Prisotnost S100A9 pozitivnih vnetnih celic v tumorskih tkivih povezana z zgodnjim rakom fazi in boljšo prognozo pri bolnikih z razjedo cancer

Prisotnost S100A9 pozitivnih vnetnih celic v tumorskih tkivih povezana z rakom zgodnji fazi in boljšo prognozo pri bolnikih z rakom želodca
Abstract
Ozadje
S100A9 je bil prvotno odkrili kot dejavnik, ki ga vnetnih celic izločajo. Nedavno je S100A9 ugotovljeno, da je povezana s številnimi človeškimi malignostmi. Namen te študije je raziskati S100A9 izraz v raka želodca in raziskati svojo vlogo pri napredovanju raka.
Metode
S100A9 izražanja v vzorcih želodčne tkiv 177 bolnikov z rakom želodca je bila ocenjena z imunohistokemijo. Izraz njenega dimerizacije partnerja S100A8 in S100A8 /A9 heterodimer so ocenili tudi z uporabo iste metode. Učinek eksogenega S100A9 na motiliteto želodca rakave celice AGS in BGC-823 je nato raziskana.
Bila Rezultati
S100A9 vnetnih celic, kot so makrofagi in nevtrofilcev v človeških želodčnega raka in gastritis tkiv posebej izražena. Statistična analiza je pokazala, da je število visoko S100A9 celica (> = 200), je bila na 200x povečavi mikroskopskega polja v tumorskih tkivih napovedujejo raka želodca zgodnji fazi. Visoka S100A9-pozitivna števila celic je v negativni korelaciji s bezgavkah metastaze (P
= 0,009) in tumorske invazije (P
= 0,011). S100A9 je bila opredeljena kot samostojna prognostičnega napovedovalec celokupnega preživetja bolnikov z rakom želodca (P
= 0,04). Bolniki z število visoko S100A9 celic so z ugodno prognozo (P
= 0,021). Nadaljnja preiskava je pokazala, da je bila S100A8 distribucija v človeške želodčne tkivih raka podobna S100A9. Vendar pa je število S100A8-pozitivnih celicah ni pozitivno korelira z preživetja bolnikov. Vnetne celice infiltrirajoče raka so S100A8 /A9 negativna, medtem ko so bili tisti v gastritis pozitiven. Poleg tega eksogeno S100A9 protein inhibirana migracije in vdor želodčnih rakavih celic.
Sklepi
Naši rezultati predlagal S100A9 pozitivni vnetne celice v želodcu tkivih raka so povezane z zgodnji fazi raka želodca in dobro prognozo.
Ključne besede
rak želodca S100A9 Vnetne celice tumorja uprizoritev Survival ozadju
raka želodca, je eden od glavnih vzrokov umrljivosti za rakom po celem svetu. smo ocenili skupno 989,600 novih primerov raka želodca in 738,000 smrti se je zgodila v letu 2008, in več kot 70% novih primerov in smrti zgodi v državah v razvoju, kot sta Kitajska [1]. Rak želodca je ponavadi prisoten v poznejših fazah, ko so prognostični rezultati slaba. Skoraj 70-80% bolnikov ima vključenost regionalnih bezgavkah, ki ima velik vpliv na preživetje [2, 3]. Zato bi lahko odkritje novih biomarkerjev pripomorejo pri zgodnjem odkrivanju in natančno napovedovanje obnašanja tumorja izboljša preživetje bolnikov [4-6].
Člani družine S100 proteinov se pojavljajo kot biomarkerjev v različnih vrstah tumorjev [7]. S100 družinski član S100A9 je 13kd protein, ki vsebuje ohranjenih strukturne motive, ki so sestavljeni iz dveh EF strani Ca 2 + -binding domen. Po vezavo kalcija, S100A9 komunicira z drugim S100 družinskega člana S100A8 da se tvori funkcionalno heterodimer imenovano kalprotektina [8, 9]. S100A9 bila prvotno opredeljena kot faktor, ki ga vnetnih celic, kot nevtrofilcev in makrofagov v revmatoidnega artritisa, vnetne črevesne bolezni in drugih vnetnih bolezni [10-14] izločajo. S100A9, S100A8, kot tudi heterodimer kalprotektina S100A8 /A9 se prekomerno med vnetjem inducirane karcinogenezo [15]. S100A9 izraz pripravljen regulirana v tumorskih celicah v pljučih [16], prostate [17] in rak dojke [18, 19], medtem ko je navzdol regulirano v človeških požiralnika rakavih celic [20]. V debelega osebkov rak tkiva, pa je S100A9 protein ni bila odkrita v rakavih celicah, temveč v vnetnih celicah razpršeni po strome tumorja [21]. Poleg tega je bila S100A9 v vzorcih blata bolnikov z rakom debelega črevesa bistveno višja kot v kontrolni skupini [22]. V raka želodca, izražanje genov in proteomskimi analiza je pokazala visoko ekspresijo S100A9 v tkivu. [23, 24]. Vendar pa je njegova porazdelitev v tkiva in združevanja z clinicopathological funkcije niso bili v celoti dokazana.
