Ploche ONE: zvýšené hladiny G-kvartet formácie v ľudskom žalúdku a rakoviny pečene Tissues

abstraktné

Four-plietol G-kvartet DNA sekundárne štruktúry boli v nedávnej dobe vizualizovať v jadrách ľudských kultivovaných buniek. Tu ukazujeme, že BG4, protilátka G-kvartet špecifická, môže byť použitá na farbenie DNA G-kvadruplexy v tkanivách pacientov odvodené pomocou imunohistochémia. Pozorujeme významne zvýšené množstvo G-kvartet-pozitívnych jadier v ľudskej rakoviny pečene a žalúdka v porovnaní s pozadím nenádorových tkanív. Naše výsledky naznačujú, že tvorba G-kvartet môže byť detekovaný a meraný v materiáli pacienta odvodené, a že zvýšená G-kvartet formácie môže byť charakteristická niektorých druhov rakoviny

Citácia :. Biffy G, Tannahill D, J Miller, Howat WJ, Balasubramanian S (2014) Zvýšené hladiny G-kvartet formácie v ľudskom žalúdku a pečene rakovinové tkanive. PLoS ONE 9 (7): e102711. doi: 10,1371 /journal.pone.0102711

Editor: Mark Isalan, Imperial College London, Veľká Británia

prijatá: May 28, 2014; Prijaté: 23. júna 2014; Uverejnené: 17.července 2014

Copyright: © 2014 Biffy et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Dostupné dát: Text. autori potvrdzujú, že všetky údaje súvisiace závery sú plne k dispozícii bez obmedzenia. Všetky relevantné údaje sú v papiera a jeho podporné informácie súbory

Financovanie :. Autori ďakujú Cancer Research UK o grant programu (C9681 /A11961) a jadra inštitucionálneho financovania na Balasubramanian laboratória, a PhD štipendium pre GB (http://www.cancerresearchuk.org). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Non-kánonický G-kvartet DNA sekundárne štruktúry môžu byť vytvorené z guanínu bohatých sekvencií DNA typu G _{3 + N L1 G 3 + N L2 G 3 + N L3 G 3+ (N = akákoľvek báza a L = slučka) a také sekvenčné motívy sú prevláda v ľudskom genóme [1], [2]. G-kvadruplexy sú štyri dvojvláknové štruktúry, ktoré obsahujú stohy tetrads vytvorených prostredníctvom Hoogsteenovo vodíkovou väzbou štyroch guanín koordinovaných centrálnom jednomocné katión [3]. Oligonukleotidy skladané do štruktúry G-kvartet in vitro
majú vysokú termodynamickú stabilitu za podmienok blízkych fyziologických podmienok v súlade s ich vzniku v bunkách [4]. Predpokladaná poloha G-kvartet sekvenčných motívov v regulačných oblastí genómu, ako sú napríklad promótory a teloméry, naznačuje, že G-kvadruplexy môžu mať dôležitú úlohu vo funkcii genómu [5] - [7]. Rad helikáz, že G ak kvadruplexů boli identifikované a sú vyslovená hypotéza, prispievať k normálnej genómu funkcií, ako je replikácie, transkripcie a udržiavanie stability genómu [8]. Vizualizácia DNA G-kvadruplexy v ľudských bunkách podporuje existenciu G-kvadruplexů v genóme [9]. V týchto experimentoch, je vysoko selektívny G-kvartet-špecifická protilátka (BG4) bol vytvorený fágového displeja a použité pre vizualizáciu diskrétne ložiská G-kvadruplexy v jadrách ľudských tkanív kultúre bunkových línií. Táto protilátka poskytla príležitosť k sonde bunkovú úlohe G-kvadruplexů a tiež ich možnému zapojenie do choroby.}

