PLoS ONE: Padidėjęs G Quadruplex formavimasis žmogaus skrandžio ir kepenų vėžio audinių

Anotacija

Keturių Suvyta G-quadruplex DNR antrinės struktūros neseniai buvo ryškinamos į žmogaus išaugintų ląstelių branduoliuose. Čia, mes rodo, kad BG4, G-quadruplex specifinius antikūnus, gali būti naudojamas dažyti DNR G-quadruplex struktūras pacientų gautas audinių naudojant imunohistocheminiu. Mes laikytis reikšmingai padidėjusi skaičių G-quadruplex-teigiamų branduolių žmogaus vėžio, kepenų ir skrandžio, palyginti su fono ne-neoplastinės audinio. Mūsų rezultatai rodo, kad "G-quadruplex formavimas galima aptikti ir išmatuoti paciento kilmės medžiaga ir kad padidėjusi G quadruplex formavimas gali būti kai kurių vėžio formų charakteristika

nurodomoji dalis:. Biffi G Tannahill D Milleris J Howat WJ, Balasubramanian S "(2014) Padidėjęs G Quadruplex formavimasis žmogaus skrandžio ir kepenų vėžio audiniuose. PLoS ONE 9 (7): e102711. Doi: 10,1371 /journal.pone.0102711

redaktorius: Markas Isalan, Imperial College London, Jungtinė Karalystė

Įstojo: Gegužės 28, 2014; Priėmė: Gegužės 23, 2014 m Paskelbta: Lie 17, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Biffi et al. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. autoriai patvirtina, kad visi duomenys, kuriais grindžiamos išvados visiškai prieinama be apribojimų. Visi atitinkami duomenys yra per popieriaus ir jo Pagalbinė informacija failus

Finansavimas:. Autoriai dėkoja Cancer Research UK už programos dotacija (C9681 /A11961) ir pagrindinės institucinio finansavimo į Balasubramanian laboratorijoje, ir doktorantūros Stipendija už LT (http://www.cancerresearchuk.org). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

nekanoninį G quadruplex DNR antrinės struktūros gali būti suformuotas iš guanino turtingas DNR sekų tipo G _{3 + N L1 G 3 + N L2 G 3 + N L3 G 3+ (N = bet koks vieta ir L = kilpa) ir tokios sekos motyvai yra paplitusios po visą žmogaus genomo [1], [2]. G-quadruplexes yra keturių dideles struktūras, kurios sudaro šūsnis tetrads susiformavo per Hoogsteen vandenilinių klijavimui keturių guanines koordinuoja centrinę vienvalentę katijonas [3]. Nukleotidai sulankstyti į G-quadruplex struktūrą in vitro, pervežimas turėti aukštą termodinaminį stabilumą pagal šalia-fiziologinę būklę, atitinkančią jų susidarymo ląstelėse [4]. Prognozuojama vieta G-quadruplex sekos motyvais reguliavimo regionuose genomo, kaip antai rengėjų ir Telomera, rodo, kad "G-quadruplex struktūros gali turėti svarbių vaidmenų genomo funkcija [5] - [7]. A helicases skaičius, kad išspręsti G-quadruplexes buvo nustatyti ir yra hipotezę, prisidėti prie įprastų genomo funkcijų, tokių kaip replikacija, transkripcija ir genomo stabilumo [8] priežiūros. DNR G-quadruplex struktūrų žmogaus ląstelių vizualizavimo rėmė G-quadruplexes buvimą genomo [9]. Be šių eksperimentų, labai selektyvus G quadruplex specifinius antikūnus (BG4) buvo sukurtas fagq ekrane ir dirbo vizualizuoti diskrečiųjų židinių G quadruplex struktūrų žmogaus audinių kultūra ląstelių linijų branduolių. Antikūnų suteikė galimybę zondas ląstelių vaidmenį G-quadruplexes taip pat jų galimą dalyvavimą liga.}