V tej študiji smo uporabili genov analizo izraz za primerjavo S100A9 izražanja v želodčnih tkiva raka in v sosednjih, na videz normalnih tkivih. Imunohistokemijsko pokazala S100A9 v tumor povezan vnetnih celic. Poleg tega smo obravnavali korelacijo med številom S100A9-pozitivnih celic v tumorskih tkivih in clinicopathological funkcije. Smo obravnavali tudi sodelovanje lokalizacijo S100A9 in S100A8 kot tudi lokalizacijo dimera kalprotektina s imunofluorescence. Končno, da dobijo vpogled v delovanje S100A9 v rakavih celicah, smo raziskovali vpliv rekombinantnega S100A9 proteina o migraciji in vdora v želodcu rakave celice AGS in BGC-823.
Metode
Bolniki in vzorci tkiva
Ta preiskava je bila opravljena po potrditvi Odbor za etiko Peking University Cancer Hospital. Privolitev je bila pridobljena iz vsakega bolnika. so preučevali sto šestinsedemdeset bolniki z rakom želodca. 124 moških in 53 samic (povprečna starost 57 let, razpon, 26-80 let) so diagnosticirali in operiranim v Peking University Cancer Hospital med letoma 1998 in 2004. globine tumorske invazije, histološke zgradbe, bezgavk metastaze, metastaz jeter, in vaskularne invazije so bili pridobljeni iz kliničnih in histopatoloških poročil. Faza raka želodca so razvrščeni glede na 7. izdaja tumor-node metastaz (TNM) razvrstitev Skupni odbor ameriškega raka priporoča. Nihče od bolnikov s kemoterapijo ali radioterapijo predoperativno. Vsi bolniki so sledili vse do januarja 2010. Po želodca, je bil en del odstranjenimi vzorcu, določena v 10% formalinu in obdelajo rutinsko za patološko oceno, in druga pa je bila snap-zamrznjene v tekočem dušiku, shranjenih pri -80 ° C za ekstrakcijo RNA. Poleg tega je bilo 30 ujema metastatskih bezgavk zbirajo tudi iz teh bolnikov. Deset primerov kronične slepiča tkiva s poslabšanjem jih je dal na Oddelku za splošne kirurgije, so bili nameščeni pridruženo bolnišnica v Qingdao University Medical College.
Imunohistokemija (IHC)
Štiri mikrometer odsekov iz-formalin fiksni parafin vgrajeni tkiv na poli-L-lizin-obloženih drsi in nato deparaffinized v ksilenu in hidracijo z alkoholom z destilirano vodo. Endogene peroksidaze aktivnost smo blokirali s 3% vodikovega peroksida 15 minut pri sobni temperaturi. Po pritisku kuhanje stekelca v 10 mmol /L EDTA (pH 8,0), 3 minute, so odseki inkubirali s 5% kozjim seruma, nato inkubiramo preko noči pri 4 ° C z miško anti-S100A9 protitelesa (1: 200, T1028, NR Biomedicals, Švica), ali miši proti S100A8 protitelo (1: 200, T1031, BMA Biomedicals) ali miš proti S100A8 /A9 protitelo (1: 200, T1023, BMA Biomedicals). Primarna protitelesa so odkrili s pomočjo dveh korakih predvidevamo System (Dako, Glostrup, Danska). Hrenovo peroksidazo in diaminobenzedene hidroklorid (DAB) so encim in kromogena zaposlenih. Izražanje S100A9, S100A8 in S100A8 /A9 so odkrili tudi v Cybrdi tkivo mikromrež diapozitive (IC00-01-001, Cybrdi, Xi'an, Kitajska), ki vsebuje kronični gastritis z metaplazijo (57 primerov) in želodca karcinomom tkiv (23 primerov). Deset primerov kronične slepiča osebke s poslabšanjem so služili kot pozitivna kontrola za S100A8 /A9.
