PLoS One: a megemelkedett G-quadruplex képződését emberi gyomor és a máj rákos szövet

absztrakt katalógusa

Négy szálú G-quadruplex DNS másodlagos struktúra a közelmúltban láthatóvá a magok a humán tenyésztett sejtekben. Itt azt mutatják, hogy BG4, egy G-quadruplex-specifikus antitest, fel lehet használni festésére DNS G-quadruplex struktúrák pácienseredetű szövetek immunhisztokémiai. Megfigyelhetjük szignifikánsan emelkedett száma G-quadruplex-pozitív sejtmagok a humán rákos megbetegedések a máj és a gyomor, mint háttér nem-neoplasztikus szövetet. Eredményeink arra utalnak, hogy a G-quadruplex formáció lehet észlelni és mérni a páciensből származó anyagot, és hogy emelt G-quadruplex formáció lehet jellemző bizonyos ráktípusok. Katalógusa

Citation: Biffi G, Tannahill D, Miller J., Howat WJ, Balasubramanian S (2014) emelkedett szintje a G-quadruplex képződését emberi gyomor és a máj rákos szövet. PLoS ONE 9 (7): e102711. doi: 10,1371 /journal.pone.0102711 katalógusa

Vágó: Mark Isalan, Imperial College London, Egyesült Királyság katalógusa

Beérkezett: 2014. május 28; Elfogadva: június 23, 2014; Megjelent: július 17, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Biffi et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden lényeges adat a papír és az azt támogató információs fájlokat. Katalógusa

Forrás: A szerzők köszönetet mondanak a Cancer Research UK program-támogatás (C9681 /A11961), és a legfontosabb intézményi finanszírozást az Balasubramanian laborba, és a PhD hallgatói számára GB (http://www.cancerresearchuk.org). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

nem kanonikus G-quadruplex DNS másodlagos struktúrák képezhetők guanin-gazdag DNS-szekvenciák a G-típusú _{3 + N L1 G 3 + N L2 G 3 + N L3 G 3+ (N = bármely bázis és L = hurok), és az ilyen szekvencia motívumok elterjedt az egész emberi genom [1], [2]. G-quadruplexes négy szálú struktúrák, amelyek tartalmazzák halom tetrád keresztül kialakított Hoogsteen hidrogén-kötés négy guaninok által koordinált központi vegyértékű kation [3]. Az oligonukleotidokat hajtani egy G-quadruplex szerkezet in vitro
magas termodinamikai stabilitása alatt közel fiziológiás körülmények között, konzisztens kialakulásuk sejtekben [4]. Az előre jelzett helyét a G-quadruplex szekvencia motívumok szabályozó régiók a genom, például a promoterek és a telomerek, azt sugallja, hogy a G-quadruplex szerkezetek lehetnek fontos szerepet genomban funkció [5] - [7]. Számos helikázok, hogy megoldja a G-quadruplexes azonosították, és feltételezték, hogy hozzájárulnak a normális genom funkciók, mint például a replikáció, transzkripció és a fenntartó a genom stabilitás [8]. A megjelenítés a DNS G-quadruplex struktúrák humán sejtekben támogatta a létezését G-quadruplexes a genomban [9]. Ezekben a kísérletekben egy rendkívül szelektív G-quadruplex-specifikus antitest (BG4) által generált fág display és alkalmazott elképzelni diszkrét gócok G-quadruplex struktúrák a magok a humán szövettenyészet-sejtvonalak. Ez az antitest lehetőséget nyújtott arra, hogy a szonda celluláris szerepét G-quadruplexes és azok lehetséges részvételét a betegség. Katalógusa}

G-quadruplex struktúrák már javasolták, hogy vonják be a celluláris funkciók, mint a replikáció és transzkripció. Például, a G-quadruplex stabilizáció egy kis molekula lehet elnyomni transzkripcióját bizonyos onkogének és /vagy a DNS-károsodást indukáló a telomerek és onkogének vezető replikációs hibák és a sejthalál [10] - [17]. G-quadruplex szerkezetek is kapcsolódik genom instabilitás és a G-quadruplex szekvencia motívumok találva közelebbi DNS töréspontok és helyszínek szomatikus kópiaszám változások láthatók egyes rákok [18], [19]. Helikázok, hogy megoldja a G-quadruplexes is találhatók lokalizált helyeken genom instabilitás [20] - [22], és a betegségek, mint például Bloom és Werner szindrómák, amelyek azt mutatják, megnövekedett genom instabilitás és a hajlam, hogy a rák, hogy hozzájárul mutációk G -quadruplex-megoldása helikázok [23]. katalógusa

