PLOS NËMMEN: nik Niveauen vum G-Quadruplex Formatioun an Human Mo a Liewer Cancer Stoffer

Wat VerfÜgung

Véier-gekëmmert G-quadruplex DNA Secondaire Strukturen hu viru kuerzem am Käre vun mënschlech cultured Zellen visualized ginn. Hei, weisen mir dat BG4, engem G-quadruplex-spezifesch antibody, ka benotzt ginn fir DNA G-quadruplex Strukturen an Patient-ofgeleet Stoffer stain immunohistochemistry benotzt. Mir observéieren eng bedeitend nik Zuel vun G-quadruplex-positiv Käre vun mënschlech Cancers vun der Liewer an Mo als Verglach zu Hannergrond Net-neoplastic Otemschwieregkeeten. Eis Resultater hindeit, datt G-quadruplex Opstellung erwëscht an am Patient-ofgeleet Material an dat nik G-quadruplex Opstellung eng Charakteristik vun e puer Cancers kann gemooss kënne ginn VerfÜgung

Fro:. Biffi G, Tannahill D, Miller J, Howat WJ, Balasubramanian S (2014) Bistum Niveauen vum G-Quadruplex Formatioun an Human Mo a Liewer Cancer Stoffer. PLoS NËMMEN 9 (7): e102711. Doi: 10.1371 /journal.pone.0102711 VerfÜgung

Redakter: Mark Isalan, Imperial College zu London, England VerfÜgung

Arnaque: Mee 28, 2014; Akzeptéiert: 23 Juni, 2014; Publizéiert: 17. Juli 2014 zu

Copyright: © 2014 Biffi et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Data Disponibilitéit:. D' Auteuren confirméieren datt all Daten d'Conclusiounen si voll sinn ouni Restriktioun Basisdaten. All Daten sinn bannent de Pabeier a seng Ennerstëtzung Informatiounen Fichieren VerfÜgung

Funding:. D'Auteuren Cancer Research UK fir Programm heimat (C9681 /A11961) an Kär institutionell Finanzéiere zu der Balasubramanian Labo Merci, a fir eng Dokteraarbecht studentship fir GB (http://www.cancerresearchuk.org). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

non-kanonesche G-quadruplex DNA Secondaire Strukture kënnen aus guanine-räiche DNA Message vum Typ G _{3 + N L1 G 3 + N L2 G gemaach ginn 3 + N L3 G Iwwer 3 (N = keng Basis an L = Glück) an esou entsteet motifs sinn verwandelt uechter d'mënschlech Nepgen [1], [2]. G-quadruplexes si véier-gekëmmert Strukturen, déi vun engem zentrale monovalent, dass koordinéiert duerch Hoogsteen Waasserstoff-Numm vu véier guanines geformt stacks vun tetrads representéieren [3]. Oligonucleotides an enger Struktur G-quadruplex Triichter kënschtlech VerfÜgung hunn eng héich thermodynamic Stabilitéit ënner Géigend-Fro gestallt Konditiounen, konsequent mat hir Équipe an Zellen [4]. D'virausgesot Standuert vum G-quadruplex Haaptrei motifs an reglementaresche Regioune vum Daniel Nepgen, wéi Promoteuren an telomeres, hindeit datt G-quadruplex Strukturen wichteg Roll an Nepgen Funktioun hunn vläicht [5] - [7]. Eng Zuel vun helicases datt G-quadruplexes léisen hunn identifizéiert a sinn Hypothes zu normal Nepgen Funktiounen, wéi Gedächtnis, Transkriptiouns an den Ënnerhalt vun Nepgen Stabilitéit [8] ze bedeelegen. D'visualization vun DNA G-quadruplex Strukturen zu mënschlech Zellen huet d'Existenz vum G-quadruplexes am Nepgen ënnerstëtzt [9]. An dës Experimenter, eng besonnesch G-quadruplex-spezifesch antibody (BG4) war vun phage Ecran generéiert an agestallt ze diskret Foci vum G-quadruplex Strukturen am Käre vun mënschlech Otemschwieregkeeten Kultur Zell Linnen visualiséieren. Dëst antibody huet eng Geleeënheet gëtt de bewosst Roll vum G-quadruplexes an och hire potentielle Abannung vun Krankheet ze Studiebäihëllefe. VerfÜgung}

