di acqua e di pesce nello stomaco simulati portato a cali improvvisi seguiti da un aumento esponenziale della temperatura registrata dalla STP. Con conseguente coefficienti di discriminanti lineari dalla LDA su 7 variabili (Tabella 4) identificarono la I
indice come il predittore gruppo più efficiente. Il I
indice calcolato per iniezioni di acqua è stata significativamente (rand-test, P
= 0.002) inferiore a quello per le iniezioni di pesce. Pertanto, il I
distribuzione di indice è stato tracciato per gli eventi PDER classificati nei gruppi 2 e 4 ( n
= 195; acqua e ingestione alimentari solidi). Come mostrato in Fig. 4, una discontinuità evidente era presente nella distribuzione, con una densità pari a zero per I
valori che variano da 77,3 a 108,3 s ° C ^{-1. La classificazione visiva preliminare degli eventi PDER da gruppi 2 e 4 con I
valori > 92,8 s ° C -1 (punto medio del range nullo del I
distribuzione , vedi figura 4;. n
= 13) ha indicato che probabilmente nasce dalla ingestioni alimentari solidi, mentre gli eventi PDER avendo I
valori < 92,8 s ° C -1 erano soprattutto visivamente classificato come ingestioni di acqua di mare.}

Dato che ingestione di latte sono tenuti a produrre una maggiore I
valori rispetto alla ingestione di cibo solido (vedi Fig. 1B), gli eventi PDER di tutti i gruppi con I
valori inferiori a 92,8 s ° C ^{-1 ( n
= 251) sono stati classificati come ingestioni di acqua di mare. Al contrario, gli eventi PDER con I
valori superiori a 92,8 s ° C -1 sono stati classificati come ingestione di cibo solido ( n
= 13) quando assegnato a gruppi di 2 o 4, e come ingestione di latte ( n
= 1003) quando viene assegnato ai gruppi 1, 3 o 5 per l'analisi cluster.}

le discriminanti lineari risultanti dalla LDA eseguite sui 1267 eventi classificati come PDER alta fiducia e single sono presentati nella Tabella 5. la funzione di previsione risultante ha permesso la classificazione delle restanti 517 multipli o bassi eventi fiducia PDER con il 98,3% di conformità con la classificazione visiva preliminare. Di conseguenza, tutti gli eventi 1776 PDER sono stati classificati come il latte ( n
= 1478), acqua di mare ( n
= 279) o ingestione di cibo solido ( n
= 19). Il divario globale nella attribuzione di gruppo tra l'analisi statistica combinata e la classificazione visiva preliminare è stata del 2,4%, ed è in gran parte a causa di eventi PDER dal gruppo 1 (Fig. 3) che sono stati visivamente considerato come ingestioni alimentari solidi, anche se classificate come ingestione di latte di il metodo statistico.

categorie ingestione e il consumo di comportamento

Mentre acqua di mare e cibo solido ingestioni hanno rappresentato il 15,7% e il 1,1% di tutti gli eventi PDER rispettivamente, l'importanza relativa di ogni tipo ingestione variava considerevolmente tra gli individui (Tabella 6). Non a caso, il latte ha rappresentato il tipo di assunzione più frequente per tutti i cuccioli, con la proporzione relativa del totale delle ingestioni singole che vanno 60,0-100% (media = 84,1 ± 1,7%). L'acqua di mare ingestione attraverso gli individui variava 0-40,0% (media = 15,3 ± 1,6%) di eventi PDER, mentre il cibo solido rappresentato 0-13,0% (media = 0,7 ± 0,2%) del totale delle ingestioni tra gli individui. Tutti tranne uno individuo ingerito acqua di mare almeno una volta durante il periodo di registrazione. Un totale di 19 ingestioni alimentari solidi sono stati rilevati tra i 7 cuccioli. Tra questi cuccioli, 9 ingestioni alimentari solidi sono stati registrati in un singolo individuo mentre tra le altre 6 animali cibo solido è stato ingerito in ≤ 3 occasioni.

Nel complesso, i cuccioli erano in acqua durante il 63,7% di ingestione di latte, di che il 13,9% sono stati preceduti da un evento di mare ingestione. Quasi tutti (98,5%) di acqua marina ingestions verificato mentre cuccioli erano in acqua. Inoltre, i cuccioli erano di solito ancora in acqua quando si esegue la successiva assunzione a seguito di una ingestione di acqua di mare (98,6% e 72,2% quando questi ingestioni erano, rispettivamente, l'acqua di mare o latte,). È interessante notare che i cuccioli che ingerito cibi solidi mostravano una maggiore occorrenza di allattamento acquatico (ingestione di latte, mentre il cucciolo era in acqua) di cuccioli che non ingeriscono cibo solido (P < 0,001; mezzi = 80 ± 4% e 54 ± 6%, rispettivamente).

ingestione Milk verificato durante il periodo di monitoraggio della temperatura dello stomaco, mentre il primo consumi identificato di acqua di mare e cibo solido verificato a 4 e 12 giorni di età, rispettivamente. Come illustrato in Fig. 5, la proporzione di ingestione associati suzione scesa dal 94,4% al giorno 1 al 77,4% al giorno 20, e in seguito aumentata fino al 90,0% fino all'età svezzamento stimata (giorno 33; [48]).

• PLoS ONE: Nutrienti differenzialmente Regolamentare Nucleobindin-2 /nesfatin-1 in vitro in colture di stomaco Ghrelinoma (MGN3-1) Le cellule ed in vivo nei topi maschi
• PLoS ONE: quantificazione dei livelli di mRNA chitinasi nei tessuti umani e mouse Real-Time PCR: Espressione specie-specifico di acido Mammalian chitinase nei tessuti dello stomaco