PLoS ONE: Ultra-Deep Sequencing onthult de microRNA expressie Patroon van de menselijke maag

De abstracte

Achtergrond

Hoewel microRNAs (miRNAs) een belangrijke rol spelen in het weefsel differentiatie en bij het handhaven van basale fysiologie, is er weinig bekend over de miRNA expressie niveaus in de maag weefsel. Veranderingen in de miRNA profiel kan leiden tot cel deregulering, die neoplasie kan induceren.

Methodologie /voornaamste bevindingen

Een kleine RNA-bibliotheek van de maag weefsel werd gesequenced met behulp van high-throughput SOLiD sequencing technologie. We verkregen 261.274 kwaliteit leest met perfecte matches de menselijke miRnome en 42% van bekende miRNAs geïdentificeerd. Digital Gene Expression profiling (DGE) werd uitgevoerd op basis van gelezen overvloed en toonde aan dat vijftien miRNAs sterk werden uitgedrukt in de maag weefsel. Vervolgens werd de expressie van deze miRNAs werd gevalideerd in 10 gezonde individuen met RT-PCR toonde een significante correlatie van 83,97% (P < 0,05). Zes miRNAs toonde een lage variabele patroon van meningsuiting (miR-29b, miR-29c, miR-19b, miR-31, miR-148a, miR-451) en een deel van de expressie patroon van de gezonde maag weefsel kan worden beschouwd.

Conclusies /Belang

Deze studie had als doel om de normale miRNA profielen van de menselijke maag weefsel te valideren om een ​​referentie profiel voor gezonde individuen vast te stellen. Het bepalen van de regelgeving processen handelt in de maag zal belangrijk zijn in de strijd tegen maagkanker, dat is de op een na belangrijkste oorzaak van kankersterfte wereldwijd

Visum:. Ribeiro-dos-Santos Â, Khayat AS, Silva A , Alencar DO, Lobato J, Luz L, et al. (2010) Ultra-Deep Sequencing onthult de microRNA expressie Patroon van de menselijke maag. PLoS ONE 5 (10): e13205. doi: 10.1371 /journal.pone.0013205

Uitgever: Patrick Tan, Duke-National University of Singapore Graduate Medical School, Singapore

Ontvangen: 30 maart 2010; Aanvaard: 8 september 2010; Gepubliceerd: 8 oktober 2010

Copyright: © 2010 Ribeiro-dos-Santos et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Het werk werd gesteund door de Genoma Paraense de Genomica e Proteomica Project (Governo do Para /SEDECT /FAPESPA), PROPESP /UFPA, FADESP en capes (Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Onlangs, Friedman et al.
, 2009 aangetoond dat de meerderheid van de menselijke genen onder de controle van miRNAs. De > 45.000 miRNA doelplaatsen binnen menselijke 3'UTRs geconserveerd en > 60% van de menselijke eiwit-coderende genen onder selectiedruk geweest om koppelingen te handhaven miRNAs [1]. miRNAs zijn kleine niet-coderende sequenties van 17-25 bp die genexpressie reguleren door te binden aan het 3'-uiteinde van doelwit mRNA, resulterend in de remming van translatie van de mRNA [2], [3]. Ongeveer 14.000 miRNAs zijn geïdentificeerd in dieren, planten en schimmels [4], [5], [6]

Mechanismen die miRNAs te betrekken als negatieve regulatoren van genexpressie zijn vergelijkbaar in dieren en planten.; ze reguleren fundamentele cellulaire processen [6]. Bij mensen, ongeveer 3% van alle genen voorspeld miRNA precursoren en over >coderen; 60% van eiwitcoderende genen kan worden gereguleerd door miRNAs [1]. MiRNAs met essentiële functies bij vele cellulaire processen zoals groei en ontwikkeling, cellulaire proliferatie, differentiatie en apoptose. Derhalve veranderingen in miRNA expressie dragen aan menselijke ziekten zoals kanker [7], [8].

Veranderingen in miRNA expressiepatroon waargenomen in vele soorten van humane kanker, zoals borst-, colon-, long-, prostaat, leukemie en maagkankers. miRNA expressie wijzigingen leiden tot een verlies of winst van functie en zijn geassocieerd met de ontwikkeling van menselijke neoplasma via diverse mechanismen [5].

