Kifejezése a RON receptor tirozin-kináz és kapcsolata gyomorrák versus normál gyomor tissues

kifejeződése RON receptor tirozin-kináz és kapcsolata gyomorrák versus normál gyomor szövetek katalógusa Abstract Background katalógusa katalógusa Récepteur d'origine Nantais (RON) egy receptor tirozin-kináz, amely aktiválja a szérumból származó, makrofág stimuláló fehérje (MSP) a növekedési faktor és expresszálódik számos rosszindulatú daganatok. A célja az volt, hogy felfedje a fehérje expressziós profiljának RON és kapcsolata a klinikopatológiai jellemzők a gyomorrák és a prognózist. Katalógusa módszerek
gyomorrák szövetet 98 beteg, valamint 29 példányai paraneoplastic szövetek és 10 példányai normál gyomornyálkahártya, vizsgáltuk immunhisztokémiai (IHC). Western-blot analízis a 19 minta a gyomorrák szövet és a megfelelő paraneoplasztikus szövet, 8 példányai normál gyomornyálkahártya, és 2 példányai normál nyirokcsomó minták is kimutatható kifejezése egy splice variáns RON, RONΔ165. Minden mintát kapott kísérte beteg követési adatokat, hogy mozgott 3-89 hónapig (medián időtartam: 22 hónap). Katalógusa Eredmények katalógusa aránya pozitív RON kifejezés jelentősen különbözött gyomorrák szövetek [56,1%, ( 55/98)] és a paraneoplasztikus szövetekben [25,6%, (8/29)] (p = 0,007). Ezzel szemben, a RON expresszió volt jelen a normális gyomornyálkahártya mintákban. RON expressziós pozitívan korrelált az invazív mélysége a tumor (p = 0,019), a perigastricus nyirokcsomóáttét (p = 0,019), és TNM-beosztása (p = 0,001). Azonban RON kifejezése független volt a tumor növekedési minta szerint Bormann kritériumokat (p = 0,209), kórszövettani grade (p = 0,196), és előfordulása távoli áttét (p = 0,400). RON kifejezés nem állt összefüggésben a beteg túlélési arány (p = 0,195). RONΔ165 erősen kifejezett friss gyomorrák szövetek megfelelő paraneoplastic szövet, és perigastricus nyirokcsomók metasztatikus. Ezzel szemben, a kifejezése RONΔ165 nem volt megfigyelhető normális gyomornyálkahártya és a normál nyirokcsomó szöveti mintákat.
Következtetés
RON kifejeződés azért fontos gyomor karcinóma szövet és a megfelelő paraneoplasztikus szövet, de nem expresszálódik normális gyomor nyálkahártyáját. Expression of RONΔ165 hasonlóképpen megfigyelhető gyomorkarcinóma szövetekben és a metasztázisok jelen nyirokcsomó szövetekben. Feltételezzük, hogy RON és annak splice variáns fontos szerepet játszanak a előfordulás, progresszió és metasztázis a gyomor karcinóma, és ezért jelentenek hasznos marker, hogy értékeljék a biológiai aktivitás a gyomor karcinóma.
Alapon
morbiditás gyomor- carcinoma évről évre növekszik, míg az életkorban alakul csökken. Kínában, a gyomor karcinóma a felső rosszindulatú daganat mindkét kategóriában a morbiditás és mortalitás [1]. Récepteur d'origine Nantais (RON) egy receptor tirozin-kináz (RTK), amely tartozik a MET proto-onkogén család. A legújabb tanulmányok a RON knockout egér modell azt mutatja, hogy a teljes zavar a RON gén embrionális letális [2], amely bizonyítja, hogy RON elengedhetetlen embrionális fejlődés. RON aktiválódik egy szérumból származó, makrofág stimuláló fehérje (MSP) növekedési faktor, és a tanulmányok kimutatták, hogy a RON expresszálódik számos rosszindulatú daganatok és szerepet játszik azok előfordulása és progresszióját.
