Plos ONE: zvišane ravni gvanini v humani želodec in jetra raka Tissues

Povzetek

Štiri-nasedlih G-kvadrupleks DNK sekundarne strukture so bile pred kratkim vizualizira v jedrih gojenih celic. Tukaj smo pokazali, da lahko BG4, G-kvadrupleks specifičnih protiteles, je treba uporabiti, da se obarva DNK G-kvadrupleks strukture v pacienta pridobljeni tkiva z uporabo imunohistokemično. Opazujemo bistveno povišan število G-kvadrupleks-pozitivnih jeder človeških raka jeter in želodca v primerjavi z ozadja non-neoplastičnim tkiva. Naši rezultati kažejo, da se tvorba G-kvadrupleks mogoče zaznati in izmeriti v materialu bolniki izpeljana in da povišana gvanini lahko značilna za nekatere vrste raka

Navedba. Biffi G, Tannahill D, Miller J, Howat WJ, Balasubramanian S (2014), povišane ravni gvanini v humani želodec in jetra raka tkiv. PLoS ONE 9 (7): e102711. doi: 10,1371 /journal.pone.0102711

Urednik: Mark Isalan, Imperial College London, Velika Britanija

Prejeto: 28. maj 2014; Sprejeto: 23. junij 2014; Objavljeno: 17. julij 2014

Copyright: © 2014 Biffi et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v papirju in njene dodatne informacije datotek

Financiranje:. Avtorji hvala Cancer Research UK za programsko donacije (C9681 /A11961) in temeljnega institucionalnega financiranja v laboratoriju Balasubramanian, in za doktorski Studentstvo za GB (http://www.cancerresearchuk.org). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

nekanoničnih G-kvadrupleks DNA sekundarne strukture lahko tvorimo iz gvanina bogati DNA sekvencami tipa G _{3 + N L1 G 3 + N L2 G 3 + N L3 G 3+ (N = katerikoli lokaciji in L = zanke) in take zaporedje motivi so razširjene po vsej človeškega genoma [1], [2]. G-kvadrupleksov so štiri vijačnico strukture, ki zajemajo nizov tetrad nastali z Hoogsteen vodika-lepljenje štirih glikozidnih vezi, ki jih centralni kation enovalentno [3] usklajuje. Oligonukleotidi prepognjena v strukturo G-kvadrupleksa in vitro
imajo visoko termodinamičnega stabilnost v čim bolj fiziološki pogoji, v skladu z njihovo nastajanje v celicah [4]. Predvidena lokacija G-kvadrupleksnih zaporedju motivi v regulatorne regije genoma, kot promotorje in telomeres, kažejo, da imajo G-kvadrupleks strukture pomembno vlogo pri delovanju genoma [5] - [7]. Številni helicases da rešiti G-kvadrupleksi so bile ugotovljene in so predpostavili, da prispevajo k običajnim genoma funkcije, kot so podvajanje, prepisovanje in ohranjanju stabilnosti genoma [8]. Vizualizacija DNA G-kvadrupleksnih struktur v človeških celicah podpira obstoj G-kvadrupleksov v genomu [9]. V teh poskusih je bila visoko selektiven G-kvadrupleks specifičnih protiteles (BG4) generira zaslonu bakteriofagov in uporabimo za vizualizacijo diskretno žarišča G-kvadrupleksnih struktur v jedrih človeških tkiv kulture celičnih linij. Ta protitelesa, je bila priložnost, da sonda na celično vlogo G-kvadrupleksov in tudi njihovo morebitno vpletenost v bolezni.}

G-kvadrupleks strukture pa so predlagali, da so povezani z celičnih funkcij, kot so replikacijo in transkripcijo. Na primer, lahko stabilizacija G-kvadrupleks z majhno molekulo zatiranje transkripcijo določenih onkogenov in /ali inducira poškodbe DNA na telomeres in onkogenov vodi do replikacijsko napak in celično smrt [10] - [17]. G-kvadrupleks strukture lahko povezan tudi z genom nestabilnost in G-kvadrupleks zaporedje motivov je bilo ugotovljeno, proksimalno prelomnih točk DNK in območij somatskih številu kopij spreminja videli v več raka [18], [19]. Helicases da odpravite G-kvadrupleksi tudi ugotovila, lokalizirane na mestih genoma nestabilnosti [20] - [22], in bolezni, kot so Bloom je Werner je sindrom, ki kažejo povišane ravni genoma nestabilnosti in nagnjenost k raku, ki so prispevali mutacije G -quadruplex-reševanje helicases [23].

