La présence de cellules inflammatoires S100A9-positives dans les tissus cancéreux est en corrélation avec un cancer à un stade précoce et un meilleur pronostic chez les patients souffrant présence d'cancer

gastrique des cellules inflammatoires S100A9 positives dans les tissus cancéreux est en corrélation avec un cancer à un stade précoce et un meilleur pronostic chez les patients atteints d'un cancer gastrique Contexte
Résumé
S100A9 a été découvert comme un facteur sécrété par les cellules inflammatoires. Récemment, S100A9 a été trouvée être associée à plusieurs affections malignes humaines. Le but de cette étude est d'étudier l'expression S100A9 dans le cancer gastrique et d'explorer son rôle dans la progression du cancer
Méthodes
expression S100A9 dans des échantillons de tissus gastriques de 177 patients atteints de cancer gastrique a été évaluée par immunohistochimie.. L'expression de son partenaire de dimérisation S100A8 et l'hétérodimère S100A8 /A9 ont également été évalués par la même méthode. L'effet de S100A9 exogène sur la motilité de cellules cancéreuses gastriques AGS et BGC-823 a ensuite été étudiée.
Résultats
S100A9 a été spécifiquement exprimé par les cellules inflammatoires telles que les macrophages et les neutrophiles dans les tissus cancéreux et les gastrites gastriques humaines. L'analyse statistique a montré qu'un nombre élevé de S100A9 cellulaire (> = 200) par champ microscopique 200x de grossissement dans les tissus cancéreux était prédictif du cancer gastrique à un stade précoce. nombre élevé de S100A9 positif cellulaire a été négativement corrélé avec métastase ganglionnaire (P
= 0,009) et l'invasion tumorale (P
= 0,011). S100A9 a été identifié comme un prédicteur pronostique indépendant de la survie globale des patients atteints de cancer gastrique (P
= 0,04). Les patients atteints de haute S100A9 nombre de cellules étaient avec pronostic favorable (P
= 0,021). Une enquête plus poussée a révélé que la distribution S100A8 dans les tissus cancéreux gastriques humaines était similaire à S100A9. Cependant, le nombre de cellules S100A8 positif n'a pas en corrélation positive avec la survie des patients. Les cellules inflammatoires infiltrant le cancer ont été S100A8 /A9 négatif, tandis que ceux de gastrite étaient positifs. Conclusions En outre, la protéine S100A9 exogène a inhibé la migration et l'invasion des cellules de cancer gastrique. de
Nos résultats suggèrent cellules inflammatoires S100A9 positifs dans les tissus de cancer gastrique sont associés à stade précoce de cancer gastrique et bon pronostic.
Mots-clés
Le cancer gastrique S100A9 cellules inflammatoires Tumor Contexte de survie du cancer gastrique mise en scène est l'une des principales causes de mortalité par cancer dans le monde entier. Un total de 989,600 nouveaux cas de cancer de l'estomac et 738.000 décès ont été estimés avoir eu lieu en 2008, et plus de 70% des nouveaux cas et des décès surviennent dans les pays en développement tels que la Chine [1]. Le cancer gastrique est généralement détectée à un stade avancé, lorsque les résultats pronostiques sont pauvres. Près de 70-80% des patients ont une atteinte des ganglions lymphatiques régionaux qui a une profonde influence sur la survie [2, 3]. Par conséquent, la découverte de nouveaux biomarqueurs aidant à la détection précoce et la prédiction précise du comportement de la tumeur pourrait améliorer la survie des patients [4-6].
Membres de la famille S100 de protéines apparaissent comme biomarqueurs dans plusieurs types de tumeurs [7]. Le membre de la famille S100 S100A9 est une protéine 13kd qui contient des motifs structuraux conservés composés de deux Ca EF-hand 2 domaines + liaison d'. Après la liaison du calcium, S100A9 interagit avec un autre membre de la famille S100 S100A8 pour former l'hétérodimère fonctionnel appelé calprotectine [8, 9]. S100A9 a été identifiée à l'origine en tant que facteur sécrété par les cellules inflammatoires telles que les neutrophiles et les macrophages dans la polyarthrite rhumatoïde, la maladie intestinale inflammatoire et d'autres maladies inflammatoires [10-14]. S100A9, S100A8, ainsi que l'hétérodimère S100A8 calprotectine /A9, sont surexprimées au cours de la carcinogenèse induite par une inflammation [15]. S100A9 expression est régulée à la hausse dans des cellules tumorales dans le poumon [16], de la prostate [17] et le cancer du sein [18, 19], tandis qu'elle est régulée à la baisse dans les cellules du cancer de l'oesophage humain [20]. Dans les échantillons de tissus du cancer colorectal, cependant, la protéine S100A9 n'a pas été détectée dans les cellules cancéreuses, mais plutôt dans les cellules inflammatoires dispersés à travers le stroma tumoral [21]. En outre, S100A9 était significativement plus élevée dans les échantillons de selles de patients atteints d'un cancer colorectal que chez les témoins [22]. Dans le cancer gastrique, l'expression génique et l'analyse protéomique ont démontré une expression élevée de S100A9 dans le tissu. [23, 24]. Cependant, sa distribution dans les tissus et d'association avec des caractéristiques clinico ont pas été pleinement démontrées.
