Buvimas S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių vėžiu audinių koreliuoja su ankstyvoje stadijoje vėžys ir geriau prognozės pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu

Buvimas S100A9 teigiamų uždegiminių ląstelių vėžiu audinių koreliuoja su ankstyvoje stadijoje vėžys ir geriau prognozės pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, pervežimas Anotacija
faktai
S100A9 pradžių buvo atrasta kaip veiksnys, išskiriami uždegiminių ląstelių. Neseniai buvo nustatyta, S100A9 į būti susietas su keliomis žmogaus piktybinių navikų. Šio tyrimo tikslas yra ištirti S100A9 išraišką skrandžio vėžio ir ištirti jos vaidmenį vėžio progresavimą.
Metodai
S100A9 raiškos skrandžio audinių mėginių iš 177 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams buvo vertinamas imunohistocheminiu. Jo Dimeryzacja partnerio S100A8 ir S100A8 /A9 heterodimero sąvoka taip pat buvo įvertintas tuo pačiu metodu. tada egzogeninės S100A9 poveikis judrumui skrandžio vėžio ląstelių AGS ir BGC-823 buvo tiriami.
rezultatai
S100A9 buvo specialiai išreiškė uždegiminių ląstelių, tokių kaip makrofagų ir neutrofilų žmogaus skrandžio vėžio ir gastritas audiniuose. Statistinė analizė parodė, kad didelė S100A9 ląstelių skaičius (> = 200) už 200x didinimo mikroskopinių srityje vėžio audiniuose buvo prognozuoti ankstyvos stadijos skrandžio vėžio. Aukštos S100A9 teigiamų ląstelių skaičius buvo neigiamai koreliuoja su limfmazgių metastazių (p
= 0,009) ir naviko invazijos (P, pervežimas = 0,011). S100A9 buvo identifikuojamas kaip savarankiškas prognostinį prognozuoti bendrą išgyvenamumą pacientų, sergančių skrandžio vėžiu (P, pervežimas = 0,04). Pacientai, sergantys didelio S100A9 ląstelių skaičiaus buvo su palanki prognozė (P, pervežimas = 0,021). Tolesnis tyrimas nustatė, kad S100A8 pasiskirstymas žmogaus skrandžio vėžio audiniuose buvo panašus į S100A9. Tačiau S100A8 teigiamas ląstelių skaičius nebuvo teigiamai koreliuoja su pacientų išgyvenimo. Uždegiminis ląstelės patekę vėžiu buvo S100A8 /A9 neigiamas, o tie, gastritas buvo teigiami. Be to, egzogeninė S100A9 baltymų slopinami migracija ir invazija skrandžio vėžio ląsteles.
Išvados
Mūsų rezultatai rodo, S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skrandžio vėžio audiniuose yra susijęs su anksti skrandžio vėžio ir geros prognozės.
Raktažodžiai
Skrandžio vėžys S100A9 uždegiminių ląstelių naviko sustojimo išlikimo Fono
skrandžio vėžys yra viena iš pagrindinių priežasčių mirtingumo nuo vėžio visame pasaulyje. Iš 989,600 naujų skrandžio vėžio atvejų ir 738,000 mirčių viso buvo apskaičiuota, kad įvyko 2008 metais, ir daugiau kaip 70% naujų atvejų ir mirčių įvyksta besivystančiose šalyse, tokiose kaip Kinija [1]. Skrandžio vėžys yra dažniausiai diagnozuojamas stadijose, kai prognostiniai rezultatai yra prasta. Beveik 70-80% pacientų turi dalyvauti regioninių limfmazgių, kuri turi didelę įtaką išgyvenamumui [2, 3]. Todėl atradimas naujų biologinių žymenų padėti anksti aptikti ir tiksliai prognozuoti naviko elgesį gali pagerinti pacientų išgyvenamumą [4-6].
Nariai S100 šeimos baltymų atsiranda kaip biologinių žymenų ir kelių tipų auglių [7]. S100 šeimos narys S100A9 yra 13kd baltymas, kuris yra užkonservuotas struktūrinių motyvų, sudaryti iš dviejų "EF-rankų Ca 2 + -binding srityse. Po kalcio privalomas, S100A9 sąveikauja su kitu S100 šeimos narys S100A8 suformuoti funkcionalus heterodimero vadinamas calprotectin [8, 9]. S100A9 iš pradžių buvo nustatyta kaip veiksnys, išskiriami uždegiminių ląstelių, tokių kaip neutrofilų ir makrofagų reumatoidinio artrito, uždegiminės žarnų ligos, ir kitų uždegiminių ligų [10-14]. S100A9, S100A8, taip pat S100A8 /A9 heterodimero calprotectin, yra aktyvuojami per uždegimas sukeltas kancerogenezėje [15]. S100A9 išraiška yra iki reguliuojama auglio ląstelių plaučių [16], prostatos [17], ir krūties vėžys [18, 19], o tai yra žemyn reguliuojama žmogaus stemplės vėžio ląstelių [20]. Be storosios žarnos vėžio audinių pavyzdžių, tačiau, S100A9 baltymų nebuvo aptikta vėžinių ląstelių, o uždegiminių ląstelių išsibarsčiusios visoje naviko stromos [21]. Be to, S100A9 buvo reikšmingai didesnis išmatų mėginiuose storosios žarnos vėžiu sergantiems pacientams negu kontrolinės grupės [22]. Skrandžio vėžio, genų ekspresijos ir PROTEOMIKOS analizė parodė aukštą raišką S100A9 į audinį. [23, 24]. Tačiau jos paskirstymas per audinį ir kartu su klinikos ypatybių nebuvo visiškai įrodytas.