G-kvadruplexy boli navrhnuté byť spájaný s bunkovými funkciami ako replikáciu a transkripciu. Napríklad stabilizácia G-kvartet malú molekulou môžu potláčať transkripciu niektorých onkogénov a /alebo vyvolanie poškodenia DNA v telomér a onkogény vedúce k replikáciu vady a smrť buniek [10] - [17]. G-kvadruplexy môže byť tiež spojená s genómu nestabilitu a G-kvartet sekvenčné motívy boli nájdené proximálnej k DNA zlomových bodov a miest somatických počet kópií sa mení nájsť v niektorých druhov rakoviny [18], [19]. Helikáz že vyrieši G-kvadruplexů sa nachádzajú tiež lokalizované v miestach genómu nestability [20] - [22], a ochorenia, ako je Bloom je aj Wernerova syndrómov, ktoré vykazujú vyššiu úroveň genómu nestability a predispozíciou k rakovine, ktoré prispievajú mutácie G -quadruplex-riešenie helikázy [23].

s ohľadom na potenciálne vzťah medzi G-kvartet štruktúr a ľudských ochorení, je dôležitým cieľom riešiť, či G-kvadruplexy môžu byť detekované v ľudských tkanivách. Preto sme skúmali detekciu DNA G-kvadruplexů v pacientom odvodené tkanív a či existujú rozdiely v úrovni G-kvartet medzi non-neoplastických a nádorového tkaniva. Použitím protilátky G-kvartet špecifické, BG4, v imunohistochémia formalínom fixovaných parafínových (FFPE) mikroskopické sústavy tkanív sekcií, sme zistili rozsiahle DNA tvorbu G-kvartet v jadrách ľudských tkanív. Kvantifikácia BG4-pozitívnych bunkových jadier odhalila rozsiahlejšie tvorbu G-kvadruplexy v žalúdku a pečene nádorov v porovnaní s odpovedajúcou pozadí nenádorových tkanív. Tieto výsledky naznačujú, že spracovanie G-kvartet štruktúr je zle regulovaný v niektorých ľudských nádorov.

Výsledky a diskusia

Rozhodli sme sa, aby sa preukázala prítomnosť G-kvadruplexů v jadrách človeka tkaniva a skúmať, či prípadné rozdiely sú zrejmé v rakovinových tkanivách pacienta pôvodu. Náš prístup bol založený na detekciu nukleárnych G-kvadruplexů imunohistochemicky (IHC) s G-quadruplex-špecifické protilátky, BG4, na non-neoplastických a rakovinových microarrays tkanív (TMA). Špecifickosť a selektivitu BG4 pre G-kvadruplexy a aplikácie BG4 v imunofluorescencie (IF) mikroskopie na ľudských bunkách už boli popísané [9]. Ak chcete zistiť vhodnosť BG4 pre IHC, sme prvýkrát testovali túto protilátku v modelovom systéme pomocou úsekov od FFPE bunkových peliet z MDA-MB-231 buniek rakoviny prsníka, ktoré boli predtým pozorovali zobraziť jadrovú G-kvartet ohniská IF mikroskopie [9] , Ako epitopové vyhľadávanie, a to buď tepelne-sprostredkované (v citrátovom založené na pH 6,0 alebo Tris /EDTA založené na pH 9,0 pufre) alebo enzymatickou (s proteináza K), je často nutné vystaviť antigénne miesta pred viazanie protilátky, porovnali sme tieto tri štandardné epitop prieskumovej pre-ošetrenie. Po inkubácii BG4, farbenie bolo vykonané inkubáciou so sekundárnou protilátkou proti FLAG, ktorá rozpoznáva epitop FLAG tag prítomné v BG4 protilátky, nasledované chrenovej peroxidáze detekcie na báze polyméru Leica za použitia farbenia platformu Bond IHC. V nadväznosti na tento protokol, intenzívne nukleárna farbenie bol pozorovaný u BG4 až po epitopové vyhľadávania (obrázok 1B a S1). Žiadne farbenie bol pozorovaný v neprítomnosti predbežného ošetrení (obrázok 1A) a kontrol vykonaných v neprítomnosti BG4 ukázala, že epitop načítanie pufrom citrát báze sa získa menšie pozadie, ako je s Tris /EDTA (obrázok 1C a S1), zatiaľ čo pre -treatment sa proteináza k viedla k nešpecifickej nukleárnej farbenie aj v neprítomnosti BG4 (obr S1). Okrem toho, po epitopu vyhľadávanie s citrátom alebo Tris /EDTA nárazníky, liečba DNase Aj pred BG4 farbenie viedlo k silnému zníženiu BG4 jadrovej intenzity signálu (obrázok 1D a S1), ďalej potvrdzuje detekciu DNA G-kvadruplexů. Nukleárna BG4 signál je vidieť na IHC je v súlade s predchádzajúcim detekciu BG4 ohnísk v jadrách buniek tkanivovej kultúry [9].