Dans cette étude, nous avons utilisé l'analyse de l'expression des gènes pour comparer l'expression de S100A9 dans les tissus de cancer gastrique et dans les tissus adjacents, apparemment normales. La coloration immunohistochimique a révélé S100A9 dans les cellules inflammatoires associées à la tumeur. En outre, nous avons abordé la corrélation entre le nombre de cellules positives S100A9 dans les tissus tumoraux et les caractéristiques clinico-pathologiques. Nous avons également abordé la co-localisation de S100A9 et S100A8, ainsi que la localisation du dimère calprotectine par immunofluorescence. Enfin, pour mieux comprendre la fonction de S100A9 dans les cellules cancéreuses, nous avons étudié l'effet de la protéine S100A9 recombinante sur la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques AGS et BGC-823.
Méthodes
Patients et échantillons de tissus
Cette enquête a été réalisée après approbation par le Comité d'éthique de l'hôpital du cancer Université de Pékin. Un consentement éclairé a été obtenu auprès de chaque patient. Cent soixante-seize patients atteints de cancer gastrique ont été étudiés. 124 hommes et 53 femmes (âge, 57 ans signifie, plage, 26-80 ans) ont été diagnostiqués et traités chirurgicalement à l'hôpital du cancer Université de Pékin entre 1998 et 2004. La profondeur de l'invasion tumorale, le grade histologique, métastase ganglionnaire, métastases hépatiques, et l'invasion vasculaire ont été obtenus à partir des rapports cliniques et histopathologiques. Stade de cancer de l'estomac a été classé en fonction de la 7e édition tumeur noeud métastases (TNM) classification recommandée par l'American Joint Committee sur le cancer. Aucun des patients n'a reçu une chimiothérapie ou une radiothérapie pré-opératoire. Tous les patients ont été suivis jusqu'à Janvier 2010. Après gastrectomie, une partie de pièce de résection a été fixé à 10% de formaline et traitées régulièrement pour l'évaluation pathologique, et un autre était snap-congelé dans de l'azote liquide stocké à -80 ° C pour l'extraction de l'ARN. En outre, 30 ganglions métastatiques appariés ont également été recueillies à partir de ces patients. Dix cas de tissus chroniques appendicite avec exacerbation ont été fournies par le Département de chirurgie générale, l'hôpital affilié de l'Université de Qingdao Medical College.
Immunohistochimie (IHC)
sections Quatre-micromètre à partir de tissus de paraffine fixés au formol ont été montés de poly-L-lysine diapositives, puis déparaffinées dans du xylene et réhydratées par l'alcool à l'eau distillée. une activité de peroxydase endogène a été bloquée avec 3% de peroxyde d'hydrogène pendant 15 minutes à température ambiante. Après la cuisson sous pression des lames dans 10 mmol /L d'EDTA (pH 8,0) pendant 3 minutes, les sections ont été incubées avec du sérum de chèvre à 5%, puis incubées pendant une nuit à 4 ° C avec un anticorps de souris anti-S100A9 (1: 200, T1028, BMA Biomedicals, Suisse) ou l'anticorps anti-souris S100A8 (1: 200, T1031, BMA Biomedicals) ou un anticorps anti-souris S100A8 /A9 (1: 200, T1023, BMA Biomedicals). Les anticorps primaires ont été détectés en utilisant un système à deux étapes EnVision (Dako, Glostrup, Danemark). La peroxydase de raifort et de chlorhydrate de diaminobenzedene (DAB) étaient enzyme et chromogène employés. Expression de S100A9, S100A8 et S100A8 /A9 ont également été détecté dans Cybrdi diapositives microarray de tissu (IC00-01-001, Cybrdi, Xi'an, Chine) contenant une gastrite chronique avec métaplasie (57 cas) et des tissus de carcinome gastrique (23 cas). Dix cas de spécimens chroniques appendicite avec exacerbation ont servi de contrôle positif pour S100A8 /A9.
