Izražavanje RON receptora tirozin kinaze i njegova povezanost s želučanog karcinoma u odnosu na normalne želuca tissues

izraz RON receptora tirozin kinaze i njegove povezanosti s želučanog karcinoma u odnosu na normalne želučanog tkiva pregled apstraktne pregled Pozadina pregled Recepteur d'origine nantais (RON) je receptor tirozin kinaze koji se aktivira, makrofaga proteina koji stimulira (MSP) faktor rasta seruma izvedena i izražava se u mnogim malignih tumora. Cilj ovog istraživanja bio je otkriti ekspresije proteina profil Ron i njegov odnos s kliničkopatološkim karakteristikama želučanog karcinoma i prognozu.
Metode
želučanog tkiva karcinoma od 98 pacijenata, zajedno s 29 primjeraka paraneoplastični tkiva i 10 primjerci normalne sluznice želuca, ispitani su imunohistokemijski (IHC). Western blot analiza 19 uzoraka karcinoma želuca i tkiva odgovarajućeg paraneoplastični tkiva, 8 uzorcima normalne sluznice želuca i 2 uzorcima normalnih uzoraka limfnih čvorova i detektirati ekspresiju inačice spajanja RON, RONΔ165. Svi uzorci dobiveni su pratnji pacijenta praćenja podataka koji se kretala od 3 do 89 mjeseci (medijan vrijeme: 22 mjeseca). Pregled Rezultati
stopi od pozitivnog RON izražavanja značajno razlikovao između želučanog tkiva karcinoma [56,1%, ( 55/98)] i paraneoplastični tkiva [25,6% (8/29)] (p = 0,007). Za razliku od toga, RON izraz bio odsutan u normalnim uzorcima želučane sluznice. RON izraz pozitivno korelirana s invazivnom dubini od tumora (p = 0,019), perigastric limfni čvorovi metastaza (P = 0,019), a TNM stadij (p = 0,001). Međutim, RON izraz bio neovisan o obrasca rasta tumora prema kriterijima Bormann (p = 0,209), patohistološku razred (p = 0,196), kao i učestalost udaljenim metastazama (p = 0.400). RON izraz nije bio povezan s stopi preživljavanja pacijenta (p = 0,195). RONΔ165 je snažno izražen u svježem tkivu karcinoma želuca, što odgovara paraneoplastičnu tkiva i perigastric limfni čvorovi s metastatskim karcinomom. Nasuprot tome, ekspresija RONΔ165 nije opažena u normalnoj sluznici želuca i uzorcima normalnih tkiva limfnog čvora. Pregled Zaključak pregled RON ekspresije je značajna u karcinom želuca tkiva i odgovarajući paraneoplastičnu tkiva, ali ne izražava u normalnoj sluznici želuca. Ekspresija RONΔ165 slično zabilježeno je u želučanom tkivu karcinoma i metastaza prisutnih u tkivima limfnih čvorova. Pretpostavljamo da Ron i njegova povezana varijanta igraju važnu ulogu u nastanku, napredovanju, i metastaza želučanog karcinoma, te stoga može predstavljati koristan marker za procjenu biološke aktivnosti želučanog karcinoma.