Šiame tyrime mes naudojome genų ekspresijos analizė palyginti S100A9 išraišką skrandžio vėžio audiniuose ir gretimose, neva normaliuose audiniuose. Imunohistocheminį dažymo atskleidė S100A9 naviko susijusių uždegiminių ląstelių. Be to, mes kreipėsi tarp S100A9 teigiamas ląstelių skaičiaus navikų audiniuose ir klinikos funkcijų koreliaciją. Mes taip pat kreipėsi į bendradarbiavimą lokalizacijos S100A9 ir S100A8 taip pat iš dimeras calprotectin lokalizacija imr.rnofluorescencija. Galiausiai, siekiant įgyti pažvelgti į S100A9 funkcija vėžinių ląstelių, mes ištirti rekombinantinio S100A9 baltymų poveikį migracijos ir invazijos į skrandžio vėžio ląstelių AGS ir BGC-823.
Metodai
Pacientai ir audinių mėginiai
Šis tyrimas buvo atliktas po patvirtinimo etikos komiteto Pekino universiteto onkologijos ligoninėje. Informuoti sutikimą buvo gauta iš kiekvienam pacientui. Šimtas 76 pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, buvo tiriami. 124 vyrai ir 53 moterys (vidutinis amžius 57 metų, diapazonas, 26-80 metų) buvo diagnozuota ir chirurgiškai gydomi Pekino universiteto onkologijos ligoninės tarp 1998 ir 2004 m naviko invazijos, histologinio laipsnio, limfmazgių metastazių, kepenų metastazių gylio, ir kraujagyslių invazija buvo gauti iš klinikinių ir histopatologinių ataskaitas. Etapas skrandžio vėžio buvo klasifikuojami pagal 7-asis leidimas navikas mazgas metastazių (TNM) klasifikaciją rekomenduojamos Amerikos jungtinio komiteto vėžio. Nė vienas iš pacientų chemoterapija arba radioterapija prieš operaciją. Visi pacientai buvo stebimi iki 2010 sausio Po pašalintas skrandis, viena dalis rezekcijos egzempliorius buvo nustatytas 10% formalinu ir tvarkomi rutiniškai patologinės vertinimu, o kitas buvo Snap-šaldyta skystame azote prie -80 ° C RNR gavyba. Be to, 30 atitiko metastaziniai limfiniai mazgai taip pat buvo surinkti iš šių pacientų. Dešimt atvejai lėtinių apendicito audinių, paūmėjimo buvo numatyta Bendrosios chirurgijos katedros, dukterinė ligoninėje Čingdao universiteto medicinos koledžo.
Imunohistocheminis (IHC)
Keturių mikrometro skyriuose iš formalinu fiksuotos parafino įterptųjų audiniuose buvo sumontuoti ant poli-L-lizino dengtos skaidres ir tada deparaffinized ksilene ir rehidrataciją per alkoholį distiliuotu vandeniu. Endogeninės peroksidazės aktyvumas buvo užblokuotas su 3% vandenilio peroksido 15 minučių kambario temperatūroje. Po to, kai slėgio virimo iš 10 mmol /L EDTA (pH 8,0) 3 minutes skaidres, sekcijos buvo inkubuojamos su 5% ožkų serume, tada inkubuojami per naktį 4 ° C su pelės anti-S100A9 antikūno (1: 200, T1028, PTP Biomedicals, Šveicarija), arba pelės anti-S100A8 antikūnas (1: 200, T1031, PTP Biomedicals) arba pelės anti-S100A8 /A9 antikūnas (1: 200, T1023, PTP Biomedicals). Pirminiai antikūnai buvo aptikta naudojant dviejų pakopų įsivaizduoti sistema (Dako, Glostrup, Danija). Krienų peroksidazės ir diaminobenzedene hidrochloridas (TBP) buvo fermentas ir chromogeną dirba. Išraiška S100A9, S100A8 ir S100A8 /A9 taip pat buvo aptikta Cybrdi audinių microarray skaidres (IC00-01-001, Cybrdi, Sianas, Kinija), kurių sudėtyje yra lėtiniu gastritu su metaplazijos (57 atvejai) ir skrandžio karcinoma audinių (23 atvejai). Dešimt atvejai lėtinių apendicito bandinių su paūmėjimo buvo įteikti kaip teigiama kontrolė S100A8 /A9.