Potom, čo bol vytvorený protokol pre IHC BG4, najprv potvrdil, že biopsia non-neoplastických humánnych vzorky tkaniva by mohla byť zafarbené za použitia BG4. Všeobecne platí, že sme pozorovali rôzne BG4 farbenie vzory v mnohých tkanivách, čo naznačuje, rozdiely v tvorbe G-kvadruplexů medzi tkanivami, a tiež medzi bunkami v rámci jednej tkaniva (obr S2). Tieto výsledky ukazujú, že celková tvorba DNA G-kvadruplexů v zložitých ľudských tkanivách môže byť hodnotená za použitia BG4 v IHC, čím sa predlžuje vizualizáciu G-kvadruplexy než IF mikroskopie v bunkách tkanivovej kultúry. V predbežnom prieskume BG4 farbenie na rakovinových tkanivách v porovnaní s pozadím non-neoplastické tkanive, rozdiely v intenzite alebo distribúcie BG4 farbenie sa objavili predovšetkým nepresvedčivé (dáta nie sú uvedené), a v mnohých prípadoch starostlivý kvantifikácia nebolo možné kvôli značným rozdielom v morfológiu a prítomnosť rôznych typov buniek na malígne proti non-neoplastické tkaniva. Naproti tomu u pečene a žalúdka, naše predbežné skúšky naznačujú, že tieto tkanivá boli ľahko merateľné v dôsledku jednotnejší vzhľad v rámci i medzi non-neoplastických a nádorového tkaniva. Preto sme použili Aperio Imagescope Nuclear (V9) pre analýzu obrazu softvér pre kvantifikáciu percenta BG4-pozitívnych jadier prítomných v TMA. Samostatná analýza obrazu triedič vyvinul pre každý typ tkaniva presne identifikovať a samostatné dojemné objektov, s malígny a nenádorových vzorky zaznamenal za použitia rovnakých parametrov pre presné porovnanie. Pozoruhodné je, že v deviatich prípadoch, pre ktoré sme mali duplicitné rakovina pečene TMA jadra s zodpovedajúce uzavreté pozadí non-neoplastické tkanivá odobraté z rovnakého pacienta, sme pozorovali oveľa väčší počet BG4-pozitívnych jadier v rakovine (priemer 60,3 ± 5,4%) v porovnaní nenádorových (priemer 18,3 ± 2,12%), tkanivové vzorky (obrázok 2). Keď boli skúmané jednotlivé rakovinové fenotypy, sme zistili, že obaja hepatocelulárny karcinóm (HCC) a intrahepatálna cholangiokarcinom (ICC) ukázala významne väčšie nukleárnej farbenie BG4 v porovnaní s non-neoplastické tkaniva (obrázok 2A-D a G). Aj keď HCC a ICC majú rôzne bunkové pôvodu, ktorý vychádza hepatocytov alebo žlčových ciest cholangiocytes v tomto poradí, a to ako ukázala väčší počet a intenzitu BG4-pozitívnych jadier v porovnaní s non-neoplastické tkaniva pečene. Okrem toho, v metastáz (izolované z veľkých buniek nediferencovaných pľúcneho karcinómu miest) zvýšenie BG4-pozitívne farbenie sa tiež poznamenať, (obr 2E-G). Pozorovali sme jasné rozdiely medzi non-neoplastických a nádorové tkanivá pre rad rôznych prípadov pacientov. V skutočnosti, širší záberom analýza nádorových a nenádorových pozadia TMA jadier vrátane otvorených prípadov opäť ukázali zvýšenie BG4-pozitívnych jadier cez HCC, ICC a metastatickým karcinómom (obrázok 3A). Keď boli všetky prípady posudzované spoločne, zvýšenie ~ 2.4-krát v počte BG4-pozitívnych jadier bola pozorovaná u rakoviny pečene v porovnaní s non-neoplastické tkaniva. (P 0,001, Obrázok 3B)