Oceno IHC in cut-off opredelitev
so S100A9 in S100A8 obarvajo v vnetnih celicah, kot so makrofagi in nevtrofilci razraščati tumorske tkiva. Pozitivne celice so pokazale različno stopnjo citoplazemski obarvanjem. Slike so bile pridobljene s pomočjo Ariol slikovna analiza sistema (Applied Imaging, San Jose, CA, ZDA). Skener temelji na Olympus BX61 mikroskopom z motoriziranim fazi in samodejnim ostrenjem zmogljivosti, opremljenih s kamero. Ploščice smo skenirane pri 200-kratni povečavi. Stopnja monoklonskih S100A9 ali S100A8 reaktivnosti protiteles v vsakem delu tkiva je bila ocenjena s štetjem števila obarvanih vnetnih celic v treh 200 x povečave področji. To je bila izvedena dva neodvisna patologi s pomočjo avtomatskega sistema mikroskopom in programsko opremo za obdelavo slike (glej dodatno datoteko 1: Slika S1). Cut-off vrednost S100A9 obarvane vnetne celice za napovedovanje bolnikov patološkega fazi je bila določena s sprejemnikom, ki delujejo lastnost (ROC) krivulja.
Laserski konfokalno skeniranje
da razišče sodelovanje lokalizacijo S100A9 in njegovo dimerizacije partnerja S100A8, ali heterodimer S100A8 /A9 se Cybrdi tkivo mikromrežnem diapozitive (IC00-01-001) inkubiramo 1,5 ure pri sobni temperaturi z miško anti-S100A9 protitelesa (1: 200) predhodno označene s Zenon Alexa Fluor 647 miš IgG Označevanje Kit (z-25.008, rdeče fluorescence), in bodisi-S100A8 anti protitelo (1: 200) ali anti-S100A8 /A9 protitelo (1: 200) predhodno označene s Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG Označevanje Kit (z-25.002 zelena fluorescenca). Konfokalni slike so bile pridobljene s pomočjo Leica TCS SP5 konfokalnim mikroskopom (Leica, Mannheim, Nemčija). . Poleg tega so jedra jih nasprotno z DAPI (Vector, Burlingame, CA, ZDA), vzbujanje pri 358 nm
Vzorci kroničnih slepiča tkiva s poslabšanjem inkubirana z anti-S100A9 protitelesa (1: 200, rdeče fluorescenčno označeni), in anti-S100A8 /A9 protitelesa. (1: 200, zelene fluorescence označeno) kot pozitivne kontrole za posebne heterodimer izražanja S100A8 /A9
celične kulture
obeh celičnih linij v tej študiji so bili prej profiliran z analizo mikromrež in redno smo preveri z analizo STR (short tandem ponovitev DNA odvzem prstnih odtisov) [25]. Rak želodca celične linije AGS je bilo pridobljeno iz ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA), in celične linije BGC-823 je bila ustanovljena na Kitajskem in se pridobiva iz Cell Research Institute, Šanghaj, Kitajska. Rakave celice so rutinsko goji kot enoplastni v RPMI-1640 medij (GIBCO BRL, Carlsbad, CA), dopolnjen z 10% (v /v), fetalni telečji serum (FCS, GIBCO) in antibiotikov pri 37 ° C v navlaženi 5% CO 2 vzdušje.