IHC vertinimą ir atjungimo apibrėžimas
S100A9 ir S100A8 buvo tamsintas į uždegiminių ląstelių, tokių kaip makrofagų ir neutrofilų infiltrating navikų audiniuose. Teigiami ląstelės parodė įvairaus laipsnio citoplazmos dažymo. Vaizdai buvo įgytos naudojant Ariol vaizdo analizės sistema (taikoma vaizdavimo, San Chosė, CA, JAV). Skeneris remiasi Olympus BX61 mikroskopą su motorizuotu scenos ir automatinio fokusavimo galimybes įrengta kamera. Skaidrės nuskaityta 200 × priartinimas. Iš monokloninis S100A9 ar S100A8 antikūnų reaktyvumo kiekvienoje audinių skyriuje laipsnis buvo vertinamas skaičiuojant vitražas uždegiminių ląstelių skaičių į tris 200 × priartinimu apimtis. Tai buvo atliktas dviejų nepriklausomų patologai su automatinio mikroskopo sistemą ir vaizdų apdorojimo programinės įrangos pagalba (žr Papildoma failą 1: S1 paveiksle). Cut-off "vertė S100A9 tamsintas uždegiminių ląstelių pacientų patologinį etape prognozavimas nulėmė ROC kreivė (ROC) kreivė.
Lazeriniai confocal nuskaitymo
ištirti bendrą lokalizacijos S100A9 ir jos Dimeryzacja partneriu S100A8, arba heterodimero S100A8 /A9, kad Cybrdi audinių mikrogardeliq skaidres (IC00-01-001) buvo inkubuojami 1,5 valandas kambario temperatūroje su pelės anti-S100A9 antikūnų (1: 200) iš anksto paženklinti etikete su Zenon Alexa Fluor 647 pelė IgG Žymėjimas Kit ( "Z-25008, raudona fluorescencija), ir arba anti-S100A8 antikūnas (1: 200) ar anti-S100A8 /A9 antikūnas (1: 200) iš anksto paženklinti etikete su Zenon Alexa Fluor 488 Mouse IgG Žymėjimas Kit (Z-25002 , žalia fluorescencija). Confocal vaizdai buvo įgytos naudojant Leica TCS SP5 mikroskopas ( "Leica", Manheimas, Vokietija). . Be to, branduolių counterstained su DAPI (vektorius, Burlingame, CA, JAV), sužadinimo AT 358 nm,
Mėginiai lėtinių apendicito audinių, paūmėjimo buvo inkubuojami su anti-S100A9 antikūnų (1: 200, raudona fluorescencija ženklinami) ir anti-S100A8 /A9 antikūnas. (1: 200, žalios fluorescencija paženklintas), kaip teigiamos kontrolės konkrečiam S100A8 /A9 heterodimero išraiškos
Mobilusis kultūra
abiejų ląstelių linijų šiame tyrime anksčiau buvo profiliuoti pagal mikrogardeliq analizės ir buvo reguliariai tikrinami pagal STR analizę (trumpas tandemas pakartokite DNR pirštų atspaudų) [25]. Skrandžio vėžio ląstelių linija "AGS buvo gauta iš ATCC (American Type Culture Collection, Manassas, VA), ir ląstelių linijos BGC-823 buvo įkurta Kinijos ir gauti iš ląstelių tyrimų instituto, Šanchajuje, Kinijoje. Vėžinės ląstelės buvo nuolat auginami kaip RPMI-1640 terpėje (GIBCO BRL, Carlsbad, CA) monosluoksnio, po to papildomai su 10% (v /v) serumas iš veršiuko embriono (FCS, GIBCO) ir antibiotikų 37 ° C temperatūroje drėgnoje 5% CO 2 atmosferą.