Mivel a lehetséges kapcsolatát G-quadruplex szerkezetek és az emberi megbetegedések, ez egy fontos cél annak megállapítása, hogy a G-quadruplexes mutatható belül az emberi szövetekben. Ezért megvizsgáltuk a DNS kimutatására G-quadruplexes in pácienseredetű szövetek és hogy vannak-e különbségek a G-quadruplex szintek között nem neoplasztikus és a rák szövetekben. Alkalmazásával a G-quadruplex-specifikus antitest, BG4, a immunohisztokémiai módszerrel, formalinnal fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szöveti microarray szakaszok, az általunk feltárt széles körben elterjedt a DNS G-quadruplex kialakulását a magok az emberi szövetek. Számszerűsítése BG4-pozitív sejtmagok kiderült kiterjedtebb képződését G-quadruplex struktúrák gyomor- és májrák, mint a megfelelő háttér nem neoplasztikus szövetekben. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a feldolgozás a G-quadruplex szerkezetek rosszul van szabályozva bizonyos emberi daganatok. Katalógusa

Eredmények és megbeszélés katalógusa

tűzte ki, hogy a jelenlétére utal G-quadruplexes a sejtmagban az emberi szövetek és annak vizsgálatára, hogy bármilyen különbségek nyilvánvalóak a páciensből származó rákos szövetekben. A mi megközelítésünk alapult kimutatására nukleáris G-quadruplexes immunhisztokémiai (IHC) a G-quadruplex-specifikus antitest, BG4, a nem-neoplasztikus és a rák szöveti microarray (TMA). Specifitását és szelektivitását BG4 G-quadruplex struktúrák és alkalmazását BG4 a immunfluoreszcens (IF) mikroszkópia humán sejteken már korábban leírt [9]. Annak meghatározására, alkalmasságának BG4 IHC, először azt vizsgáltuk, ez az antitest egy olyan modellben rendszer segítségével metszetet FFPE sejt pellet MDA-MB-231 mellrák sejtek, amelyeket korábban megfigyelt megjelenítéséhez nukleáris G-quadruplex gócok IF mikroszkópiával [9] . Amint epitóp visszakeresés, akár hő-mediált (a citrát-alapú pH = 6,0 vagy Tris /EDTA-alapú pH = 9,0 pufferek), vagy enzimatikus (proteináz K-val), gyakran szükség van, hogy ki antigénhelyeket előtt ellenanyag-kötődés, összehasonlítottuk a három szokásos epitóp visszakeresés pre-kezelések. Miután BG4 inkubálás festést végeztünk inkubálva egy másodlagos anti-FLAG antitesttel, amely felismeri FLAG tag epitóp jelen a BG4 ellenanyag, majd Leica tormaperoxidáz polimer alapú detektálását a Bond IHC festést platform. Ezt követően a protokoll, az intenzív magfestődés volt megfigyelhető BG4 csak epitóp lehívása (1B és S1). Nem volt festődés hiányában előkezelést (1A ábra) és a kontrollok távollétében végezzük a BG4 azt mutatta, hogy epitóp lehívása a citrát-alapú puffer adott kisebb háttér, mint TRIS /EDTA (1C és S1), míg a pre KEZELÉS proteináz K-val vezetett nemspecifikus nukleáris festődést hiányában is a BG4 (ábra S1). Ezen kívül, miután epitóp visszakeresés citráttal vagy Tris /EDTA puffer, DNáz I kezelés előtt BG4 festés vezetett erőteljes csökkenése BG4 nukleáris jelintenzitás (1D ábra és S1), további megerősítve a DNS kimutatására G-quadruplexes. A nukleáris BG4 jel látható IHC összhangban van a korábbi kimutatását BG4 gócok a magok szövettenyésztési sejtek [9].

