CD44 men ikke CD24 ekspresjon er relatert til dårlig prognose i ikke-cardia adenokarsinom i magen

CD44 men ikke CD24 uttrykk er relatert til dårlig prognose i ikke-Cardia adenokarsinom i magen
Abstract
Bakgrunn
Nyere studier har fokusert på den diagnostiske og prognostisk betydning av CD24 og CD44 uttrykk i kreft hos mennesker. Denne studien hadde som mål å utforske endringer i CD44 og CD24 uttrykk nivåer hos pasienter med magekreft og for å vurdere deres prognostiske verdier.
Metoder
CD44 og CD24 uttrykk nivåer ble undersøkt immunohistochemically i tumorprøver fra 290 pasienter med ikke-Cardia mage adenokarsinom, hvorav 77 hadde koblet sammen ved normal mageslimhinnen. CD24 og CD44 mRNA-nivåer ble bestemt ved hjelp av kvantitativ polymerasekjedereaksjon på 34 pasienter. Serum anti-Helicobacter pylori
IgG ble påvist ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay. Relasjoner mellom CD44 og CD24 protein uttrykk nivåer og kreft parametre ble analysert og deres prognostiske verdier ble evaluert av Cox-modeller
. Resultater
CD24 og CD44 uttrykk nivåer var signifikant høyere hos pasienter med magekreft sammenlignet med de i sammen kontroller (45,5% vs. 0,0%, og 61,0% vs. 0,0%, P
< 0,001). Blant 290 pasienter, den totale overlevelsen var betydelig høyere i CD44 (-) sammenlignet med CD44 (+) pasienter (log-rank test, P
= 0,035). Det var imidlertid ingen signifikant sammenheng mellom CD24 uttrykk og total overlevelse tid (log-rank test, P
= 0,115). Multivariat regresjonsanalyse indikerte at positiv CD44 uttrykk (P
= 0,029), TNM staging (P
< 0,001), og lymphovascular invasjon (P
= 0,016), men ikke CD24 uttrykk (P
= 0,065), var uavhengige prognostiske faktorer i magekreft.
Konklusjoner
Individuell uttrykk for CD44 var assosiert med dårlig overlevelse hos pasienter med magekreft.
nøkkelord
CD44 CD24 Prognose mage~~POS=TRUNC kreft~~POS=HEADCOMP Expression Helicobacter pylori
Bakgrunn
Magekreft kreft~~POS=HEADCOMP er den tredje vanligste kreftformen i Kina. Til tross for forbedringer i kirurgiske teknikker og utvikling av nye kjemoterapeutiske regimer, det var 989,600 nye tilfeller, og mer enn 738,000 dødsfall på verdensbasis i 2008. Halvparten av disse sakene og dødsfall ble anslått å skje i Kina. Prognosen for pasienter med avansert magekreft er fortsatt dårlig, selv etter kurativ kirurgi [1-3]. Selv om mange studier har undersøkt molekylære markører for magekreft, mekanismene for kreftutvikling er fortsatt uklar. Interaksjoner mellom genetiske varianter resistens, molekylære endringer og miljømessige og livsstilsfaktorer er kjent for å bidra til utvikling av magekreft. TNM staging av magekreft brukes til å bedømme prognosen, men det er foreløpig ingen god molekylær-baserte biomarkører som kan tjene som en nyttig prognostisk prediktor for avansert magekreft [4]. Både CD24 og CD44 er kjent for å bidra til å mobilsignal og celle adhesjon, og deres roller i kreftutvikling har blitt undersøkt. CD24 er et mucin-lignende celleoverflate-protein vist å være assosiert med malignitet i en rekke menneske-vevs-studier [5]. CD44 er et transmembran-glykoprotein som er involvert i cellulær adhesjon, noe som også har vist seg å være sterkt uttrykt i gastrisk adenokarsinom [6]. Sheridan et al. vist at CD44 (+) /CD24 (-) fenotype av brystcancerceller ble forbundet med invasive egenskaper og dårlig prognose [7]. Cancer stamceller (cscs) er nylig blitt identifisert i humane magecancercellelinjer i flere studier [8], og CD44 (+) CD24 (+) celler har vist seg å definere en svært tumorigen, magekreft cellepopulasjon med egenskaper selv -regeneration og multi-avstamning differensiering [9]. Weichert et al. viste at cytoplasma uttrykk for CD24 ble uavhengig korrelert med kortere overlevelse i kolorektal kreft [10]. Yong et al. nylig undersøkt CD44 /CD24 uttrykk i en retrospektiv analyse av pasienter med tilbakevendende magekreft, men fant ingen sammenheng mellom individ eller kombinert uttrykk for CD24 og CD44 og gjentakelse av magekreft [11]. Basert på disse tidligere studier, hypotese vi at CD24 og CD44 uttrykk kan være korrelert med magekreft prognose. Hensikten med denne studien var derfor å evaluere uttrykket nivåer av CD24 og CD44 i magekreft og å vurdere deres mulige prediktiv relevans for fremtidig klinisk praksis. Helicobacter pylori
infeksjon regnes som en risikofaktor for adenokarsinom i ventrikkel, og en fersk studie rapporterte at H. pylori
, via CagA, avduket CSC-lignende egenskaper i mage epitelceller [12]. Vi har derfor også undersøkt sammenhengen mellom H. pylori
infeksjon og CD24 /CD44 uttrykk.
Metoder
Deltakere, En totalt 290 pasienter (221 menn og 69 kvinner) med ikke-Cardia adenokarsinom i ventrikkel som gikk radikal operasjon (D1 + eller D2) ved det første sykehuset i Jilin-universitetet ble inkludert i denne studien mellom august 2000 og desember 2010. pasientene fikk ingen preoperativ kjemoterapi-strålebehandling. Postoperativ kjemoterapi ble administrert til alle pasienter med trinn II, III, IV og tumorer. Diagnosen magekreft ble gjort på grunnlag av morfologiske og immunhistokjemiske funn, vurderes uavhengig av to patologer (MJ og YW). Tumorprøver ble oppsamlet ved kirurgi. Histopatologiske klassifisering og grader av adenokarsinom ble definert i henhold til Laurén klassifiseringen [13] og Verdens helseorganisasjon (WHO) klassifikasjon 2010 [14]. De inkluderte papillære adenokarsinom (n = 4), rørformet adenokarsinom (n = 252), mucinous adenokarsinom (n = 27), og dårlig sammenhengende karsinomer (signet ring cellekreft) (n = 7) i henhold til WHO klassifisering 2010. I tilknytning normal gastrisk epiteliale prøver ble også samlet fra 77 pasienter for sammenligning. Pasient aldre var fra 32 til 87 år, med en median alder på 64 år. Skriftlig informert samtykke ble innhentet fra alle pasienter og studien protokollen ble godkjent av etikkomiteen av det første sykehuset i Jilin-universitetet
immunhistokjemi
Tissue blokkene ble bygget ved hjelp av en vev array (Minicore;. Alphelys Impasse Paul Langevin, Plaisir, Frankrike). Seksjoner (4 mikrometer tykke) ble kuttet, deparaffinized, og farget ved hjelp av et streptavidin-biotin immunoperoxidase teknikk. Snittene ble deretter inkubert med et anti-humant CD24 polyklonalt antistoff (1: 100 fortynnet, sc-7034, Santa Cruz, USA) og et CD44 monoklonalt antistoff (1:50 fortynnet, MA1-81995, Thermo Fisher Scientific Inc., Chicago , IL, USA), henholdsvis. 