Izraz RON receptorja tirozin kinaze in njegova povezava z želodčnega raka v primerjavi z običajnim želodca tissues

izražanju RON receptorja tirozin kinaze in njene zveze z želodčnim rakom v primerjavi z običajnimi želodčnega tkiva
Abstract
Ozadje
Recepteur d'origine NANTAIS (RON) je receptor tirozin kinaze, ki se ga aktivira, makrofagov stimuliranje proteina (PPN) rastnega faktorja-serumu pridobljena in se izraža v številnih malignih tumorjih. Namen raziskave je bil, da razkrije profila protein izraz RON in njen odnos z clinicopathological značilnosti želodčnega raka in prognozo.
Metode
želodčnega karcinoma tkivo od 98 bolnikov, skupaj z 29 osebkov Paraneoplastični tkiva in 10 primerki normalno želodčne sluznice, so bile pregledane s imunohistokemijo (IHC). Western blot analizo 19 vzorcev želodčnega karcinoma tkiva in ustreza Paraneoplastični tkiva, 8 osebkov normalno želodčne sluznice in 2 osebkov normalnih vzorcev bezgavk zaznali tudi izražanje spoja različico RON, RONΔ165. Vse vzorce dobljene v spremstvu pacientov spremljanja podatkov, ki so znašale od 3 do 89 mesecev (mediana časa: 22 mesecev).
Rezultati
je delež pozitivnih RON izražanja bistveno razlikovale med želodca karcinomom tkiva [56,1%, ( 55/98)] in paraneoplastični tkiva [25,6% (8/29)] (p = 0,007). V nasprotju s tem pa je bila RON izraz odsoten v normalnih želodčne sluznice vzorcih. RON izraz v pozitivni korelaciji z invazivno globino tumorja (p = 0,019), perigastric bezgavk (p = 0,019), in stopnjo TNM (p = 0,001). Vendar pa je bil RON izraz neodvisna vzorca rasti tumorja v skladu z merili Bormann (p = 0,209), histopatološko stopnjo (p = 0.196) in pojavnost oddaljene metastaze (p = 0,400). RON izraz ni bil povezan s stopnjo preživetja bolnika (p = 0,1-95). RONΔ165 je močno izražena s svežim želodčnega karcinoma tkiva, ki ustreza Paraneoplastični tkivo in perigastric bezgavke z metastatskega raka. V nasprotju s tem, izraz RONΔ165 niso opazili pri normalni želodčne sluznice in normalnih vzorcev bezgavk tkiva.
Zaključek
RON izražanja pomembna želodčnega karcinoma tkiva in ustreza Paraneoplastični tkivo, vendar ni izražena v normalnem želodčne sluznice. Izraz RONΔ165 bil podobno opazili želodčnega karcinoma tkiva in so prisotni v bezgavkah tkivih metastaz. Smo hipotezo, da RON in njegov spoj varianta igrajo pomembno vlogo pri nastanku, napredovanju in metastaze raka želodca, zato je lahko uporabno marker za oceno biološke aktivnosti za raka želodca.
Ozadje
obolevnost iz želodca karcinom povečuje vsako leto, medtem starost nastopa zmanjšuje. Na Kitajskem, karcinom želodca je vrh maligni tumor v obeh kategorijah obolevnosti in umrljivosti [1]. Recepteur d'origine NANTAIS (RON) je receptor tirozin kinaze (RTK), ki pripada MET proto-onkogena družino. Nedavne študije na RON modela knockout miške kaže, da je popolna okvara gena RON zarodka smrtonosno [2], ki dokazuje, da je RON bistvenega pomena razvoja zarodka. RON se ga aktivira, makrofagov spodbujanje beljakovin (MSP), rastni faktor-seruma izvira, in študije so pokazale, da je RON izražena v številnih malignih tumorjih in igra pomembno vlogo pri nastanku in napredovanju.