Cell invazija test
CytoSelect 24-No Cell Invasion Vsebnost kompleta je bila kupljena iz celice Biolabs, ZDA. S100A9 rekombinantni protein je bila kupljena od BMA Biomedicals, Švica. Cell invasion teste smo izvedli z Transwell priloge, ki omogoča celice migrirajo skozi 8 um velikost por polikarbonatne membrane za. Zgornja površina vložnega membrane je prevlečena z enotno plast posušimo kleti raztopine membrana matriko. Celice resuspendiramo v mediju brez seruma smo nanesli v zgornji komori vsakega Transwell z gostoto 10 6 celic /ml (200μL /komornih). S100A9 rekombinantni protein dodamo k zgornji komorni mediju pri 0, 10, 20, 50 ali 100 ng /ml. Dno komora je bila napolnjena z 500μL medij, ki vsebuje 10% FCS. Celice pustimo, da migrirajo 48 ur pri 37 ° C. Celice, ki so še v zgornji komori smo odstranili z vato, in celice, ki so prodrle na spodnji strani membrane, smo obarvali v mobilni Stain raztopino za 15 minut, in šteje v devetih naključno izbranih mikroskopskih polj (200 x) na jamico . Vsak vložek smo nato prenesli v prazen vdolbino in inkubiramo pri 200μL z ekstrakcijo raztopine. Po 10 minutah, je bilo 100 nI raztopine iz vsakega vzorca prenesemo v 96-mikrotitrski plošči in merijo v čitalniku mikroorganizmov pri OD560nm.
Celic migracije vsebnosti
mobilnost celic je bila ocenjena s pomočjo celjenje ran testa. Celice smo zasejali v šestih tudi jedi za tkivne kulture in kultivirani do zraščene, da bi dobili mobilni strnjena plast, ki je bil nato ranjeno sterilni 200 ul pipeto nasveti. Koli celični debris odstranimo s spiranjem s PBS. Ranjenih enoplastna celico smo nato inkubirali v mediju s 100 ng /ml S100A9 rekombinantnega proteina. Kontrolnih celicah, smo obdelali z seruma RPMI-1640 medij. Čas-lapse fotografije so bile posnete z uporabo obrnjeno fazno kontrastnim mikroskopom pri 200-kratni povečavi za 0, 24, in 48 ur. Sposobnost migracija celic je bila ocenjena z izračunom migracije celic razdaljo povprečno.
Statistična analiza
so Clinicopathologic spremenljivke, pridobljeni iz kliničnih in histopatoloških poročil. ROC krivulje so bili uporabljeni pri določanju mejno vrednost S100A9 pozitivnih število vnetne celice pri vrednotenju patološkega oder TNM. Združenje S100A9 pozitivna števila vnetnih celic z različnimi stopnjami TNM je bila izvedena s preskusom rang-sum Wilcoxon. Za pridobitev povezave med S100A9 ali S100A8 števila celic in clinicopathologic spremenljivk so podatki navzkrižno zbrani v tabeli in χ
2 Testiranje je bilo izvedeno. Kumulativno preživetje je bila ocenjena z metodo Kaplan-Meier, in primerjave med skupinami so bile izvedene z testa log-ranga. Celokupnega preživetja je bila izmerjena od datuma začetnega kirurgije do dneva smrti, štetje smrt zaradi kateregakoli vzroka kot končno točko, oziroma zadnji dan informacij kot končne točke, če ni bil dogodek dokumentiran. Multivariatno analizo Cox sorazmernih tveganj regresije modela (nazaj, postopoma) je bil ustvarjen za oceno vpliva posameznih spremenljivk na preživetje. Pomen je bila določena na P
< 0,05.
Rezultati
Izražanje S100A9 v infiltracije vnetnih celic v raka želodca in kronične gastritis tkiv
Na podlagi predhodne analize genov diod, smo ugotovili, da so bile v želodcu raka tkiva razlikovati od sosednjih noncancerous sluznice, ki ga značilnih razlik v njihovih gen izraz vzorcev [26]. Raznolikost genskih vzorcev izražanja lahko odraža razlike v bistvenih lastnostih tumorskih in normalnih celic, pa tudi razlike v celični sestavi teh kompleksnih tkiv. Znotraj teh genov, je izraz S100A9 v želodčnih tkivih raka višja od izravnane sosednjega noncancerous sluznici (P
= 0,00241, slika 1A). Slika 1 Podajanje S100A9 pri raku želodca in sosednjih non-rakastih tkivih. (A) drugačen izraz vrednost S100A9 v 72 želodčnih tkivih raka in seznanjen ne-rakave tkiva z analizo podatkov iz Illumina Sentrix BeadChip cDNA mikromrež. (B-E) Imunohistokemijsko od S100A9 v želodčnih tkivih rakom (B) metastatskih bezgavke (C), kronični gastritis (D), in sosednji nerakasta želodčni sluznici (E). S100A9 lokalizacija je pokazalo kot rjavo ali rdeče granuliranega lokusih v citoplazmi infiltracije vnetnih celic, zlasti v mononuklearnih fagocitov in nevtrofilcev granulocitov. (Povečava 200 x).
