Plos ONE: Ultra Deep zaporedja razkriva microRNA Expression Vzorec človeškega Stomach

Povzetek

Ozadje

Čeprav microRNAs (miRNAs) igrajo pomembno vlogo pri diferenciaciji tkiv in pri ohranjanju bazalno fiziologijo, malo je znanega o stopnjah izražanja miRNA v želodcu tkiva. Spremembe v profilu miRNA lahko povzroči celično deregulacije, ki lahko povzroči neoplazije.

Metodologija /Glavne ugotovitve

Majhen RNA knjižnica želodčne tkiva je zaporedje uporabo visoko prepustnost SOLid tehnologijo za določanje zaporedja. Dobili smo 261.274 kakovost bere z odlično tekmah do človeškega miRnome, in so bile ugotovljene 42% znanih miRNAs. Digitalni Gene Expression profiliranje (DGE) je bila izvedena na podlagi branja izobilju in je pokazala, da je bilo petnajst miRNAs močno izražen želodčnega tkiva. Pozneje je bil izraz teh miRNAs potrjen v 10 zdravih posameznikih z RT-PCR je pokazala pomembno korelacijo 83,97% (P < 0,05). Šest miRNAs pokazala nizko spremenljivo vzorec izražanja (pokoj-29b, MIR-29c, miR-19b, MIR-31, miR-148a, miR-451) in se lahko obravnava kot del izražanja vzorec zdravega želodca tkiva.

Sklepi /Pomen

To želeli validirati običajnih profilov Mirna človeške želodčne tkiva vzpostaviti referenčni profil za zdrave posameznike. Določanje regulativne postopke, ki delujejo v želodcu bo pomembno v boju proti raku želodca, ki je drugi najpogostejši vzrok umrljivosti za rakom po celem svetu

Navedba. Ribeiro-dos-Santos Â, KHAYAT AS, Silva , Alencar DO, Lobato J, Luz L, et al. (2010) Ultra Deep zaporedja razkriva microRNA Expression vzorca of the Human želodec. PLoS ONE 5 (10): e13205. doi: 10,1371 /journal.pone.0013205

Urednik: Patrick Tan, Duke-National University of Singapore Graduate Medical School, Singapur

Prejeto: 30. marec 2010; Sprejeto: 8. september 2010; Objavljeno: 8. oktober 2010

Copyright: © 2010 Ribeiro-dos-Santos et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Delo je podprl genoma Paraense de Genomica e Proteomica Project (Governo storiti Para /SEDECT /FAPESPA), PROPESP /UFPA, FADESP in CAPES (Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Pred kratkim je Friedman et al.
2009 je pokazala, da je večina človeških genov pod nadzorom miRNAs. ≫ so ohranjeni 45.000 Mirna ciljnih območij znotraj človeške 3'UTRs, in > 60% ljudi, ki kodirajo proteine ​​geni so bili v skladu s selektivnim pritiskom, da ohrani seznanitve na miRNAs [1]. miRNAs so majhne nekodirajoče, zaporedja 17-25 bp, ki uravnavajo izražanje genov preko vezave na koncu 3 'ciljnih mRNA, ki izhajajo iz inhibicije prevoda mRNA [2], [3]. Približno 14.000 miRNAs so bile ugotovljene na živali, rastlin in gliv [4] [5] [6]

Mehanizmi, ki vključujejo miRNAs kot so negativni regulatorji izražanja genov podobna pri živalih in rastlinah.; uravnavajo temeljnih celičnih procesov [6]. Pri ljudeh je približno 3% vseh genov predvidoma kodiranje Mirne predhodne sestavine, in po > 60% kodiranja proteinskih genov, ki lahko ureja miRNAs [1]. MiRNAs imajo bistvene funkcije v mnogih celičnih procesov, kot sta rast in razvoj, celično proliferacijo, diferenciacijo in apoptozo. Zato spremembe v Mirni izražanja prispevati k človeških bolezni, kot raka [7], [8].

Spremembe v Mirni vzorcev izražanja so opazili pri mnogih vrstah raka prehrano, kot so dojke, debelega črevesa, pljuč, prostate, levkemije in želodec raka. miRNA izraz spremembe povzroči izgubo ali dobiček funkcije in so povezane z razvojem človeškega neoplazme prek različnih mehanizmov [5].