Zhou et al. [3] je pokazala, da je RON močno izražen v kolorektalnih karcinomov, in so identificirali tri Spajanje različic RON (RONΔ160, RONΔ165 in RONΔ155). Izraz RON in njenih variant je bila povezana z napredovanjem kolorektalnega raka. Druge študije so pokazale, da lahko izraz RON in njenih spojenih variant obori tvorbo celične kolonije debelega črevesa epitelija in povečati njihovo preživetje. Ko so izraz RON in njenih spojenih variant tarča siRNA v danke sevov tumorskih celic, so širjenje in metatasis močno zaviral, sočasno s povečano apoptozo. Na podlagi teh podatkov, RON in njegove spojnice variante so predpostavili, da imajo pomembno vlogo pri nastanku, napredovanju in metastaze raka danke [4]. Podobno je pokazala povečano študije RON izražanja v obeh dojk in rak mehurja tkiv ravni RON izražanja in primerjalno z histološke [5, 6].
Kolikor nam je znano, je vloga RON pri raku želodca je bilo raziskano le z Collesi et al [7]. V tej študiji je spoj varianta RON, RONΔ165, je bila odkrita v želodčni karcinom celic seva, KATO-III. RONΔ165 bilo dokazano, da izboljša vdor želodčnih rakavih celic, kar kaže na vlogo pri spoja varianti RON v maligne transformacije želodčnih celic na karcinoma. V tej študiji proučujemo izražanje RON v želodčni karcinom tkivu 98 bolnikov metodi Envision imunohistokemija (IHK). Preučiti izraz RONΔ165, smo izvedli Western blot svežega karcinom želodca tkiva. Bolniki, vključeni v naši raziskavi smo spremljali med 3 in 89 mesecev po operaciji, da razišče združenje RON izražanja, vključno s spoja variante, na clinicopathological značilnosti želodčnega raka in prognozo. Zaradi kompleksne patogenezi raka želodca, je terapevtska učinkovitost ni izkazalo za zelo učinkovito. Zato je pomembno, da se razišče patogenezo želodčnega raka bi našli nove terapevtske cilje.
Metode
vzorcih pacientov
parafin vgrajeni vzorcev tkiv od 98 bolnikov, ki so bili operirani za patološko potrdili raka želodca v prvem odvisnimi bolnišnici College of Medicine Zhejiang University med letoma 1998 in 2003 so bili pridobljeni. Želodčne vzorci so bili uporabljeni s soglasjem bolnikov in dovoljenjem za etiko v bolnišnicah. Sedemdeset moških in 28 žensk, starih od 21 do 76 let (povprečna starost 58 let), so bili vključeni v to študijo. diagnoza bolnikov je sestavljalo 78 primerov sinus ventriculi karcinoma, 16 primerov raka želodca Cardia in 4 primere skupnega raka želodca. Post-kirurški patološka poročila diagnosticirali 2 dobro diferenciranega adenokarcinomov, 21 zmerno diferencirane adenokarcinomov, 69 slabo diferencirane adenokarcinomov, 1 karcinom pečat obroč, 2 mucinozni adenokarcinomi in 3 huda displazija s cancerization. Po UICCTNM (1998), je bila določena histološka ocena vzorcev vključuje 26 primerih faze I, 14 primerih faze II, 30 primerih faze III, in 28 stopnjo IV primerih. Stopnja spremljanje naših bolnikov je bila 92%, pri 8 bolnikih, ki niso na voljo za dokončanje spremljanje. Obdobje nadaljevanje je bila med 3 in 89 mesecev (mediana časa 22 mesecev) po operaciji. Deset vzorcev normalnega želodčne sluznice so bili pregledani, kot kontrole. Devetnajst vzorcev svežega želodčnega karcinoma tkiva, paraneoplastični tkiva in pozitivno perigastric bezgavk tkiva so bili zbrani za Western blot analizo. Deset vzorcev normalnega želodčne sluznice so bili vključeni tudi nadzor.