G-quadruplex Strukturen gewiescht mat bewosst Funktiounen wéi Gedächtnis an Transkriptiouns ugeholl gin assoziéiert. Zum Beispill, G-quadruplex Stabiliséierung vun engem klenge Protein Transkriptiouns vu bestëmmte oncogenes géint kënnen an /oder DNA Schued um telomeres an oncogenes induce Virwaat Feier an Zell Doud ze Gedächtnis [10] - [17]. G-quadruplex Strukturen och Zesummenhang kann Onstabilitéit an G-quadruplex Haaptrei motifs schonn proximal zu DNA breakpoints a Siten vun somatic Kopie Rei Ännerungen op verschiddene Cancers gesinn [18], [19] fonnt hunn zu Nepgen. Helicases datt G-quadruplexes beschränkt sinn och um Site vun Nepgen Onstabilitéit [20] en der fonnt - [22], a Krankheeten wéi Bloom ass a Werner d'syndromes, déi fräi Niveau vun Nepgen Onstabilitéit weisen an engem predisposition zu Kriibs, hunn Contributioun Projet'en am G -quadruplex-Léisung helicases [23]. VerfÜgung

d'Potential Relatioun tëscht G-quadruplex Strukturen a mënschlech Krankheet Tatsaach, et ass eng wichteg Goal ze Adress ob G-quadruplexes bannent Mënsch Stoffer nogewise ka ginn. Mir propagéieren also d'Detektioun vun DNA G-quadruplexes zu Patient-ofgeleet Stoffer an ob et Differenzen an G-quadruplex Niveau tëscht Net-neoplastic a Kriibs Stoffer. Vun astellen d'G-quadruplex-spezifesch antibody, BG4, an immunohistochemistry mat paraffin-Ënnerbewosstsinn (FFPE) Otemschwieregkeeten microarray Rubriken formalin-fix, hu mir verbreet DNA G-quadruplex Opstellung vun de Käre vun mënschlech Stoffer fonnt. Quantification vun BG4-positiv Zell Käre réischt méi extensiv Opstellung vum G-quadruplex Strukturen am Mo. a Liewer Cancers Verglach zu den entspriechende Hannergrond Net-neoplastic Stoffer. Dës Resultater hindeit, datt Ofwécklung vun G-quadruplex Strukturen ass ännert-reglementéiert puer Mënsch Cancers. VerfÜgung

Resultater an Diskussioun VerfÜgung

Mir setzen aus der Präsenz vum G-quadruplexes an de Kären vun der Mënschheet ze weisen an Stoffer ze ermëttelen, ob keng Ennerscheeder erhale offensichtlech sinn zu Patient-ofgeleet Kriibs Stoffer. Eis Approche war baséiert op d'Detectioun vun nuklearem G-quadruplexes vun immunohistochemistry (IHC) mat den G-quadruplex-spezifesch antibody, BG4, op Net-neoplastic a Kriibs Otemschwieregkeeten microarrays (TMAs). D'Spezifizitéit a gesäit vun BG4 fir G-quadruplex Strukturen an der Uwendung vun BG4 zu immunofluorescence (WANN) microscopy op mënschlech Zellen virdrun beschriwwen goufen [9]. Fir d'suitability vun BG4 fir IHC bestëmmen, mir getest éischt dëst antibody zu engem Modell System benotzt Sektiounen aus FFPE Zell Pellets vun MDA-MB-231 Broscht Kriibs Zellen dass virdrun observéiert goufen d'nuklear G-quadruplex Foci vun WANN microscopy Ecran [9] . Als epitope retrieval, entweder Hëtzt-mediated (an citrate-baséiert pH 6.0 oder Tris /héich-baséiert pH 9.0 Baudeeler) oder enzymatic (mat proteinase K), néideg ass oft antigenic Siten ze filmen virun antibody bindend, am Verglach mir dës dräi Standard epitope retrieval Pre-Behandlungen. , Gefollegt vun Leica horseradish peroxidase Polymer-baséiert erkennen mat der Bond IHC staining Plattform no BG4 incubation, staining war vun incubation mat enger Première anti-FÄNDEL antibody gesuergt, déi an der BG4 antibody engem FÄNDEL Markéierung epitope erkennt. No dësem Protokoll, war enorm nuklear staining mat BG4 observéiert nëmmen no epitope retrieval (Dorënner 1B an S1). Nee staining war an de Flichte vun Pre-Behandlung (Dorënner 1A) an Kontrollen standing an dem Fehlen vun BG4 observéiert huet, datt epitope retrieval mat citrate-baséiert gefiermt huet manner Hannergrond wéi dat mat Tris /héich (Dorënner 1c an S1), wobäi Précoce -treatment mat proteinase K fir net-spezifesch nuklear staining gefouert souguer an dem Fehlen vun BG4 (Dorënner S1). Desweideren, no epitope retrieval mat citrate oder Tris /héich Baudeeler, DNase ech Behandlung virun BG4 gefouert staining fir eng staark Reduktioun vun BG4 nuklear Signal Intensitéit (Dorënner 1D an S1), weider d'Detektioun vun DNA G-quadruplexes confirméiert. D'Nuklearenergie BG4 Signal an IHC gesinn ass mat der leschter erkennen BG4 Foci am Käre vun Otemschwieregkeeten Kultur Zellen konsequent [9]. VerfÜgung