Tukaj predstavljamo genetsko študijo miRNA človeškega želodca, ker kljub pomen organa, so na voljo na njihovo prisotnost in ureditve pri ljudeh malo genetski podatki. To delo je bilo prvo polno miRnome zaporedja normalnega želodčne tkiva s pomočjo naslednje generacije tehnologijo za določanje zaporedja.

Rezultati

V tej študiji so profili, pridobljen z ultra-globoko sekvenciranje uporabo trdno podlago ( življenje Technologies, CA, ZDA). To je prva študija za uporabo tega postopka za opisovanje miRnome normalnega želodčnega tkiva. miRNAs smo izolirali iz običajnega želodčni sluznici Cardia enotnega zdravem pacientu. Profili so bile potrjene z uporabo PCR v realnem času za določanje ekspresijo 15 najbolj izražene miRNAs v nadaljnjih 10 zdravih bolnikih.

ULTRA-DEEP sekvenciranje

Ultra-deep zaporedja dobimo skupaj 104 milijonov surovo bere in 5 milijonov bere za želodčne Cardia miRNA knjižnici. Za nadaljnjo analizo, 3,2 milijona glasi so bili izbrani glede na kakovost zaporedja (vsaj QV≥10 v 10 prvih baz) [8]. Po preslikavo ti v človeškem genomu (sprostitev 19), mapiranim skupno prebrali število je 2.534.490 milijona bere (75% celotnega kakovost bere). Približno 38% od 2,5 milijona bere (963.460 bralcev) so ponavljajoče sekvence DNA, tRNA, rRNA ali druge majhne molekule; 10% (261.274) so ​​bili sprejeti bere, popolnoma usklajena z znanimi zrele miRNAs (MirBase različica 15, javnost 04/2010) [9]; in ostalo od bere (52%) so bili povezani z zaporedjem nukleotidov (slika 1).

Za analizo ekspresije miRNAs, bere le z vžigalicami, da zrel miRNAs sekvence (261.274 bralcev) so bile vključene. Pri želodčnih Kardije smo identificirali 404 od 970 znanih zrel miRNA sekvenc (42%). Za analizo ekspresije miRNAs smo opredelili pet obdobij: 1 do 10 prebrane števila; 11-100; 101 do 1000; 1001 do 5000; in brati štetje nad 5000 (slika 2) (dodatne podrobnosti so navedene v Tabeli S1). Prvo območje (1-10) obsegala 40% miRNAs opaženih; Drugi območje (11 do 100) sestavlja 26%; Tretji območje (101 do 1000) sestavlja 20%; ter četrti in peti območja (> 1000 Število branje) 14%

S to klasifikacijo, 347 zreli miRNAs so bili izraženi med prvim in tretjim območjih in 57 med četrtim in petim razponih.. Za karakterizacijo miRnome, smo izbrali nabor 15 miRNAs, ki so bile izražene na najvišji ravni (≥1,000 bralcev).

Tabela 1 in Slika 3 našteti 15 zrele miRNAs opredeljeni v Kardije človekovih želodca . Toplotnem zemljevidu na sliki 4 povzema izraz teh 15 miRNAs v želodcu Kardije in preko normalnih človeških tkiv, podatki DGE, ki je na voljo v microRNA.org banko podatkov [10], [11]. Mature miRNA izraz, ki lahko razdelimo v dve skupini: i) Cardia-tkiv: miRNAs redko izražene v drugih tkivih, vendar izražena v želodčni Kardije, vključno pokoj-148a, MIR-192, miR-200A in miR-200B; ii) kvazi-vseprisotno: miRNAs izražena v številnih tkivih in pogoji, vključno s pokoj-29c, MIR-21, miR-24, miR-29b, miR-29a, miR-451, miR-31, miR-145, miR-26a , miR-19b in pustite-7b.

REAL TIME PCR

ultra-deep Rezultati zaporedja so bile potrjene z singleplex PCR v realnem času (RT-PCR) metode pri 15 miRNAs izbranih ugotoviti njihovo izražanje v želodcu Cardia območju od 10 zdravih posameznikov. Testnih osebah, je bilo 60% moških, je bila povprečna starost 39,1 (± 12,8) let in 50% preučevanih predmetov pozitiven na H. pylori
po mednarodnih merilih, določenih za njihovo identifikacijo [12], [13] (tabela 2) (dodatne podrobnosti so navedene v tabeli S2).