Évaluation IHC et cut-off définition
S100A9 et S100A8 ont été colorées dans les cellules inflammatoires telles que les neutrophiles et les macrophages infiltrant les tissus tumoraux. Les cellules positives ont montré un degré variable de coloration cytoplasmique. Les images ont été acquises à l'aide Ariol système d'analyse d'image (Applied Imaging, San Jose, CA, USA). Le scanner est basé sur un microscope Olympus BX61 un avec une capacité de scène et de mise au point automatique à moteur équipés d'une caméra. Les lames ont été scannée à 200 × grossissement. Le degré d'anticorps monoclonaux S100A9 ou S100A8 la réactivité des anticorps dans chaque section de tissu a été évalué en comptant le nombre de cellules inflammatoires colorées en trois portées de 200 × grossissement. Cela a été effectué par deux pathologistes indépendants à l'aide d'un système de microscope automatique et le logiciel de traitement d'image (voir fichier supplémentaire 1: Figure S1). valeur de S100A9 Cut-off tachée cellules inflammatoires pour la prédiction du stade pathologique du patient a été déterminé par le récepteur d'exploitation (ROC) courbe caractéristique. confocal à balayage laser

Pour étudier la co-localisation de S100A9 et son partenaire de dimérisation S100A8, ou l'hétérodimère S100A8 /A9, les lames de puces à ADN Cybrdi tissulaire (IC00-01-001) ont été incubées 1,5 heure à température ambiante avec un anticorps anti-souris S100A9 (1: 200) pré-marquées avec le kit de Zenon Alexa Fluor 647 IgG de souris Labeling (Z-25008, la fluorescence rouge) et soit l'anticorps anti-S100A8 (1: 200) ou anti-S100A8 anticorps /A9 (1: 200) pré-étiquetés avec le Fluor 488 Souris Labeling Kit IgG Zenon Alexa (Z-25002 , la fluorescence verte). Les images confocales ont été acquises à l'aide du Leica TCS SP5 microscope confocal (Leica, Mannheim, Allemagne). . En outre, les noyaux DAPI (Vector, Burlingame, CA, USA), excitation à 358 échantillons de tissus chroniques appendicite avec exacerbation nm
ont été incubées avec un anticorps anti-S100A9 (1: 200, fluorescence rouge marqué), et anti-S100A8 anticorps /A9. (1: 200, fluorescence verte marqué) comme témoin positif pour la hétérodimère expression spécifique S100A8 /A9 culture
Cell
les deux lignées cellulaires dans cette étude ont été préalablement profilée par l'analyse des microréseaux et ont été régulièrement vérifiées en utilisant l'analyse de STR (short tandem repeat empreinte ADN) [25]. lignée cellulaire de cancer gastrique AGS a été obtenu auprès de l'ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA), et la lignée cellulaire BGC-823 a été créé en Chine et obtenu à partir de l'Institut de recherche sur les cellules, Shanghai, Chine. Les cellules cancéreuses ont été couramment cultivées en monocouche dans un milieu RPMI-1640 (Gibco BRL, Carlsbad, CA), complété avec 10% (v /v) de sérum de veau foetal (SVF, GIBCO) et des antibiotiques à 37 ° C dans un humidifiée à 5% CO 2 atmosphère. d'essai
invasion cellulaire
CytoSelect 24-Well cellulaire kit invasion Assay a été acheté auprès de Cell Biolabs, USA. S100A9 protéine recombinante a été achetée auprès BMA Biomedicals, Suisse. des essais d'invasion cellulaire ont été réalisées avec des inserts Transwell qui permet aux cellules de migrer à travers une membrane de polycarbonate de taille de pores de 8 pm. La surface supérieure de la membrane d'insert a été revêtue d'une couche uniforme de solution de matrice de la membrane basale séché. Les cellules remises en suspension dans un milieu sans sérum ont été ensemencées dans la chambre supérieure de chaque Transwell à une densité de 10 6 cellules /ml (200 pl /chambre). S100A9 protéine recombinante a été ajoutée au milieu de la chambre supérieure à 0, 10, 20, 50 ou 100 ng /ml. Le fond de chambre a été remplie avec un milieu contenant 500 pi 10% de FCS. Les cellules ont été autorisés à migrer pendant 48 h à 37 ° C. Les cellules qui sont restées dans la chambre supérieure ont été éliminées avec un coton-tige, et les cellules qui avaient pénétré sur la face inférieure de la membrane ont été colorées dans la cellule solution de coloration pendant 15 minutes, et on les compte dans neuf champs microscopiques choisis au hasard (200 x) par puits . Chaque insert a ensuite été transféré dans un puits vide et incubé dans 200 pi de solution d'extraction. Au bout de 10 minutes, 100 pi de solution à partir de chaque échantillon ont été transférés dans une plaque de microtitrage à 96 puits et mesurée dans un lecteur de plaques à OD560nm.