Imunohistokemija
Parafinski vzorci so bili prerezana v 4 mikrometrov debele rezine, ki so deparaffinized, težki in inkubiranih 20 minut pri 0,3% H 2O 2 da inhibira endogenega peroksidaze aktivnost. Za pridobivanje antigenov smo vzorce inkubiramo z 0,1 M citratnem pufru (pH 6,0) in segrevamo v lonec za 8 minut. Po izpiranju v TBS, so drsi inkubirali s 3% normalne osla serum (NDS) v TBS 20 minut za preprečevanje nespecifične vezave prvega protitelesa. Anti-RON zajec monoklonsko protitelo Rona β (C-20) (Santa Cruz Biotechnologies, ZDA) smo uporabili na 1: 400. Predstavljajte si kit (DAKO) je bila uporabljena v skladu z navodili proizvajalca, in vezana protitelesa smo zaznali uporabo DAB. Vzorce smo tudi sodelovali obarvali s hematoksilinom. Vzorce smo opazili pod svetlobnim mikroskopom in PBS samo obarvanje vzorec je bil uporabljen kot kontroli ozadja.
Ocenjevalnih meril za odkrivanje RON s imunohistokemijo
presoji razreda obarvanje je bila določena z uporabo slepo postopek ocenjevanja, ki jih izkušeni patologi. High-power polja (400 ×), ki uporabljajo standardne svetlobne mikroskopije smo razdelili na deset delov, ki so bili naključno golov. Tumorske celice z levkocitnega delcev v intracytoplasm smo ocenili kot pozitivne, in je bil posnet odstotek pozitivnih tumorskih celic in intenzivnost barvanja za vsak vzorec. Tumorske celice, ki ne obarva RON ekspresijo smo ocenili kot negativna, celice, ki šibko obarvanih bilo doseženih kot 1, zmerno obarvanje je dosegel z 2, in so bili dosegel močno obarvajo vzorci kot 3. Od pozitivne tumorske celice odkrite, < 5% so bili negativni, med 5 in 24% jih je dosegel 1, 25-49% pa je bilo doseženih z 2 as, in > 50% jih je dosegel s 3. Kumulativni rezultat tumorskih celic, opredeljenih v vzorcu je končni rezultat vzorcu je. Temelji na končni rezultat, je tumorsko tkivo ugotovljeno, da je negativna (ocena od 0-2), ali je pozitiven (ocena od 3-6) za RON izražanja.
Beljakovin imuno
Petdeset mikrogramov skupnih beljakovin za vsak vzorec smo ločili z elektroforezo na 10% poliakrilamidni gel in prenesli na PVDF membrano (Millipore). Odkrivanje RON beljakovin je bila izvedena z anti-RON zajec monoklonska protitelesa Ron ß (C-20) (Santa Cruz Biotehnologija, ZDA) (1: 400). Protitelesa vezavo smo vizualizirali s pomočjo protiteles anti-zajec konjugiran na hrenovo peroksidazo in pospešenega kemiluminescenco komplet (ECL) (Biological Industries, Inc. Izrael). β-aktina smo uporabili kot kontrolo obremenitve.
Statistična analiza
je SPSS 13.0 statistične programske opreme za identifikacijo statistične pomembnosti naših podatkov z uporabo štirikrat tabele ali R × tabeli C χ 2 testa. Krivulji preživetja so bili ocenjeni po metodi Kaplan-Meier in primerjave stopenj preživetja so bile testirane s testom za Log-rang.