eng IHC Protokoll fir BG4 etabléiert hunn, mir bestätegt éischt datt biopsied Net-neoplastic Mënsch Otemschwieregkeeten Echantillon hätt mat BG4 ginn Kierchefënster. Generell, mir observéiert variéiert BG4 staining Musteren abréngen Stoffer Differenzen an der Opstellung vum G-quadruplexes tëscht Stoffer suggeréiert an och tëscht Zellen am selwechten Otemschwieregkeeten (Dorënner S2). Dës Resultater weisen, datt de globale Équipe vun DNA G-quadruplexes zu komplex Mënsch Stoffer kënne benotzt BG4 zu IHC harmoniséiert ginn, doduerch Mëssverständnis visualization vum G-quadruplex Strukturen eraus WANN microscopy an Otemschwieregkeeten Kultur Zellen. An enger provisorescher Ëmfro vun BG4 staining op Kriibs Stoffer Verglach mam Hannergrond Net-neoplastic Otemschwieregkeeten, Oneenegkeet BG4 staining Intensitéit oder Verdeelung wossten meeschtens inconclusive (Donnéeën net gewisen), a ville Fäll genau quantification war net méiglech wéinst Differenze an Wirklechkeet an Präsenz vu multiple Zell Zorte vun malignant versus Net-neoplastic Otemschwieregkeeten. Am Géigesaz, fir Liewer an Mo, proposéiert eise provisorescher Ënnersichung dass dës Stoffer wéinst enger méi eenheetlech krut erhale quantifiable sech bannent an tëscht Net-neoplastic a Kriibs Stoffer. Mir ginn also d'Aperio Imagescope Nuclear (v9) Bild Analyse Software de Prozentsaz vun BG4-positiv Käre präsent an der TMAs zu ofgedonkelt. Eng separat Bild Analyse classifier war fir all Otemschwieregkeeten Typ entwéckelt korrekt ze identifizéieren a separat Klicken Objeten, mat der malignant an Net-neoplastic Echantillon Faarwen déi selwecht Parameteren fir korrekt Verglach benotzt. Contreras, an néng Fäll fir déi mir zweete Liewer Kriibs TMA Placken mat den entspriechende reagéiert Hannergrond Net-neoplastic Otemschwieregkeeten aus dem selwechten Patient geholl haten, observéiert mer e wäit méi grouss Zuel vun BG4-positiv Käre zu Kriibs (60.3 ± 5,4% mengen) versus Net-neoplastic (mengen 18,3 ± 2,12%) Otemschwieregkeeten Placken (Dorënner 2). Wann eenzel Kriibs phenotypes goufen iwwerpréift, fonnt mir dass souwuel hepatocellular carcinoma (HCC) an intrahepatic cholangiocarcinoma (Sanktioune) huet däitlech méi nuklear BG4 staining Verglach zu Net-neoplastic Otemschwieregkeeten (Dorënner 2A-D a G). Obwuel HCC a Sanktioune verschiddene bewosst Originen hunn, aus hepatocytes oder Bile duct cholangiocytes Entwécklung respektiv, huet souwuel eng grouss Zuel an Intensitéit vun BG4-positiv Käre Verglach zu den Net-neoplastic Liewer Otemschwieregkeeten. Doriwwer eraus, war an Investitiounen (vom grouss Zell Strenz haett carcinoma Siten) eng Erhéijung vun BG4-positiv staining och bemierken (Dorënner 2E-G). Mir observéiert kloer Ënnerscheeder tëscht Net-neoplastic an entholl Otemschwieregkeeten fir eng Rei vu verschiddene Patient Fäll. Iwwerhaapt, e breet-gefächert Analyse vum Kriibs an Hannergrond Net-neoplastic TMA Placken och firstellen Fäll awer erëm eng Erhéijung vun BG4-positiv Käre ganze HCC, Sanktioune an metastatic carcinoma (Dorënner 3A). . (; 0,001, Dorënner 3B P &Si besteet) VerfÜgung