Miután megállapítottuk az IHC protokoll BG4, először megerősítette, hogy a biopsziával nyert nem-neoplasztikus humán szövetmintát lehet festettük BG4. Általában megfigyeltük, változatos BG4 festődési minták szerte sok szövetben utal különbségek kialakulását G-quadruplexes a szövetek között, továbbá a sejtek közötti belül az ugyanazon szövet (ábra S2). Ezek az eredmények azt mutatják, hogy a teljes kialakulását DNS G-quadruplexes komplex emberi szövetek alkalmazásával lehet meghatározni BG4 az IHC, ezzel kiterjesztve a vizualizációja G-quadruplex struktúrák túl IF mikroszkóppal szövettenyészetben sejtekben. Egy ideiglenes felmérés BG4 festés rákos szövet összehasonlítva háttér nem neoplasztikus szövet, a különbségek a BG4 festődés intenzitása vagy a forgalmazás megjelent többnyire nem meggyőzőek (az adatokat nem mutatjuk be), és sok esetben a szigorú számszerűsítése miatt nem volt lehetséges, hogy jelentős különbségek morfológia és jelenléte több sejttípus malignus versus nem neopláziás szövetek. Ezzel ellentétben, a máj és a gyomor, a mi előzetes vizsgálata azt javasolta, hogy ezek a szövetek voltak számszerűsíthetők miatt több egységes megjelenést belül és között, nem neoplasztikus és a rák szövetekben. Ezért használják a Aperio Imagescope nukleáris (v9) képelemző szoftver számszerűsíteni százalékos BG4-pozitív sejtmagok jelen a TMA. Egy külön képanalízis osztályozó fejlesztették minden egyes szövet típusától, hogy pontosan azonosítsák és külön megható tárgyak, a rosszindulatú és nem neoplasztikus minták Szerzett ugyanazt a paramétereket a pontos összehasonlítás. Meglepő módon, kilenc esetben, amelyhez már két példányban májrák TMA magok a megfelelő kiegyenlített háttér nem neoplasztikus szövet vett ugyanazon beteg, mi megfigyelt sokkal nagyobb számú BG4-pozitív sejtmagok a rák (átlag 60,3 ± 5,4%), mint nem neoplasztikus (átlag 18,3 ± 2,12%), a szöveti magok (2. ábra). Amikor egyes daganatos fenotípusokat vizsgáltuk, azt találtuk, hogy mind a hepatocelluláris karcinóma (HCC) és intrahepatikus cholangiocarcinoma (ICC) szignifikánsan nagyobb nukleáris BG4 festéssel, mint a nem-daganatos szövet (2A ábra-D és G). Bár a HCC és az ICC különböző celluláris eredetű, a fejlődő származó hepatociták vagy epevezeték cholangiocytes rendre mindkét mutatott nagyobb száma és intenzitása BG4-pozitív magok, mint a nem-daganatos májszövetben. Továbbá a metasztázisok (izolált óriássejtes differenciálatlan tüdőrák oldalak) növekedését BG4 pozitív festéssel is megfigyelték (ábra 2E-G). Megfigyeltük között egyértelmű különbségek nem neopláziás és tumorszövetben a számos különböző beteg esetben. Valóban, a szélesebb körű elemzése a rák és a háttér nem daganatos TMA magok beleértve páratlan esetben ismét növekedést mutatott BG4-pozitív sejtmagok egész HCC, ICC és metasztatikus (3A). Amikor minden esetben együttesen vizsgálták, egy ~2.4-szeres számának BG4-pozitív sejtmagok volt megfigyelhető a máj rák, mint a nem-daganatos szövet (P < 0,001, 3B ábra).

Hasonló a növelése G-quadruplex előfordulási máj rákos szövetekben, nagyobb, mint 3-szoros növekedését számának BG4-pozitív sejtmagok volt megfigyelhető gyomor adenokarcinóma és pecsétgyűrű sejtes karcinóma összehasonlítva háttér nem neoplasztikus szövet vett ugyanazon egyén (ábra 4). Szélesebb körű elemzésén gyomorrák és nem neoplasztikus szövetekben, beleértve a páratlan esetekben megerősítette a számának növekedése a BG4-pozitív sejtmagok látható gyomorrák, mint a nem-daganatos szövet (5. ábra). Sőt, egyes gyomorrák altípusai, adenocarcinoma (származó mirigyes epitélium), pecsétgyűrű sejtes carcinoma (adenocarcinoma jellemzi mucin lerakódás) és gasztrointesztinális stroma tumorok (GIST, KIT-et kifejező szarkóma mesenchymalis eredetű), mind azt nagyobb számú BG4-pozitív magok, mint a nem-daganatos gyomor szövet (5A ábra). Amikor minden esetben együttesen vizsgálták, ~3.1-szor több BG4-pozitív sejtmagok találtak a rák, illetve nem-neoplasztikus szövetekben (5B, ábra, a P < 0,001). Figyelemre méltó, hogy számos gyomor tumor altípusok, amelyek különböző etiológiájú és progressziójában, mind jellemzi növekedése BG4 festéssel. Ezek az eredmények tehát erősen valószínűsíti az általános közötti kapcsolat fokozott jelenléte a G-quadruplex struktúrák és gyomor rák fejlődését.