Rezultati
RON izražanja v želodcu tkiva in paraneoplastični tkiva
so opazili RON beljakovine v cytolymph, vendar ne v jedrce, želodčnih celic karcinoma in običajno pojavil kot buffy granulo-barvanjem (sl. 1). Odstotek pozitivnih tumorskih celic in intenzivnost barvanja za vsak vzorec je bil posnet. Za ovrednoteni 98 pacientovi primerki je RON ekspresijo opazili pri 56,1% od želodčnega karcinoma tkiv (55/98), vendar ne v vzorcih normalnega želodčne sluznice. V karcinom želodca Paraneoplastični tkiva, ki so se zbirali od želodčne sluznice plasti 0,5 cm stran od želodca karcinomom osebkov, je RON protein opazili pri 25,6% vzorcev (8/29). Ti podatki predstavljajo statistično pomembno razliko v RON beljakovin izražanja med želodčnega karcinoma tkiva in njegova pripadajoča Paraneoplastični tkiva (χ 2 = 7,290, p = 0,007). Slika 1 Odkrivanje RON izražanja, ki ga immunhistochemistry. A, H) Odkrivanje RON v slabo diferenciran adenokarcinomom želodca vzorca. 200 x in 400 x povečavo. B, E) povečan pogled detekcijo RON v vzorcu slabo diferencirano adenokarcinomom želodca. 400 x in 200 x povečavo. C) Odkrivanje RON v vzorcu karcinoma pečat obroča celic. 400 x povečavo. D) Odkrivanje RON v vzorcu zmerno diferenciranega adenokarcinomom želodca. 400 x povečavo. F) Odkrivanje RON v vzorcu zmerno diferenciranega adenokarcinomom želodca. 200 x povečavo. G) Odkrivanje RON v vzorcu karcinoma pečat obroča celic. . 400 × povečava
RON beljakovin izraz glede na patologijo želodčnega raka
RON beljakovin izražanja ni bilo ugotovljeno, da je povezana s spolom, starostjo ali obolelo območje (p
> 0,05). Vendar pa v želodčnih karcinoma tkivih, globlje karcinom celica prepojena smo močneje RON protein izražen (p
= 0,019). RON protein izraz je bilo tudi, da se pozitivno korelira z perigastric bezgavkah metastaze in klinični fazi patologijo s statistično značilno (p
= 0,019, p
= 0,001) (tabela 1). V nasprotju s tem pa ni bilo pomembnih statističnih razlik v RON izražanja s patologijo razvrščanje, tip BORRMANN ali prisotnost metastaz. Vendar pa je bilo ugotovljeno, da je bila RON izraz močnejši v skupini BORRMANN III /IV (63,6%) kot v skupini BORRMANN I /II (53,8%), močnejši v daljni metastaz skupini (68,2%) kot v ne-daljni metastaze skupina (52,6%) in močnejši v histološko nižja diferencirani skupini (52,4%) kot v srednje in visoko diferencirane histologijo skupini (39,1%). Ni bilo pomembnih statističnih razlik na teh primerjav (p = 0,209; p = 0,400; p = 0,196), v tem zaporedju (tabela 1) .table 1 odnos RON izražanja patologijo parametri

RON
RON
Χ2
p
(+) (%)
( -)
invazivnih globina
zgodnjega raka želodca
5 (29,4)
12
pretihotapljena za mišično plast
15 (51,7)
14
7,795
p = 0,019
pretihotapljena na seroznega membrano
35 (67,3)
17
TNM Stage
Stage
14 (35,0)
26
12,245
p = 0,001
Stage
41 (70,7)
17
metastaze na bezgavke
N0
11 (37,9)
18
N1-3
44 (63,8)
25
5,535
p = 0,019
BORRMANN Grade
I /skupina II
14 (53,8)
12
III /IV skupina
35 (63,6 )
20
0,708
p = 0.400
drugi
6
11
Histologija Grade
Zmerno & močno razlikuje
9 (39,1)
14
1,577
p = 0,209
manj razlikujejo *
39 (54,2)
33
drugi **
0
3
Distant Metastasis
M0
40 (52,6)
36
1,675
p = 0,196
M1
15 (68,2)
7
* Vključuje slabo diferenciran adenokarcinoma, karcinom pečat obroč celic, mucinozni adenokarcinom; ** Huda displazija s cancerization.