Ähnlech un der Wéi all Fäll zesummen dorunner huet, e ~2.4-fantastesch Erhéijung vun der Zuel vun BG4-positiv Käre war zu Liewer Kriibs Verglach zu Net-neoplastic Otemschwieregkeeten gesinn Erhéijung vum G-quadruplex Heefegkeet vun Kriibs Otemschwieregkeeten Liewer, eng grouss wéi 3-fantastesch Erhéijung vun der Zuel vun BG4-positiv Käre war am Mo. adenocarcinoma an signet Ring Zell carcinoma Verglach mam Hannergrond Net-neoplastic Otemschwieregkeeten aus der selwechter individuell (Dorënner geholl observéiert 4). Eng breet-gefächert Analyse vun Mo. Kriibs an Net-neoplastic Stoffer dorënner firstellen Fäll Neits d'Erhéijung vun der Zuel vun BG4-positiv Käre vun Mo. Kriibs gesinn Verglach mat Net-neoplastic Otemschwieregkeeten (Dorënner 5). Iwwerhaapt, an eenzelne Mo. Kriibs sub-Typ, adenocarcinomas (ursprünglech aus glandular epithelia), signet Ring Zell carcinomas (adenocarcinomas vun mucin Oflagerung charakteriséiert) an gastrointestinal stromal erhéijen (Schued, KIT-ausdrécken sarcomas vun mesenchymal Urspronk), awer all grouss Zuel vun BG4-positiv Käre Verglach zu net-neoplastic Mo. Otemschwieregkeeten (Dorënner 5A). Wann all Fäll zesummen dorunner huet, ~3.1-fantastesch méi BG4-positiv Käre zu Kriibs versus Net-neoplastic Stoffer (Dorënner 5B, P &Si besteet; 0.001) fonnt goufen. Et ass ausserdeem, datt e puer Mo. entholl sub-Typen, déi verschidden etiologies an Werdegang hunn, sinn all déi Erhéijung vun BG4 staining charakteriséiert. Des Resultater sinn also héich suggestiv vun engem allgemenge Lien tëscht eng grouss Präsenz vum G-quadruplex Strukturen an Mo. Kriibs Entwécklung. VerfÜgung

An der Liewer an Mo. TMAs, e puer Kriibs Otemschwieregkeeten Placken onverännert oder nee quantifiable BG4 staining, vläicht eng Fro zu epitope Stabilitéit während chirurgesch Fro Kollektioun bidden, oder alternativ Virop zu engem richtege Verännerlechkeet am G-quadruplex Équipe an dëse bestëmmte Stoffer. Et ass awer vun NB an kee Fall war all Net-neoplastic Liewer oder Mo. Otemschwieregkeeten extensiv BG4-positiv. Dëse Fonds observation dé weider, datt d'Erhéijung vun der Zuel vun BG4-positiven an de Kriibs TMA Placken gesinn Zellen am G-quadruplex Präsenz tëscht der Net-neoplastic an malignant Staaten e richtegen Ënnerscheed reflektéiert. Analyse vum G-quadruplex staining an aner Cancers also méiglech kann an eiser virleefeg Analyse vun Bauchspaicheldrüs Otemschwieregkeeten hindeit, datt, wann BG4 staining an Net-neoplastic Bauchspaicheldrüs verbreet ass, do e ~1.6-fantastesch ass Erhéijung vun BG4 nuklear staining zu adenocarcinoma Stoffer ( P &Si besteet;. 0,01, Dorënner S3) VerfÜgung