buvo siūloma G quadruplex statiniai turi būti susijęs su mobiliojo ryšio funkcijas, pavyzdžiui, replikacijos ir transkripcijos. Pavyzdžiui, "G-quadruplex stabilizavimas nedidelė molekulė gali slopinti transkripciją tikrų onkogenų ir /arba sukelti DNR žalą iš Telomera ir onkogenų pirmaujanti atkartojimas defektus ir ląstelių mirtį [10] - [17]. G-quadruplex struktūros, taip pat gali būti susijęs su genomo nestabilumą ir G-quadruplex seka motyvai buvo rasta proksimalinio DNR ribines vertes ir svetainių somatinių kopijų skaičiaus pokyčiai matyti keletą vėžio [18], [19]. Helicases kad išspręsti G-quadruplexes taip pat yra lokalizuota vietose genomo nestabilumo [20] - [22], ir ligos, kaip antai B. Bloomo ir Werner anketa sindromų, kurie rodo padidėjusį lygių genomo nestabilumo ir polinkį į vėžį, yra prisidedama mutacijos G -quadruplex-sprendžiant helicases [23].

Atsižvelgiant į galimą ryšį tarp G-quadruplex struktūrų ir žmonių ligų, tai yra svarbus tikslas spręsti, ar G-quadruplexes galima aptikti per žmogaus audiniuose. Todėl tyrė DNR G-quadruplexes aptikti pacientų gautas audinių ir ar yra skirtumai G quadruplex lygių tarp ne navikinių ir vėžio audiniuose. Pasitelkus G-quadruplex specifinius antikūnus, BG4, į imunohistocheminiu su formalinu fiksuotos parafino įterptųjų (FFPE) audinių microarray skyriuose, mes nustatėme, plačiai DNR G quadruplex formavimas žmogaus audinių branduolių. Kiekybinis BG4 teigiamų ląstelių branduolių atskleidė plačiau formavimąsi G quadruplex struktūrų skrandžio ir kepenų vėžiu, palyginti su atitinkamu fono ne navikinių audinių. Šie rezultatai rodo, kad G-quadruplex struktūrų tvarkymas neteisingai reguliuojama kai kuriose žmogaus vėžio.

Rezultatai ir jų aptarimas

išdėstyta įrodyti G-quadruplexes buvimą žmogaus branduolių audiniai ir ištirti, ar bet kokie skirtumai yra lengvai matyti paciento kilmės vėžio audiniuose. Mūsų požiūris buvo grindžiamas branduolinių G-quadruplexes aptikimo imunohistocheminiu (IHC) su G-quadruplex specifinius antikūnus, BG4, apie ne navikinių ir vėžio audinių mikrogardelių (TMA). Specifiškumą ir selektyvumas BG4 už G quadruplex struktūrų ir BG4 taikymas imunofluorescenciniam (IF) mikroskopijos žmogaus ląstelės buvo aprašyta anksčiau [9]. Norėdami nustatyti BG4 už IHC tinkamumą, pirmiausia išbandyti šį antikūną modelinė sistema, naudojant skyrius iš FFPE ląstelių granules MDA-MB-231 krūties vėžio ląstelių, kurios anksčiau buvo pastebėta, kad būtų rodomas branduolinę G quadruplex židiniai IF mikroskopijos [9] , Kaip epitopą paieška, arba šilumos tarpininkaujant (citrato pagrindu pH 6,0 ar Tris /EDTA pagrindu pH 9,0 buferiai) arba fermentais (su proteinazės K), dažnai reikalinga prieš antikūnų privalomas atskleisti antigeninėmis svetainių, mes palyginti šias tris standartinį epitopą Priėmimo anksto procedūros. Po BG4 inkubacijos dažymo atliko inkubacijos su antrinio kovos su FLAG antikūno, kuris pripažįsta vėliava tag epitopą dabartinį į BG4 antikūnų, po Leica krienų peroksidazės polimero pagrindu aptikimo naudojant Obligacijų IHC dažymo platformos. Po šio protokolo, intensyvus atominės dažymo buvo pastebėtas su BG4 tik po epitopą paieškos (1b ir S1 paveiksle). Nėra dažymo buvo pastebėtas paruošiamojo apdorojimo (1a pav) ir kontrolės, kuri atliekama atsižvelgiant į BG4 nebuvimo, parodė, kad epitopas paieška su citrato pagrindu buferis suteikė mažiau fonas, nei su Tris /EDTA (1c ir S1 paveiksle), o iš anksto GYDYMUI su proteinazės K lėmė ne konkretaus branduolinės energetikos dažymo net BG4 nėra (S1 paveiksle). Be to, po epitopą paieškos su citrato arba tri /EDTA buferiai, gydymas dezoksiribonukleazė Aš prieš BG4 dažymo lėmė smarkiai sumažinamas BG4 branduolinės signalo intensyvumo (1D ir S1 paveiksle), toliau patvirtinantis DNR G-quadruplexes aptikimo. Branduolinis BG4 signalas matomas IHC yra suderinama su ankstesnės aptikti BG4 židinių į audinių kultūros ląstelių branduolių [9].