Pozadina
pobola od želuca karcinom raste iz godine u godinu, dok je dob pojave se smanjuje. U Kini, karcinom želuca je vrh maligni tumor u obje kategorije morbiditeta i mortaliteta [1]. Recepteur d'origine nantais (RON) je receptor tirozin kinaze (RTK), koji pripada MET proto-onkogena obitelji. Nedavne studije RON nokaut mišjem modelu pokazuje da je kompletan poremećaj gena RON je embrionalna smrtonosna [2], pokazujući da RON je bitno u embrionalnom razvoju. RON se aktivira, makrofaga stimulirajući protein (MSP) faktor rasta seruma izveden i studije su pokazale da RON je izražena u mnogim malignim tumorima i ima ulogu u pojavi i napredovanja. Pregled Zhou i sur. [3] je utvrdio da RON snažno izražena u kolorektalnog karcinoma, a identificirali su tri srastanje varijante RON (RONΔ160, RONΔ165 i RONΔ155). Izraz Ron i njegovih varijanti bila je povezana s progresijom kolorektalnog karcinoma. Druge studije su pokazale da je ekspresija RON i njegove srodne inačice mogu taložiti kolona epitelnih stanica formiranje kolonije i povećati održivost. Kada ekspresija RON i njegove srodne inačice su meti siRNA rektalni sojevima tumorskih stanica, proliferacijom i metatasis značajno inhibira, istodobno s povećanom apoptoze. Na temelju tih podataka, Ron i njegove povezane inačice su pretpostavili da imaju važnu ulogu u nastanku, napredovanju, i metastaza raka rektuma. [4] Isto tako, studije RON izražavanja u obje dojke i mokraćnog mjehura tkiva raka pokazala povišene razine RON izražavanja i korelacija s histološkog stupnja [5, 6].
Prema našim saznanjima, uloga RON kod raka želuca samo je studirao po Collesi et al [7]. U ovoj studiji inačice spajanja RON, RONΔ165, otkrivena je u želučanoj stanica karcinoma soja Kato-III. RONΔ165 se pokazalo da povećavaju invaziju želučanih stanica raka, što ukazuje na ulogu ovog inačice spajanja RON u maligne transformacije stanica želuca do karcinoma. U ovom istraživanju smo ispitati ekspresiju RON u karcinom tkivu želuca od 98 pacijenata koji koriste Predvidjeti imunohistokemijski (IHH) metodu. Da bi se ispitala ekspresija RONΔ165, Western blot svježeg tkiva karcinoma želuca provedena je. Pacijenti uključeni u našem istraživanju praćeni su između 3 i 89 mjeseci poslije operacije da istraži povezanost RON izražavanja, uključujući i njegovo inačicu spajanja, do kliničkopatološkim karakteristike želučanog karcinoma i prognozu. Zbog složene patogenezi želučanog karcinoma, terapijska djelotvornost nije dokazano da se vrlo učinkovit. Dakle, važno je istražiti patogenezu želučanog karcinoma bi pronašli nove terapijske ciljeve.
Metode
pacijenta uzoraka
uklopljenog u parafin, uzorke tkiva od 98 pacijenata koji su se podvrgnuli operaciji za patološki potvrdio karcinom želuca u Prvoj SRODNE bolnici od College of medicine Zhejiang University između 1998. i 2003. godine dobiveni su. Želučani uzorci su korišteni uz suglasnost pacijenata i odobrenja Etičkog odbora u bolnicama. Sedamdeset muškaraca i 28 žena, u dobi od 21 do 76 godina (srednja dob 58 godina), uključene su u ovoj studiji. Pacijent dijagnoza uključuje 78 slučajeva sinusa ventriculi karcinoma, 16 slučajeva želuca cardia karcinoma i 4 slučaja ukupne želučanog karcinoma. Nakon operacije patološke izvješća dijagnosticiran 2 dobro diferencirane adenokarcinoma, 21 