Mobilusis invazija tyrimas
CytoSelect 24-Na Mobilusis invazija prabavimo komplektas buvo pirktas iš mobiliųjų Biolabs, JAV. S100A9 rekombinantinis baltymas buvo įsigytas iš BMA Biomedicals, Šveicarijoje. Mobilusis invazija tyrimai buvo atliekami su Transwell intarpų, kurie leidžia ląstelėms migruoti per 8 mikronų akučių dydis polikarbonato membrana. Viršutinis paviršius yra antroje įdėtinės membranos buvo padengtas sluoksnj džiovinti pamatinės membranos matricos tirpalo. Ląstelės vėl suspenduojamos terpėje serumo neturinčioje buvo padengtą viršutiniame kambaryje kiekvieno Transwell esant 10 6 ląstelių /ml (200μL /kamerą) tankis. S100A9 rekombinantinis baltymas buvo įtraukta į viršutinio kameros terpėje, esant 0, 10, 20, 50, arba 100 ng /ml. Apatinė kamera alsuoja 500μL terpė su 10% FCS. Ląstelės buvo leidžiama migruoti už 48 h 37 ° C temperatūroje. Ląstelių, kurios liko viršutiniame kambaryje buvo pašalinta su vatos tamponu ir ląstelių, kurios įsiskverbė į apačioje membranos buvo tamsintas Mobilusis Stain Sprendimas 15 minučių, ir skaičiuojami devynių atsitiktinai atrinktų mikroskopinių laukų (200 ×) per gerai , tada kiekvienas įdėklas buvo perkeltas į tuščią šulinį ir inkubuojami 200μL iš ekstrakto tirpalo. 10-ąją minutę, 100μL iš tirpalo iš kiekvieno mėginio buvo perkelti į 96 šulinėlių mikrotitravimo plokštelės ir išmatuotas esant plokštelių skaitytuvas esant OD560nm.
Ląstelių migraciją tyrimas
Mobilusis mobilumo buvo įvertintas naudojant žaizdų gijimą testą. Ląstelės buvo pasėjamos į šešių duobučių audinių kultūros patiekalų ir kultūringas iki susiliejantis gauti ląstelių monosluoksnį, kuris vėliau buvo sužeistas steriliais 200 mikrol pipetės antgalius. Bet korinio nuolaužos buvo pašalintas plaunant PBS. tada žaizdos monosluoksnio ląstelių buvo inkubuojami terpėje, turinčioje 100 ng /ml S100A9 rekombinantinio baltymo. Kontrolės ląstelės buvo gydomi RPMI-1640 terpėje serumo neturinčioje. Laiko tarpas vaizdai buvo užfiksuoti naudojant apversto fazinio kontrasto mikroskopu 200 × priartinimas už 0, 24 ir 48 val. Ląstelių migracijos galimybė buvo įvertinta apskaičiuojant vidutinį ląstelių migraciją atstumą.
Statistinė analizė
Clinicopathologic kintamieji buvo paimti iš klinikinių ir histopatologinių ataskaitas. ROC kreivės buvo naudojami nustatant ribines vertes, kad S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičiaus vertinant patologinę TNM etapą. Iš S100A9-teigiamas uždegiminių ląstelių skaičiaus su skirtingais TNM etapais asociacija buvo padaryta su Wilcoxon rangas atėmimu testą. Norėdami gauti asociacijas tarp S100A9 arba S100A8 ląstelių skaičiaus ir clinicopathologic kintamųjų, duomenų buvo kryžminio lentelėse ir χ
2 bandymas buvo atliktas. Kaupiamasis išlikimo buvo apskaičiuota su Kaplan-Meier metodu, ir palyginimai tarp grupių buvo padaryta su prisijungimo rangas testą. Bendras išgyvenamumas buvo matuojamas nuo šiol pradinio chirurgija mirties dieną, skaičiuojant mirties dėl bet kokios priežasties, kaip galutinis taškas, ar paskutinės dienos informacija kaip galutinis taškas, jei ne įvykis užfiksuotas. buvo sukurtas Dispersinės analizės iš Cox proporciniai pavojų regresijos modelio (atgal, laipsnišką) įvertinti kiekvieno kintamojo išgyvenimui įtakos. Reikšmė buvo nustatytas P
< 0,05.
Rezultatai
išraiška S100A9 į infiltrating uždegiminių ląstelių skrandžio vėžio ir lėtiniu gastritu audinių
Ankstesnėje genas masyvo analizę, mes nustatėme, kad skrandžio vėžio audiniuose buvo atskirti nuo gretimų noncancerous gleivinės būdingų skirtumų tarp jų genų ekspresijos modeliai [26]. Genų ekspresijos modelių įvairovė gali atspindėti pokytis būdingas savybes naviko ir normalios ląstelės, taip pat variacijos ląstelių sudėtį šių sudėtingų audinių. Per šių genų, iš S100A9 išraiška skrandžio vėžio audiniuose buvo didesnis nei suderinta gretimame noncancerous gleivinės (P
= 0,00241, 1A pav). 1 pav išraiška S100A9 skrandžio vėžio ir gretimų nevėžinės audiniuose. (A), Įvairūs išraiška vertė S100A9 72 skrandžio vėžiu audinių ir suporuotas jokių vėžiniai audiniuose analizuoti duomenis iš Illumina Sentrix BeadChip kDNR microarray. (B-E) Imunohistocheminis dažymo S100A9 skrandžio vėžio audinių (B) metastaziniai limfiniai mazgai (C), lėtinis gastritas (D), ir greta nevėžinis skrandžio gleivinės (E) dalį. S100A9 lokalizacija buvo atskleista, kaip rudos ar raudonos granuliuotų lokusų atsižvelgiant į infiltrating uždegiminių ląstelių, ypač vienabranduolėse phagocytes ir neutrofilų citoplazmos granulocitų. (Priartinimas 200 x).