nustačiusios IHC protokolą BG4, mes pirmą kartą patvirtino, kad biopsiją ne neoplazminė žmogaus audinio mėginiai gali būti dažomi BG4. Apskritai, mes nustatėme, įvairių BG4 dažymo modelius daugelyje audinių, rodantiems skirtumus G-quadruplexes tarp audinių ir tarp ląstelių tame pačiame audinyje (S2 paveikslas) formavimas. Šie rezultatai rodo, kad bendras formavimas DNR G-quadruplexes sudėtingų žmogaus audinių gali būti įvertintas naudojant BG4 į IHC, taip išplečiant G quadruplex struktūrų vizualizacija už JEI mikroskopija audinių kultūroje ląstelių. Be laikinai apklausos BG4 dėmių atsiradimą ant vėžinių audinių, palyginti su fono ne neoplastiniu audinio, skirtumai BG4 dažymo intensyvumo arba platinti pasirodė labiausiai abejotina (duomenys neparodyti), ir daugeliu atvejų griežtas kiekybinis buvo neįmanoma dėl didelių skirtumų morfologijos ir buvimas kelių tipų ląstelių piktybinę palyginti ne neoplastiniu audinio. Priešingai, kepenims ir skrandžiui, mūsų laikinoji tyrimo parodė, kad šie audiniai buvo lengvai kiekybiškai dėl daugiau vienodos išvaizdos ir tarp ne navikinių ir vėžio audiniuose. Todėl mes panaudojome Aperio Imagescope branduolinės (V9) Vaizdo analizės programinė įranga kiekybiškai įvertinti BG4 teigiamas branduolių, esančių TMA procentą. Po atskirą vaizdą analizė klasifikatorius buvo sukurtas kiekviena audinių tipo tiksliai nustatyti ir atskirų nesiliečia, objektų, su piktybinių ir nepiktybinių-neoplastinių mėginiai įmušė naudojant tuos pačius parametrus tiksliau palyginti. Įdomu pastebėti, kad devyniais atvejais, dėl kurių mes turėjome dublikatas kepenų vėžio TMA branduolius su atitinkamu atitiko fonas ne neoplastiniu audinio, paimto iš paties paciento, mes nustatėme, daug didesnį skaičių BG4 teigiamų branduolių vėžio (vidurkis 60,3 ± 5,4%), palyginti su ne neoplazminė (vidurkis 18,3 ± 2,12%) audinių ritiniai (2 paveikslas). Kai buvo nagrinėjami atskirų vėžio fenotipų, mes nustatėme, kad tiek kepenų ląstelių karcinoma (HCC) ir intrahepatinė cholangiokarcinomos (TBT) parodė žymiai didesnį branduolinės BG4 dažymo palyginti su ne neoplastiniu audinio (pav 2A-D ir G). Nors HCC ir TBT turi skirtingus ląstelių kilmę, kurti iš hepatocitų ar tulžies latakų cholangiocytes atitinkamai, tiek parodė didesnį skaičių ir intensyvumą BG4 teigiamas branduolys, lyginant su ne neoplastiniu kepenų audinio. Be to, metastazių (izoliuota nuo didelių ląstelių nediferencijuotose plaučių karcinoma svetaines) in BG4 teigiamas dažymo padidėjimą taip pat buvo pažymėta (pav 2E-G). Mes pastebėjo aiškius skirtumus tarp ne neoplastiniu ir naviko audinių įvairių pacientų atvejų. Iš tiesų, platesni analizė vėžio ir fono ne navikinių TMA branduolių įskaitant neprilygstamą atvejais vėl parodė į BG4 teigiamas branduolių visoje HCC, TBT ir metastazavusiu vėžiu (3a paveikslas) padidėjimas. Kai visi atvejai buvo laikomi kartu A ~2.4 kartus padidėjo BG4 teigiamų branduolių skaičius buvo pastebėtas kepenų vėžio palyginti su ne neoplastiniu audinio. (P < 0,001, 3b pav)