Glede na možno razmerje med G-kvadrupleksnih struktur in bolezni pri ljudeh, je pomemben cilj za obravnavo, ali se G-kvadrupleksov mogoče zaznati v človeških tkiv. Zato smo raziskali odkritje DNK G-kvadrupleksov v bolnikov, ki se pridobiva tkiva in ali obstajajo razlike v ravni G-kvadrupleksnih med ne-neoplastične in tumorskih tkivih. Z uporabo protitelo G-kvadrupleks specifične, BG4 v imunohistokemijo s-formalin fiksni parafinskih vgrajeni (FFPE) tkivo mikromrež oddelkov, smo zaznali široko DNA gvanini v jedrih človeških tkiv. Količinska BG4 pozitivnih celičnih jeder pokazala obširnejšo tvorbo G-kvadrupleksnih struktur v želodcu in jetrih raka v primerjavi z enakim ozadju non-neoplastičnih tkiv. Ti rezultati kažejo, da je obdelava G-kvadrupleksnih struktur mis-urejeno v nekaterih oblikah raka.

Rezultati in Razprava

določeno, da se dokaže prisotnost G-kvadrupleksov v jedra človeških tkiva in raziskati, ali so razlike očitna v bolnika izvira tkiva raka. Naš pristop je temeljil na odkrivanje jedrskih G-kvadrupleksov ga imunohistokemični (IHC) z G-kvadrupleksa specifična protitelesa, BG4, o ne-neoplastične in rakom mikromrež tkiva (TMAs). Specifičnost in selektivnost BG4 za G-kvadrupleksnih struktur in uporaba BG4 v imunofluorescenco (IF) mikroskopijo na človeških celicah so bile že opisane [9]. Za določitev primernosti BG4 za IHC, smo najprej testirali ta protitelesa v modelnem sistemu z uporabo odsekov iz FFPE peletov celičnih MDA-MB-231 celice raka dojke, ki so bili prej opazili, da se prikaže jedrsko G-kvadrupleks žarišča IF mikroskopijo [9] . Kot priklic epitop, bodisi toplotno posredovane (v temelji na citratnega pH 6,0 ali Tris /temelji na EDTA pH 9,0 odbojnikov) ali encimsko (s proteinazo K), ki se pogosto zahteva, da izpostavijo antigenske območij pred vezavo protitelesa, smo primerjali te tri standardne epitop priklic pre-zdravljenja. Po BG4 inkubaciji smo obarvanje izvedemo z inkubacijo s sekundarnim anti-FLAG protitelesom, ki prepozna označitve oznake epitop, prisoten v protitelesa BG4, čemur sledi Leica hrenovo peroksidazo na osnovi polimera detekcijo s pomočjo obarvanje platformo Bond IHC. Po tem protokolu je bila intenzivna jedrska obarvanje opazili BG4 šele po pridobivanju epitop (slika 1B in S1). Ne obarvanje opazili v odsotnosti predobdelave (slika 1A) in nadzora, opravljenega v odsotnosti BG4 je pokazala, da iskanje epitop s temelji na citratnega pufra je manj ozadje, kot da s Tris /EDTA (slika 1C in S1), medtem ko je pre -treatment z proteinaze k privedla do nespecifičnega jedrske obarvane tudi v odsotnosti BG4 (Slika S1). Poleg tega je po pridobivanju epitop z citrat ali Tris /EDTA odbojnikov, zdravljenje DNaze pred BG4 obarvanje privedla do močnega zmanjšanja BG4 intenzivnosti jedrske signala (Slika 1D in S1), še dodatno potrjuje odkritje DNK G-kvadrupleksov. Signal jedrske BG4 videli v IHC je v skladu s prejšnjim odkrivanje BG4 žarišč v jedrih tkivne kulture celic [9].