RON izraz in preživetja stopnje
Za 90 bolnikov, vključenih v študijo, ki so sledili po operativno, je bilo ugotovljeno, ni pomembna statistična razlika v stopnji preživetja med bolniki z RON-pozitivnim rakom želodca vzorce primerjavi RON-negativnih želodčnih vzorcih karcinoma (sl. 2). Slika 2 Preživetje krivulja RON + primerjavi RON pacientom.
Odkrivanje RONΔ165 spoja varianto
in 19 vzorcev svežih karcinomom želodca tkiva zbirajo, skupaj z ustreznimi Paraneoplastični tkiv ter patološko potrdili perigastric bezgavke z metastatskega raka, spojni različico RON, RONΔ165, je bila izražena. V nasprotju s tem pa ni bilo opaziti izraz RON proteina v normalne želodčne sluznice ali običajne bezgavkah tkivu (sl. 3, 4). Slika 3 Western analiza blot za RON izražanja v želodčni karcinom tkivu, paraneoplastični tkiva in perigastric bezgavke. Podvojene vzorci želodčnega karcinoma tkiva (T), paraneoplastični tkiva (P), in metastatskega bezgavkah (L) tkiva smo analizirali ekspresijo RONΔ 165 (165 kDa). Normalna želodčna sluznica (N) in vzorci normalnega bezgavk (NL) tkiva smo primerjali. β-aktin (44 kDa), smo uporabili kot kontrolo nalaganja.
Slika 4 Western blot analizo RON izražanja v želodčni karcinom tkivu, paraneoplastični tkiva in normalno želodčne sluznice. Podvojene vzorci želodčnega karcinoma tkiva (T) in paraneoplastični tkiva (P) smo analizirali izražanje RONΔ165 (165 kDa) in v primerjavi z običajnimi želodčna sluznica (N) tkivnih vzorcev. Marker (M) in pozitivna kontrola (PC) (160 kDa) so bile vključene.
Razprava
in trenutne študije, bomo pokazali tako IHC in Western blot, da RON izraz ni zaznati v normalnem želodčne sluznice. Te ugotovitve so skladne z rezultati Okino et al [8]. Vendar barvanje RON v karcinomom tkiv in ustreznih Paraneoplastični tkiv po IHC pokazali veliko izraz RON glede na normalne želodca vzorcev sluznice. Western analiza blot pod pogojem, podrobnejše informacije v zvezi RON izražanja z odkrivanjem RONΔ165 v želodcu karcinomom tkivih, ki ustreza Paraneoplastični tkiva in bezgavk s karcinomom metastaz. Ti podatki kažejo, da je izražanje polne dolžine RON, kakor tudi varianto RON so izraženi med procesom maligne transformacije epitelnih celic želodca. Na podlagi teh podatkov in dela v drugih študijah o vlogi RON v tumorogenih fenotipov, smo hipotezo, da lahko RON deluje kot onkogen spodbujati nastanek, napredovanje, invazijo in metastaze raka želodca.