Test de migration cellulaire
mobilité cellulaire a été évaluée en utilisant un essai de cicatrisation des plaies. Les cellules ont été ensemencées dans des boîtes de six puits de culture de tissus et mis en culture jusqu'à la confluence pour obtenir une monocouche cellulaire, qui a ensuite été blessés à l'aide stérile 200 pi de pointes de pipette. Les débris cellulaires ont été éliminés par lavage avec du PBS. La cellule monocouche blessé a ensuite été incubé dans un milieu avec 100 ml de protéine recombinante ng /S100A9. Les cellules témoins ont été traitées avec du RPMI-1640 exempt de sérum. images Time-lapse ont été capturées à l'aide d'un inversé à contraste de phase microscope à 200 × grossissement pour 0, 24, et 48 h. La capacité de migration des cellules a été évaluée en calculant la distance moyenne de la migration cellulaire.
Analyse statistique
les variables clinicopathologiques ont été extraites des rapports cliniques et histopathologiques. Les courbes ROC ont été utilisés pour déterminer la valeur de la inflammatoire nombre de cellules S100A9-coupure positive dans l'évaluation de stade TNM pathologique. L'association de la numération des cellules inflammatoires S100A9-positive avec différents stades TNM a été fait avec le test de Wilcoxon. Pour obtenir des associations entre S100A9 ou S100A8 nombre de cellules et les variables clinicopathologiques, les données ont été croisées et un χ
2 test a été effectué. la survie cumulée a été estimée par la méthode de Kaplan-Meier, et les comparaisons entre les groupes ont été fait avec un test du log-rank. La survie globale a été mesurée à partir de la date de la chirurgie initiale à la date du décès, en comptant la mort de toute cause que le point final, ou la dernière date de l'information comme point si aucun événement a été documenté de fin. Une analyse multivariée du modèle des risques proportionnels de régression de Cox (vers l'arrière, par étapes) a été créé pour évaluer l'influence de chaque variable sur la survie. La signification a été fixé à P
< Expression de 0,05.
Résultats de S100A9 à infiltrer des cellules inflammatoires dans le cancer gastrique et tissus de gastrite chronique
Dans une analyse de réseaux de gènes précédente, nous avons constaté que les tissus de cancer gastrique ont été distingués de la muqueuse noncancerous adjacente par des différences caractéristiques dans leur les profils d'expression génique [26]. La diversité des modèles d'expression des gènes peut refléter une variation dans les propriétés intrinsèques des cellules tumorales et normales ainsi que des variations dans la composition cellulaire de ces tissus complexes. Parmi ces gènes, l'expression de S100A9 dans les tissus du cancer de l'estomac est plus élevé que celui de la muqueuse non cancéreuse adjacente adaptée (P = 0,00241
, figure 1A). Figure 1 Expression de S100A9 dans le cancer gastrique et les tissus non-cancéreuses adjacentes. (A) la valeur d'expression différente de S100A9 dans 72 tissus de cancer gastrique et appariés pas cancéreuses tissus en analysant les données d'Illumina Sentrix BeadChip ADNc microarray. (B-E) La coloration immunohistochimique de S100A9 dans les tissus du cancer de l'estomac (B) de ganglions lymphatiques métastatiques (C), la gastrite chronique (D) et de la muqueuse gastrique non-cancéreuses adjacentes (E). S100A9 localisation a été révélé comme brun ou rouge locus granulé dans le cytoplasme des cellules inflammatoires infiltrantes, en particulier dans les phagocytes mononucléaires et granulocytes neutrophiles. (Grossissement 200 fois).