COMPARARISON Z DGE IN RT-PCR

Tako singleplex (RT-PCR) in multiplex (trdno podlago) tehnologije je pokazala visoko izraz (izraz nad 1.000 prebere v DGE in 7-krat nad endogeno kontrolo v RT-PCR) od 15 miRNAs (sliki 4 in 5)

istih vzorcih RNA so analizirali z dveh različnih platformah: DGE in RT-PCR - Life Technologies.. Rezultati poskusov smo primerjali in so opazili linearno regresijo med 2 ^{-ΔCt in kvadratnega korena prebral številko štetja. Pearson korelacija je visoka 83,9% s statistično pomembnim testom (P < 0,05). In potrjeni SOLID rezultate}

Poleg tega so rezultati DGE v primerjavi s količinsko razpona izražanja miRNAs pri 10 zdravih osebah, ki jih realnem času PCR. Regresijska za povprečno RT-PCR teste v primerjavi
kvadratni koren prebere številko štetja. Pearson korelacija je visoka 68,4%, s statistično pomembnim testom (P < 0,05).

Lahko opazujemo miRNAs z visoko interindividualne variacije, za exempla miR-21, in drugo z nizko interindividualne razlike, npr izraz vzorec nekoliko spremenljivo (miR-29b, miR-29c, miR-19b, miR-31, miR-148a, miR-451).

Pogovor

miRNAs urediti večino človeških genov; Vendar pa je le malo miRNAs imeli svoje cilje in ugotovljene posebne naloge [14]. V naši raziskavi smo želodec vzorec dobimo iz posameznika brez želodca neoplazije ali drugih vnaprej neoplazije pogoji kot atrofija, metaplazijo in displazija. Predrakave lezije kot so gastritis vodi do genomske hipo-metilacije v želodcu, ki se lahko spremeni v izraz vzorec miRNAs [15]. Vzorec je bil pridobljen od normalnega tkiva iz pacienta brez kakršnih koli patologij, ki je pomagal pri preprečevanju tveganja za zbiranje videz normalni vzorec tkiva z mikro vdori tumorogenih celic na začetku poklicne poti, kot se lahko pojavi pri bolnikih s katerokoli od zgornjih patologije.

Ta študija je prvi ultra-visoko prepustnost sekvenciranje miRNAs v fiziološko normalni človeški želodec. Le 5,06% od miRNAs opredeljenih želodčnega tkiva je že bila odkrita tudi v drugih tkivih in katalogizirati v bioinformatike zbirke podatkov, kot so microRNA.org [10]. Pričakujemo, da bo ta skupina miRNAs, da so regulatorji oskrbniška genov, ki so bogata s človeškimi tkivi. Druga 7.84% od miRNAs ni imela tekme v izraz podatkovnih baz Mirna in lahko predstavljajo miRNAs, ki so značilne za prebavni sistem ali želodec.

Podobne raziskave so bile izvedene z drugimi običajnimi tkiv, na primer v ustih, žrelu, požiralnik, anus in črevesja. teh podatkov z našimi miRNA izražanja podatkov smo primerjali opredeliti izraz vzorec želodčne tkiva. Ugotovili smo visoko raven izražanja v 15 miRNAs, od katerih je 13 že prepoznana kot zelo izražene v drugih tkivih.

Izraz MIR-148a in MIR-192 so bile ugotovljene v drugih normalnih in rakavih človeških tkiv, vendar ni bil pretirano izražena. Mir-192 je že bila odkrita v prebavilih tkiva, kot debelega črevesa, ileum, dvanajstnika, tankega črevesa, želodca, trebušne slinavke in jeter [16]. Bazalno izraz MIR-148a so opazili v vezivno tkivo in endokrinega tkiva [17]. V zadnjem času je bilo ugotovljeno, mir-148a, ki se zatira v popkovnične krvi celic [18] in hypermethylation utišani v črevesnih tumorjev [19]. Ugotovili smo visoko ekspresijo mir-200 grozda (a in b) v želodčni Kardije kot je opaziti v Langerhansovih otočkih [11]. V mikromrež poskusu, so odkrili mir-200a in mir-200B na nizkih ravneh v prebavilih tkivih, toda na visoki ravni v debelega črevesa, želodca in trebušne slinavke [16]. Nedavno objavljena microRNA izraz atlas je pokazala, da je ta miRNA značilne za endokrinega tkiva [17]. Nedavne ugotovitve kažejo, da je nizka izraz MIR-200 grozd povezana z rakom jajčnikov [19], [20]. Zato lahko mir-200 grozdov pomembna pri ohranjanju integritete prebavnih tkiv, kot so želodčni Kardije, ker tako visoke izraz navzgor regulirano ekspresijo e-kadherina, proteina, ki je odgovoren za organizacijo arhitekture epitelijskega tkiva. Poleg tega so rezultati močno predlagal pomembno vlogo družine miR-200 pri zatiranju epitelijske-mezenhimskih prehod (EMT) in napredovanje raka [21].