3, 3-Diaminobenzidin ble anvendt som et kromogen. Seksjoner ble kontra med hematoksylin. Objektglass ble behandlet med IgG isotyper i stedet for primære antistoffer ble anvendt som negative kontroller. De fargede objektglass ble evaluert uavhengig av to patologer (MJ og YW) som ble blindet for de kliniske data og resultater. Fargeintensitet og prosenter av celler farget ved en bestemt størrelse av intensitet ble vurdert ved hjelp av allment akseptert HScore system. Den HScore ble beregnet ved anvendelse av følgende ligning: HScore = ΣPi (i) (i = 0, 1, 2, 3, Pi = 0-100%), hvor i representerer fargeintensitet, dvs. 0 = ingen farging, 1 = svak farging, 2 = moderate flekker, og 3 = sterk farging. (Ytterligere fil 1: Fig S1) Fotografier av referanse intensiteter er vist i tilleggsdataene. Gitt at Pi representerer prosentandelen av fargede celler med intensiteter som varierer fra 0 til 100%, ble den endelige HScore varierte fra 0 til 300. Prosent positive celler tellet i minst 50 felt ved å granske minst 1000 celler under et mikroskop, ved hjelp en 40 × objektiv. Uttrykket nivåer av CD24 og CD44 ble klassifisert som negative (HScore < 30) og positive (HScore ≥ 30). Cut-off verdier for CD24 og CD44 (HScore < 30) ble endret i henhold til resultatene av tidligere studier [11, 15] Hotell Revers transkripsjon-polymerase chain reaction kvantifisering av CD24 og CD44
Expression nivåer av CD24. og CD44 mRNA ble bestemt i 34 pasienter med magekreft. I korthet, RNA ble ekstrahert fra magevevet ved hjelp av et RNA Isolation Kit (Axygen, CA, USA) i henhold til produsentens retningslinjer. Etter DNase-behandling, ble første-tråd cDNA syntetisert ved anvendelse av et cDNA-syntesesett (Roche, Basel, Switzerland). Kvantitativ polymerase kjedereaksjon av CD24 (forover primer: AAA CAA CAA CTG GAA CTT CAA GTA ACT C, reverse primer: GGT GGT GGC ATT AGT TGG ATT T) og CD44v6 (forover primer: TCC CTG CTA CCA ATA GGA ATG ATG, reverse primer : GGT CAC TGG GAT GAA GGT CC) ble utført ved hjelp av lys Cycler 480 system (Roche). Glyseraldehyd 3-fosfat dehydrogenase (GAPDH) ble kvantifisert som en endogen RNA-kontroll (forover primer: TGC ACC ACC AAC TGC TTA GC, reverse primer: GGC ATG GAC TGT GGT CAT GAG).
Fastsettelse av H. pylori
infeksjons
Blodprøver prøver~~POS=HEADCOMP ble samlet inn fra 103 pasienter for å bestemme tilstedeværelsen av H. pylori
infeksjon før operasjonen. Serum anti-H. pylori
IgG ble påvist ved hjelp av enzymbundet immunosorbent assay (Biohit, Helsinki, Finland). Kort beskrevet ble prøver med titere over cut-off-verdi på 30 EIU betraktet som positive for H. pylori-infeksjon
, som tidligere beskrevet [16].
Statistisk analyse
Den HSCOREs for CD24 og CD44 ekspresjon var presentert som median (interkvartilt område). Mann-Whitney U, Kruskal-Wallis H, og Wilcoxon signert rang tester ble brukt for å sammenligne resultater mellom gruppene. Kaplan-Meier metoden ble brukt til å beregne total overlevelsesrate, og overlevelsesforskjeller ble analysert ved bruk av log-rank tester. En Cox modellen ble brukt til å beregne relativ risiko og tilsvarende 95% konfidensintervall (CI), etter justering for alder, kjønn, lymphovascular invasjon, og TNM staging. Analyser ble utført ved hjelp av SPSS programvare 18,0 (SPSS Inc., USA). Alle statistiske tester ble tosidige og P
verdier < 0,05 ble ansett som statistisk signifikant.