Zhou et al. [3] megállapította, hogy RON erősen kifejezett kolorektális karcinóma, és azonosították a három splicing variánsok RON (RONΔ160, RONΔ165 és RONΔ155). A kifejezés a RON és annak változatait járt a progresszió a colorectalis carcinoma. Más vizsgálatok kimutatták, hogy a kifejezés a RON és az érési variánsainak kicsapódhat vastagbél epiteliális sejtek kolónia képződését, és növeli az állatok életképességét. Amikor kifejezése RON és splice variánsok célzott siRNS rektális tumorsejt törzsek terjedése és metatasis szignifikáns mértékben gátolta, együttjáró fokozott apoptózist. Ezen adatok alapján, a RON és splice variánsokat feltételeztük, hogy fontos szerepe van a előfordulás, progresszió és metasztázis rektális rák [4]. Hasonlóképpen, tanulmányok RON kifejezés mind az emlő- és a húgyhólyag rákos szövet megmutatta megnövekedett RON kifejezés és a korrelációt a szövettani grade [5, 6].
Tudomásunk szerepének RON gyomorrákban csak vizsgálták által Collesi és munkatársai [7]. Ebben a vizsgálatban a splice-változata, RON, RONΔ165, kimutatható volt a gyomor karcinóma sejtvonal, KATO-III. RONΔ165 kimutatták, hogy fokozza az invázió gyomor rákos sejtek, jelezve a szerepet a splice variáns RON a malignus transzformáció a gyomor sejtek egy carcinoma. Ebben a vizsgálatban azt vizsgáljuk, a kifejezés a RON, a gyomor karcinóma szöveteiben 98 beteg a Envision immunhisztokémiai (IHC) módszer. Annak vizsgálata expressziójának RONΔ165, Western-blot friss gyomorrák szövet végeztünk. A bevont betegek vizsgálatunk követtük 3 és 89 hónapos műtét utáni vizsgálatára az egyesület RON kifejezés, beleértve a splice variáns, a klinikopatológiai jellemzők a gyomorrák és a prognózis. Mivel a komplex patogenezisében gyomor karcinóma, a terápiás hatásosság nem bizonyított, hogy nagyon hatékony. Így fontos, hogy vizsgálja meg a patogenezisében gyomorrák, hogy új terápiás célpontokat. Katalógusa Módszerek
betegmintát katalógusa paraffinba ágyazott szövetminta 98 ​​átesett betegek műtét kórosan megerősítette gyomorrák az Első Kapcsolt Kórház a College of Medicine Zhejiang Egyetem 1998 és 2003 között kaptuk. A gyomor mintákat hozzájárulásával használhatók fel a betegek és engedélyt az etikai bizottság a kórházak. Hetven férfi és 28 nő, koruk 21-76 év (medián életkor 58 év), vontak be a vizsgálatba. A beteg diagnózisa tartalmazza 78 esetben sinus ventriculi carcinoma, 16 esetben a cardia karcinóma, és 4 esetben teljes gyomorrák. Műtét utáni kóros jelentések diagnosztizált 2 jól differenciált adenocarcinoma, 21 közepesen differenciált adenocarcinoma, 69 gyengén differenciált adenocarcinoma, 1 pecsétgyűrű sejtes carcinoma, 2 mucinosus adenocarcinoma, és 3 súlyos diszplázia a rákosodási. Szerint UICCTNM (1998), a szövettani fokozatú a minták meghatároztuk, hogy tartalmazza a 26. I. stádiumú esetekben 14 Stage II esetekben 30 szakasz III esetekben és 28 szakasz IV esetben. A nyomon követés aránya a betegek 92%, 8 betegnél nem áll rendelkezésre a teljes nyomon követés. A követési idő alatt volt 3 és 89 hónapos (medián idő 22 hónap) a műtét után. Tíz mintát normál gyomornyálkahártya vizsgáltunk kontrollként. Tizenkilenc mintát friss gyomorrák szövet, paraneoplasztikus szövet, és a pozitív perigastricus nyirokcsomók szöveti gyűjtöttünk Western blot analízissel. Tíz mintát normál gyomornyálkahártya is szerepelt kontrollként.