Tabela 1 in 2 prikazujeta število možne cilje za vsako visoko izraženo zrelo miRNA. Tabela 2 prikazuje nekatere cilje miRNAs, ki ga TargetScan napovedanih proti družin ohranjenih miRNAs. Z izjemo miR-451, vsi delili vsaj dveh drugih genov cilje. Geni ANKD52
in UBN2
, so cilji deset od štirinajstih miRNAs analiziramo, medtem ko je gen TNRC6B
je devet miRNAs in geni EPS15
, NFAT5
, BACH2
, BRWD1
, NUFIP2
, PTEN
, CDK6
in PTPRD DD6
, so cilji osmih miRNA. Ta rezultat kaže, da so ti miRNAs močni kandidati, ki se utišani v Cardia regiji. Eksperimentalna potrditev teh genov, sledi analiza funkcije vsake od lahko razkrije fiziološko vlogo teh miRNAs v normalnem želodčnega tkiva.

Veliko miRNAs lahko urejajo prevod proteinov, ki deluje v širjenju tkiva in tkivo vzorčenje kot MIR-200A (ki se lahko pojavljajo v integrin) in mir-145 (ki lahko interakcijo z erbB4
mRNA). Veliko predvidene cilje mRNA je bilo ugotovljeno, da so skupni več zelo izražene miRNAs. Na primer, HTR4
(5-hidroksitriptamin [serotonin] receptorjev) in AFF2
mRNA ( AF4 /FMR2
družinski, član 2) so napovedali, da bodo cilji 13 od 15 najbolj izražene miRNAs. Še pet mRNA, vključno s IGF-1
(inzulinu podoben rastni faktor 1 [somatomedin C]), so bile skupne predvidene tarče 12 miRNAs. Osem miRNAs imel 222 napovedanih ciljev skupne; na primer, mir-29b napovedano ciljati 196 od teh. Pet miRNAs (19b, 29a, 29b, 29c in 148a), deljeno 70 napovedal cilje, od katerih je ( CDK6
, PTEN
, IGF1
, FRS2 nekaj
, PDGFRA
, PIK3R1
in MXD1
) uravnavajo celično proliferacijo in zajezitev tumorja.

več ugotovitev povezavo miRNAs raka. Prvič, mnogi miRNAs so vključeni v celično proliferacijo in apoptozo. Drugič, veliko Mirna loci nahaja v nestabilnih območij človeškega genoma, regije, ki so pogosto dopolnjena ali izbrisani v človeških neoplazij in povzročijo velike razlike v Mirni izražanja v primerjavi z običajnimi tkiva [21], [22] [23] [24 ].

Real Time PCR tehniko (ki uporablja relativno količinsko) je potrdila 15 miRNAs pojmujejo kot kaže najvišji izraz, ki ga trdno podlago (ki temelji na absolutnih številkah) (sliki 4 in 5). Zato lahko te miRNAs se šteje, da je prekomerno izražen [25] [26] [27] [28]. Korelacija med DGE in RT-PCR testih je bilo jasno in statistika pomembna. In lahko DGE poskus šteje za reprezentativno tkiv želodca vzorcev izolirali iz 10 zdravstvenih predmetov in določajo del izražanja vzorec zdravega želodca tkiva.