umjereno se razlikuju adenokarcinoma, 69 slabo diferencirani adenokarcinom, 1 karcinoma pečatnjak prsten stanica, 2 mucinozni adenokarcinoma, i 3 teška displazija s stvaranja raka. Prema UICCTNM (1998), histološka stupnja uzoraka utvrđena je uključiti 26 Faza I slučajeva, 14 fazu II slučajeva, 30 fazu III slučajeva, a 28 Faza IV slučajevima. Stopa follow-up za naše pacijente je 92%, a 8 bolesnika nisu dostupni za dovršetak praćenje. Follow-up razdoblje je između 3 i 89 mjeseci (medijan vremena od 22 mjeseci) nakon operacije. Deset uzoraka normalne sluznice želuca ispitani su kao kontrole. Devetnaest uzorci svježeg tkiva karcinoma želuca, paraneoplastični tkiva, te pozitivna perigastric tkivu limfnog čvora su skupljene za Western blot analizu. Deset uzorci normalne sluznice želuca su također uključene su kao kontrola. Pregled Imunohistokemija pregled Parafmski Uzorci su razdvojeni u 4 um debele kriške koje su deparafmizirani, hidrirani i inkubiraju 20 minuta u 0.3% H 2O 2 da inhibiraju aktivnost endogene peroksidaze. Za dohvat antigen, uzorci su inkubirani s 0.1 M citratnog pufera (pH 6,0), te grije u loncu za 8 min. Nakon ispiranja u TBS, slajdovi su inkubirani sa 3% normalnog magaraca seruma (NDS) u TBS-u tijekom 20 minuta kako bi se spriječilo nespecifično vezanje prvog antitijela. Anti-zečje RON monoklonsko protutijelo Ron β (C-20) (Santa Cruz Biotechnologies, USA) je korišten pri 1: 400. Predvidjeti kit (DAKO) se koristi u skladu s uputama proizvođača, te vezani antitijelo detektirano je upotrebom DAB. Uzorci su također co-obojeni hematoksilinom. Uzorci su promatrane pod svjetlosnim mikroskopom i PBS-samo bojenje uzorak je korišten kao pozadinsku kontrolu.
Kriteriji za otkrivanje RON imunohistokemijski pregled i procjenu stupnja bojenja je određen korištenjem postupka slijepa evaluacija od strane iskusnih patolozi. polja visoke snage (400 ×) upotrebom standardnih svjetlosne mikroskopije podijeljeni su u deset dijelova koji su nasumce postignutih. Tumorske stanice sa buffy čestica u intracytoplasm su označeni kao pozitivni, a bilježi se postotak pozitivnih tumorskih stanica i intenzitet bojenja za svaki uzorak. Tumorske stanice koje nisu bojanje RON ekspresije označeni kao negativne stanice koje slabo obojeni su označeni kao 1, umjereno obojenje uočeno je postignuto s 2, i snažno bojanjem uzorci su označeni kao 3. Od pozitivnih tumorskih stanica otkrivene < 5% su bili negativni, između 5 i 24% su označeni kao 1, 25-49% je zabio s 2, a > 50% se boduju sa 3. Kumulativni rezultat od tumorskih stanica identificiranih u uzorku određen konačni rezultat uzorku a. Na temelju konačni rezultat, tumorsko tkivo je određena da bude negativan (rezultat 0-2), ili pozitivan (rezultat 3-6) za RON izražavanja.
Protein imunoupijač pregled pedeset mikrograma ukupnih proteina za svaki uzorak se odvoji elektroforezom na 10% poliakrilamidnom gelu i preneseni na PVDF membranu (Millipore). Detekcija RON proteina je provedeno pomoću anti-zečji RON monoklonsko protutijelo Ron P (C-20) (Santa Cruz Biotechnologies, USA) (1: 400). Antitijelo vezanje je vizualizirana upotrebom anti-zečje antitijelo konjugirano na peroksidazu iz hrena i jedan hemiluminiscencija kita (ECL) (Biološka Industries, Inc. Izrael). β-aktin je korišten kao kontrola za punjenje.