Prejšnje študije so pokazale, da izraz RON korelira z invazijo tumorskih celic. MAGGIORA et al [9], so poročali, da je bil RON izražen v 55% jajčnikih tkiva raka. Poleg tega, če se jajčnikov raka celična linija, ki močno izraža RON induciran z MSP, rast tumorja in invazija bistveno izboljšana. Na podlagi teh podatkov je bilo hipotezo, da ima RON vlogo pri napredovanje raka na jajčnikih. Podobno Chan et al [10] je pokazala, da izraz RON spodbuja rast in maligno transformacijo kože papilomov, in Cheng et al [6], je pokazala, da je močan izraz RON v celičnih linijah raka mehurja v korelaciji s povečano proliferacijo in inhibicijo apoptoze. Slednja študija je tudi pokazala, da je izraz RON pri karcinomu želodca v pozitivni korelaciji z invazivno globino želodca rakave celice in bezgavk in nivo izražanja bistveno povečala z višjimi kliničnih bolezni, raka želodca. Zato lahko močan izraz RON v želodčnih tkiva raka služi kot označevalec, ki označuje pretvorbo normalnih celic do maligni fenotip, ki je povezano s povečano invazijo tumorskih celic in metastaz, bi bilo povezano s slabo prognozo za dolgoročno preživetje. Bližina želodca tkiva raka na epitelno displazije rezultatov želodca v občutljivosti epitelno displazije želodca do predrakavih sprememb. Zato s poročanjem izražanje RON v Paraneoplastični tkivu, ki je bilo zbrano ~ 0,5 cm stran od želodca vzorcih karcinoma, smo zagotavljajo podatke, ki potrjujejo našo hipotezo, ki jo ima RON pomembno vlogo pri spodbujanju raka na želodcu, lahko pa služi kot označevalec pretvorba tkivih malignega fenotipa.
v prejšnjih študij, v katerih je razmerje med RON izražanja in preživetja mer, Lee et al [11] je pokazala, da so bili izpolnjeni in RON neodvisni napovedni dejavniki dolgoročnega ponovitev raka dojk, in da so vzorci pozitivni za TGO in RON izraz je imel bistveno nižjo 10-letno preživetje brez bolezni. Podobno, Cheng et al [6] poroča nižjo stopnjo preživetja mehurja raka pozitivne tako za TGO in RON. V nasprotju s tem pa smo ugotovili, da je bila stopnja preživetja bolnikov pozitivnih za RON izražanja ne sme biti nižja od stopnje preživetja za skupini RON-negativnih bolnikov. Možno je, da se je stopnja preživetja bolnikov z rakom želodca lahko vpliva veliko dejavnikov, in naš nadaljnji podatki niso bili zadostni, da zagotovi dodaten vpogled v katerem bi lahko dejavniki pomembno.
Zaključek
rezultate tega študija kažejo, da je RON izražena pri raku želodca, vendar ne v normalnem želodčne sluznice. Poleg tega se stopnja izraz RON raka želodca pozitivno korelira z invazivno globino, klinična patološko fazi in obsega bezgavkah metastaze. Predpostavljamo, da ima RON pomembno vlogo pri nastanku, napredovanju, invazijo, in metastaz raka želodca, zato bi lahko bil pomemben označevalec pri ocenjevanju biološke lastnosti raka želodca. Rezultati naše študije zagotavljajo temelj, iz katerega nadalje opredeliti mehanističnih podrobnosti o vlogi RON raka želodca, da bi ugotovili RON kot terapevtski cilj pri raku želodca.
Izjave
Zahvala
to delo je financirala Znanstvenoraziskovalnega podeljevanju urada za zdravje province Zhejiang (št 491010-W10380) (št 2006B039) in naravoslovni Foundation province Zhejiang, Kitajska (št Y2080168).
Avtorji "prvotna predložiti datoteke za slike
Spodaj so povezave do originalnih predloženih spisov avtorjev za slike. "Izvirno datoteko na sliki 1 12885_2008_1291_MOESM2_ESM.jpeg avtorjev 12885_2008_1291_MOESM1_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki Slika 2 12885_2008_1291_MOESM3_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki Slika 3 12885_2008_1291_MOESM4_ESM.jpeg avtorjev prvotni datoteki številka 4 nasprotujočimi si interesi
Avtorji izjavljajo, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Laparoskopsko nastavljiv odvisnih Roux-en-Y želodčni bypass kot glavni postopek za super-super-debelih (indeks telesne mase > 60 kg /m2)
• Povečano tveganje adenokarcinomom želodca po zdravljenju primarne želodca difuzni velikocelični B limfom