Rezultati obeh metodologij kažejo, da je miRNA-21 je najbolj močno izražen želodčnega Cardia tkiva. Ta miRNA je razdeljen tudi v drugih človeških tkiv (na primer, dendritične celice, T-celic trebušne slinavke) in lahko sodeluje pri urejanju izražanje oskrbniška genov ( ATPAF1
, KIF3A
, CYBRD1
).

trdno podlago je pokazala, da so miR-192 in 148a značilne za želodčnega tkiva. Poleg tega Real Time PCR potrdili, da so ti miRNAs pretirano izražena. Tako na splošno, ti miRNAs verjetno uravnavajo izražanje genov, povezanih s homeostazo želodčnega tkiva. Zato bi nizke stopnje izraženosti teh miRNAs so povezani z razvojem želodčne neoplazije. Potencialna uporaba miRNA-192 in miRNA-148a, saj bi lahko markerji tveganja pri raku želodca najbolje raziskati z analizo miRnomes različnih histološke vrste raka želodca.

Razumevanje regulativne postopke, ki delujejo na človeka želodec bo pomembno v boju proti raku želodca, ki je drugi najpogostejši vzrok umrljivosti za rakom po celem svetu.

materiali in metode

biološkega materiala

Cardia želodca je mikroskopski območje, ki se navadno najdemo v večini proksimalnem delu želodca, blizu požiralniku odprtino (srčno zaslonko ali Kardije) in vsebuje srčne žleze. Naša sveže tkivo vzorec za ultra globoko sekvenciranje je bila pridobljena iz gastroscopic biopsijo (~4 mm ^{3). Bolnik je bil star 33 let, brez znakov raka in normalno gastroezofagealnem prehodu. Makroskopsko opazovanje tkiva ni pokazal poškodb in histološki pregled je potrdil normalne in zdrave razmere.}

Za potrditev rezultatov ultra-globoko sekvenciranje, vzorcev Cardia, v bližini srca odprtine, od 10. Poleg tega so bili zdravi posamezniki dobimo tudi endoskopske biopsije (~4 mm ^{3) in, po histološko preiskavo brez nepravilnosti, smo analizirali s PCR v realnem času. H. pylori
okužba je bil diagnosticiran na osnovi tipično videz bakterije vzdolž sluzi plast prekriva želodčni sluznici antralnih biopsije so bili sprejeti za oceno histologijo zaradi večje gostote bakterij v želodcu antruma in odlično občutljivosti tega diagnostične metode po mednarodnih merilih, določenih za njihovo identifikacijo [12], [13] (dodatne podrobnosti so navedene v tabeli S2).}

ETIKA IZJAVA

privolitev Avtor je bila pridobljena iz vseh bolnikih, in študija je odobril Comité de etica em Pesquisa (CEP) Hospital Universitario João Barros Barreto (HUJBB) -. Zvezni univerzi Pará (UFPA) (številka Protokol 14052004 /HUJBB)

miRNA KNJIŽNICA

skupno majhne RNA je bila pridobljena iz tkiva vzorca z uporabo mirVana Izolacija Kit (Ambion Inc., ZDA). Koncentracija in kakovost so bile določene z uporabo Nanodrop 1000 spektrofotometer, in čiščenje in izbire velikosti smo izvedli z uporabo 6% poliakrilamid gel elektroforeza. Uporaba SOLiD male RNA Expression Kit (Ambion Inc., ZDA), je bilo 200 ng majhnih RNA 150-200 bp uporablja kot predlogo za pridobitev knjižnico Mirna. Vse miRNAs knjižnice so bile označene z edinstveno in posebnih ojačevalnih primerji, znan kot črtne kode sistema (Life Technologies, CA, ZDA). Nato se je 50 pg knjižnice združili s sedmimi drugimi knjižnicami miRNA pri enaki koncentraciji. Frakcija knjižnice bazen (0,1 pg) je bila dopolnjena in pritrjena na magnetne kroglice, ki uporabljajo emulzije PCR. Produkt ePCR je bila shranjena na enem diapozitivu in se na multipleks SOLiD zaporedja reakcije.