statistička analiza pregled SPSS 13.0 statistički softver je korišten za identifikaciju statističke značajnosti naših podataka koriste se četiri puta tablice ili R redova χ 2 testa. Krivulje preživljavanja su ocijenjeni pomoću Kaplan-Meier metodi i usporedbe stope preživljavanja su ispitani pomoću log-rank testa. | Rezultati
RON izražavanja u želučanog tkiva i paraneoplastični tkiva pregled RON proteina zabilježeno je u cytolymph, ali ne u jezgra je, stanica karcinoma želuca i obično pojavljuje kao Buffy granulo bojanjem (Sl. 1). zabilježeno postotak pozitivnih tumorskih stanica, a intenzitet bojenja za svaki uzorak. Za 98 uzoraka pacijent ocjenjuje, RON ekspresija opažena je kod 56,1% tkiva karcinoma želuca (55/98), ali ne u uzorcima normalne sluznice želuca. U karcinom želuca paraneoplastični tkiva, koji je sakupljen iz želuca mukozne sloj udaljen od 0,5 cm od uzoraka karcinoma želuca, RON protein je opažena kod 25,6% uzoraka (8/29). Ovi podaci predstavljaju značajan statističku razliku u RON ekspresije proteina između karcinom želuca tkiva is njom povezanim paraneoplastični tkiva (χ 2 = 7,290, p = 0,007). Slika 1 Detekcija RON ekspresiju immunhistochemistry. A, H) Otkrivanje RON u slabo diferenciranim želučane uzorku adenokarcinom. 200 i 400 × uvećanja. B, E) uvećani prikaz detekcije RON u uzorku slabo diferencirani želučanog adenokarcinoma. 400 × i povećanje 200 puta. C) Otkrivanje RON u uzorku karcinoma stanica pečatnjak-prstena. 400 × povećanje. D) Otkrivanje RON u uzorku umjereno diferencirani želučanog adenokarcinoma. 400 × povećanje. F) Otkrivanje RON u uzorku umjereno diferencirani želučanog adenokarcinoma. 200 puta. G) Otkrivanje RON u uzorku karcinoma stanica pečatnjak-prstena. . 400 × povećanje
RON ekspresije proteina u odnosu na patologiji želučanog karcinoma
RON ekspresije proteina nije utvrđeno da je povezan sa spolom, dobi, ili bolesnog regiji (p izvoznici > 0,05). Međutim, u želučanom tkivu karcinoma, dublje stanica karcinoma infiltrirana je jače RON ekspresije proteina (p pregled = 0,019). RON ekspresija proteina također je utvrđeno da je pozitivno korelira s perigastric limfnih čvorova metastaza i kliničke patologije pozornici s statističke značajnosti (p Netlogu = 0,019, p
= 0,001) (Tablica 1). Nasuprot tome, nije bilo značajne statističke razlike u RON izraza s patologije ocjenjivanja, vrste Borrmann ili prisutnosti metastaza. Međutim, uočeno je da RON izraz bio jači u Borrmann III /IV skupine (63,6%) nego u skupini Borrmann I /II (53,8%), jači u udaljenim metastazama grupe (68,2%) nego u ne-daleka metastaze skupina (52,6%), a jači u histološki niže diferencirane skupine (52,4%) nego u umjereno i visoko diferencirani histologiju grupe (39,1%). Nije bilo značajne statističke razlike za ove usporedbe (p = 0,209; p = 0,400; p = 0,196), odnosno (tablica 1) .table jedan odnos RON izražavanja na patologiji parametri pregled pregled RON
RON
Χ2
p
(+) (%) pregled ( -) pregled Invazivne dubini pregled Rani karcinom želuca pregled 5 (29,4)
12 pregled, infiltrirali se mišićna sloja pregled 15 (51,7) pregled, 14 pregled 7,795 pregled p = 0,019 pregled infiltrirali se serozni membrane pregled 35 (67,3)
17 pregled TNM stadiju pregled Stage
14 (35,0)
26 pregled 12,245 pregled p = 0,001 pregled Stage
41 (70,7)
17 pregled, metastaze u limfne čvorove pregled N0 pregled 11 (37,9)
18 pregled N1-3 pregled 44 (63,8) pregled, 25 pregled 5,535 pregled p = 0,019 pregled Borrmann Grade pregled I /II grupa pregled 14 (53,8)
12 pregled, III /IV grupa pregled 35 (63,6 )
20 pregled 0,708 pregled p = 0,400 pregled ostalo
6 pregled 11 pregled Histologija Grade
Umjereno & visoko diferencirane pregled 9 (39,1)
14 pregled 1,577 pregled p = 0,209 pregled manje diferencirane * pregled 39 (54,2)
33 pregled ostalo ** pregled 0 pregled 3
udaljenim metastazama pregled M0
40 (52.6)
36 pregled 1.675
p = 0,196 pregled M1 pregled 15 (68,2) pregled 7
* Uključuje slabo diferencirani adenokarcinom, karcinom pečatnjak-prsten, mucinozni adenokarcinom; ** Teška displazija uz karcinogeneze.