Imunohistokemija vzorcev od 177 bolnikov z rakom želodca je pokazala, da je bil S100A9 pozitivna v vseh osnovnih rakavih tkiv z imunskim barvanjem nahaja izključno v vnetnih celicah, kot so makrofagi in nevtrofilci razraščati primarni tumor tkiva (različne vrste celic v tkivu vzorci so bili označene z dvema neodvisnima patologi) (slika 1B). Vsi pregledani metastatskih bezgavk (n = 30), so bili prav tako pozitiven S100A9 z imunskim barvanjem nahaja izključno v vnetnih celicah, ki obdajajo metastaznih tkiva raka (slika 1c). V sosednji non-rakavo sluznico, je S100A9 izražena v vnetnih celicah infiltrirajočih gastritis. Želodčna sluznica je bilo negativno ali zelo šibko S100A9 izraz (slika 1D, E).
S100A9 pozitivni število vnetnih celic v tumorskih tkivih je povezana s stopnjo raka in bolnikov preživetje
Da bi ocenili obseg S100A9 izražanja želodčnega cancer- povezana okolja, je število S100A9 pozitivnih vnetnih celic v vsaki tumorsko tkivo merjena s povprečenjem število celic treh področij (originalno povečava 200 x) v območju z največjim številom pozitivnih celic na mestu najgloblje tumorja invazije. Korelacija med števila celic in clinicopathological parametrov in preživetje bolnikov smo analizirali s pomočjo Wilcoxonovim testom rang-sum in metoda Kaplan-Meier. Kot je prikazano na sliki 2A, postopnega zmanjševanja S100A9 pozitivni število vnetnih celic v tumorskih tkivih je bilo povezano s povečanjem tumorja patološke stopnje od I do IV (Wilcoxonov rang zneska test za 4 fazah, P
= 0,0265). Slika 2 Visoka S100A9 število celic v raka tkivu kaže boljše rezultate pri bolnikih z rakom želodca. (A) Raztreseni parcela S100A9 pozitivnega število vnetnih celic v vsaki patološko fazi TNM. Modra črta označuje stopnjo 200. (B) ROC krivuljo števila S100A9 celic za napovedovanje patološkega fazi TNM. Arrow navedla cutoff točko o 200. (C) Kaplan-Meier analizo celokupnega preživetja za vsako bolezensko fazi TNM. (D) Kaplan-Meier Analiza celokupnega preživetja za visoko število S100A9 celic (≥ 200) skupina in število celic nizko S100A9 (< 200) skupino. (Samo 176 bolnikov je bilo vključenih v analizo za en bolnik izgubil spremljanje).
Potem smo testirali moč napovedovanja štetja S100A9 celic za stopnjo tumorjev pri raku želodca. Temelji na odru TNM, so bolnike razdelili v dve skupini, manj napredne skupine (faza I + II) in napredno skupino (stopnja III + IV). Površina pod krivuljo (AUC), pridobljeno iz sprejemnika deluje značilne (ROC) krivulj z uporabo vnetne celice S100A9 pozitivni štetje je bilo 0,623 za patološke stopnje TNM. Je mejna vrednost je bila 198,5 (smo uporabili 200 v naslednji analizi) na 200 x povečavo področju z 64,3% občutljivost in 61,9% specifičnost za odrsko tumor napoved (slika 2B). Mejna črta 200 se lahko uporablja za ločevanje manj napredne skupine iz naprednega skupine. Razlika je pomembna med obema skupinama (Wilcoxonov rang test znesek za dve skupini, P
= 0.017, slika 2A).