Allgemeng, eis Resultater Musiktherapie- datt G-quadruplexes kann duerch IHC an net-neoplastic a Kriibs Mënsch Stoffer verlängeren eis virdrun Conclusiounen visualized ginn, datt d'Präsenz vun G-quadruplex Strukturen réischt an d'Käre vun Kultur Zell Linnen [9]. Et ass wichteg, datt mir eng Erhéijung vun der Zuel vun de G-quadruplex-positiv Zellen fir e puer Kriibs Stoffer Verglach zu Net-neoplastic Fäll observéiert. D'Donnéeën, déi mer net an sech dobäi net virwat méi G-quadruplexes am Fäll vun Mo a Liewer Cancers offensichtlech sinn. Allerdéngs sinn et e puer Zeilen aus de Beweiser vun der Literatur, datt e Potential Veräin oder causative Lien tëscht G-quadruplexes a Mechanismen Contributioun zu Kriibs Entwécklung oder Werdegang schloen. Zum Beispill, G-quadruplex Strukturen, wann net während DNA Gedächtnis geléist, kann fragil Siten bedeiten dass Nepgen Onstabilitéit förderen, wat eng gutt-bekannt Markenzeeche vum Kriibs ass [24]. Iwwerhaapt sinn G-quadruplex Haaptrei motifs um DNA fonnt breakpoints datt Féierung ze translocations bannent de BCL2 Gentherapie zu lieft a bannent de HOX11 Gentherapie vun T-Zell leukemias [25], [26]. Computational gebueden hunn och méiglech Associatiounen vum G-quadruplexes an ausgefouert Regioune vun verschiddenen Cancers ugeholl [19]. VerfÜgung

Mir hypothesize dass eng Hausse am Frankräich G-quadruplexes zu Kriibs aus kennen an Enzymen féiere kann, datt G-quadruplexes Prozess an /oder Frankräich Onstabilitéit um G-quadruplex Siten. Zum Beispill, Fanconi anemia, Bloom ass a Werner d'syndromes, all Ecran Nepgen Onstabilitéit mat engem predisposition zu Kriibs [27] - [29] an aus kennen an DNA helicase Enzymen Resultat datt G-quadruplex-Léisung Aktivitéit hunn [30] - [32] . Rezent Nepgen-grouss Etuden hunn Optakt der Unerkennung vun G-quadruplex Message vun zousätzleche Léisung helicases wéi ATRX, PIF1 an XPB /D [20] - [22]. Ausserdeem, huet PIF1 ugeholl Frankräich Onstabilitéit um G-quadruplexes zu oofgesinn [22], während ATRX Verloscht mat chromosomal Onstabilitéit an pancreatic neuroendocrine erhéijen assoziéiert ass [33], an XPD kennen desorganiséieren DNA Nukleotid excision Reparatur datt zu Kriibs-ufälleg Krankheete féiert esou wéi Xeroderma pigmentosum [34]. VerfÜgung

Et schéngt, datt Liewer an Mo. Cancers héich heterogen sinn an net vun enger gemeinsamer genetesch Ënnerschrëft oder engem héich representéiert dreiwend stattfannen charakteriséiert, datt d'observéiert Zouhuele G-quadruplex Strukturen einfach erkläre kann . Während ville Liewer Cancers mat hepatitis B oder C Wonn verbonne sinn, seet d'agebousst Informatiounen mat der TMAs kritt, datt et keng Korrelatioun mat BG4 staining ass. Als Deel vun der Zukunft schaffen, gëtt et vun Wäert Nët-neoplastic an Echantillon malignant entholl fir Fäll ze analyséieren, wou ganz-Nepgen sequencing d'genetesch Hannergrond vun der entholl /Nët-neoplastic opzefëllen, fir, fir d'Bezéiung ze etabléieren agestallt gouf tëschent genotype an G-quadruplex Équipe an Kriibs. VerfÜgung