Immunhisztokémia
Paraffin mintákat osztva 4 um vastag szeletekre amelyeket paraffint, hidratált, és inkubáltuk 20 percig 0,3% -os H 2 O 2 gátolni az endogén peroxidáz aktivitást. Az antigén-visszanyerés, a mintákat inkubáltuk 0,1 M citrát-puffer (pH = 6,0) és fűtött egy nyomásálló tűzhely 8 percig. Öblítés után TBS, a lemezeket inkubáltuk 3% -os normál szamár-szérum (NDS) TBS-on 20 percig, hogy megakadályozzák a nem-specifikus kötődését az első ellenanyag. Anti-RON nyúl monoklonális antitest Ron β (C-20) (Santa Cruz Biotechnologies, USA) használtunk 1: 400. ENVISION kit (DAKO) alkalmaztunk a gyártó utasításai, és kötött antitesteket úgy detektáltuk alkalmazásával DAB. A mintákat is együtt hematoxilin. A mintákat figyeltek fénymikroszkóp alatt és egy PBS-sel csak festéssel a mintát használjuk, mint a háttér kontroll.
Értékelési kritériumai RON kimutatására immunhisztokémiai
értékelése évfolyam festési alkalmazásával határoztuk meg egy vak értékelési eljárást a tapasztalt patológusok. Nagy teljesítményű mezők (400 ×) a szokásos fénymikroszkóppal osztottuk tíz szakaszra, amely véletlenszerűen lőtt. Tumorsejteket buffy részecskék a intracytoplasm pontoztuk pozitívnak, és a százalékos pozitív tumorsejtek és festés intenzitása minden egyes minta feljegyeztük. A tumor sejtek, amelyek nem festi a RON expresszió pontoztuk, mint negatív, a sejteket, hogy a gyengén megfestett pontoztuk, mint 1, a mérsékelt festődést szerezte A 2, és erősen festődő mintákat pontoztuk 3. A pozitív tumorsejtek észlel, < 5% negatív volt, 5 és 24% -a szerzett, mint 1, 25-49% -a szerzett egy 2 és > 50% -a szerzett egy 3. az összesített pontszám a tumorsejtek azonosított egy mintában határozzuk meg egy minta végső pontszámot. Alapján a végeredmény, a daganatos szövet került meghatározásra, hogy a negatív (pontszám 0-2), illetve pozitív (pontszám 3-6) lej kifejezés. Katalógusa Protein immun katalógusa ötven mikrogramm teljes fehérjét az egyes mintát elektroforézissel elválasztjuk egy 10% -os poliakrilamid gélen és átvisszük PVDF membránra (Millipore). Kimutatása RON fehérje végeztünk anti-RON nyúl monoklonális antitest Ron β (C-20) (Santa Cruz Biotechnologies, USA) (1: 400). Az antitest kötődését tettük láthatóvá, egy anti-nyúl antitest konjugált torma peroxidázt és egy erősített kemilumineszcenciás reagenskészlet (ECL) (Biological Industries, Inc. Izrael). β-aktin használtunk kontrollként.
Statisztikai analízis katalógusa SPSS 13.0 statisztikai szoftver azonosítására használt statisztikai jelentőségét adataink segítségével négyszeres táblák vagy az R × C táblázat χ 2 teszt. A túlélési görbéket értékeltük a Kaplan-Meier-módszerrel és összevetése a túlélési arány vizsgálatához a Log-rank teszt. Katalógusa Eredmények katalógusa RON kifejezés a gyomor szöveti és paraneoplasticus szövetek katalógusa RON fehérje volt megfigyelhető a cytolymph, de nem a nukleoláris, a gyomor karcinóma sejteket, és jellemzően megjelent, mint egy Buffy granulo-festés (ábra. 1). A százalékos pozitív tumorsejtek és a festődés intenzitása minden egyes minta feljegyeztük. A 98 beteg minták értékeltük, RON expresszió volt megfigyelhető a 56,1%, a gyomor karcinóma szövetekben (55/98), de nem a mintákban a normális gyomor nyálkahártyáját. A gyomor karcinóma paraneoplasztikus szövet volt, amelyet a gyomor nyálkahártya-réteg 0,5 cm-re a gyomorkarcinóma példányok, RON fehérje volt megfigyelhető 25,6% A minták (8/29). Ezek az adatok jelentős statisztikai különbség a RON-fehérje expressziója között gyomor karcinóma szövetek és a hozzá kapcsolódó paraneoplasztikus szövet (χ 2 = 7.290, p = 0,007). 1. ábra kimutatása RON expresszió immunhisztokémiai. A, H) kimutatása RON egy rosszul differenciált gyomor adenokarcinóma minta. 200 × és 400 × nagyítással. B, E) Nagyított nézet RON detektálására mintát rosszul differenciált gyomor adenokarcinóma. 400 × 200 × nagyítással. C) kimutatása RON mintáján pecsétgyűrű sejtes carcinoma. 400 × nagyítással. D) kimutatása RON mintáján közepesen differenciált gyomor adenokarcinóma. 400 × nagyítással. F) kimutatása RON mintáján közepesen differenciált gyomor adenokarcinóma. 200 × nagyítással. G) kimutatása RON mintáján pecsétgyűrű sejtes carcinoma. 400 × nagyítással.