Ker analize preživetja je pokazala bistveno drugačno prognozo pri bolnikih z rakom želodca v različnih fazah raka (slika 2C) smo analizirali odnos med S100A9 pozitivnih vnetnih celic, število in stopnjo preživetja bolnikov. Bolniki so bili razdeljeni glede na mejno vrednostjo v visoki S100A9 števila celic (≥ 200) skupina in število celic nizko S100A9 (< 200) skupine. 5-letno preživetje je bilo 44,6% v skupini, ki štetje visoko celic v primerjavi z 22,5% v skupini, nizko število celic (P
= 0,021, slika 2D). Mediana časa preživetja je bila 35,1 ± 10,8 mesecev za skupino visoko celično štetje in 20,3 ± 3,0 meseca za skupino nizko število celic, oz. Če povzamemo, lahko S100A9 pozitivnih vnetna število celic želodčnega tkiva raka se uporablja kot napovedovalec za razlikovanje v zgodnji fazi in napredovalega raka želodca s cutoff 200 pozitivnih celic /HPF. Prisotnost S100A9 pozitivnih vnetnih celic v tumorskih tkivih povezana z boljšo prognozo pri bolnikih z rakom želodca.
Nizko število S100A9-pozitivnih vnetnih celic v tumorskih tkivih pozitivno korelira z Ugotovljeno je bilo revnih clinicopathological lastnosti
število Low S100A9 celic se povezana z globino tumor invazije (fazi T), bezgavk metastaze (N fazi) in klinični fazi TNM (P
= 0,011, 0,009 in 0,002, v tem zaporedju). Korelacija med štetjem S100A9 celic in drugih kliničnih značilnosti, kot so spol, starost, lokacija tumorja, metastaz jeter (M fazi), vaskularne invazije in diferenciacije niso bile statistično značilne (vsi P
> 0,05) (tabela 1). Poleg tega, multivariatna analiza je pokazala stopnjo N (P
= 0,006), jetra metastaz (P
= 0,000), in število S100A9 celic (P
= 0,046), da so neodvisne dejavnike pri napovedovanju celokupno preživetje (tabela 2 ) .table 1 združenje S100A9 pozitivnih število vnetnih celic v tumorskih tkivih s clinicopathological parametri pri bolnikih z želodčnim rakom
spremenljivk
Low S100A9 (pozitivnih celic < 200)
Visoka S100A9 ( pozitivne celice > = 200)
P
vrednost
Sex
0.125
Male
74
50
Moški
25
28
Age
0,089
< 50
32
18
50-59
24
12
60-69
33
33
> = 70
10
15
Tumor lokacija
0,271
Cardia
26
15
Non-Cardia
73
63
Globina tumor invazija **
0,011
T1
3
2
T2
7
19
T3
69
42
T4
20
15
limfnega vozla metastaze
0,009
n0
13
23
N1
32
30
N2
32
17
N3
22
8
jetrne metastaze
0.571
Negative
89
68
pozitivno
10
10
TNM stage
0.002
І
3
12
II
37
35
III
50
21
IV
9
10
Vascular invazija
0,742
Negative
38
31
pozitivno
58
43
Ni zabeleženih *
3
4
Razlikovanje **
0,472
No
2
4
Zmerno + Slabo
82
66
Druge vrste
13
6
Ni določeno
2
2
* Podatki nepopolna.
** Fisherjev natančni preizkus.
Tabela 2 Multivariatna analiza napovednih dejavnikov za splošno preživetje bolnikov z rakom želodca
Variacije
P
RR
CI (95%)
Sex
0.671
1.106
0.694-1.765
Moški versus ženske
dobe
0,179
1,148
0,938-1,405
< 50
50-59
60-69
> = 70
tumor za lokacijo
0,545
0,864
0,538-1,387
Cardia vs.