Immunohistochimique d'échantillons de 177 patients atteints de cancer gastrique a montré que S100A9 était positive dans tous les tissus de cancer primaires avec immunocoloration exclusivement situés dans des cellules inflammatoires telles que les macrophages et les neutrophiles infiltrants tissus tumoraux primaires (Les différents types de cellules dans un tissu les échantillons ont été identifiés par deux pathologistes indépendants) (figure 1B). Tous les ganglions métastatiques examinés (n = 30) étaient également positifs pour S100A9 avec immunomarquage exclusivement situé dans les cellules inflammatoires entourant les tissus cancéreux métastatiques (Figure 1C). Dans la muqueuse non cancéreuse adjacente, S100A9 a été exprimée dans les cellules inflammatoires infiltrant gastrite. muqueuse gastrique avait expression S100A9 négative ou très faible (figure 1D, E).
inflammatoire nombre de cellules S100A9 positif dans les tissus cancéreux est associé avec le stade du cancer et la survie des patients
Pour évaluer le degré d'expression S100A9 dans cancer- gastrique environnement associé, le nombre de cellules inflammatoires S100A9 positives dans chaque tissu tumoral a été mesuré en calculant la moyenne des comptages de cellules de trois champs (grossissement 200 fois) dans la zone avec le plus grand nombre de cellules positives au niveau du site de l'invasion de la tumeur la plus profonde. Corrélation entre le nombre de cellules et les paramètres clinicopathologiques et la survie des patients a été analysée à l'aide de Wilcoxon test de la somme des rangs et la méthode de Kaplan-Meier. Comme le montre la figure 2A, la diminution progressive du nombre de cellules inflammatoires S100A9 positifs dans les tissus cancéreux a été associée à l'augmentation de la tumeur stade pathologique de I à IV (Wilcoxon test rang somme pour 4 étapes, P
= 0,0265). Figure 2 High S100A9 numération des cellules dans les tissus cancéreux indique de meilleurs résultats chez les patients atteints de cancer gastrique. (A) nuage de points de comptage de cellules inflammatoires S100A9 positif dans chaque stade TNM pathologique. La ligne bleue indique le niveau de 200. (B) courbe ROC de S100A9 nombre de cellules pour la prédiction du stade TNM pathologique. Flèche indiqué le point 200. (C) de coupure analyse de Kaplan-Meier de la survie globale pour chaque stade TNM pathologique. (D) d'analyse de Kaplan-Meier de la survie globale pour une grande nombre de cellules S100A9 (≥ 200) groupe et le nombre de cellules à faible S100A9; groupe (<200). (Seuls 176 patients ont été inclus dans l'analyse pour un patient perdu pour le suivi).
Ensuite, nous avons testé le pouvoir de prédiction du nombre de cellules S100A9 pour le stade de la tumeur dans le cancer gastrique. Basé sur le stade TNM, les patients ont été divisés en deux groupes, le groupe moins avancé (stade I + II) et groupe avancé (stade III + IV). L'aire sous la courbe (AUC) obtenue à partir du récepteur fonctionnant courbes caractéristiques (ROC) en utilisant les cellules inflammatoires S100A9 positif compte était de 0,623 pour les stades TNM pathologiques. La valeur de coupure était de 198,5 (nous avons utilisé 200 dans l'analyse suivante) par 200 × champ de grossissement avec 64,3% de sensibilité et 61,9% de spécificité pour la prédiction de stade de la tumeur (figure 2B). ligne de coupure de 200 peut être utilisé pour séparer le groupe moins avancé dans le groupe avancé. La différence était significative entre les deux groupes (test de Wilcoxon rang somme pour deux groupes, P
= 0,017, figure 2A).
Depuis l'analyse de survie a montré un pronostic significativement différent pour les patients atteints de cancer gastrique à différents stades du cancer (figure 2C) , nous avons analysé la relation entre les cellules inflammatoires S100A9 positives compter et le taux de survie des patients. Les patients ont été stratifiés en valeur de coupure en haute S100A9 nombre de cellules (≥ 200) groupe et le nombre de cellules à faible S100A9 (< 200) groupe. taux de survie à 5 ans était de 44,6% dans le groupe de comptage cellulaire élevée par rapport à 22,5% dans le groupe à faible nombre de cellules (P = 0,021
, figure 2D). La médiane de survie était de 35,1 ± 10,8 mois pour le groupe de comptage cellulaire élevée et 20,3 ± 3,0 mois pour le groupe de comptage cellulaire faible, respectivement. Pris ensemble, le nombre de cellules inflammatoires S100A9 positives dans le tissu du cancer de l'estomac peut être utilisé comme un indicateur pour distinguer stade précoce et le cancer gastrique avancé grâce à la fréquence de coupure de 200 cellules positives /HPF. Présence de cellules inflammatoires S100A9-positifs dans les tissus cancéreux est en corrélation avec un meilleur pronostic chez les patients atteints de cancer gastrique.