Hier presenteren we een genetische studie van de miRNA van de menselijke maag, want ondanks het belang van het orgel, kleine genetische gegevens beschikbaar over hun aanwezigheid en regelgeving bij de mens. Dit werk is het eerste volledige miRnome sequentiebepaling van de normale maag weefsel met behulp van next-generation sequencing technologie.

Resultaten

In de huidige studie werden profielen verkregen door ultra-deep sequencing met behulp van de solide platform ( Life Technologies, CA, VS). Dit is de eerste studie om deze procedure te gebruiken om de miRnome beschrijven van de normale maag weefsel. miRNAs werden geïsoleerd uit normale gastrische cardia slijmvlies van een gezonde patiënt. De profielen zijn gevalideerd met behulp van real time PCR om de expressie van de 15 meest uitgedrukt miRNAs te bepalen in een andere 10 gezonde patiënten.

ULTRA-DEEP SEQUENCING

Ultra-deep sequencing leverde een totaal van 104 miljoen ruwe leest en 5.000.000 leest voor de maag cardia miRNA bibliotheek. Voor verdere analyse, 3.200.000 leest werden geselecteerd op basis van sequentie kwaliteit (althans QV≥10 in de eerste 10 basen) [8]. Na het in kaart brengen die het menselijk genoom (release 19), bracht de hoeveelheid videogeheugen telling 2.534.490 miljoen leest (75% van de totale kwaliteit gelezen). Ongeveer 38% van 2.500.000 leest (963.460 gelezen) werden repeterende DNA-sequenties, tRNA, rRNA of andere kleine moleculen; 10% (261.274) werden aanvaard leest, perfect afgestemd op bekende volwassen miRNAs (MirBase versie 15, laat 04/2010) [9]; en de rest van de leest (52%) werden gekoppeld aan sequenties (figuur 1) genoom.

Voor de expressie analyse van miRNAs, leest alleen met lucifers aan miRNAs sequenties (261.274 gelezen) rijpen werden opgenomen. Gastrische cardia, identificeerden we 404 van 970 bekende rijpe miRNA sequenties (42%). Om de expressie van miRNAs te analyseren, definieerden we vijf reeksen: 1-10 lezen tellingen; 11-100; 101 tot 1000; 1001 tot 5000; en lees telling van meer dan 5000 (figuur 2) (aanvullende details worden gegeven in tabel S1). Het eerste bereik (1-10) omvatte 40% van de miRNAs waargenomen; de tweede reeks (11-100) omvatte 26%; het derde bereik (101 tot 1000) omvatte 20%; en de vierde en vijfde bereiken (> 1000 read tellen) bestond uit 14%

Met deze indeling, 347 volwassen miRNAs werden uitgedrukt tussen de eerste en derde reeksen en 57 tussen de vierde en vijfde bereiken.. Voor de karakterisering van de miRnome, selecteerden we een set van de 15 miRNAs die werden geuit op het hoogste niveau (≥1,000 gelezen).

In tabel 1 en Figuur 3 een lijst van de 15 volwassen miRNAs geïdentificeerd in het humane maag cardia . De heatmap van Figuur 4 vat de expressie van deze 15 miRNAs in de gastrische cardia en aan normale humane weefsels, DGE gegevens in de databank microRNA.org [10], [11]. Volwassen miRNA expressie kunnen worden ingedeeld in twee groepen: i) cardia-weefsels: miRNAs zelden uitgedrukt in andere weefsels, maar uitgedrukt in de maag cardia, met inbegrip van miR-148a, miR-192, miR-200a en miR-200b; ii) quasi-alomtegenwoordig: miRNAs uitgedrukt in vele weefsels en voorwaarden, met inbegrip van miR-29c, miR-21, miR-24, miR-29b, miR-29a, miR-451, miR-31, miR-145, miR-26a , miR-19b en laat-7b.

real time PCR

de ultra-deep sequencing resultaten werden gevalideerd met behulp van de singleplex Real Time PCR (RT-PCR) methode op 15 miRNAs geselecteerd om bepalen hun expressie in de gastrische cardia gebied van 10 gezonde individuen. Van de proefpersonen, 60% waren mannen, de gemiddelde leeftijd was 39,1 (± 12,8) jaar en 50% van de onderzochte patiënten positief voor H. pylori
volgens vastgesteld voor hun identificatie internationale criteria [12], [13] (tabel 2) (aanvullende details worden gegeven in tabel S2).