panašus į padidėjimas G-quadruplex dažnis kepenų vėžio audinyje, daugiau negu 3 kartus padidėjo BG4 teigiamų branduolių skaičius buvo pastebėtas skrandžio adenokarcinoma ir antspaudo žiedas ląstelių karcinoma, lyginant su foninio ne neoplazminė audinio, paimto iš to paties asmens (pav 4). Platesnis masto analizė skrandžio vėžio ir ne navikinių audinių, įskaitant neprilygstamą atvejais patvirtino į BG4 teigiamas branduolių matyti skrandžio vėžio palyginti su ne neoplastiniu audinio (5 paveikslas) skaičiaus padidėjimą. Iš tiesų, individualios skrandžio vėžio, adenokarcinoma (paimta iš liaukinio epitelyje), antspaudo žiedas ląstelių karcinomos (adenokarcinoma būdingas mucino nusėdimą) ir virškinimo trakto stromos navikai potipiai (VTSN, "KIT-išreikšti sarkomą mezenchimos kilmės), visi parodė didesnį skaičių BG4 teigiamas branduolys, lyginant su ne neoplastiniu skrandžio audinyje (5a pav.) Kai visi atvejai buvo nagrinėjami kartu, ~3.1 kartus daugiau BG4 teigiamas branduolys buvo rasta vėžį palyginti ne navikinių audinių (pav 5B, P < 0,001). Pažymėtina, kad kai kurios skrandžio naviko potipiai, kurie turi skirtingas etiologies ir progresavimą, visi būdingi padidinti BG4 dažymo. Todėl šie rezultatai yra labai įtaigus bendro ryšio tarp padidėjusia buvimo G quadruplex struktūrų ir skrandžio vėžio vystymąsi.

kepenų ir skrandžio TMA, kai vėžys audinio šerdis parodė mažai arba jokio kiekybiškai BG4 dažymo, galbūt tai rodo, kad epitopą stabilumo problemą per chirurginės biopsijos surinkimo arba alternatyviai nukreipta į nekilnojamojo kintamumą G quadruplex formavimo šių konkrečių audinių. Tai nepaisant to, atkreipkite dėmesį, kad jokiu būdu buvo bet ne neoplazminė kepenų ar skrandžio audinių plačiai BG4-teigiamas. Pastarasis pastebėjimas dar kartą patvirtina, kad į BG4 teigiamas ląsteles matyti vėžys TMA branduolių skaičiaus augimas atspindi tikrą skirtumą G quadruplex buvimą tarp ne navikinių ir piktybinių narių. Todėl analizė G-quadruplex dažymo kitų vėžio gali būti įmanoma ir mūsų preliminari analizė kasos audinio rodo, kad, nors BG4 dažymo ne neoplastiniu kasos yra plačiai paplitusi, yra ~1.6 kartus padidėjęs BG4 branduolinės dažymo metu adenokarcinoma audinių ( p. < 0,01, S3, pav)