Faible nombre de cellules inflammatoires S100A9-positifs dans les tissus cancéreux est en corrélation positive avec Low S100A9 le nombre de cellules de caractéristiques clinico pauvres a été trouvé être en corrélation avec la profondeur de l'invasion tumorale (stade T), métastase ganglionnaire (stade N), et le stade TNM clinique (P = 0,011
, 0,009 et 0,002, respectivement). Corrélation entre le nombre de cellules S100A9 et d'autres caractéristiques cliniques telles que le sexe, l'âge, la localisation de la tumeur, les métastases du foie (M stade), l'invasion vasculaire et la différenciation ne sont pas statistiquement significatives (tous les P
> 0,05) (tableau 1). En outre, l'analyse multivariée a démontré le stade N (P = 0,006
), métastases hépatiques (P
= 0,000), et S100A9 nombre de cellules (P = 0,046
) soient des facteurs indépendants pour prédire la survie globale (tableau 2 ) .Table 1 Association du comte S100A9 positif inflammatoire cellulaire dans les tissus cancéreux avec des paramètres clinicopathologiques chez les patients atteints de cancer gastrique Variables
Low S100A9 (cellules positives < 200)
Haute S100A9 ( cellules positives > = 200)
P
valeur
Sex
74
50
Femme de 0,125
Homme
25
28
Âge
0,089
< 50
32
18
50-59
24
12
60-69
33
33
> = 70
10
15
emplacement de la tumeur
0,271
Cardia
26
15
non-cardia
73
63
Profondeur de invasion tumorale **
0,011
T1 3
2
T2
7
19
T3
69
42
T4
20
15
métastases ganglionnaires
0,009 13
23
N1
N0
32
30
N2
32
22 8
foie de métastases de 17
N3
0,571
négatif
89
68
10
10 de
positive stade TNM
0,002
І 3
12
II
37
35
III
50
21
IV
9
10
invasion vasculaire
0,742
négatif
58
43
Non enregistré * 3
de 38
31
positif 4
Différenciation **
0,472
bien 2
4
Modérément + mal
82
66
Autres types
13
6
Non déterminé
2 2
* données incomplètes.
** test exact de Fisher.
Tableau 2 L'analyse multivariée des facteurs pronostiques pour la survie globale des patients atteints de cancer gastrique Variations
P
RR
CI (95%)
Sex
0,671
1.106
0,694 à 1,765
Homme contre femme
âge
0,179
1.148
0,938 à 1,405
< 50
50-59
60-69
> = 70
0,545
0,864
0,538 à 1,387
Cardia vs.