COMPARARISON MET DGE EN RT-PCR

Zowel singleplex (RT-PCR) en multiplex (vast platform) technologieën vertoonden hoge expressie (uitdrukking over 1000 leest de DGE en 7-voudig boven de endogene controle in de RT-PCR) van 15 miRNAs (figuren 4 en 5)

dezelfde RNA-monsters werden geanalyseerd met twee verschillende platforms: DGE en RT-PCR - Life Technologies.. De resultaten experimenten werden vergeleken en werden waargenomen lineaire regressie tussen de 2 ^{-ΔCt en de vierkantswortel van lezen tellen nummer. Pearson correlatie is hoog 83,9% statistische significante-test (P < 0,05). En gevalideerd solide resultaten}

Bovendien werden DGE resultaten ten opzichte van de kwantificering van de expressie bereik van de miRNAs in 10 gezonde proefpersonen, door Real Time PCR. De regressie voor de gemiddelde van RT-PCR-tests versus
vierkantswortel van lezen tellen nummer. Pearson correlatie is hoog 68,4% statistische significante-test (P < 0,05).

kon waarnemen miRNAs met een hoge inter-variant, voor exempla miR-21, en een andere met een lage interindividuele variatie, bijv. expressie patroon enigszins variabele (miR-29b, miR-29c, miR-19b, miR-31, miR-148a, miR-451).

Discussie

miRNAs regelen de meerderheid van de menselijke genen; echter, hebben slechts een paar miRNAs hun doelstellingen hadden en specifieke functies geïdentificeerd [14]. In onze studie was de maag monster verkregen van een individu zonder maag neoplasie of andere pre-neoplasie aandoeningen zoals atrofie, metaplasie en dysplasie. Voorstadia van kanker zoals gastritis leiden tot hypo-genomische methylatie in de maag dat het expressiepatroon van miRNAs [15] kan wijzigen. Het monster werd verkregen uit het normale weefsel van een patiënt zonder pathologieën, die het mogelijk hebben zonder gevaar voor het verzamelen van een schijnbaar normaal weefselmonster met micro-invasies van beginnende tumorigene cellen bij patiënten kan optreden met een van de bovenstaande pathologieën.

Deze studie is de eerste ultra-high-throughput sequentiebepaling van miRNAs in de fysiologisch normale menselijke maag. Slechts 5,06% van miRNAs die in maagweefsel reeds gedetecteerd in andere weefsels en gecatalogiseerd bioinformatica databanken zoals microRNA.org [10]. We verwachten dat deze groep van miRNAs aan toezichthouders van housekeeping genen, die overvloedig in menselijke weefsels zijn. Ander 7,84% van miRNAs had geen wedstrijden in het miRNA expressie databases en kon miRNAs die specifiek aan het spijsverteringssysteem of maag vertegenwoordigen.

Soortgelijke studies zijn uitgevoerd met andere normale weefsels, zoals de mond, keelholte, slokdarm, anus en de darmen. We vergeleken gegevens onze miRNA expressiedata het expressiepatroon van het maagweefsel te definiëren. We vonden hoge expressie niveaus in 15 miRNAs, waarvan 13 was al geïdentificeerd als zeer uitgedrukt in andere weefsels.

De expressie van Mir-148a en Mir-192 was geïdentificeerd in andere normale en cancereuze menselijke weefsels, maar was niet tot overexpressie gebracht. Mir-192 reeds gedetecteerd in gastrointestinale weefsels zoals de dikke darm, ileum, twaalfvingerige darm, dunne darm, maag, pancreas en de lever [16]. Basale expressie van mir-148a waargenomen in bindweefsel en endocriene weefsels [17]. Onlangs werd mir-148a gevonden te worden onderdrukt in navelstrengbloed cellen [18] en het zwijgen opgelegd door Hypermethylering in darmtumoren [19]. We waargenomen hoge expressie van mir-cluster 200 (a en b) in gastrische cardia zoals waargenomen in de eilandjes van Langerhans [11]. In een microarray experiment mir-200a en mir-200b werd gedetecteerd op lage niveaus in het maagdarmkanaal weefsels maar bij hoge niveaus in de colon, maag en alvleesklier [16]. Een recent gepubliceerde microRNA expressie atlas is gebleken dat deze miRNA is kenmerkend voor endocrine weefsel [17]. Recente bevindingen tonen aan dat de lage expressie van mir-200 cluster is gecorreleerd met eierstokkanker [19], [20]. Derhalve kan mir-200 cluster belangrijk voor het behoud van de integriteit van maag weefsels zoals gastrische cardia omdat dergelijke hoge expressie opgereguleerd de expressie van E-cadherine, het eiwit dat verantwoordelijk is voor de organisatie van de architectuur van het epitheelweefsel. Bovendien, de resultaten sterk een belangrijke rol van de familie miR-200 in de onderdrukking van de epitheliale-mesenchymale transitie (EMT) en de progressie van kanker [21] heeft.