Ker je vzpostavila IHC protokol za BG4, smo najprej potrdili, da biopsijo ne-neoplastične človek vzorce tkiva se lahko obarvajo z uporabo BG4. Splošno smo ugotovili različne vzorce BG4 obarvanja v mnogih tkivih nakazujejo razlike v nastajanju G-kvadrupleksov med tkiv in tudi med celicami v istem tkivu (Slika S2). Ti rezultati kažejo, da je celotna tvorba DNK G-kvadrupleksov v zapletenih človeških tkiv mogoče oceniti s BG4 v IHC, tako razširja vizualizacijo G-kvadrupleksnih strukture izven IF mikroskopija v tkivne kulture celic. V začasni anketo BG4 barvanjem na tkivu raka v primerjavi z osnovnimi non-tumorska tkiva, razlike v intenzivnosti ali distribucijo BG4 barvanja pojavil predvsem sumljiva (podatki niso prikazani), in v mnogih primerih strogo količinsko ni bilo mogoče zaradi velikih razlik v morfologiji in prisotnost različnih tipov celic v maligne v primerjavi z ne-tumorska tkiva. V nasprotju s tem, za jetra in želodec, naš začasni pregled predlagal, da so bile te tkiva zlahka merljivi zaradi enotnejši nastop in med ne-neoplastične in tumorskih tkivih. Zato smo uporabili Z novo Imagescope Jedrska (v9) analizo slike programske opreme količinsko odstotek BG4 pozitivnih jeder, prisotnih v TMAs. Ločena analiza slike klasifikator je bila razvita za vsako vrsto tkiva natančno opredelili in samostojne dotika predmetov, s maligne in ne-neoplastične vzorci dosegel z istimi parametri za natančno primerjavo. Presenetljivo, v devetih primerih, ki smo jih imeli ponovitev raka jeter TMA jedra z ustreznim ujemanjem ozadju non-tumorska tkiva vzetega iz istega bolnika, smo opazili veliko večje število BG4-pozitivnih jeder pri bolnikih z rakom (povprečno 60,3 ± 5,4%) v primerjavi s non-neoplastična (povprečno 18,3 ± 2,12%) tkiva jedra (slika 2). Ko so bili pregledani posameznih fenotipov raka, smo ugotovili, da sta hepatocelični karcinom (HCC) in intrahepatska holangiokarcinom (ICC) je pokazala bistveno večjo BG4 madeže jedrskega v primerjavi z ne-tumorska tkiva (Slika 2A-D in G). Čeprav HCC in ICC različne celične izvor, ki se razvija od hepatocitov ali žolčevoda cholangiocytes oziroma tako pokazala večje število in intenzivnost BG4 pozitivnih jeder v primerjavi z ne-neoplastične jetrnega tkiva. Poleg tega je v metastaz (izoliran iz nediferenciranih pljučnega karcinoma straneh velike celice), so opazili tudi (slika 2E-G) povečanje BG4 pozitivnih barvanjem. Opazili smo jasne razlike med ne-neoplastičnega in tumorskega tkiva za več različnih primerov bolnikov. Dejansko je bolj obširne analize raka in v ozadju non-neoplastične TMA jedra, vključno z neprimerljivo primerih spet pokazala povečanje BG4 pozitivnih jeder po HCC, ICC in metastatskega raka (slika 3A). Ko so vsi primeri obravnavani skupaj, je bil ~2.4-kratno povečanje števila BG4 pozitivnih jeder opazili pri raku na jetrih v primerjavi z ne-tumorska tkiva. (P < 0,001, slika 3B)

Podobno kot na povečanje pojavnosti G-kvadrupleksa v raka jeter tkiva, večji kot 3-kratno povečanje števila BG4 pozitivnih jeder je bilo opaziti v želodcu adenokarcinoma in raka pečatni prstan celic v primerjavi z osnovnimi ne-neoplastične tkiva vzetega iz istega posameznika (slika 4). Širše zastavljene analize raka na želodcu in ne-neoplastične tkivih neprimerljivo primerih ponovno potrdil povečanje števila BG4 pozitivnih jeder videli v želodčnega raka v primerjavi z ne-tumorska tkiva (slika 5). Dejansko je v posameznem raka na želodcu podtipi, adenokarcinomi (ki izvirajo iz žleznega epitela), celic karcinomi pečatni prstan (adenokarcinome značilna mucin odlaganje) in gastrointestinalni stromalni tumorji (GIST, KIT-izražanje sarkomov o mezenhimskega izvora), so pokazali, večje število BG4 pozitivni jedra v primerjavi z ne-neoplastične želodčne tkiva (slika 5A). Ko so vsi primeri obravnavani skupaj, ~3.1-krat več BG4 pozitivni jedra so našli v raka v primerjavi z ne-neoplastične tkiva (slika 5B, P < 0,001). Omembe vredno je, da je več tumorja na želodcu podtipi, ki imajo različne etiologij in napredovanje, vse je značilna povečanje BG4 barvanjem. Ti rezultati so zato zelo spominja na splošno povezavo med povečano prisotnostjo G-kvadrupleksnih struktur in razvoj raka na želodcu.