Imunohistocheminis egzempliorių iš 177 skrandžio vėžiu sergančių pacientų parodė, kad S100A9 buvo teigiamas visų pirminių vėžio audiniuose su imunodažymu yra tik uždegiminių ląstelių, tokių kaip makrofagų ir neutrofilų infiltrating pirminio naviko audiniai (skirtingų tipų ląstelių audiniuose mėginiai buvo žymimas dviem nepriklausomų patologams) (1B pav). Visi išnagrinėti metastaziniai limfmazgiai (N = 30), taip pat buvo teigiami S100A9 su imunodažymu yra tik uždegiminių ląstelių, supančių metastazavusiu audinius (1c pav.) Gretimose nevėžinės gleivinę, S100A9 buvo išreikštas uždegiminių ląstelių infiltrating gastritas. Skrandžio gleivinė turėjo neigiamos arba labai silpnas S100A9 išraišką (pav 1D, E).
S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius vėžiu audiniuose susijęs su vėžio stadijoje ir pacientų išgyvenimo
įvertinti S100A9 išraiškos mastą skrandžio vėžį susijęs aplinką, iš S100A9 teigiamų uždegiminių ląstelių kiekvienoje naviko audinyje skaičius buvo matuojamas vidutiniškai ląstelių skaičių trijų sričių (Original priartinimas, 200 x) srityje su didžiausiu skaičiumi teigiamų ląstelių ties giliausia naviko invazijos svetainėje. Koreliacija tarp ląstelių skaičiaus ir klinikos parametrų ir paciento išgyvenamumo analizuojami naudojant Vilkoksono rango sumą testą ir Kaplan-Meier metodu. Kaip parodyta 2A figūra, laipsniškai sumažėja S100A9-teigiamas uždegiminių ląstelių skaičiaus vėžiu audiniuose buvo susijęs su naviko patologinės etape padidėjo nuo I iki IV (Wilcoxon rangas suma testas 4 etapus, P
= 0.0265). 2 pav Aukštos S100A9 kūnelių vėžio audinio rodo geresnį rezultatą skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. (A), Taškinė sklypas S100A9-teigiamas uždegiminių ląstelių skaičiaus kiekvienoje patologinės TNM etape. Mėlyna linija rodo 200. (B) ROC kreivės S100A9 ląstelių skaičiaus lygį nuo patologinio TNM etape prognozavimas. Rodyklė nurodė lizdu apie 200. (C) Kaplan-Meier analizė bendro išgyvenamumo kiekvienam patologinės TNM etape. (D), Kaplan-Meier analizė ir bendro išgyvenamumo aukštos S100A9 ląstelių skaičiaus (≥ 200) grupę ir mažas S100A9 ląstelių skaičius (< 200) grupė. (Tik 176 pacientai buvo įtraukti į analizės vienas pacientas prarado tolesnė priežiūra).
Tada mes patikrinome prognozavimo galia S100A9 ląstelių skaičiaus naviko stadijos skrandžio vėžio. Remiantis TNM etape, pacientai buvo suskirstyti į dvi grupes, mažiau pažangių grupės (etapo I + II) ir pažangių grupės (III etapas + IV). Plotas po kreive (AUC), gaunamas iš ROC kreivė (ROC) kreivės, naudojant S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius buvo 0,623 už patologinių TNM etapais. Ribinė vertė buvo 198,5 (mes naudojome 200 tolesnėje analizėje) už 200 × didinimo srityje su 64,3% jautrumu ir 61,9% specifiškumas auglio stadijos prognozavimas (2b pav.) Ribinė linija 200 gali būti naudojamas atskirti mažiau pažengęs grupę iš pažangiosios grupės. Skirtumas buvo reikšmingas tarp dviejų grupių (Vilkoksono rangas suma testas dvi grupes, p
= 0,017, 2A pav.)