, ktorá je podobná zvýšenie incidencie G-quadruplex v rakoviny pečene tkanive, je väčšia ako 3-násobné zvýšenie počtu BG4-pozitívnych jadier bola pozorovaná v žalúdku adenokarcinómu a karcinómu pečatný krúžok buniek v porovnaní s pozadím nenádorových tkanív odobratých z rovnakého jedinca (obr 4). Širší rozmedzí-analýza na rakovinu žalúdka a nenádorových tkanív, vrátane otvorených prípadov potvrdila zvýšenie počtu BG4-pozitívnych jadier pozorovaných u karcinómu žalúdka v porovnaní s non-neoplastické tkaniva (obrázok 5). Naozaj, v individuálnom rakovinu žalúdka podtypy, adenokarcinóm (vznikania od žľazového epitelu), karcinómy pečatný prsteň buniek (adenokarcinómy charakterizované mucín depozície) a zažívacom strómovými tumorom (GIST, KIT expresiou sarkómy mezenchymálnych pôvodu), všetci prejavili väčší počet BG4-pozitívnych jadier v porovnaní s non-neoplastické tkaniva žalúdka (obrázok 5A). Keď boli všetky prípady považované spoločne, ~ 3.1-krát viac BG4-pozitívnych jadier boli nájdené v karcinómu v porovnaní s non-neoplastických tkanív (Obrázok 5B, p 0,001). Je pozoruhodné, že niekoľko žalúdočné nádorové podtypy, ktoré majú rôzne etiológie a progresie, sú charakterizované nárastom BG4 farbenie. Tieto výsledky sú preto veľmi podnetný, ktoré majú všeobecnú súvislosť medzi zvýšenou prítomnosťou G-kvartet štruktúr a vzniku rakoviny žalúdka.

V pečene a žalúdka TMA, niektoré rakovina tkaniva jadier vykazovali malé alebo žiadne merateľné BG4 farbenie, možno odráža problém v stability epitopu v priebehu chirurgického odberu biopsia alebo alternatívne smerujúce k skutočnému variability tvorby G-quadruplex v týchto konkrétnych tkanivách. Treba však poznamenať, že v žiadnom prípade nejaká nenádorových pečene a žalúdka tkanivo značne BG4-pozitívne. Tento druhý pozorovanie ďalej potvrdzuje, že zvýšenie počtu BG4-pozitívnych buniek, ktoré znázorňujú jadra rakovina TMA odráža skutočný rozdiel v G-quadruplex prítomnosti medzi non-neoplastických a malígnych stavov. Analýza G-quadruplex farbenie v iných zhubných nádorov môže teda byť možné a naša Predbežná analýza pankreasu tkaniva naznačuje, že, zatiaľ čo BG4 farbenie v non-neoplastických pankreasu je rozšírená, je ~ 1.6-násobné zvýšenie BG4 nukleárnej farbenie v adenokarcinómu tkanivách ( P <. 0,01, obr S3)