IOB ekspresije i preživljavanje stope
Za 90 pacijenata uključenih u ove studije koji su uslijedili nakon operativno, postoji značajna statistička razlika u postotku preživljavanja je pronađena između bolesnika s RON-pozitivnim želučanog karcinoma uzorci odnosu RON negativnih uzoraka karcinoma želuca (Sl. 2). Slika 2 Krivulja preživljavanja za RON + odnosu IOB-pacijenata. pregled Otkrivanje RONΔ165 povezana varijanta Netlogu u 19 uzoraka svježeg tkiva karcinoma želuca prikupljeni, zajedno s odgovarajućim paraneoplastični tkiva, a patološki potvrdio perigastric limfni čvorovi s metastatskim karcinomom, na inačice spajanja Ron RONΔ165, izražena. Nasuprot tome, nikakve ekspresija proteina RON opažena u normalnoj sluznici želuca ili normalnom tkivu limfnog čvora (Sl. 3, 4). Slika 3 Western blot analiza od RON izražavanja u karcinom želuca tkiva, paraneoplastični tkiva, te perigastric limfnih čvorova. Ponovljene uzorci tkiva karcinoma želuca (T), paraneoplastični tkiva (P), i metastatičkog limfnih čvorova (L) tkiva su analizirani na ekspresiju RONΔ 165 (165 kDa). Normalna sluznica želuca (N) i normalni limfni čvor (NL) uzoraka tkiva uspoređeni su. β-aktin (44 kDa) je korišten kao kontrola za punjenje.
Slika 4 Western blot analizu ekspresije RON u želučanom tkivu karcinoma, paraneoplastični tkiva i normalne sluznice želuca. Ponovljene uzorci tkiva karcinoma želuca (T) i paraneoplastičnu tkiva (P) analizirani su na ekspresiju RONΔ165 (165 kDa), a u usporedbi s normalnim želučane sluznice (N) uzoraka tkiva. Marker (M) i pozitivna kontrola (PC) (160 kDa) su uključene. Pregled Rasprava
U trenutnoj studiji, pokazali smo i od strane IHC i Western blot, da RON izraz nije moguće otkriti u normalnoj sluznici želuca. Ova zapažanja su u skladu s rezultatima iz Okino et [8] al. Međutim, bojenje RON u kancerogenim tkivima i odgovarajućih paraneoplastični tkivima, IHC pokazali značajan izraz RON u odnosu na normalne uzoraka želučane sluznice. Western blot analiza dala više točne informacije u vezi RON izrazom otkrivanje RONΔ165 u želučanog tkiva karcinoma, što odgovara paraneoplastični tkiva i limfnih čvorova s ​​metastazama karcinoma. Ovi podaci pokazuju da je ekspresija full-length RON, kao i varijantu RON, izraženi u procesu maligne transformacije želučanog epitela. Na temelju tih podataka i rad u drugim studijama o ulozi RON u tumorskih fenotipova, mi pretpostavljamo da RON može djelovati kao onkogena za promicanje pojavu, napredovanje, invaziju i metastaziranje raka želuca.