V jetrih in želodcu TMAs, nekateri rak tkiva jedra pokazala malo ali nima merljivega BG4 obarvanje, morda odraža težavo v stabilnost epitop med kirurškim zbiranje biopsijo, ali pa kaže na realno variabilnost tvorbo G-kvadrupleksa v teh posebnih tkivih v. To je vseeno ugotavljajo, da v nobenem primeru ni koli ne-neoplastične jetra ali želodec tkiva v veliki meri BG4-pozitiven. Ta zadnja pripomba še dodatno potrjuje, da je povečanje števila BG4 pozitivnih celic videl v jedrih raka TMA odraža resnično razliko v G-kvadrupleksa prisotnosti med ne-neoplastične in malignih stanj. zato lahko analiza G-kvadrupleksa obarvanje v druge oblike raka mogoče in naša Predhodna analiza trebušne slinavke tkiva kažejo, da je, medtem ko BG4 obarvanje v ne-neoplastične trebušne slinavke je zelo razširjena ~1.6-kratno povečanje BG4 jedrske obarvanje v adenokarcinom tkivih ( P <. 0.01, slika S3)

Naši rezultati dokazujejo, da se G-kvadrupleksov lahko vizualiziramo z IHC v ne-neoplastične in rakom človeških tkiv razširiti naše prejšnje ugotovitve, ki kažejo na prisotnost G-kvadrupleksnih struktur v jedra za kulturo celičnih linijah [9]. Omeniti je treba, da smo opazili povečanje števila G-kvadrupleksnih-pozitivnih celic za nekatera tkiva raka v primerjavi z ne-neoplastične primerih. Podatki, ki jih bomo predstavili same po sebi ne pojasnjuje, zakaj je več G-kvadrupleksov očitno v primerih želodca in jeter raka. Vendar pa obstaja več vrst dokazil v strokovni literaturi, ki kažejo na morebitno združenja ali vzročne povezave med G-kvadrupleksov in mehanizmov, ki prispevajo k razvoju in napredovanju raka. Na primer, G-kvadrupleks strukture, če niso bili rešeni v podvojitvi DNA lahko predstavljajo krhke spletna mesta, ki spodbujajo genomsko nestabilnost, ki je dobro znan znak raka [24]. Dejansko so G-kvadrupleks zaporedje motivov najdete na DNK Mejni vrednosti, ki vodijo za prenose znotraj gena BCL 2 v limfomov in znotraj gena HOX11 v T-celic levkemije [25], [26]. Računske analize so pokazale tudi možne združenja G-kvadrupleksov in Ustavljanje regije različnimi vrstami raka [19].

smo hipotezo, ki se lahko pojavi povečanje genomskih G-kvadrupleksov pri raku mutacij v encimov, ki obdelujejo G-kvadrupleksi in /ali genomske nestabilnosti na G-kvadrupleksnih straneh. Na primer, Fanconijev anemija, Bloom in Werner sindromi, vsi prikaz genoma nestabilnost z nagnjenost k raku [27] - [29] in so posledica mutacij v DNA helikaza encimov, ki imajo G-kvadrupleksnih-reševanje dejavnost [30] - [32] . Nedavne študije genoma vsej so poudarili tudi priznavanje G-kvadrupleksnih sekvenc z dodatnimi reševanja helicases kot ATRX, PIF1 in XPB /D [20] - [22]. Poleg tega PIF1 je bilo predlagano, da bi zatrl genomske nestabilnosti na G-kvadrupleksov [22], izguba ATRX medtem ko je povezano s kromosomsko nestabilnost trebušne slinavke nevroendokrinih tumorjih [33], in XPD mutacije motijo ​​nukleotidov ekscizijski popravljanje DNA, ki vodijo do rakavih obolenj, nagnjeni takšnih kot pigmentne kseroderme [34].