Celkovo naše výsledky preukazujúce, že G-kvadruplexy možno vizualizovať pomocou IHC v non-neoplastických a rakovinou ľudských tkanív rozšíriť našej skoršie zistenia, ktorá preukázala prítomnosť G-kvadruplexy v jadra kultúra bunkových línií [9]. Je pozoruhodné, že sme pozorovali zvýšenie počtu G-kvartet-pozitívnych buniek u niektorých rakovinových tkanivách v porovnaní s non-neoplastických prípadoch. Údaje, ktoré predstavujeme, samy o sebe vysvetliť, prečo stále viac G-kvadruplexy sú zjavné v prípadoch žalúdku a pečene rakoviny. Avšak, existuje niekoľko línií dôkazov v literatúre, ktoré naznačujú potenciálne združenie či kauzálnu spojenie medzi G-kvadruplexů a mechanizmy, ktoré prispievajú k rozvoju rakoviny alebo progresie. Napríklad G-kvadruplexy, pokiaľ nie je vyriešený počas replikácie DNA, môže predstavovať krehké stránky, ktoré podporujú genómu nestabilitu, čo je dobre známy znakom rakoviny [24]. V skutočnosti, G-kvartet sekvenčné motívy sú k dispozícii na DNA, Hraničné hodnoty, ktoré vedú k presuny v rámci génu BCL2 v lymfómy a v rámci génu HOX11 v T-bunkovej leukémie [25], [26]. Výpočtové analýzy tiež navrhli prípadné združenia G-kvadruplexů a zarážky regióny rôznych druhov rakoviny [19].

Predpokladáme, že nárast genómových G-kvadruplexů u karcinómu môže vzniknúť mutácií enzýmov, ktoré spracúvajú G-kvadruplexů a /alebo genomické nestability na G-kvartet miest. Napríklad, Fanconiho anémia, Bloom a Wernerovho syndrómy, všetci displej genóm nestabilita s predispozíciou k rakovine [27] - [29] a výsledkom mutácií v DNA helikáza enzýmy, ktoré majú G-kvartet vymiznú aktivitu [30] - [32] , Nedávne štúdie celého genómu tiež zdôraznili uznanie G-kvartet sekvencií ďalšími riešiacich helikáz ako je ATRX, PIF1 a XPB /D [20] - [22]. Okrem toho, PIF1 bolo navrhnuté na potlačenie genómovej nestabilite na G-kvadruplexů [22], zatiaľ čo strata ATRX je spojená s chromozomálne nestability v pankreatických neuroendokrinných nádorov [33], a XPD mutácie narušiť nukleotidové vyrezanie reparácia DNA, ktorá vedie k nádorových ochorení náchylné takých ako Xeroderma pigmentosum [34].

Zdá sa, že pečeň a karcinóm žalúdka sú veľmi heterogénne a nie sú charakterizované spoločným genetickým podpise alebo vysoko zastúpené hnacou mutácií, ktoré môžu jednoducho vysvetliť pozorovaný nárast G-kvadruplexy , Zatiaľ čo mnoho pečene rakoviny sú spojené s hepatitídou B alebo C, patologický informácie získané s TMA znamená, že neexistuje žiadna korelácia s BG4 farbenia. V rámci ďalšej práce, bude to mať hodnotu k analýze non-neoplastických a malígnych nádorových vzoriek pre prípady, keď bol použitý celý genóm sekvenovania pre objasnenie genetické pozadie nádorových /non-neoplastických pary, za účelom stanovenia vzťahu medzi genotypom a G-quadruplex tvorby rakoviny.

na záver, nám uvádza použitie protilátky G-quadruplex špecifické, BG4, v IHC farbenie experimentoch ľudských non-neoplastických a nádorového tkaniva. Táto štúdia nám umožnila identifikovať výrazne vyššiu prítomnosť DNA G-kvartet štruktúr v jadrách žalúdku a rakoviny pečene bunky v porovnaní so zodpovedajúcimi normálnom tkanive. Predpokladáme, že tieto rozdiely môžu byť závislé na zmenách bunkovej procesy, ktoré regulujú genómu stabilitu alebo zmeny v stave chromatínu na G-kvartet miest v nádorových tkanivách. Naše výsledky podporujú možnosť, že rakovinové bunky môžu poskytnúť okno selektívnosti, ktoré by vďaka ktorým sú citlivejšie ako non-nádorových buniek voči malá molekula G-kvartet cielenie stratégie.