Apskritai, mūsų rezultatai, rodantys, kad G-quadruplexes gali būti matomos IHC ne navikinių ir vėžio žmogaus audinių išplėsti savo ankstesnes išvadas, kad atskleidė G-quadruplex struktūrų buvimą kultūros ląstelių linijų branduoliai [9]. Pažymėtina, kad mes stebėjo į G-quadruplex teigiamas ląstelių skaičiaus kai kurių vėžio audiniuose, palyginti su ne navikinių atvejais padidėjimas. Duomenų, kad mes pristatome patys savaime negali paaiškinti, kodėl daugiau G-quadruplexes yra akivaizdus skrandžio ir kepenų vėžio atvejų. Tačiau yra kelios eilutės įrodymų literatūroje, rodančių galimą asociaciją ar priežastinio ryšio tarp G-quadruplexes ir mechanizmų prisideda prie vėžio išsivystymo ar progresuoja. Pavyzdžiui, "G-quadruplex struktūros, jei ne išspręstas per DNR replikacija, gali atstovauti trapi svetaines, skatinančias genomo nestabilumą, kuris yra gerai žinomas požymis vėžio [24]. Iš tiesų, "G-quadruplex seka motyvai rasti DNR ribinės koncentracijos, kad švino perkėlimams per BCL2 geno limfomų ir per HOX11 geno T-ląstelių leukemija [25], [26]. Skaičiuojamoji analizė taip pat pasiūlė galimą asociacijas G-quadruplexes ir atskaitos tašką regionus įvairių vėžio [19].

hipotezę, kad į genomo G-quadruplexes vėžiu padidėjimas gali atsirasti mutacijų fermentų, apdoroja G-quadruplexes ir /arba genomo nestabilumas ne G quadruplex svetainėse. Pavyzdžiui, Fankoni anemija, Bloomo ir Werner sindromai, visi ekranas genomo nestabilumas su polinkį į vėžį [27] - [29] ir atsiranda mutacijų DNR helikazės fermentų, kurie G-quadruplex-sprendžiant veiklą [30] - [32] , Naujausi genomo tyrimai taip pat pabrėžė, kad "G-quadruplex sekų atpažinimą papildomų išspręsti iškilusias helicases pvz ATRX, PIF1 ir XPB /D [20] - [22]. Be to, PIF1 buvo pasiūlyta slopinti genomo nestabilumą ne G-quadruplexes [22], o ATRX praradimas yra susijęs su chromosomų nestabilumo kasos neuroendokrininių navikų [33], ir XPD mutacijos sutrikdyti nukleotidų iškirpimas DNR reparacijos, kuri veda prie vėžio tikimybė ligų, tokių kaip xeroderma pigmentinės [34].

atrodo, kad kepenų ir skrandžio adenokarcinoma yra labai nevienalytė ir nėra būdinga bendros genetinės parašu arba labai atstovavo vairavimo mutacija, kuri gali tiesiog paaiškinti padidėjusį G quadruplex struktūrų , Nors daugelis kepenų vėžio yra susijęs su hepatitu B ar C infekcija, patologinės gautą informaciją su TMA rodo, kad nėra koreliacijos su BG4 dažymo. Kaip dalis būsimo darbo, tai bus vertinga analizuoti ne neoplastiniq ir piktybinių navikų mėginiuose tokiems atvejams, kai viso genomo sekos dirbo išsiaiškinti genetinę fone auglio /ne navikinių poromis, siekiant nustatyti ryšį tarp genotipo ir G-quadruplex formavimo vėžio.