non-cardia de tumeur emplacement
Différenciation
0,301
0,751
0.437- 1.292
bien par rapport à modérément + mal
métastases ganglionnaires
0,006
1.841
1,196 à 2,835
N0 + N1 contre la Profondeur de N2 + N3 de l'invasion tumorale
0,1
1.756
0,897 à 3,435
T1 + T2 par rapport Liver la métastase de T3 + T4
0
3.461
2,002 à 5,983
négatif par rapport à l'invasion positive
vasculaire
0,107
1.452
0,922 à 2,285
négatif par rapport positif de cellules inflammatoires S100A9 positif compte
0,046
0,643
0,417-0,991
< 200 contre > = 200
RR: risque relatif; CI. Intervalle de confiance
Le statut d'expression de la S100A8 et l'hétérodimère S100A8 /A9 dans l'estomac des tissus cancéreux et les tissus de gastrite
gastrite chronique est une lésion gastrique chronique pathologique caractérisée par une inflammation chronique non spécifique de la muqueuse gastrique. Les cellules inflammatoires dans la gastrite chronique sont morphologiquement comme ceux infiltrant les tissus de cancer gastrique primaire. Dans certains cas, la gastrite chronique peut même conduire à un cancer de l'estomac. Ensuite, nous avons examiné en outre l'expression de S100A8, un membre de la famille proche de S100A9 et le formulaire de hétérodimérisation S100A8 /A9 dans les deux tissus de cancer gastrique et non-tumorales tissus gastrite chronique adjacents dans les échantillons de cancer gastrique en effectuant immunohistochimie. De manière similaire au motif de S100A9, S100A8 est exclusivement exprimée dans les cellules inflammatoires infiltrent les tissus tumoraux et les tissus adjacents gastrite. . S100A8 n'a pas été exprimé dans toutes les cellules de cancer gastrique et de la muqueuse gastrique normale
Ensuite, nous avons quantifié le nombre de cellules inflammatoires S100A8 positif dans chaque tissu tumoral comme décrit précédemment pour S100A9 (fichier additionnel 1: Figure S1). Étonnamment, S100A8 nombre de cellules dans les tissus de cancer gastrique n'a pas en corrélation avec la plupart des caractéristiques clinico (fichier supplémentaires 2: Tableau S1) ou de survie du patient (fichier supplémentaire 3: Figure S2). En outre, l'expression de la forme hétérodimérisation S100A8 /A9 n'a pas été détecté dans toutes les cellules inflammatoires infiltrent les tissus du cancer de l'estomac, alors que certaines cellules positives S100A8 /A9 ont été identifiés dans les tissus de la gastrite chronique (données non représentées). Ces données indiquent que la distribution de S100A9, S100A8 et S100A8 /A9 peut être différent dans le cancer gastrique et des tissus humains de gastrite chronique.
Pour confirmer cette hypothèse, nous avons en outre étudié le modèle de localisation subcellulaire de S100A9, S100A8 et S100A8 /A9 hétérodimère expression en effectuant immunofluorecence coloration dans un tissu microarray dont 23 cas de cancer de l'estomac et 57 cas de gastrite chronique. Dans les tissus de cancer gastrique, à la fois S100A9 et les protéines S100A8 ont été détectées dans les cellules inflammatoires infiltrant les tumeurs (figure 3A, B), alors qu'aucun hétérodimère S100A8 /A9 a été trouvé dans tous les cas (figure 3G). L'expression de S100A8 et S100A9 partiellement chevauchée dans le cytoplasme des cellules (figure 3D, E). En outre, les protéines S100A9 et S100A8 ont été détectées dans les cellules inflammatoires dans la gastrite chronique (Figure 3K, L). La distribution de ces deux protéines a également partiellement chevauché (figure 3 N, O). En accord avec les résultats d'une immunohistochimie, S100A8 /A9 n'a pas été exprimé dans toutes les cellules des tissus du cancer gastrique (figure 3G), tandis que l'expression de la S100A8 /A9 partiellement chevauchée par la S100A9 dans les cellules inflammatoires des tissus de la gastrite (figure 3T, S, T) . Sans surprise, l'expression et la distribution de S100A8 /A9 dans les tissus chroniques appendicite avec exacerbation (le contrôle positif) étaient très semblables ceux dans les tissus de la gastrite chronique (Figure 3U, V, X, Y). Pris ensemble, l'expression différentielle et la localisation subcellulaire de la S100A9, S100A8 et S100A8 /A9 dans divers tissus peuvent impliquer leurs rôles dans le cancer gastrique ou de l'environnement de la gastrite chronique. les images Figure 3 Immunofluorescence de S100A9, S100A8 et des protéines S100A8 /A9 lames de tissu de puces à ADN contenant des tissus de cancer gastrique (A-J) et les tissus chroniques gastrite (K-T), et les tissus appendicite chronique avec exacerbation (U-Y). S100A9 et S100A8 ont été détectés par un anticorps monoclonal, avec le marquage préalablement marqué Kit Fluor Mouse IgG Zenon Alexa (avec fluorescence verte et rouge respectivement). Le noyau a été coloré par DAPI. hétérodimères S100A8 /A9 étaient détectables en utilisant l'anticorps 27E10 spécifique de dimère de BMA Biomedicals avec préalablement marqué fluorescence verte. La co-localisation de S100A9 et S100A8 ou S100A8 /A9 a été montré dans les images fusionnées (D, I, N, S, X) et de plus grandes images fusionnées (E, J, O, T, Y). flèche blanche dans 3 T montre co-localisation de S100A9 et S100A8 /A9 dans la gastrite chronique. Longueur de barre, 50 um.