Materiály a metódy

Fixácia, vkladanie, krájanie a farbenie bunkovej pelety boli vykonané základné služby histopatológie v Cancer Research UK Cambridge Institute. Imunohistochémia (IHC) bola vykonaná s použitím štandardných metód na automatizovanom Leica Bond platformy s menšími variáciami. V stručnosti, tkanivá boli fixované po dobu 24 hodín pri izbovej teplote (RT) v 10% neutrálnom formalínu pufrovaného a spracované za použitia tkanivového procesora Leica ASP300 s de-hydratačné prostredníctvom triedeného radu etanolu, zúčtovanie v xyléne a infiltráciu roztaveným parafínom. Vloženie bola vykonaná na Vkladanie stanice Leica EG1160 a rezy boli narezané na 3 um mikrotómy, plávajúce na vodnej kúpeľov nastavenú na ~ 45-50 ° C do hladkej a ploché, pred odberom na mikroskopickom sklíčku a sušením pri 60 ° C, po dobu 1 hodiny. De-voskovanie a re-hydratačný boli vykonané za použitia automatizovaného Leica ST5020 Multistainer. MDA-MB-231 bunky adenokarcinómu ľudského prsníka boli získané z ATCC LGC štandardov. Pre bunkové pelety MDA-MB-231, vyhľadávanie epitopu bola vykonaná pri teplote 100 ° C počas 20 minút s vyhľadávacím Bond epitop roztoku 1 (citrát na báze pufri o pH 6,0) alebo Bond vyhľadávacím epitop roztoku 2 (Tris /EDTA na báze pufor pH 9,0) alebo pri teplote 37 ° C počas 10 minút sa súpravou Bond enzým predprípravy (100 ug /ml proteinázy k v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku, povrchovo aktívneho činidla a 0,35% ProClin 950) na nájdenie najlepšieho stavu. Komerčne dostupné Tkanivové ľudských so zodpovedajúcimi etického schválenie v krajine pôvodu boli zakúpené od firmy Insight Bio Veľkej Británii (pre americkú Biomax Inc. polí) a BioCat, Nemecku alebo Stretton Scientific, UK (pre Accumax, Isu Abxis polí). Epitop vyhľadávania bola vykonávaná pri teplote 100 ° C počas 20 minút s citrátovom tlmivom roztoku. BG4 farbenie bolo vykonané pri izbovej teplote na automatizovanom Leica Bond nástroje s králičie polyméru kit (Leica) po 15 min inkubácie s BG4 a 8 min inkubácie s anti-FLAG králičie polyklonálne protilátky (Cell Signaling Technology). Sklíčka bola kontrastne potom po dobu 5 minút s 0,02% hematoxylínom pre vizualizáciu bunková jadra. De-hydratačný a zúčtovanie boli vykonávané na automatickom Leica ST5020 Multistainer, a montáž sa vykonáva na automatizovanom sklo coverslipper Leica CV5030. Sklíčka boli skenované pomocou skenovacieho slide systému Aperio XT120 (Leica) a obrazy analyzované s použitím softvéru Aperio Imagescope Nuclear v9. Štatistické analýzy a hodnoty P boli vypočítané za použitia t test. Frekvencia-distribučné grafy boli vynesené za použitia GraphPad Prism (GraphPad Software).