Nuo išgyvenamumo analizė parodė žymiai skiriasi prognozę skrandžio vėžiu sergantiems pacientams įvairiose vėžio stadijose (2C paveikslas) mes analizavo tarp S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičiaus ir pacientų išgyvenamumas santykius. Pacientai buvo suskirstyti pagal ribinei vertei į didelio S100A9 ląstelių skaičiaus (≥ 200) grupę ir mažas S100A9 ląstelių skaičius (< 200) grupės. 5 metų išgyvenamumas buvo 44,6% aukštos ląstelių skaičiaus grupėje, palyginti su 22,5% esant silpnam ląstelių kiekį grupėje (P
= 0,021, 2D pav). Mediana buvo 35,1 ± 10,8 mėnesių didelis ląstelių skaičius grupėje ir 20,3 ± 3,0 mėnesių žemos ląstelių kiekį grupės, atitinkamai. Kartu paėmus, S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius skrandžio vėžio audiniuose gali būti naudojami kaip prognozuoti atskirti ankstyvame etape ir išplitusiu skrandžio vėžiu, su 200 teigiamas ląstelių /HPF nukirpimas. Buvimas S100A9 teigiamų uždegiminių ląstelių vėžiu audiniuose susijęs su geriau prognozės pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu.
Nedaug S100A9 teigiamų uždegiminių ląstelių vėžiu audinių teigiamai koreliuoja su Nustatyta, neturtingų klinikos funkcijų
Žemas S100A9 ląstelių skaičius būti susijęs su naviko invazijos gylio (T stadija), limfmazgių metastazių (N etapas) ir klinikinės TNM etape (P, pervežimas = 0,011, 0,009 ir 0,002, atitinkamai). Koreliacija tarp S100A9 ląstelių skaičiaus ir kitų klinikinių funkcijų, tokių kaip lytis, amžius, naviko vietą, metastazių kepenyse (M etapas), kraujagyslių invazija ir diferenciacijos nebuvo statistiškai reikšmingi (visos p
> 0,05) (1 lentelė). Be to, daugiamatis analizė parodė N etapą (p
= 0,006), kepenų metastazės (p
= 0,000), ir S100A9 ląstelių skaičius (P
= 0,046), kad būtų nepriklausomas faktorius prognozuojant bendrą išgyvenimą (2 lentelė ) .table 1 asociacija S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius vėžiu audinių, klinikos parametrų skrandžio vėžiu sergantiems pacientams
kintamųjų

Low S100A9 (teigiamas ląsteles < 200)
Aukštos S100A9 ( teigiamų ląstelių > = 200)
P
vertė

Lytis
0.125
Male
74
50
Moteris
25
28
Amžius
0.089
< 50
32
18
50-59
24
12
60-69
33
33
> = 70 Naviko vietą
10
15
0,271
Cardia
26
15
Ne Cardia
73
63
Gylis naviko invazija **
0,011
T1
3
2
T2
7
19
T3
69
42
T4
20
15
Limfmazgių metastazės
0,009
N0
13
23
N1
32
30
N2
32
17
N3
22
8
metastazių kepenyse
0.571
Neigiama
89
68
teigiamą
10
10
TNM stadija
0,002
І
3
12
II
37
35
III
50
21
IV
9
10
kraujagyslių invazija
0,742
Neigiama
38
31
teigiamą
58
43
neįrašomas * pervežimas 3
4
diferencijavimas **
0,472
Na
2
Vidutiniškai + Prastai
82
66
Kiti tipai
4 13
6
Nenustatyta
2
2
* duomenų neišsami.
** tikslus Fišerio testas.
2 lentelė daugiamatė analizė prognozinių veiksnių bendram išgyvenamumui skrandžio vėžio pacientų
Variacijos
P
÷
PI (95%)
Lytis
0.671
1,106
0.694-1.765
Vyras prieš moteris pervežimas amžius
0,179
1,148
0,938-1,405
< 50
50-59
60-69
> = 70

navikas location
0.545
0,864
0,538-1,387
Cardia vs
Ne Cardia
diferencijavimas 0,301
0,751
0.437- 1,292
Na, lyginant su vidutiniškai + prastai
limfmazgių metastazių
0,006
1,841
1,196-2,835
N0 + N1, palyginti su n2 + n3
Gylis naviko invazijos
0.1
1,756
0,897-3,435
T1 + T2, palyginti su T3 + T4
metastazių kepenyse
0
3,461
2,002-5,983
Neigiama palyginti Teigiamas
kraujagyslių invazija
0,107
1,452
0,922-2,285
Neigiama palyginti teigiamą
S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius
0,046
0,643
0,417-0,991
< 200 palyginti > = 200
RR: santykinė rizika; PI:. Pasikliautinasis intervalas
Sąvoka statusą S100A8 ir S100A8 /A9 heterodimerą skrandžio vėžio audinių ir gastritas audiniai