SOLid ULTRA-DEEP zaporedja in analiza podatkov

solidno (različica 2.0) zaporedja sistem (Life Technologies) je bil uporabljen za ustvarjanje zapisano, da je bilo 35 bp dolg. Drugi korak je za dekodiranje črtne kode, ki ustrezajo vsakemu noga sekvenco z identiteto vzorca. Vse majhne RNA zaporedja želodčnih Kardije so na voljo v NCBI sekvencah Preberi arhiva (SRA012099). sekvenčna analiza je bila narejena z SOLiD System Small RNA Analysis Tool (Life Technologies) in MiRanalyzer [8]. Najprej smo izločiti vse sekvence, ki se ujemajo RNA onesnaževalcev, kot tRNA, rRNA, DNK ponovitev in adapter molekul. Po izločitvi onesnaževalcev bere, smo uskladiti vse sekvence proti miRNA predhodnikov zaporedij (MirBase ver. 12) in nato vključeni samo prebere, da se ujemajo zrel Mirna zaporedja [9]. Primerja te izrazne podatkov s tistimi iz drugih človeških tkiv, so bili podatki izraz Mirna uvoženi iz baze microRNA.org in izražanje vsak zrel miRNA je normaliziralo do skupnega števila branje [10]. Grafična analiza je bila opravljena s pomočjo Genepattern ^{10. Postopek odnosi Mirne-biološke so napovedali uporabo miRNApath (http://lgmb.fmrp.usp.br/mirnapath/tools.php~~HEAD=dobj).}

miRNA PCR v realnem času (POTRDITEV)

biopsijo vzorci želodčnih Cardia tkiv so bili zbrani iz 10 zdravih bolnikih. Po zbiranju smo vzorce takoj obdelana in shranjena pri -80 ° C, dokler ekstrakcijo RNA. Total RNA je bila vzeta s homogenizacijo 40 miligramov zamrznjenega tkiva, sledijo RNA izolaciji TRIzola reagentom (Life Technologies) v skladu z navodili proizvajalca. Koncentracija in kakovost miRNAs bile določene z uporabo Nanodrop 1000 spektrofotometer (ND-1000, Nanodrop Technologies, Wilmington, DE). Total RNA je bila reverzno prepisana z uporabo TaqMan @ MicroRNA reverzno transkripcijo komplet (Life Technologies).

Analiza ravni miRNAs je bila izvedena na 7500 Real-Time PCR System (Life Technologies) z TaqMan Mirna testi v skladu z proizvajalca navodila (Life Technologies) z uporabo začetnih oligonukleotidov, izdelane s Primer Express (Life Technologies). stopnja pomeni izraz treh človekovih notranjih kontrol (Z30, RNU19 in RNU6B - kalibratorjem). je bila uporabljena kot notranji nadzor v vseh poskusih miRNA, da omogoči primerjavo rezultatov izražanja

Zaradi visoke stopnje izraženosti v miRNAs prepoznavanje z ultra-globoko sekvenciranje (v padajočem vrstnem redu: MIR-29C, miR-21, miR-148a, miR-29a, miR-24, miR-29b, miR-192, miR-451, miR-145, miR-31, miR-200A, miR-19b, miR-200B, naj-7b in miR-26a), so bile potrjene s testi TaqMan miRNA (Life Technologies). Te analize so bili uporabljeni za merjenje ravni izražanja zrelih miRNAs in inter-individualne razlike v 10 vzorcih zdravega Cardia tkiva. Podatki o izražanje posameznih zrelih miRNA smo normalizirali na srednji izraz ravni treh človekovih notranjih kontrol (Z30, RNU19 in RNU6B). Relativni ekspresijski nivoji Mirni smo nato izračunamo z metodo primerjalno praga cikel (CT) (2 ^{-ΔCt). Korelacija Testiranje je bilo izvedeno po metodi Pearson (SPSS V.12).}

Podpora Informacije
Tabela S1.
identitete in podatkov obilje za vse znane miRNAs v trdnem zaporedno CCD v človeškem želodcu in baze podatkov miRamda
doi:. 10,1371 /journal.pone.0013205.s001
(0,44 MB PDF)
tabeli S2.
Opis in rezultati RT-PCR v 10 vzorcih iz zdravih posameznikov, pridobljenih s endoskopske biopsije. Velikost Vzorce je približno ~4 mm3. Pri vseh vzorcih so bile izvedene na histološko preiskavo in H. odkrivanje pylori
doi:. 10,1371 /journal.pone.0013205.s002
(0,03 MB XLS)

Priznanja

avtorji hvala D. Calcagno in S. Demaschki za njihove pripombe, ideje in pomaga.

• Plos ONE: Pot do Mans ljubezen skozi želodec: Kaj pa Konji
• Plos ONE: Vpliv energijske pijače na strukturi želodca in trebušne slinavke Albino Rat:? Ali lahko omega-3 Zagotoviti zaščito