Resultater
CD24 og CD44 uttrykk nivåer i magekreft
CD24 og CD44 uttrykk ble oppdaget i membranen av kreftceller i mage kreftprøver (figur 1). Svak farging for både CD24 og CD44 ble også observert i kjernen av magekreftceller. Alle negative kontroller viste ubetydelig bakgrunn farging. Blant 77 parede prøver, ble CD24 (+) og CD44 (+) fargingsresultater funnet i 35/77 (45,5%) og 47/77 (61,0%) av magekreft prøver, henholdsvis. Men de sammenkoblede normale mage epitelceller viste negative uttrykk for CD24 og CD44. mRNA ekspresjonsnivåer av både CD24 og CD44 var signifikant høyere i immunhistokjemisk positiv sammenlignet med immunhistokjemisk negative grupper. De mRNA ekspresjonsnivåer av CD24 og CD44 var i overensstemmelse med immunhistokjemi resulterer i magekreft (figur 2). Figur 1 Visualisering av CD24 og CD44 uttrykk i mage kreftceller ved immunhistokjemi. CD24 (A) og CD44 (B) farging i membranen av gastrisk karsinom celler.
Figur 2 mRNA-ekspresjonsnivåene av CD24 og CD44. Kvantifisering ved revers transkripsjon-polymerasekjedereaksjon viste at CD24 (A) og CD44 (B) nivåene var signifikant høyere i immunhistokjemisk positiv sammenlignet med immunhistokjemisk negative grupper, henholdsvis. *, P
< 0.001.
Korrelasjon mellom CD24 /CD44 uttrykk nivåer og clinicopathologic parametere
Pasienter med lymphovascular invasjonen hadde signifikant høyere forekomst av CD44 positivitet enn de uten invasjon (P
= 0,013). CD24 og CD44 uttrykk nivåer ble også analysert i henhold til alder, kjønn, tumor differensiering, dybden av invasjon, lymfeknutemetastase, og TNM stadium. Men det var ingen signifikante forskjeller i CD24 /CD44 uttrykk nivåer i forhold til disse parametrene. De kliniske karakteristikker av fagene er oppsummert i tabell 1.Table 1 CD24 og CD44 uttrykk i mage karsinom ifølge clinicopathological parametere Book CD24 positive hastighet n (%)
P-verdi
<.no> CD44 positive hastighet n (%)
P-verdi
Kjønn
Mann (n = 221)
92 (41,6)
0,148
133 (60,2)
0,835
Kvinne (n = 69)
22 (31,9)
45 (65,2)
Age (y)
≤60 (n = 127 )
48 (37,8)
0,435
85 (66,9)
0,087
> 60 (n = 163)
69 (42,3)
93 (57,0)
h.pylori
infeksjon (n = 103)
Positiv (n = 67)
24 (35,8)
0,096
48 (71,6)
0,815
Negative (n = 36)
19 (52,8)
25 (69,4)
Lauren klassifisering
Intestinal type (n = 104)
42 (40,3)
0,965
67 (64,4)
0.168
Diffuse type (n = 186)
77 (41,3)
103 (55,3)
WHO klassifisering
papillary adenokarsinom (n = 4)
1 (25,0)
0,906
4 (100,0)
0,064
Tubular adenokarsinom
Well (n = 1)
0 (0,0)
0 (0,0)
Moderat (n = 98)
30 (30,6)
49 (50,0)
Dårlig (n = 153)
47 (30,7)
87 (56,9)
mucinous adenokarsinom (n = 27)
7 (25,9)
13 (48,1)
Poorly sammenhengende karsinomer (signetring cellekreft) (n = 7)
1 (14,3)
1 (14,3)
Lymfe-vaskulær invasjon
Fraværende (n = 134)
56 (41,8)
0,642
72 (53,7)
0,013
Present (n = 156)
61 (39,1)
106 (67,9)