Prethodne studije su pokazale da izraz RON korelira s invazije tumorskih stanica. Maggiora sur [9] izvijestio da RON izražena kod 55% jajnika tkiva raka. Nadalje, ako jajnika stanična linija koja eksprimira jako RON induced by MSP, rasta tumora i invazija je značajno poboljšana. Na temelju tih podataka, to je hipoteza da RON igra važnu ulogu u napredovanju raka jajnika. Slično tome, Chan i sur [10] pokazalo je da je ekspresija RON promovira rast i malignu transformaciju kože papiloma, Cheng et al [6] pokazalo je da jaka ekspresija RON u staničnim linijama karcinoma mokraćnog mjehura povezano s povećanim proliferacije i inhibicije apoptoze. Potonji Studija je također pokazala da je izraz RON u želučanom karcinomu pozitivno korelirana s invazivnom dubini želuca stanica raka i metastaza u limfnim čvorovima, a razina ekspresije znatno povećao s višim kliničkim patologije raka želuca. Dakle, jaka ekspresija RON u želučanim tkiva raka može služiti kao marker za označavanje pretvorbe normalnih stanica na maligni fenotip, koja je povezana s povećanim invaziju i metastaziranje tumorskih stanica, biti povezan s lošom prognozom za dugoročni opstanak. Blizina želučanom tkivu karcinoma u epitela displazija rezultata želuca u prijemljivosti epitelnog displazija trbuha prekanceroznih lezija. Dakle, prijavljivanje na ekspresiju RON u paraneoplastični tkiva, koji su prikupljeni ~ udaljena 0,5 cm od uzoraka na karcinom želuca, pružamo podatke za podršku našim hipotezu da RON igra važnu ulogu u nastanku karcinoma želuca i može služiti kao marker za pretvaranje tkiva na maligni fenotip.
u prethodnim istraživanjima u potrazi na odnos između IOB ekspresije i preživljavanja stopa, Lee i suradnici [11] su otkrili da MET i Ron su neovisni prognostički faktori za dugoročno recidiva raka dojke, i da uzoraka pozitivno na MET i Ron izraz su imali značajno niži od 10 godina bez bolesti stopu preživljavanja. Slično tome, Cheng et al [6] prijavili nižu stopu preživljavanja za rak mokraćnog mjehura pozitivne i za MET i Ron. Za razliku od toga, otkrili smo da je stopa preživljavanja bolesnika pozitivnih na RON izražavanja nije bio niži od stopa preživljavanja za RON-negativne grupe pacijenata. Moguće je da je stopa preživljavanja bolesnika s rakom želuca može utjecati mnogo faktora, a naši follow-up podataka nije bila dovoljna da bi se dodatni uvid u čimbenike moglo biti važno. Pregled Zaključak
rezultate ovog studija pokazuju da RON se izražava u karcinomu želuca, ali ne i u normalnoj sluznici želuca. Nadalje, stopa izraz RON kod raka želuca pozitivno korelira s invazivnom dubine, kliničke patološkog fazi i opsegu limfnih čvorova metastaze. Pretpostavljamo da RON igra važnu ulogu u nastanku, napredovanju, invazije i metastaziranja karcinoma želuca, i stoga bi mogla biti važan marker za procjenu biološke ponašanje karcinoma želuca. Rezultati naših istraživanja pružaju temelj s kojeg se dodatno utvrditi mehaničkog pojedinosti o ulozi RON kod raka želuca kako bi se utvrdili RON kao terapijski cilj u raka želuca. Pregled Deklaracije
Zahvale
Ovaj rad financirala je znanstvenoistraživački projekt zdravstvenog zavoda za Zhejiang Province (br 491010-W10380) (br 2006B039) i Natural Science Foundation provincije Zhejiang, Kina (br Y2080168). pregled autora na izvorni podnosi datoteke slike
Ispod su linkovi na autora originalnih dostavljenih datoteka za slike. 12885_2008_1291_MOESM1_ESM.jpeg autora izvorna datoteka za Slika 1 12885_2008_1291_MOESM2_ESM.jpeg autorskim izvorne datoteke za sliku 2 12885_2008_1291_MOESM3_ESM.jpeg autorskim izvorne datoteke na Slici 3 12885_2008_1291_MOESM4_ESM.jpeg autorskim izvorne datoteke za Slika 4 suprotstavljenih interesa
Autori izjavljuju da nema suprotstavljenih interesa. pregled

• Laparoskopska podesiva povezan Roux-en-Y želučani zaobići kao primarni postupak za super-super-debeli (indeks tjelesne mase do 60 kg /m2)
• Povećani rizik od želučanog adenokarcinoma nakon liječenja primarne želuca difuzne limfome velikih B-stanica