Podporné informácie
Obrázok S1. Farbenie
BG4 na parafínových bunkovej pelety MDA-MB-231. MDA-MB-231 karcinómu prsníka bunkovej pelety A. Ľudská boli stanovené, zaliatych v parafínu a spracované pre IHC za použitia protilátky BG4 G-kvartet špecifické. Silné farbenie BG4 (hnedá) je zrejmé v bunkovom jadre po epitopové vyhľadávanie s Tris /EDTA na báze pufri pH 9,0. Mierka zodpovedá 20 um. Jadrá sú kontrastne hematoxylínom (modrá). B. Silné farbenie BG4 (hnedá) je zrejmé v bunkovom jadre po epitopové vyhľadávanie s proteinázy K. C. Žiadne jadrové farbenie je pozorovaná v neprítomnosti BG4 protilátky po získavanie Tris /EDTA epitopu. D. Žiadne jadrové farbenie je vidieť po ošetrení DNase pred farbením BG4 po epitopové vyhľadávania s EDTA. E. Vysoké hladiny nešpecifickej farbenie v neprítomnosti BG4 po epitopu vyhľadávanie s proteinázy K.
doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s001
(TIF)
Obrázok S2.
nenádorových ľudských tkanív ukazujú variabilný BG4 farbenie. Non-neoplastické tkaniva boli zafarbené pomocou IHC použitím protilátky BG4 G-kvartet špecifické. A. BG4 farbenie (hnedá) v kôre obličiek, ukazuje rozsah intenzít jadrových farbením v glomerulov a súvisiacich stavieb. Bunková jadra boli kontrastne hematoxylínom (modrá). Mierka zodpovedá 50 um B. Slabo pozitívny BG4 farbenie je vidieť na zberných kanálikov jadra drene obličiek. C. kože sa pohybuje od BG4 intenzít v epidermis s pozitívnymi a negatívnymi jadier roztrúsených po, vzhľadom k tomu, dermis je väčšinou pozitívne. D. Väčšina jadra v hrubom čreve sú BG4 pozitívne. E. V krčka tela, vrstevnatý dlaždicového epitelu, je do značnej miery BG4-negatívne, zatiaľ čo pozitívne farbenie je vidieť viac povrchne. F. V priebehu prsníka ductal lalôčikov, ako zmršťovanie myoepiteliálních a luminální bunky vykazujú silnú všeobecnú BG4 farbenie iba s občasnými negatívnych buniek
doi :. 10.1371 /journal.pone.0102711.s002
(TIF)
Obrázok S3.
Zvýšený výskyt G-kvadruplexy v ľudských nádorových tkanív pankreasu. Non-neoplastické a rakovinu pankreasu tkaniva boli zafarbené pomocou IHC použitím protilátky BG4 G-kvartet špecifické, a počet BG4-pozitívnych jadier bola hodnotená pomocou softvéru Aperio Imagescope. A. prítomné aj Jadrá nenádorových pankreasu tkaniva vykazujú mierne farbenie BG4 (hnedá) s mnohými nefarbených jadier. Bunková jadra boli kontrastne hematoxylínom (modrá). Mierka zodpovedá 50 um. B. BG4 farbenie v pankreatickej tkanive adenokarcinómu širšie, s väčšou intenzitou. C. Celkový kvantifikácia počtu BG4-pozitívnych jadier naprieč všetkými non-neoplastických a pankreatických rakovinových tkanív. Chybové úsečky predstavujú SEM * P < 0,01, n = 6 a 12 pre non-neoplastických a rakovinou jadier, respektíve
doi :. 10,1371 /journal.pone.0102711.s003
(TIF)

• Ploche ONE: Vždy Gamble na lačný žalúdok: Hlad je spojená s výhodnejšie rozhodovaní
• Ploche ONE: Neočakávaná Bezhlavý a tailless Ryby v žalúdku Obsah žraloka mako Isurus oxyrinchus