an Conclusioun, Rapport hu mir d'benotze vun de G-quadruplex-spezifesch antibody, BG4, an IHC staining Experimenter vu mënschlechen Net-neoplastic a Kriibs Stoffer. Dës Etude huet eis erlaabt e méi héich Präsenz vun DNA G-quadruplex Strukturen an d'Käre vun Mo a Liewer Kriibs Zellen ze identifizéieren Verglach zu den entspriechende Net-neoplastic Stoffer. Mir hypothesize datt dës Ënnerscheeder op hire Restaurant vun bewosst Prozesser ofhängeg ginn, datt Nepgen Stabilitéit oder Ännerungen am chromatin Staat um G-quadruplex Siten zu Kriibs Stoffer regelt. Eis Resultater ënnerstëtzt d'Méiglechkeet, datt Kriibs Zellen enger Fënster vun gesäit suerge kann, dass se méi sensibel wéi Net-neoplastic Zellen géintiwwer engem klenge Protein G-quadruplex-gezielt Strategie maachen géif. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Alben, embedding, sectioning an staining vun Zell Pellets sech duerch d'histopathology Kär Service am Cancer Research UK Cambridge Institut gesuergt. Immunohistochemistry (IHC) war mat mannerjäregen Variatioune benotzt Standard Methoden op eng automatiséiert Leica Bond Plattform gesuergt. Kuerz, fir 24 h bei Raumtemperatur (RT) zu 10% neutral gefiermt formalin sech Stoffer fix a verschafft eng Leica ASP300 Otemschwieregkeeten Prozessor mat de-hydration duerch eng graded Ethanol Serie benotzt, an xylene an einfach mat geschmollte paraffin Faarwen verhënneren. Embedding op eng Leica EG1160 Embedding Station Leeschtung war an Rubriken op 3 μm mat enger microtome geschnidde goufen, lenks op engem Waasser Bad um ~45-50 ° C Formatioun bis glaten a flaach, ier Kollektioun op engem microscope Rutsch an drëschenen bei 60 ° C fir 1 h. De-zouhuelend ae-hydration huet mat enger automatiséiert Leica ST5020 multistainer gesuergt. MDA-MB-231 mënschlech Broscht adenocarcinoma Zellen sech aus ATCC LGC Bestëmmungen kritt. Fir MDA-MB-231 Zell Pellets, epitope retrieval bei 100 ° C fir 20 min mam Bond epitope retrieval Solution 1 (citrate-baséiert gefiermt pH 6.0) oder Bond epitope retrieval Léisung 2 (Tris /héich-baséiert gefiermt pH 9.0) Leeschtung war oder bei 37 ° C fir 10 min mam Bond Aktivitéit Pre-Behandlung Kit (100 μg /ml proteinase K an Tris-gefiermt Salins, dass nach an 0,35% ProClin 950) am beschten Zoustand ze fannen. Kommerziell sinn mënschlech Otemschwieregkeeten microarrays mat passenden ethesch Akraafttriede vun der Heemecht sech aus Asiicht Bio UK (fir US Biomax Galaxy flamenden Ofgrond) an BioCat, Däitschland oder Stretton Wëssenschaftlech, UK (fir Accumax, Isu Abxis flamenden Ofgrond) kaaft. Epitope retrieval war bei 100 ° C fir 20 min mat citrate gefiermt gesuergt. BG4 staining war um RT op eng automatiséiert Leica Bond Instrument mat engem Kanéngchen Polymer Kit (Leica) folgenden eng 15 min incubation mat BG4 an eng 8 min incubation mat enger Anti-FÄNDEL Kanéngchen polyclonal antibody (Zell sécher Technology) gesuergt. Drënner waren duerno fir 5 min mat 0,02% haematoxylin counterstained der Zell Kären ze visualiséieren. De-hydration a geschlof huet op eng automatiséiert Leica ST5020 multistainer gemaach, an Opriichte war op en automatiséierte Glas coverslipper Leica CV5030 gesuergt. Drënner waren mat enger Aperio XT120 Rutsch Scannen System (Leica) gescannt a Biller analyséiert d'Aperio Imagescope Nuclear v9 Software benotzen. Statistique analyséiert a P Wäerter waren berechent de Student sech an d'T-Test mat. Heefegkeet-Verdeelung Grafike sech mat opgezeechent GraphPad Prism (GraphPad Software). VerfÜgung