Tabel 1 en 2 geven het aantal mogelijke doelen voor elk sterk tot expressie volwassen miRNA. Tabel 2 toont enkele doelstellingen van miRNAs voorspeld door de TargetScan tegen families van geconserveerde miRNAs. Met uitzondering van miR-451, alle gedeelde ten minste twee andere genen doelwitten. De genen ANKD52 Kopen en UBN2
, zijn doelwit van tien van de veertien miRNAs geanalyseerd, terwijl het gen TNRC6B
is van negen miRNAs, en de genen EPS 15 gelden
, NFAT5
, BACH2
, BRWD1
, NUFIP2
, PTEN
, CDK6
en PTPRD DD6
, zijn doelwit van acht miRNA. Dit resultaat suggereert dat deze miRNAs zijn sterke kandidaten te worden uitgezet in cardia regio. De experimentele validatie van deze genen, gevolgd door een analyse van de werking van elk kan de fysiologische rol van deze miRNAs in normaal maagweefsel onthullen.

Veel miRNAs het vertalen van eiwitten die handelen weefsel proliferatie reguleren en weefsel patronen zoals mir-200A (die kan richten integrine) en Mir-145 (die kunnen interageren met ErbB4
mRNA). Velen voorspeld mRNA targets werden gevonden gebruikelijk om meerdere sterk tot expressie miRNAs te zijn. Bijvoorbeeld, de HTR4
(5-hydroxytryptamine [serotonine] receptor) en AFF2
mRNA ( AF4 /FMR2
familie, lid 2) werden voorspeld doelen zijn van 13 van de 15 meest expressie miRNAs. Nog eens vijf mRNA's, met inbegrip van IGF-1
(insulin-like growth factor 1 [somatomedine C]), waren gemeenschappelijke voorspelde targets van 12 miRNAs. Acht miRNAs had 222 voorspelde doelstellingen met elkaar gemeen; Zo werd mir-29b voorspeld doel 196 daarvan. Vijf miRNAs (19b, 29a, 29b, 29c en 148a) gedeeld 70 voorspelde targets, waarvan sommige ( CDK6
, PTEN
, IGF1
, FRS2
, PDGFRA
, PIK3R1 Kopen en MXD1
) te reguleren cellulaire proliferatie en tumor onderdrukking.

Een aantal waarnemingen te koppelen miRNAs aan kanker. Eerst worden vele miRNAs betrokken bij cellulaire proliferatie en apoptose. Ten tweede zijn veel miRNA loci in kwetsbare gebieden van het menselijk genoom, gebieden die vaak in miRNA expressie worden geamplificeerd of verwijderd in humane neoplasieën en veroorzaken grote verschillen met normale weefsels [21], [22], [23], [24 ].

de Real Time PCR-techniek (welke relatieve kwantificatie gebruikt) bevestigd 15 miRNAs geïdentificeerd als met de hoogste expressie door de solide platform (die is gebaseerd op absolute aantallen) (figuren 4 en 5). Daarom kunnen deze miRNAs worden beschouwd als over-uitgedrukt [25], [26], [27], [28]. De correlatie tussen DGE en RT-PCR assays was duidelijk en statistisch significant. En DGE experiment kon worden geacht representatief weefsels maag monsters geïsoleerd uit 10 onderwerpen gezondheid en deel van het expressiepatroon van het gezond maagweefsel definiëren.

De resultaten van beide methoden blijkt dat miRNA-21 was het meest tot expressie gastrische cardia weefsel. Dit miRNA wordt ook verspreid in andere menselijke weefsels (bijvoorbeeld dendritische cellen, T-cellen, pancreas) en kan worden betrokken bij het reguleren van de expressie van housekeeping genen ( ATPAF1
, KIF3A
, CYBRD1
).