Non-Cardia
Diferenciacija
0,301
0,751
0.437- 1,292
No, v primerjavi z zmerno + slabo
bezgavko metastaze
0,006
1,841
1,196-2,835
N0 + N1 primerjavi N2 + N3
globine tumorske invazije
0,1
1,756
0,897-3,435
T1 + T2 v primerjavi z T3 + T4
jetra metastaz
0
3,461
2,002-5,983
Negativna primerjavi z Pozitivno
žilne invazije
0,107
1,452
0,922-2,285
negativna v primerjavi s pozitivno
S100A9 pozitivni vnetne celice število
0,046
0,643
0,417-0,991
< 200 v primerjavi s > = 200
RR: relativno tveganje; CI:. Interval zaupanja
status ekspresije S100A8 in heterodimer S100A8 /A9 v želodčni rak tkiva in gastritis tkiva
Kronični gastritis je kronična želodca poškodba, patološko značilna nespecifičnega kronično vnetje želodčne sluznice. Vnetne celice v kroničnega gastritisa so morfološko kot tiste infiltracije primarnega želodca rakavih tkiv. V nekaterih primerih, kronični gastritis celo lahko povzroči raka na želodcu. Dalje, smo podrobneje proučiti izražanje S100A8, ožjega družinskega člana S100A9 in obrazec heterodimerizacijo S100A8 /A9 v obeh želodca tkivih rakom in sosednjih non-tumorskih kronični gastritis tkiv v želodcu vzorcih raka, ki jih opravlja imunohistokemično. Podobno kot pri vzorcu S100A9 je S100A8 izraženo izključno v vnetnih celicah razraščati tako tumorske tkiva in sosednjih gastritis tkiva. . S100A8 ni bil izražen v vseh želodčne rakavih celic in normalno želodčne sluznice
Naprej smo količinsko število S100A8 pozitivnih vnetnih celic v vsaki tumorsko tkivo, kot je opisano zgoraj za S100A9 (Dodatni datoteka 1: Slika S1). Presenetljivo je, da S100A8 število celic v želodčnih tkiva raka ni bilo povezano z večino clinicopathological funkcij (Additional datotek 2: Tabela S1) ali preživetje bolnika (Dodatna datoteka 3: Slika S2). Poleg tega izraz obliki heterodimerizacijo S100A8 /A9 ni bila odkrita v nobenem vnetnih celicah infiltrirajočih želodčne rakavih tkiv, medtem ko so nekateri S100A8 /A9 pozitivne celice opredeljeni v kronični gastritis tkiva (podatki niso prikazani). Ti podatki kažejo, da bi lahko bila porazdelitev S100A9, S100A8 in S100A8 /A9 drugačna človeškega raka želodca in kronične gastritis tkiva.
Da bi potrdili to hipotezo, smo še naprej raziskovali subceličnih lokalizacijo vzorec S100A9, S100A8 in S100A8 /A9 heterodimere izraz, ki ga opravljajo immunofluorecence barvanje v mikromrež tkiva, vključno z 23 primerov raka želodca in 57 primerov kroničnega gastritisa. Pri želodčnih tkiva z rakom, so tako S100A9 in S100A8 proteini odkrita v tumor infiltracije vnetnih celic (slika 3A, B), medtem ko ni bilo S100A8 /A9 heterodimer najdemo v vseh primerih (Slika 3G). Izražanje S100A8 in S100A9 delno prekrivajo v citoplazmi celic (slika 3D, E). Poleg tega so bile ugotovljene S100A9 in S100A8 proteini pri vnetnih celic v kronični gastritis (slika 3k, L). Porazdelitev teh dveh proteinov tudi delno prekrivajo (slika 3N, O). Skladni z rezultati imunohistokemijo, S100A8 /A9 ni bil izražen v nobenem celicah raka želodca tkiv (slika 3G), medtem ko je izraz S100A8 /A9 delno prekrivajo s S100A9 pri vnetnih celicah gastritis tkiv (slika 3q, S, T) . Ni presenetljivo, da je bila ekspresija in distribucijo S100A8 /A9 pri kroničnih slepiča tkivih s poslabšanjem (pozitivni kontrolni) precej podobni tistim pri kroničnih gastritis tkivih (slika 3U, V, X, Y). Skupaj, se lahko razlika izraz in subceličnih lokalizacija S100A9, S100A8 in S100A8 /A9 v različnih tkivih implicirajo njihove različne vloge pri raku želodca ali kronični gastritis okolje. Slika 3 Imunofluorescentne podobe S100A9, S100A8 in S100A8 /A9 proteinov v tkivnih mikromrež diapozitivov, ki vsebujejo želodčni rak tkiva (A-J) in kroničnih gastritis tkiv (K-T) in kroničnih slepiča tkiv s poslabšanjem (U-Y). S100A9 in S100A8 so odkrile monoklonsko protitelo, prelabeled z Zenon Alexa Fluor Mouse IgG Označevanje Kit (z zeleno in rdečo fluorescenco zaporedju). Jedro je obarvajo s DAPI. S100A8 /A9 heterodimerov bile zaznavne uporabo dimer specifičnih 27E10 protitelesa iz BMA Biomedicals prelabeled z zeleno fluorescenco. Co-lokalizacija S100A9 in S100A8 ali S100A8 /A9 je razvidno iz spojenih slikah (D, I, N, S, X) in večjimi združenih slik (E, J, O, T, Y). Bela puščica 3 T prikazuje sodelovanje lokalizacijo S100A9 in S100A8 /A9 v kronični gastritis. Dolžina bar, 50 um.