zdi se, da so jetra in želodec raka so zelo heterogena in niso značilni skupni genetski podpis ali zelo zastopa vozniškega mutacije, ki lahko preprosto pojasniti opaženo povečanje G-kvadrupleksnih struktur . Medtem ko so mnogi raka jeter, povezane z virusom hepatitisa B ali okužbo C, patološko informacije, pridobljene s TMAs pomeni, da ni nobene korelacije z BG4 barvanjem. V okviru nadaljnjega dela, bo vrednost za analizo ne-neoplastične in malignih vzorcev tumorjev za primere, ko je bila celih genom zaporedja, ki delajo za pojasnitev genetsko ozadje tumorskih /ne-neoplastične parov, da se vzpostavi odnos med genotipom in gvanini raka.

na koncu smo poročilo uporabo protiteles G-kvadrupleksa specifične, BG4 v IHC obarvanje poskusih človekovih non-neoplastične in tumorskih tkivih. Ta raziskava nam je omogočilo, da prepoznajo bistveno večjo prisotnost DNK G-kvadrupleksnih struktur v jedrih želodca in raka jeter celic v primerjavi z ustreznimi ne-neoplastične tkiva. Predpostavljamo, da bi lahko te razlike odvisne od sprememb v celične procese, ki uravnavajo stabilnost genoma ali spremembe v stanju kromatina na G-kvadrupleksnih mest v tumorskih tkivih. Naši rezultati podpirajo možnost, da se lahko rakave celice zagotovi okno selektivnosti, ki bi jih naredil bolj občutljiva kot ne-neoplastične celice v smeri majhno molekulo G-kvadrupleksa ciljanja strategije.

Materiali in metode

stalnost, embedding, sekcijo in barvanjem celičnih peletov je bila izvedena v osnovnih storitev histopatološki na Cancer Research UK inštituta Cambridge. Imunohistokemija (IHK) je bila izvedena z uporabo standardnih postopkov za avtomatizirano platformo Leica obveznic z manjšimi odstopanji. Na kratko smo tkiva določena za 24 h pri sobni temperaturi (RT) v 10% nevtralnem zapufrani formalina in obdelali s pomočjo procesorja za tkivno Leica ASP300 z de-hidracijo skozi stopenjski etanola seriji obračun v ksilenu in infiltracijo s staljenim parafinom. Vdelovanje je bila izvedena na Embedding postaji na Leica EG1160 in sekcije so se zmanjšale na 3 um z Mikrotom, v zraku na vodno kopel pri ~45-50 ° C, dokler gladko in ravno pred zbiranjem na objektno stekelce in sušenju pri 60 ° C 1 h. De-voskanje in ponovno hidracijo smo izvedli z uporabo avtomatskega Leica ST5020 multistainer. MDA-MB-231 adenokarcinomske celice človeškega dojk smo dobili iz ATCC LGC standardi. Za celične pelete MDA-MB-231, smo Preiskovalna epitop izvaja pri 100 ° C za 20 minut z pridobivanja Bond epitop rešitev 1 (temelji na citrat pH 6,0) ali Bond pridobivanja epitop raztopini 2 (Tris /temelji na EDTA pufer pH 9,0) ali pri 37 ° C za 10 minut s kompletom Bond encim predhodne obdelave (100 mg /ml proteinaze k v Tris-pufrom, površinsko aktivne snovi in ​​0,35% ProClin 950), da bi našli najboljše stanje. Na voljo na tržišču mikromreže človeških tkiv z ustrezno podani v državi izvora, so bile kupljene od Insight Bio Združenem kraljestvu (za ZDA Biomax Inc. nizi) in BioCat, Nemčiji ali Stretton Znanstvenega, UK (za Accumax, ISU Abxis nizi). Epitop Preiskovalna smo izvedli pri 100 ° C za 20 minut z citratnega pufra. BG4 obarvanje je bila izvedena pri sobni temperaturi na avtomatizirani instrumenta Leica obveznic z zajec polimera kit (Leica) po 15 minutah inkubacije je z BG4 in 8 min inkubaciji z anti-FLAG kunčje poliklonalno protitelesa (Cell signalizacija Technology) a. Ploščice smo potem jih nasprotno 5 min z 0,02% hematoksilinom vizualizirati jedra celic. De-hidracijo in obračun so bile izvedene na avtomatizirani Leica ST5020 multistainer in montaža je bila izvedena na avtomatizirani steklo coverslipper Leica CV5030. Ploščice smo skenirane s sistemom slide skeniranje Z novo XT120 (Leica) in slike analizirali z uporabo programske opreme V9 Z novo Imagescope jedrsko. Statistične analize in P vrednosti so bile izračunane na podlagi t-test. Frekvenčno distribucijo grafe so bile narisane s pomočjo GraphPad Prism (GraphPad Software).