Informatiounen Ennerstëtzung VerfÜgung Dorënner S1. VerfÜgung BG4 staining op paraffin-Ënnerbewosstsinn MDA-MB-231 Zell Pellets. A. Mënscherechter MDA-MB-231 Broscht Kriibs Zell Pellets sech fest, paraffin-Ënnerbewosstsinn an Filteren fir IHC mat den G-quadruplex-spezifesch antibody BG4. Staark BG4 staining (bronger) ass scheinbar zu Zell Käre folgenden epitope retrieval mat Tris /héich-baséiert gefiermt pH 9.0. Skala Bar entsprécht 20 μm. Käre mat haematoxylin (blo) counterstained. B. Strong BG4 staining (bronger) ass scheinbar zu Zell Käre folgenden epitope retrieval mat proteinase K. C. keng nuklear staining an de Flichte vun de BG4 antibody der Tris /héich epitope retrieval observéiert ass. D. Nee nuklear staining ass Behandlung folgenden DNase gesinn virun BG4 staining der epitope retrieval mat héich. E. High Niveau vun Net-spezifesch staining an dem Fehlen vun BG4 der epitope retrieval mat proteinase K. VerfÜgung Doi: 10,1371 /journal.pone.0102711.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2. VerfÜgung Non-neoplastic Mënsch Stoffer weisen ofwiesselnd BG4 staining. Non-neoplastic Stoffer sech duerch IHC mat den G-quadruplex-spezifesch antibody BG4 Kierchefënster. A. BG4 staining (bronger) an d'Niere cortex weist eng Rei vun nuklearem staining intensities zu glomeruli an verbonne Strukturen. Zell Käre sech mat haematoxylin (blo) counterstained. Skala Bar entsprécht 50 μm B. schwaach positive BG4 staining an der Sammelt tubule Käre vun de Niere medulla gesinn ass. C. Skin weist eng Rei vun BG4 intensities an der epidermis mat positiv an negativ Kären duerch Streeung hierkommen d'dermis gréisstendeels positiv ass. D. meescht Käre vun Colon sinn BG4-positiv. E. An der Joan vu Kierper, déi stratified squamous epithelium ass haaptsächlech BG4-negativ hierkommen positive staining ass méi deklaréiert gesinn. F. Laf der Broscht ductal lobules, souwuel myoepithelial an luminal Zellen weisen allgemeng staark BG4 staining mat nëmmen heiansdo negativ Zellen VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0102711.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S3. VerfÜgung nik Präsenz vum G-quadruplex Strukturen am mënschleche Stoffer Bauchspaicheldrüs Kriibs. Non-neoplastic a Kriibs huet pancreatic Stoffer vun IHC mat den G-quadruplex-spezifesch antibody BG4, an d'Zuel vun BG4-positiv Käre Kierchefënster war mat Aperio Imagescope Software Faarwen. A. D'Käre vun Net-neoplastic Bauchspaicheldrüs Otemschwieregkeeten Show moderéiert BG4 staining (bronger) mat villen unstained Käre och präsent. Zell Käre sech mat haematoxylin (blo) counterstained. Skala Bar entsprécht 50 μm. B. BG4 staining an Otemschwieregkeeten pancreatic adenocarcinoma ass méi extensiv mat grousser Intensitéit. C. Allgemengen quantification vun der Zuel vun BG4-positiv Käre ganze all Net-neoplastic an pancreatic Kriibs Stoffer. Feeler Baren vertrieden s.e.m. * P &Si besteet; 0,01, n = 6 an 12 fir Net-neoplastic a Kriibs Placken, respektiv VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0102711.s003 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: Ëmmer Gamble op engem eidle Mo: Hunger Ass Associéierten mat avantagéis Decision Making
• PLOS NËMMEN: Onerwaart Dekapitatioun an Tailless Fish am Mo. Inhalt vun Shortfin MAKO Isurus oxyrinchus