L'effet inhibiteur de la protéine recombinante S100A9 sur la migration et l'invasion de lignées cellulaires de cancer gastrique in vitro
La protéine S100A9 est exprimée et sécrétée par les cellules inflammatoires, servant de médiateur dans aiguë et inflammation chronique. Étant donné que le nombre de cellules inflammatoires de S100A9 positif en corrélation avec les caractéristiques clinico moins agressives, nous avons encore testé la fonction inhibitrice directe de recombinant S100A9 sur la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques. Afin d'évaluer la capacité invasive des cellules de cancer de l'estomac, des dosages transwell ont été utilisés. Deux lignées cellulaires de cancer gastrique, AGS et BGC-823, ont été traitées avec du milieu sans sérum ou un milieu contenant différentes concentrations de la protéine recombinante S100A9 (10, 20, 50 et 100 ng /ml, respectivement). cellules invasives ont été comptées dans neuf champs microscopiques choisis au hasard (200 ×). Les résultats ont montré que S100A9 protéine recombinante légèrement inhibée AGS invasion des cellules (figure 4A), tandis que S100A9 significativement inhibé BGC-823 invasion d'une manière dépendante de la concentration (P
< 0,05, figure 4C). Pour analyser la capacité de migration des cellules cancéreuses gastriques, nous avons effectué la cicatrisation dosage. Les deux lignées cellulaires ont été traitées avec du milieu sans sérum ou un milieu contenant 100 ng /ml de protéine recombinante S100A9. Les résultats ont montré que S100A9 légèrement inhibé la migration des cellules AGS (figure 4B), tandis que les distances de migration des cellules de BGC-823 cellules traitées avec S100A9 après 24 h et 48 h d'incubation étaient significativement plus faibles que celles du contrôle (P
< 0,05, La figure 4D). La Figure 4 Effet de la protéine recombinante S100A9 sur l'invasion et la migration des lignées cellulaires de cancer gastrique. Dans Transwell essai, les cellules AGS (A) et BGC-823 (C) ont été traitées avec un milieu sans sérum ou un milieu contenant 10, 20, 50 ou 100 ng /ml de protéine recombinante S100A9. cellules invasives ont été comptées dans aléatoirement neuf sélectionnés champs microscopiques (200 ×). Dans cicatrisante essai, les cellules AGS (B) et BGC-823 (D) ont été traitées avec un milieu ou un milieu RPMI-1640 exempt de sérum contenant 100 ng /ml de protéine recombinante S100A9. Les photos ont été capturés par un inversé à contraste de phase microscope à 0 h, 24 h et 48 h après la blessure. Trois expériences indépendantes ont été réalisées. Les résultats ont été présentés sous forme de moyenne ± E.T. Ces expériences indépendantes. P
valeur par rapport à un groupe
de contrôle. De la discussion
cancer humain est une maladie chronique qui provient de cellules transformées abritant génétique ainsi que les modifications épigénétiques. Cependant, le cancer ne se compose pas seulement des cellules cancéreuses. un tissu cancéreux contenant d'autres types de cellules, y compris les fibroblastes et les cellules epitheliales, les cellules du système immunitaire, et des cellules formant des vaisseaux sanguins et des vaisseaux lymphatiques [27]. Dans ce microenvironnement tumoral complexe, les médiateurs inflammatoires régulent différents stades de développement de la tumeur, y compris l'initiation, la promotion, l'invasion et les métastases [28].
S100A9, un membre de la famille S100, est abondant dans les granulocytes, les monocytes et les kératinocytes activés lors de diverses des états inflammatoires. Dans cette étude, nous avons constaté que S100A9 a été spécifiquement situé dans les cellules inflammatoires infiltrent les tissus du cancer de l'estomac et les tissus de la gastrite chronique, tandis que toutes les cellules de cancer de l'estomac ou des cellules adjacentes de la muqueuse gastrique n'exprimaient S100A9. Nos résultats sont en accord avec les études précédentes démontrant une expression élevée de S100A9 dans les cellules immunitaires infiltrant dans divers types de cancer, notamment le cancer colorectal [21] et le cancer du pancréas [29]. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

• Identification des changements de méthylation d'ADN associés au cancer gastrique humaine
• Caractérisation de la méthylation gastrique liée au cancer humain de 9 îles miR CpG et la répression de leurs expressions in vitro et in vivo