Taigi, mes pranešti apie G-quadruplex specifinius antikūnus naudoti, BG4, į IHC dažymo eksperimentus žmogaus ne navikinių ir vėžio audiniuose. Šis tyrimas leido mums nustatyti žymiai didesnį buvimą DNR G quadruplex struktūrų skrandžio ir kepenų vėžio ląstelių branduolių palyginti su atitinkamu ne navikinių audinių. Mes iškėlė hipotezę, kad šie skirtumai gali būti priklausomas nuo pakitimų korinio procesų, kurie reguliuoja genomo stabilumą ar pokyčius chromatino narėje G quadruplex svetainių vėžio audiniuose. Mūsų rezultatai patvirtina galimybę, kad vėžinės ląstelės gali suteikti atrankinio langą, kad leistų jiems jautresni nei ne navikinių ląstelių link mažos molekulės G-quadruplex nukreipimą strategiją.

Medžiagos ir metodai

Fiksacijos, indeliuose, ruožais ir dažymo ląstelių granules buvo atlikta pagal histopatologinį pagrindines paslaugas prie Cancer Research UK Kembridžo institutas. Imunohistocheminis (IHC) buvo atliekamas naudojant standartinius metodus automatizuotai Leica "Bond platforma su nedideliais pakeitimais. Trumpai tariant, audiniai buvo nustatytos 24 h kambario temperatūroje (RT) 10% neutralus buferiniame formalino ir apdoroti naudojant Leica ASP300 audinių procesorius su de-hidratacijos per rūšiavo etanolio serijos, kliringo ir ksileno ir infiltracija su išlydytu parafinu. Įterpimas buvo atliktas Leica EG1160 Įtraukus stoties ir skyriai buvo sumažinti iki 3 mkm su Mikrotoms, plūduriavo ant vandens vonios, nustatyta ~45-50 ° C iki vientisos masės ir plokšti, iki kolekcijos ant mikroskopo objektinio stiklelio ir džiovinimo esant 60 ° C 1 val. De-vaškavimas ir rehidracinį buvo atliekama naudojant automatizuotą Leica ST5020 multistainer. MDA-MB-231 motinos adenokarcinoma ląstelės buvo gautos iš ATCC LGC standartus. Už MDA-MB-231 ląstelių granules, epitopas paieška buvo atlikta 100 ° C temperatūroje 20 min su Obligacijų epitopas išėmimą iš 1 sprendimas (citrato-pagrįstas buferiniame tirpale pH 6,0) arba Bond epitopas išėmimą iš tirpalo 2 (Tris /EDTA remiantis buferinio tirpalo pH 9,0) arba 37 ° C temperatūroje 10 min su obligacijų fermentas iš anksto gydymo rinkinys (100 mikrogramų /ml proteinazės K Tris-druskų buferinio tirpalo, paviršinio aktyvumo medžiagos ir 0,35% ProClin 950) kad rasti geriausią būklę. Prekyboje esantys žmogaus audinių mikrogardelių su atitinkamu etinį patvirtinimą kilmės šalyje buvo perkamos iš Insight Bio JK (mums Biomax Inc. matricos) ir BioCat, Vokietijoje ar Stretton mokslo, JK (už Accumax, Isu Abxis masyvų). Epitopas paieška buvo atlikta esant 100 ° C temperatūroje 20 min, citrato buferio. BG4 dažymo buvo atlikta RT automatizuotai Leica "Bond priemonės su triušio polimero Kit (Leica) po 15 min inkubacijos su BG4 ir 8 min inkubacijos su anti-FLAG triušis polikloniniu antikūnų (Mobilusis Signalizacijos technologija). tada Skaidrės buvo counterstained 5 min su 0,02% hematoksilinu vizualizuoti ląstelių branduolius. De-hidratacija ir kliringo buvo padaryta dėl automatizuotos Leica "ST5020 multistainer ir montavimas buvo atliktas automatizuotą stiklo coverslipper Leica CV5030. Skaidrės nuskaityta su Aperio XT120 skaidrių skenavimo sistemos (Leica) ir vaizdai analizuojami naudojant Aperio Imagescope branduolinio V9 programinę įrangą. Statistinės analizės ir p vertės apskaičiuotos naudojant Stjudento t-testą. Dažnio pasiskirstymo diagramas buvo brėžiamas naudojant GraphPad Prism (GraphPad programinė įranga).