zavira rekombinantnega proteina S100A9 za migracije in invazije na želodcu linij rakavih celic in vitro
S100A9 beljakovine, izražene v in izločajo vnetnih celic, ki služi kot posrednik pri akutnih in kronično vnetje. Ker S100A9 pozitivni število vnetnih celic v korelaciji z manj agresivnimi clinicopathological značilnosti, smo dodatno testirali neposredno zaviralno funkcijo rekombinantnega S100A9 na migracije in invazije na želodcu rakavih celic. Oceniti invazivno sposobnost želodčnih rakavih celic, smo uporabili transwell testov. Dva želodčne rakave celične linije, AGS in BGC-823, smo obdelali s srednjo ali medij brez seruma, ki vsebujejo različne koncentracije S100A9 rekombinantnega proteina (10, 20, 50 in 100 ng /ml). Invazivne celic so v devetih naključno izbranih mikroskopskih polj (200 ×). Rezultati so pokazali, da S100A9 rekombinantni protein rahlo inhibiran AGS celično invazijo (slika 4A), pri čemer S100A9 znatno inhibiran BGC-823 vdor v odvisnosti od koncentracije (P
< 0,05, slika 4C). Za analizo preselitveno sposobnost želodca rakavih celic, smo izvedli celjenje ran testa. Obe celični liniji smo obdelali s srednjo ali medij brez seruma, ki vsebuje 100 ng /ml S100A9 rekombinantni protein. Rezultati so pokazali, da S100A9 nekoliko zaviral migracije AGS celic (slika 4B), medtem ko so migracije celic razdalje BGC-823 celic, ki so se zdravili z S100A9 po 24 urah in 48 urah inkubacije bistveno nižje od nadzora (P
< 0,05, slika 4D). Slika 4 Učinek S100A9 rekombinantnega proteina na invazijo in migracije želodčnega raka celičnih linij. V transwell testu smo AGS (A) in BGC-823 (C) celice obdelamo s srednjo ali medij brez seruma, ki vsebuje 10, 20, 50 ali 100 ng /ml S100A9 rekombinantni protein. Invazivne celice so bili prešteti v naključno devetih izbranih mikroskopskih polj (200 ×). V celjenje ran testu smo AGS (B) in BGC-823 (D) celice obdelamo s seruma RPMI-1640 medij ali medij, ki vsebuje 100 ng /ml S100A9 rekombinantni protein. Fotografije so bile posnete z obrnjen fazno kontrastnim mikroskopom pri 0 h, 24 urah in 48 urah po ranjenih. Tri neodvisne poskuse smo izvedli. Rezultati so bili predstavljeni kot sredstvo ± SD teh neodvisnih eksperimentov. P
vrednost v primerjavi s kontrolno
skupine.
Razprava
raka v humani medicini je kronična bolezen, ki izvira iz transformiranih celic zasidrana genska kot tudi epigenetske spremembe. Vendar pa je rak ni sestavljena zgolj iz rakavih celic. Rak tkivo vsebuje druge tipe celic, vključno fibroblastov in epitelnih celic, imunskih celic in celic, ki so krvne žile in limfni žilja, [27]. V tem zapletenem tumorja mikrookolja, vnetni mediatorji uravnavajo različne stopnje razvoja tumorja, vključno z začetkom, promocije, invazijo, in metastaz [28].
S100A9, član S100 družine, je bogato granulocitov, monocite in aktivirane keratinocitih med različnimi vnetja. V tej študiji smo ugotovili, da je bil S100A9 posebej nahaja v vnetnih celicah razraščati želodčni rakavih tkiv in kroničnih gastritis tkiva, medtem ko so vsi želodca rakave celice ali sosednje celice želodčne sluznice niso izrazili S100A9. Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Identifikacija DNA metilacijo sprememb, povezanih z rakom človeške želodčne
• Karakterizacija človeške želodčne povezanih karcinom metiliranjem 9 miR CpG otokov in zatiranju njihovih izrazov in vitro in in vivo