De solide platform bleek dat miR-192 en 148a zijn specifiek voor de maag weefsel. Bovendien, Real Time PCR bevestigd dat deze miRNAs zijn overexpressie gebracht. Bijgevolg, uiteindelijk deze miRNAs waarschijnlijk de expressie van genen betrokken bij maag- weefsel homeostase reguleren. Daarom kan de lage expressieniveaus van deze miRNAs worden gerelateerd aan de ontwikkeling van een maag neoplasie. Het potentiële gebruik van miRNA-192 en miRNA-148a als risicomerkers bij maagkanker best kan worden onderzocht door de analyse van de miRnomes van verschillende histologische typen maagkanker.

begrijpen van de regulerende processen die optreden in de menselijke maag zal belangrijk zijn in de strijd tegen maagkanker, dat is de op een na belangrijkste oorzaak van kankersterfte wereldwijd.

Materialen en methoden

biologisch materiaal

de maag cardia is een microscopisch zone die normaal in het proximale gedeelte van de maag, dichtbij de slokdarm opening (cardiale opening of cardia) en bevat de cardiale klieren. Onze verse weefselmonster voor ultra deep sequencing werd verkregen uit een gastroscopisch biopsie (~ 4 mm ^{3). De patiënt was 33 jaar oud, zonder bewijs van kanker en een normale gastro-oesofageale overgang. Macroscopische observatie van het weefsel toonde geen bewijs van de laesies en histologisch onderzoek bevestigde normale en gezonde omstandigheden.}

Om de resultaten van de ultra-deep sequencing, cardia monsters, in de buurt van cardiale opening, bevestigen van 10 Daarnaast gezonde personen waren ook verkregen via endoscopische biopten (~ 4 mm ^{3) en na histologisch onderzoek met uitzondering van afwijkingen, werden geanalyseerd door Real Time PCR. H.
pylori infectie gediagnosticeerd op basis van de typische uiterlijk van de bacterie aan de slijmlaag die het maagslijmvlies Antral biopten werden genomen voor histologie evaluatie door de hogere dichtheid van de bacteriën in de maag antrum en de uitstekende gevoeligheid van deze diagnostische methode volgens vastgesteld voor hun identificatie internationale criteria [12], [13] (aanvullende details worden gegeven in tabel S2).}

ETHIEK STATEMENT

Schriftelijke toestemming werd verkregen van alle patiënten, en de studie werd goedgekeurd door het Comité de Ética em Pesquisa (CEP) van Hospital Universitario João Barros Barreto (HUJBB.) - Federal University of Pará (UFPA) (Protocol nummer 14052004 /HUJBB)

miRNA BIBLIOTHEEK

de totale kleine RNA werd verkregen uit het weefselmonster met de Mirvana Isolation Kit (Ambion Inc., VS). De concentratie en kwaliteit werden bepaald met een spectrofotometer Nanodrop 1000 en zuivering en selectie op grootte werden uitgevoerd met 6% polyacrylamide gel electroforese. Via de vaste Small RNA Expression Kit (Ambion Inc., VS), 200 ng kleine RNA van 150-200 bp werden gebruikt als sjabloon om de miRNA bibliotheek te verkrijgen. Alle miRNAs van de bank werden gelabeld met unieke en specifieke amplificatie primers, zogenaamde streepjescode systeem (Life Technologies, CA, VS). Vervolgens werd 50 pg van de bibliotheek werd samengevoegd met zeven andere miRNA bibliotheken bij dezelfde concentratie. Een fractie van de bibliotheek pool (0,1 pg) werd geamplificeerd en magnetische korrels gebruikt emulsie PCR bevestigd. Het EPCR product werd afgezet op een enkele dia en onderworpen aan de multiplex SOLiD sequencing reactie.