Podpora Informacije
Slika S1.
BG4 madeži na parafinskih vgrajeni celične pelete MDA-MB-231. A. človeške MDA-MB-231 rak dojke celic pelete so bile določene, parafin, vgrajena in pripravljena za IHC uporabo G-kvadrupleks specifične BG4 na protiteles. Močna BG4 obarvanje (rjava) je razvidno v celici jedrih po pridobivanju epitop s Tris /temeljijo na EDTA pH 9,0. Lestvica bar ustreza 20 um. Jedra so jih nasprotno s hematoksilinom (modra). B. Močno BG4 obarvanje (rjava) je razvidno v celici jedrih po pridobivanju epitop z proteinaze K. C. Ne jedrsko obarvanje opaziti v odsotnosti protitelesa BG4 po pridobivanju Tris /EDTA epitop. D. Ne jedrska barvanja je videti po zdravljenju DNazi pred BG4 barvanjem po pridobivanju epitop z EDTA. E. Visoka raven nespecifičnega obarvanja v odsotnosti BG4 po pridobivanju epitop z proteinaze K.
doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s001
(IOD)
Slika S2.
Non-neoplastične človeška tkiva kažejo spremenljivka BG4 madeže. Non-neoplastične tkiva smo obarvali z imunohistokemijo, z uporabo G-kvadrupleks specifične BG4 na protiteles. A. BG4 obarvanje (rjava) v skorji ledvic kažejo različne intenzivnosti jedrskih obarvanje v glomerulov in s tem povezanih objektov. Celic jedra so jih nasprotno s hematoksilinom (modra). Lestvica bar znaša 50 um B. Šibko je pozitivna BG4 obarvanje videli v zbiralne tubulov jeder v deblo ledvic. C. kože prikazuje obseg BG4 intenzivnosti v povrhnjici s pozitivnimi in negativnimi jeder razpršeni po vsem, ker usnjico je večinoma pozitiven. D. Večina jeder v debelem črevesu so BG4-pozitivna. E. V materničnega telesa, slojevit ploščatocelični epitelij je v veliki meri BG4 negativna pa je pozitiven obarvanje videti bolj površno. F. Skozi prsi duktusu lobules na obe myoepithelial in luminalno celice kažejo splošno močno BG4 madeže z le občasnimi negativnih celic
doi:. 10.1371 /journal.pone.0102711.s002
(TIF)
Slika S3.
Zvišane prisotnost G-kvadrupleksnih struktur v človeških tkivih z rakom trebušne slinavke. Non-neoplastične in rakom trebušne slinavke tkiva smo obarvali z imunohistokemijo, z uporabo G-kvadrupleks specifične BG4 na protiteles, in število BG4 pozitivnih jeder je dosegel s pomočjo Z novo Imagescope programske opreme. A. prisoten tudi jeder non-neoplastične trebušne slinavke tkiva kažejo zmerno BG4 barvanjem (rjave) z veliko neobarvano jeder. Celic jedra so jih nasprotno s hematoksilinom (modra). Lestvica bar ustreza 50 um. B. BG4 obarvanje v trebušne slinavke adenokarcinomom tkivo je bolj obsežen z večjo intenzivnostjo. C. Skupna količinska števila BG4 pozitivnih jeder v vseh ne-neoplastične in trebušne slinavke tkiva raka. Napaka palice predstavljajo s.e.m. * P < 0,01, n = 6 in 12 za ne-neoplastične in rakom jeder, in sicer
doi:. 10,1371 /journal.pone.0102711.s003
(TIF)

• Plos ONE: Vedno Gamble na tešče: Lakota je povezana z vodomera odločanju
• Plos ONE: Unexpected brez glave in brezrepo Ribe v želodcu Vsebina mako Isurus oxyrinchus