RON fehérje expressziót kapcsolatos patológiai gyomorrák katalógusa RON fehérje expresszió nem találtak összefüggést a nemmel, életkorral, vagy beteg régió (p katalógusa > 0,05). Azonban a gyomor karcinóma szövetekben, a mélyebb egy karcinóma sejt beszivárgott, az erősebben RON fehérje expresszálódott (p
= 0,019). RON fehérje expresszióját is megállapították, hogy pozitívan korrelál perigastricus nyirokcsomó-metasztázis és klinikai patológia szakaszban a statisztikai szignifikancia (p
= 0,019, p
= 0,001) (1. táblázat). Ezzel ellentétben, nem volt szignifikáns statisztikai különbségek RON kifejezés a patológiai osztályozás, Borrmann típus, vagy a metasztázisok jelenlétével. Azonban azt figyeltük meg, hogy Ron expresszió erősebb volt a Borrmann III /IV csoport (63,6%), mint a Borrmann I /II csoportban (53,8%), erősebb, míg a távoli áttét csoport (68,2%), mint a nem-távoli áttét csoport (52,6%), és erősebb a szövettanilag alsó differenciált csoport (52,4%), mint a közepesen és az erősen differenciált szövettani csoportban (39,1%). Nem volt szignifikáns statisztikai különbség az ilyen összehasonlítások (p = 0,209; p = 0,400; p = 0,196), illetve (1. táblázat) .table 1 kapcsolat RON kifejezés patológia paraméterek katalógusa katalógusa RON Matton RON Matton Χ2 Matton p Matton (+) (%) hotelben ( -) hotelben invazív Mélység katalógusa Korai gyomorrák katalógusa 5 (29.4) hotelben 12 katalógusa beszivárgott izomrétegének katalógusa 15 (51,7) hotelben 14 katalógusa 7,795 katalógusa p = 0,019 katalógusa beszivárgott savós hártya katalógusa 35 (67,3) hotelben 17 katalógusa TNM katalógusa Stage
14 (35,0) hotelben 26 katalógusa 12,245 katalógusa p = 0,001
Stage
41 (70,7) hotelben 17 katalógusa áttétek nyirokcsomókba katalógusa N0 katalógusa 11 (37,9) hotelben 18 katalógusa N1-3 katalógusa 44 (63,8) katalógusa 25
5,535 katalógusa p = 0,019 katalógusa Borrmann Grade katalógusa I /II csoport katalógusa 14 (53,8) hotelben 12 katalógusa III /IV csoport katalógusa 35 (63,6 ) hotelben 20 katalógusa 0.708 katalógusa p = 0,400 katalógusa Egyéb
6 katalógusa 11
Szövettan Grade
Közepesen & igen differenciált katalógusa 9 (39.1) hotelben 14 katalógusa 1.577 katalógusa p = 0,209 katalógusa kevésbé differenciált * katalógusa 39 (54,2) hotelben 33 katalógusa Egyéb ** katalógusa 0
3
távoli áttét katalógusa M0
40 (52,6) hotelben 36 katalógusa 1.675 katalógusa p = 0,196 katalógusa M1 katalógusa 15 (68,2) hotelben 7
* Tartalmazza rosszul differenciált adenocarcinoma, pecsétgyűrű sejtes carcinoma, mucinosus adenocarcinoma; ** Súlyos diszplázia a rákosodási.