A máj és a gyomor TMA, néhány rákos szövet magok azt mutatta, alig vagy egyáltalán nem számszerűsíthető BG4 festés, talán tükrözi az a probléma, epitóp stabilitás a sebészeti biopszia gyűjtés vagy alternatívaként mutatva, hogy egy igazi változékonysága G-quadruplex kialakulását ezekben bizonyos szövetekben. Mindazonáltal megjegyezni, hogy semmi esetre sem volt olyan nem-daganatos máj vagy a gyomor szöveteiben széles körben BG4-pozitív. Ez utóbbi megfigyelés továbbá megerősíti, hogy a növekedés a száma BG4-pozitív sejtek látható a rák TMA magok tükrözi egy igazi különbséget a G-quadruplex jelenléte között a nem-neoplasztikus és rosszindulatú Államokban. Elemzés a G-quadruplex festés más rákos megbetegedések tehát lehet lehetséges, és a mi előzetes elemzése hasnyálmirigy szövet azt sugallja, hogy míg BG4 festéssel nem neopláziás hasnyálmirigy széles körben elterjedt, van egy ~1.6-szeres növekedést BG4 nukleáris festődést adenokarcinóma szövetekben ( P < 0,01, S3 kép). katalógusa

Összességében, az eredmények bizonyítják, hogy a G-quadruplexes lehet szemléltetni IHC nem-daganatos és daganatos emberi szövetek kiterjeszti a korábbi megállapítást, hogy jelenlétét mutatta ki a G-quadruplex struktúrák a magok a kultúra sejtvonalak [9]. Érdemes megjegyezni, hogy növekedését tapasztaltuk számának G-quadruplex-pozitív sejtek bizonyos rákos szövetekben, mint a nem-neoplasztikus esetben. Az adatok, hogy bemutatjuk önmagukban nem magyarázzák, hogy miért több a G-quadruplexes nyilvánvalóak az esetben gyomor- és májrák. Van azonban számos bizonyíték az irodalomban arra utalnak, hogy a potenciális egyesület vagy okozati összefüggés a G-quadruplexes és mechanizmusok hozzájárulnak a rák kialakulását vagy előrehaladását. Például, a G-quadruplex szerkezetek, ha nem oldódott során a DNS-replikáció, képviselhet törékeny oldalak, amelyek elősegítik a genom instabilitása, amely egy jól ismert fémjelzi a rák [24]. Valóban, a G-quadruplex szekvencia motívumok találhatók DNS töréspontok, hogy az ólom, hogy transzlokációk belül a BCL2 gén limfómák és belül a HOX11 gén T-sejt-leukémiák [25], [26]. Számítógépes elemzés azt is javasolta, lehetséges társulásai G-quadruplexes és töréspont régiók különböző rákos [19]. Katalógusa

Feltételezésünk szerint növekedését genom G-quadruplexes rákos eredhet mutációk enzimek feldolgozni G-quadruplexes és /vagy genetikai instabilitást a G-quadruplex oldalakon. Például, Fanconi anémia, Bloom és Werner szindrómák, minden kijelző genom instabilitás a hajlam, hogy a rák [27] - [29], és a mutáció eredményeképpen létrejövő DNS helikáz enzimek, amelyek a G-quadruplex-megoldása aktivitás [30] - [32] . Legutóbbi genomra kiterjedő tanulmányok azt is kiemelte az elismerését G-quadruplex szekvenciák további megoldása helikázok, mint ATRX, PIF1 és XPB /D [20] - [22]. Továbbá PIF1 javasolták, hogy elnyomja genomiális instabilitás a G-quadruplexes [22], míg ATRX veszteség társított kromoszomális instabilitás a hasnyálmirigy neuroendokrin tumorok [33], és XPD mutációk megzavarják nukleotid excíziós DNS-javító, amely elvezet a rák hajlamos betegségek, például mint Xeroderma pigmentosum [34]. katalógusa