Solid ULTRA-DEEP SEQUENCING en data-analyse

De vaste stof (versie 2.0) sequencing-systeem (Life Technologies) werd gebruikt voor het genereren staat dat 35 bp lang was. De tweede stap is om de barcode te decoderen, matching elke kraal sequentie met de identiteit van het monster. Alle kleine RNA-sequenties van de maag cardia zijn beschikbaar in de NCBI Sequences Lees Archive (SRA012099). Sequentieanalyse werd uitgevoerd met het gedegen systeem Small RNA Analysis Tool (Life Technologies) en MiRanalyzer [8]. Ten eerste, we uitgefilterd alle sequenties die RNA verontreinigingen zoals tRNA, rRNA, DNA herhalingen en adapter moleculen op elkaar afgestemd. Na uitsluiting van verontreiniging leest, we gericht alle sequenties tegen miRNA precursor sequenties (MirBase ver. 12) en dan alleen onder de staat dat paste volwassen miRNA sequenties [9]. Om deze uitdrukking gegevens te vergelijken met die van andere menselijke weefsels, werden miRNA expressie data geïmporteerd uit de microRNA.org database en de expressie van elk volwassen miRNA werd genormaliseerd door de totale lezen telling [10]. Grafische analyse werd uitgevoerd onder toepassing Genepattern ^{10. De miRNA-biologisch proces relaties werden voorspeld met behulp van miRNApath (http://lgmb.fmrp.usp.br/mirnapath/tools.php).}

miRNA real time PCR (validatie)

Biopsie monsters van gastrische cardia weefsels werden verzameld van 10 gezonde patiënten. Na het verzamelen werden de monsters onmiddellijk verwerkt en bewaard bij -80 ° C tot RNA-extractie. Totaal RNA werd geëxtraheerd door het homogeniseren van 40 milligram ingevroren weefsel, gevolgd door RNA-isolatie van TRIzol reagens (Life Technologies) volgens de instructies van de fabrikant. De concentratie en kwaliteit van miRNAs werden bepaald met een Nanodrop 1000 spectrofotometer (ND-1000, Nanodrop Technologies, Wilmington, DE). Totaal RNA werd reverse getranscribeerd met behulp van een TaqMan @ MicroRNA Reverse transcriptie kit (Life Technologies).

De analyse van miRNAs niveaus werd uitgevoerd op een 7500 Real-Time PCR System (Life Technologies) met TaqMan miRNA assays volgens de instructies van de fabrikant (Life Technologies) met behulp van primers ontworpen met Primer Express (Life Technologies). De gemiddelde expressie niveau van drie menselijke endogene controles (Z30, RNU19 en RNU6B - kalibrators). Werd gebruikt als een interne controle in alle miRNA experimenten mogelijk te maken voor de vergelijking van meningsuiting resultaten

De hoge expressie niveaus van miRNAs geïdentificeerd door ultra-deep sequencing (in dalende volgorde: miR-29c, miR-21, miR-148a, miR-29a, miR-24, miR-29b, miR-192, miR-451, miR-145, miR-31, miR-200a, miR-19b, miR-200b, laat-7b en miR-26a) werden gevalideerd met de TaqMan miRNA assays (Life Technologies). Deze analyses werden gebruikt om de expressieniveaus van volwassen miRNAs en interindividuele variatie in de 10 monsters van gezonde cardia weefsel te meten. De expressie gegevens van elke volwassen miRNA werden genormaliseerd naar de gemiddelde expressie niveau van de drie menselijke endogene controles (Z30, RNU19 en RNU6B). De relatieve miRNA expressieniveaus werden daarna berekend met de methode vergelijkende drempelcyclus (Ct) (2 ^{-ΔCt). -test correlatie werd uitgevoerd met behulp van Pearson methode (SPSS v.12).}

Ondersteunende informatie
Tabel S1.
Identiteit en overvloed van gegevens voor alle bekende miRNAs in vaste volgorde dataset in de menselijke maag en miRamda databank
doi:. 10.1371 /journal.pone.0013205.s001
(0,44 MB PDF)
tabel S2.
Beschrijving en RT-PCR resultaten van 10 monsters van gezonde individuen verkregen endoscopische technieken. Monsters is ongeveer ~ 4 mm3. Voor alle monsters werden uitgevoerd een histologisch onderzoek en H. pylori detectie
doi:. 10.1371 /journal.pone.0013205.s002
(0,03 MB XLS)

Dankwoord

De auteurs thanks D. Calcagno en S. Demaschki voor hun opmerkingen, ideeën en helpt.

• PLoS ONE: De Weg naar een Mans Hart is door zijn maag: Hoe zit het met Paarden
• PLoS ONE: Impact van een Energy Drink op de structuur van de maag en de alvleesklier van Albino Rat: Kan Omega-3 Zorg voor een Protection