Lėtinis gastritas yra lėtinė skrandžio pažeidimas, patologiškai būdingas nespecifinis lėtinis uždegimas skrandžio gleivinę. Uždegiminis ląstelės lėtiniu gastritu, yra morfologiškai kaip tie infiltrating pirminis navikas audinius. Kai kuriais atvejais, lėtinis gastritas net gali sukelti skrandžio vėžio. Be to, mes toliau nagrinėjo S100A8, artimo šeimos nario S100A9 ir heterodimerization forma S100A8 /A9 abiejų skrandžio vėžio audiniuose bei gretimų ne vėžinių lėtiniu gastritu audinių skrandžio vėžiu egzempliorių atliekant imunohistocheminis išraiška. Panašiai į S100A9 modelį, S100A8 buvo išreikštas tik uždegiminių ląstelių patekę abu navikų audiniuose ir gretimų gastritas audinius. . S100A8 nebuvo išreikšta visų skrandžio vėžio ląsteles ir normalus skrandžio gleivinės
Pirmyn, mes kiekybiškai įvertino S100A8 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičių kiekvienoje naviko audinyje, kaip aprašyta anksčiau už S100A9 (papildomas failą 1: S1 paveiksle). Keista, S100A8 ląstelių skaičius skrandžio vėžio audiniuose nebuvo koreliuoja su dauguma klinikos ypatybių (Papildoma failų 2: Lentelė S1) arba pacientų išgyvenamumo (Papildoma failą 3: S2 pav). Be to, išraiška heterodimerization forma S100A8 /A9 nebuvo aptikta jokių uždegiminių ląstelių infiltrating skrandžio vėžio audiniuose, o kai S100A8 /A9 teigiami ląstelės buvo identifikuoti lėtiniu gastritu audinių (duomenys neparodyti). Šie duomenys rodo, kad S100A9, S100A8 ir S100A8 /A9 paskirstymas gali skirtis žmogaus skrandžio vėžio ir lėtiniu gastritu audiniuose.
Norėdami patvirtinti šią hipotezę, mes toliau nagrinėjo pavienių ląstelių tyri- mas lokalizacijos modelio S100A9, S100A8 ir S100A8 /A9 heterodimero išraiška atliekant immunofluorecence dažymo ir audinių microarray įskaitant 23 atvejų skrandžio vėžio ir 57 atvejų lėtinis gastritas. Skrandžio vėžio audiniuose, tiek S100A9 ir S100A8 baltymai buvo aptikta vėžinių infiltruojanti uždegiminių ląstelių (pav 3A, B), o ne S100A8 /A9 heterodimero buvo rasta visus atvejus (3G pav). Išraiška S100A8 ir S100A9 dalies sutapo citoplazmoje ląstelių (pav 3D, E). Be to, S100A9 ir S100A8 baltymai buvo aptikta uždegiminių ląstelių lėtinės gastritas (pav 3K, L). Pasiskirstymas šių dviejų baltymų, taip pat iš dalies sutapo (3N figūra, O). Suderinamas su imunohistocheminiu rezultatus, S100A8 /A9 nebuvo išreikšta jokių skrandžio vėžio audiniuose (3G paveikslas) ląstelių, o išraiška S100A8 /A9 dalies sutapo su S100A9 uždegiminių ląstelių gastritas audinių (pav 3Q, S, T) , Nenuostabu, išraiška ir pasiskirstymas S100A8 /A9 lėtinio apendicito audinių, paūmėjimo (teigiamos kontrolės) buvo daug tiek tiems, lėtiniu gastritu audinių (pav 3U, V, X, Y). Kartu, diferencialas išraiška ir pavienių ląstelių tyri- mas lokalizacija S100A9, S100A8 ir S100A8 /A9 įvairiuose audiniuose gali įpainioti savo skirtingus vaidmenis skrandžio vėžio ar lėtiniu gastritu aplinkoje. 3 pav IMUNOFLUORESCENCIJOS vaizdai S100A9, S100A8 ir S100A8 /A9 baltymų audinių microarray skaidres, kurių sudėtyje yra skrandžio vėžys audinių (A-J) ir lėtiniu gastritu audinių (K-T) ir lėtinių apendicito audinius paūmėjimo (U Y). S100A9 ir S100A8 buvo aptikta monokloninis antikūnas, prelabeled su Zenon Alexa Fluor Pelės IgG Žymėjimas Kit (su žalia ir raudona fluorescencija atitinkamai). Branduolys buvo susitepę DAPI. S100A8 /A9 heterodimerus buvo aptinkamas naudojant dimeras specifinius antikūnus 27E10 iš PTP Biomedicals prelabeled su žalia fluorescencija. Bendro lokalizacija S100A9 ir S100A8 ar S100A8 /A9 buvo parodė sujungtų nuotraukų (D, I, N, S x) ir didesnių sujungtų nuotraukų (R, J, O, T, y). Balta rodyklė 3 T rodo bendrą lokalizacijos S100A9 ir S100A8 /A9 lėtinis gastritas. Juostos ilgis, 50 mkm.