Úgy tűnik, hogy a máj és a gyomorrák igen heterogén, és nem jellemző a gyakori genetikai aláírás vagy egy erősen képviselt vezetési mutáció, amely egyszerűen elmagyarázni a megfigyelt növekedés G-quadruplex szerkezetek . Bár sok máj rák társított hepatitis B vagy C fertőzést, a kóros nyert információk a TMA azt jelzi, hogy nincs korreláció BG4 festéssel. Ennek része a jövőbeni munka, ez lesz az érték, hogy elemezze a nem neoplasztikus és rosszindulatú tumor minták az esetekben, amikor teljes genom szekvenálása már alkalmazott megvilágítására genetikai háttérben a tumor /nem neoplasztikus pár, annak érdekében, hogy létrehozza a kapcsolatot közötti genotípus és a G-quadruplex képződés rák.

Összefoglalva, beszámolunk a használata a G-quadruplex-specifikus antitest, BG4, az IHC festést kísérletekben a humán nem-daganatos és a rák szövetekben. Ez a tanulmány lehetővé tette számunkra, hogy azonosítsuk egy lényegesen magasabb jelenlétében DNS G-quadruplex struktúrák a magok gyomor és a máj rákos sejtek összehasonlítva a megfelelő nem-neoplasztikus szövetekben. Feltételezésünk szerint ezek a különbségek függhet változások celluláris folyamatok szabályozzák genom stabilitásának vagy változtatásokat a kromatin állapotban G-quadruplex helyek rákos szövetekben. Eredményeink alátámasztják azt a lehetőséget, hogy a rákos sejtek egy ablak a szelektivitás tenné számukra sokkal érzékenyebb, mint a nem daganatos sejtek felé egy kis molekula G-quadruplex célzás stratégia. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

próba, beágyazás, metszés és festése sejtüledéket által elvégzett kórszövettani alapszolgáltatás a Cancer Research UK Cambridge Institute. Immunhisztokémiai (IHC) segítségével végeztük standard módszerekkel egy automatizált Leica Bond platform kisebb eltérések. Röviden, szöveteket fixáltuk 24 órán keresztül szobahőmérsékleten (RT) 10% -os semleges, pufferolt formalin és a feldolgozott segítségével egy Leica ASP300 szöveti processzor de-hidratációs keresztül egy fokozatos etanol sorozat, elszámolási xilolban és infiltráció olvadt paraffin viasz. A beágyazást végeztünk egy Leica EG1160 beágyazó állomás és a metszeteket 3 um egy mikrotom, lebegett egy beállított vízfürdőbe ~45-50 ° C-on, amíg sima és sík, mielőtt gyűjtemény egy mikroszkóp tárgylemez és a szárítás 60 ° C hőmérsékleten 1 órán át. De-kenő-és folyadékterápiával végeztük automatizált Leica ST5020 multistainer. MDA-MB-231 humán emlő adenokarcinóma sejteket az ATCC-től LGC Standards. MDA-MB-231 sejt pelletet, epitóp visszakeresés végeztük 100 ° C-on 20 percig Bond epitóp lehívása 1. megoldás (citrát-alapú puffer, pH = 6,0), vagy a Bond epitóp visszakeresés oldat 2 (Tris /EDTA-alapú puffer, pH = 9,0) vagy 37 ° C-on 10 percig Bond enzimmel előkezelés kit (100 ug /ml proteináz K Tris-pufferolt sóoldatot, felületaktív anyagot és 0,35% ProClin 950), hogy megtalálja a legjobb állapotban. A kereskedelmi forgalomban kapható humán szöveti microarray megfelelő etikai jóváhagyást a származási országban vásároltuk Insight Bio UK (US Biomax Inc. tömbök), és BioCat, Németországban vagy Stretton Scientific, UK (a Accumax, Isu Abxis tömbök). Epitóp visszakeresés végeztük 100 ° C-on 20 percig citrát-pufferrel. BG4 festést végeztünk szobahőmérsékleten egy automata Leica Bond eszköz egy nyúl polimer készlet (Leica), majd 15 percen át tartó inkubálást BG4 és egy 8 perc inkubáció egy anti-FLAG nyúl poliklonális antitesttel (Cell Signaling Technology). Lemezeket ezután ellenfestettük 5 percig 0,02% hematoxilinnel, hogy szemléltesse a sejtmagot. De hidratálás és elszámolási végeztek automatizált Leica ST5020 multistainer és szerelés végeztünk automatizált üveg coverslipper Leica CV5030. A lemezeket beolvasott egy Aperio XT120 dia szkennelés rendszer (Leica) és képek segítségével analizáltuk Aperio Imagescope Nukleáris v9 szoftver. A statisztikai elemzések és a P-értékeket kiszámítottuk a Student-féle t-próba. Frekvencia-eloszlási görbék ábrázoltuk GraphPad Prism (GraphPad Software). Katalógusa