RON kifejezés és a túlélési arányok
A 90 bevont betegek ebben a vizsgálatban, hogy követték utáni működés, nem sikerült statisztikailag jelentős különbség a túlélési arányok között találtuk betegek RON-pozitív gyomorrák minták versus RON-negatív gyomor carcinoma mintákban (ábra. 2). 2. ábra A túlélési görbét RON + versus RON-betegek.
detektálása RONΔ165 splice variáns katalógusa A 19 mintát friss gyomorrák szöveteket összegyűjtjük, valamint megfelelő paraneoplastic szöveteket, és betegesen megerősítette perigastricus nyirokcsomók metasztatikus, az illesztési variánsa RON, RONΔ165, fejeztük. Ezzel szemben nem expresszióját RON fehérje volt megfigyelhető normál gyomornyálkahártya vagy normális nyirokcsomó szövet (ábra. 3, 4). 3. ábra Western-blot analízis RON expresszió gyomorkarcinóma szövetben, paraneoplasztikus szövet, és perigastricus nyirokcsomók. Ellenmintát gyomorrák szövetbe (T), paraneoplasztikus szövet (P), és metasztatikus nyirokcsomó (L) szövetet analizáltunk kifejezésére RONΔ 165 (165 kDa). Normál gyomornyálkahártya (N) és a normál nyirokcsomó (NL) szöveti mintákat hasonlítottuk össze. β-aktin (44 kDa) használtunk terhelési kontrollként.
4. ábra Western-blot-analízis RON expresszió gyomorkarcinóma szövetben, paraneoplasztikus szövet, és a normál gyomor nyálkahártyáját. Ellenmintát gyomorrák szövetbe (T) és a paraneoplasztikus szövet (P) elemeztük expressziójához RONΔ165 (165 kDa), és összehasonlítottuk a normál gyomornyálkahártya (N) szöveti mintákon. Marker (M) és pozitív kontroll (PC) (160 kDa) vontak. Katalógusa Megbeszélés katalógusa A jelenlegi vizsgálat során, megmutatjuk mind IHC és Western blot, hogy RON kifejezés már nem mutatható ki a normális gyomor nyálkahártyáját. Ezek a megfigyelések összhangban vannak eredményei Okino munkatársai [8]. Azonban megfestése RON karcinómaszövetek és megfelelő paraneoplasticus szövetek IHC szignifikáns kifejezése RON viszonyítva a normál gyomornyálkahártya mintákban. Western blot analízis szolgáltatott pontosabb információt RON kifejezést kimutatására RONΔ165 a gyomorrák szövetekben, megfelelő paraneoplastic szövetekben és a nyirokcsomókban carcinoma áttétek. Ezek az adatok azt jelzik, hogy az expresszió a teljes hosszúságú RON, valamint egy változata RON, expresszálódnak a folyamat során a malignus transzformáció a gyomor hámsejtek. Ezen adatok alapján és a munka más tanulmányok szerepét RON tumorigenikus fenotípus, feltételezzük, hogy RON hathatnak egy onkogén, hogy támogassák az előfordulás, progresszió, invázió és metasztázis gyomorrák.
Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a kifejezése RON korrelál az invázió tumorsejteket. Maggiora munkatársai [9] számolt be, hogy RON fejeztük 55% a petefészekrák szövetekben. Továbbá, ha egy petefészekrák-sejtvonal erősen fejezi RON által indukált MSP, tumornövekedés és invázió jelentősen javul. Ezen adatok alapján, ezért feltételeztük, hogy RON szerepet játszik a progresszió petefészekrák. Hasonlóképpen, Chan és munkatársai [10] kimutatta, hogy kifejeződése RON támogatni a növekedést és a malignus átalakulás bőr papilloma, és Cheng és munkatársai [6] azt mutatta, hogy az erős expressziója RON húgyhólyag rákos sejtvonalak korrelál fokozott proliferáció és az apoptózis gátlása. Az utóbbi vizsgálat azt is kimutatták, hogy a kifejezés a RON gyomor karcinóma pozitívan korrelált a invazív mélysége a gyomor rákos sejt és nyirokcsomók metasztázis, és az expresszió szintjét jelentősen nőtt a magasabb klinikai patológiás gyomorrák. Ezért erős expressziója RON gyomorkarcinómában szövetekben szolgálhat markerként, hogy jelezze a konverzió a normál sejteknek a malignus fenotípust, ami összefüggésbe hozható a megnövekedett tumorsejt invázió és metasztázis, lenne társítva rossz prognózist a hosszú távú túlélés. A közelsége gyomorrák szövet az epithelialis dysplasia a gyomor eredményeket a fogékonyság a epithelialis dysplasia a gyomor rákmegelőző elváltozások. Ezért jelentse a kifejezés a RON paraneoplasztikus szövet volt, amelyet ~ 0,5 cm-re a gyomor karcinóma mintákat, mi adatszolgáltatás, hogy támogassa a hipotézist, hogy a RON játszik fontos szerepet játszhat a gyomorrák és szolgálhat a marker az átalakítás a szövetek rosszindulatú fenotípus.
a korábbi vizsgálat eredményeit tekintették át a kapcsolatát RON kifejezés és a túlélési arányok, Lee és munkatársai [11] megállapította, hogy a MET és a RON volt független prognosztikai tényezői a hosszú távú kiújulásának mellrák, és, hogy a minta pozitív a MET és a RON kifejezés lényegesen alacsonyabb volt, 10-éves betegségmentes túlélés aránya. Hasonlóképpen, Cheng és munkatársai [6] egy alacsonyabb túlélési arány a hólyagrák pozitív, mind a MET és RON. Ezzel szemben azt találtuk, hogy a túlélési arány a betegek pozitív RON expresszió nem volt alacsonyabb, mint a túlélési arány a RON-negatív betegcsoportban. Lehetséges, hogy a túlélési arány a betegek gyomorrák lehet számos tényező befolyásolja, és a mi nyomon követési adatok nem volt elegendő ahhoz, hogy további betekintést mely tényezők fontos lehet.
Következtetés
Ennek eredményei tanulmány azt mutatják, hogy RON van kifejezve gyomorrák, de nem a normál gyomor nyálkahártyáját. Továbbá az expressziós ráta RON gyomorkarcinómában pozitívan korrelál a invazív mélység, a klinikai patológiai stádium, és mértéke nyirokcsomó-metasztázis. Feltételezzük, hogy RON játszik fontos szerepet az előfordulása, progresszió, invázió, és metasztázis a gyomorrák, ezért lehet egy fontos marker értékelésekor biológiai viselkedését gyomorrák. A Vizsgálataink eredményei egy alapot, amelyből további azonosítására mechanisztikus részleteket a szerepe RON gyomorrákban azonosítása érdekében RON mint terápiás célpont a gyomorrák. Katalógusa nyilatkozatok katalógusa Köszönetnyilvánítás Ez a munka katalógusa által finanszírozott tudományos kutatási támogatásával az egészségügyi Hivatal Zhejiang tartomány (No. 491010-W10380) (No. 2006B039) és Természettudományi Alapítvány Zhejiang tartomány, Kína (No. Y2080168). katalógusa a szerzők eredeti benyújtott fájlok képek
alábbiakban a linkeket a szerzők eredeti beküldötteknek képeket. 12885_2008_1291_MOESM1_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájlt az 1. ábra szerinti 12885_2008_1291_MOESM2_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 2. ábrán 12885_2008_1291_MOESM3_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 3. ábra 12885_2008_1291_MOESM4_ESM.jpeg A szerzők eredeti fájl 4. ábra Érdekütközés
A szerzők kijelentik, hogy nincs versengő érdekek. katalógusa

• A laparoszkópos állítható pántos Roux-Y gyomor bypass elsődleges eljárást a szuper-szuper-elhízott (testtömeg-index > 60 kg /m2)
• Fokozott kockázata a gyomor adenokarcinóma kezelés után a primer gyomor diffúz nagy B-sejtes limfóma