Slopinančio poveikio, kad S100A9 rekombinantinio baltymo migracijos ir invazijos į skrandžio vėžio ląstelių linijų in vitro Viesbutis The S100A9 baltymų yra išreikštos ir išskiriami uždegiminių ląstelių, tarnauja kaip ūminis tarpininko ir lėtinis uždegimas. Kadangi S100A9 teigiamas uždegiminių ląstelių skaičius koreliuoja su mažiau agresyvių klinikos ypatybes, mes toliau išbandė tiesiogiai slopina funkciją rekombinantinio S100A9 ant migracijos ir invazijos į skrandžio vėžio ląsteles. Įvertinti invazinių gebėjimą skrandžio vėžio ląsteles, buvo naudojamas transwell tyrimai. Du skrandžio vėžys ląstelių linijos, AGS ir BGC-823, buvo gydomi vidutinio arba vidutinio serumo neturinti, kurių sudėtyje yra skirtingų koncentracijų S100A9 rekombinantinio baltymo (10, 20, 50 ir 100 ng /ml, atitinkamai). Invazinės ląstelės buvo skaičiuojami devynių atsitiktinai atrinktų mikroskopinių laukų (200 ×). Rezultatai parodė, kad S100A9 rekombinantinis baltymas šiek tiek slopinamas AGS ląstelių invazija (4a paveikslas), o S100A9 žymiai slopinamas BGC-823 invazija nuo koncentracijos priklausomu būdu (P
< 0,05, 4C pav). Analizuoti migruoti gebėjimą skrandžio vėžio ląsteles, mes atliko žaizdų gijimą tyrimą. Abi ląstelių linijos buvo gydomi vidutinio arba vidutinio serumo neturinti, kurioje yra 100 ng /ml S100A9 rekombinantinį baltymą,. Rezultatai parodė, kad S100A9 šiek tiek slopino AGS ląstelių migracija (4B pav), o ląstelių migracijos atstumai BGC-823 ląstelių gydomiems S100A9 po 24 h ir 48 h inkubacijos buvo gerokai mažesnės nei kontrolės (p pervežimas < 0,05, 4D pav.) 4 pav poveikis S100A9 rekombinantinio baltymo apie invaziją ir migracijos skrandžio vėžio ląstelių linijas. Į transwell tyrime, AGS (A) ir BGC-823 (C) ląstelės buvo gydomi vidutinio arba vidutinio serumo neturinti, kurių sudėtyje yra 10, 20, 50 arba 100 ng /ml S100A9 rekombinantinį baltymą,. Invazinės ląstelės buvo skaičiuojami atsitiktinai devynių pasirinktų mikroskopinių laukų (200 ×). Žaizdų gijimo tyrime, AGS (B) ir BGC-823 (D) ląstelės buvo gydomi serumo neturinti RPMI-1640 vidutinio arba terpę, turinčią 100 ng /ml S100A9 rekombinantinį baltymą,. Nuotraukos buvo perimta 0 h, 24 h ir 48 h po sužeidė iki apverstą fazinio kontrasto mikroskopu. Buvo atlikti trys nepriklausomi eksperimentai. Rezultatai buvo pristatyti kaip reiškia ± Š.D. Šių nepriklausomų eksperimentų. P
ar vertės vs
kontrolinės grupės.
Diskusijos
žmogaus vėžys yra lėtinė liga, kuri kilusi iš transformuotų ląstelių padermių genetinė taip pat epigenetinių pokyčių. Tačiau, vėžys sudaro ne tik vėžinių ląstelių. Vėžys audinių yra ir kitų tipų ląstelių, įskaitant fibroblastų ir epitelinių ląstelių, imuninių ląstelių ir ląstelių, sudarančių kraujagysles ir limfos kraujagyslių [27]. Šiame komplekse naviko mikroaplinkos, uždegimo mediatoriai reguliuoti skirtingus etapus auglių vystymuisi, įskaitant inicijavimo, reklamos, invazijos ir metastazių [28].
S100A9, daug S100 šeimos nario, gausu granulocitų, monocitų ir aktyvuojant keratinocitų per įvairių uždegimo sąlygos. Šiame tyrime mes nustatėme, kad S100A9 buvo specialiai įsikūręs uždegiminių ląstelių infiltrating skrandžio vėžys audinius ir lėtiniu gastritu audinius, o visi skrandžio vėžio ląstelių ar gretimų ląstelių skrandžio gleivinės neišreiškė S100A9. Mūsų rezultatai sutinku su ankstesni tyrimai rodo aukštą raišką S100A9 į infiltrating imunines ląsteles įvairiuose vėžio tipų, įskaitant gaubtinės žarnos vėžio [21] ir kasos vėžio [29]. Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Identifikavimas DNR metilinimas pokyčius, susijusius su žmogaus skrandžio cancer
• Apibūdinimas žmogaus skrandžio karcinoma susijusių metilinimo 9 miR CpG salų ir represijų jų išraiškos in vitro ir in vivo