alátámasztó információk
ábra S1.
BG4 festés paraffinba ágyazott MDA-MB-231 sejt pellet. A. Emberi MDA-MB-231 mellrák sejtüledéket fixált, paraffinba ágyazott és feldolgozásra felhasználásával IHC a G-quadruplex-specifikus antitest BG4. Erős BG4 festés (barna) nyilvánvaló sejtmagok következő epitóp lehívása Tris /EDTA alapú puffer pH = 9,0. Skála megfelel 20 um. Sejtmagok kontrasztszínezést hematoxilinnel (kék). B. Erős BG4 festést (barna) kitűnik sejtmagok alábbi epitóp visszakeresés proteináz K. C. Nincs nukleáris festődés figyelhető hiányában a BG4 ellenanyag után Tris /EDTA epitóp visszakeresés. D. Nem magfestődés látható következő DN-kezelés előtt BG4 festés után epitóp visszanyerés EDTA. E. A magas nem specifikus festődés hiányában BG4 után epitóp visszakeresés proteináz-K-
doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s001 katalógusa (TIF) katalógusa ábra S2.
nem daganatos emberi szövetek mutatják változó BG4 festéssel. Nem daganatos szövetekben festettük felhasználásával IHC a G-quadruplex-specifikus antitest BG4. A. BG4 festés (barna) a vesében cortex mutat egy sor magfestés intenzitásban glomerulus és a kapcsolódó szerkezetek. Sejtmagok voltak kontrasztfestést haematoxilin (kék). Skála megfelel 50 um B. Gyengén pozitív BG4 festés látható a gyűjtőcsatorna konfliktus magok a vese velő. C. A bőr mutatja egy sor BG4 intenzitások az epidermiszben a pozitív és negatív sejtmagok szétszórva, míg a dermisben többnyire pozitív. D. A legtöbb sejtmag vastagbél BG4-pozitív. E. A méh test, a réteges laphám nagyrészt BG4-negatív, míg a pozitív festés látható több felületesen. F. Az egész mell ductalis lebenykékben, mind myoepithelialis és lumen sejtek jelennek általános erős BG4 festést csak alkalmi negatív sejteket. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s002 katalógusa (TIF) hotelben ábra S3.
Emelkedett jelenléte G-quadruplex struktúrák emberi hasnyálmirigy rákos szövet. Nem-daganatos és a rák hasnyálmirigy szöveteiben festettük felhasználásával IHC a G-quadruplex-specifikus antitest BG4, és a szám a BG4-pozitív sejtmagok pontoztuk segítségével Aperio Imagescope szoftver. A. A magok nem neoplasztikus hasnyálmirigy szövet megjelenítése mérsékelt BG4 festést (barna) sok nem festődő sejtmagok is jelen van. Sejtmagok voltak kontrasztfestést haematoxilin (kék). Skála felel meg 50 um. B. BG4 festés hasnyálmirigy adenokarcinóma szöveti sokkal kiterjedtebb nagyobb intenzitással. C. Összességében számszerűsítése száma BG4-pozitív sejtmagok valamennyi nem-neoplasztikus és hasnyálmirigy-rák szövetekben. A hibazászlók a S.E.M. * P < 0,01, n = 6 és 12 nem-neoplasztikus és a rák mag, ill.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s003 katalógusa (TIF) katalógusa

• PLoS One: Mindig Gamble éhgyomorra: Hunger társul Kedvező határozat Making
• PLoS One: Váratlan Fejetlen és farkatlan Hal a gyomor tartalma lándzsafogú cápa Isurus oxyrinchus