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
BG4 dėmių ant parafino įterptųjų MDA-MB-231 ląstelių granules. A. Žmonių MDA-MB-231 krūties vėžio ląstelių granul buvo nustatytos, parafino-įterptųjų ir tvarkomi IHC naudojant G-quadruplex specifinius antikūnus BG4. Stiprus BG4 dažymo (rudas) matyti ląstelių branduolių po epitopą paieškos su Tris /EDTA pagrindu buferio pH 9,0. Mastelio juosta atitinka 20 mikronų. Branduoliai counterstained hematoksilinu (mėlyna). B. Stiprus BG4 dažymo (rudas) matyti ląstelių branduolių po epitopą paieškos su proteinazės K. C. Ne branduolinės nusidažo į BG4 nesant antikūno po tri /EDTA epitopą išimti. D. Ne branduolinės dažymo matyti šią dezoksiribonukleazės gydymas prieš BG4 dažymą po epitopą paieškos su EDTA. E. Didelis nespecifinės dažymo į BG4 nesant po epitopą paieškos su proteinazės K.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s001
(TIF) pervežimas S2 paveiksle.
Ne navikiniai žmogaus audiniai rodo kintamasis BG4 dažymo. Ne navikiniai audiniai buvo tamsintas IHC naudojant G-quadruplex specifinius antikūnus BG4. A. BG4 dažymo (rudas) ir inkstų žievės rodo branduolinių dažymo intensyvumo tyrimuose ir asocijuotų struktūrų spektrą. Mobilaus ryšio branduoliai buvo counterstained hematoksilinu (mėlyna). Mastelio juosta atitinka 50 mikronų B. silpnai teigiama BG4 dažymo matyti iš renkančių kanalėlių branduolių inkstų šerdinės dalies. C. Odos rodo BG4 intensyvumo epidermio su teigiamais ir neigiamais branduolių išsibarsčiusios visoje asortimentą, o dermos yra daugiausia teigiamas. D. Dauguma branduoliai Colon yra BG4-teigiamas. E. gimdos kūno, sluoksninė suragėjusių epitelio daugiausia BG4 neigiamas o teigiamas dažymo yra vertinamas daugiau paviršutiniškai. F. Per krūtų mikafungino natrio druska skiltelių, abu myoepithelial ir luminal ląstelės rodo bendrą tvirtą BG4 dažant tik kartais neigiamų ląstelių
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0102711.s002
(TIF)
S3 pav.
Padidėjęs buvimas G-quadruplex struktūrų žmogaus kasos vėžio audiniuose. Ne vėžinės vėžio kasos audiniai buvo tamsintas IHC naudojant G-quadruplex specifinius antikūnus BG4, o BG4 teigiamų branduolių skaičius pelnytas naudojant Aperio Imagescope programinę įrangą. A. Ne neoplastiniu kasos audinio šou vidutinio BG4 dažymo (rudas) branduoliai su daugeliu nedažytų branduolių taip pat dalyvauja. Mobilaus ryšio branduoliai buvo counterstained hematoksilinu (mėlyna). Mastelio juosta atitinka 50 mikronų. B. BG4 dažymo kasos adenokarcinomos audinio yra platesnis svarbesnę vietą. C. Apskritai kiekybinis iš BG4 teigiamas branduolių visose ne navikinių ir kasos vėžio audiniuose numerį. Klaida barai atstovauti s.e.m. * P < 0,01, n = 6 ir 12 ne navikinių ir vėžio branduolių, atitinkamai
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0102711.s003
(TIF)

• PLoS ONE: Visada Gamble "ant tuščio skrandžio: Alkis yra susijęs su Palankiomis sprendimas Making
• PLoS ONE: Netikėta Headless ir beuodegis Žuvis skrandžio turinys trumpačiuopiklis mako Isurus oxyrinchus