TNM stadium
I (n = 23)
10 (43,5)
0,844
16 (69,6)
0,559
II (n = 47)
19 (40,4)
32 (68,1)
III (n = 187)
77 (41,2)
110 (58,9)
IV (n = 33)
11 (33,3)
20 (60,6)
Invasion
T1 (n = 9)
2 (22.2)
0,537
7 (77,8)
0,485
T2 ( n = 36)
14 (38,9)
22 (61,1)
T3 (n = 212)
85 (40,1)
132 (62,2)
T4 (n = 33)
16 (48,5)
17 (51,5)
lymfeknutemetastaser
N0 (n = 62)
27 (43,5)
0,445
40 (64,5)
0,534
N1 (n = 89)
39 (43,8)
49 (55,1)
N2 (n = 74)
24 (32,4)
47 (63,5)
N3 (n = 65)
27 (41,5)
42 (64,6)
Survival
Levde (n = 171)
62 (36,3)
0,089
96 (56,1 )
0,028
Død (n = 119)
55 (46,2)
82 (68,9)
CD44 uttrykk var assosiert med dårlig overlevelse
Oppfølging informasjonen ble tilgjengelig for alle 290 pasienter for perioder på 3-135 måneder (median 41 måneder). Ingen pasienter døde av postoperative komplikasjoner innen 30 dager etter begynnelsen av studieperioden, men 119 (41,0%) av pasientene døde i løpet av oppfølgingsperioden. Den totale overlevelse var signifikant lenger i CD44 (-) sammenlignet med CD44 (+) pasienter (figur 3A, log-rank test, P
= 0,035). Selv om pasienter med CD24 (-) svulster viste en trend mot lengre total overlevelse trend, forskjellen var ikke signifikant (figur 3B, log-rank test, P
= 0,115). TNM stadium og lymphovascular invasjon signifikant relatert til postoperativ overlevelsestid (figur 3C, D). Figur 3 Faktorer som påvirker total overlevelse hos pasienter med magekreft. Merk ingen signifikant korrelasjon mellom CD24 ekspresjon og total overlevelse tid (B). Men CD44 uttrykk (A), TNM staging (C), og lymphovascular invasjon (D) var signifikant assosiert med dårlig overlevelse i magekreft.
CD44 uttrykk var en uavhengig prognostisk markør
Etter justering for kjønn, alder, TNM stadium, og lymphovascular invasjon, CD44 (+) pasienter hadde en betydelig høyere risiko for magekreft dødsfall sammenlignet med CD44 (-) pasienter (odds ratio (OR) = 1,57; 95% KI: 1,05 til 2,36; P
= 0,029). Sammenlignet med pasienter som var CD24 (-), CD24 (+) pasienter hadde en høyere sannsynlighet for kortere total overlevelse, men forskjellen var ikke signifikant (OR = 1,41; 95% KI: 0,98 til 2,02; P
= 0,065) . Multivariate analyser identifisert CD44 uttrykk, TNM stadium, og lymphovascular invasjon som uavhengige prognostiske faktorer av dårlig pasient overlevelse i magekreft (tabell 2) .table 2 multivariat analyse med Cox modell for prediksjon av total overlevelse hos pasienter med magekreft

Relativ risiko (95% KI)
P-verdi *
CD44 uttrykk
Negative (n = 112)
Referanse
Positiv (n = 178)
1,57 (1,05 til 2,36)
0,029
CD24 uttrykk
Negative (n = 173)
Referanse
Positiv (n = 117)
1,41 (0,98 til 2,02 )
0,065
TNM staging
I (n = 23)
Referanse
II (n = 47)
1,69 (0,46 til 6,24)
0,433
III ( n = 187)
4,32 (1,33 til 14,01)
0,015
IV (n = 33)
14,53 (4,27 til 49,41)
< 0,001
Lymfe-vaskulær invasjon
Fraværende (n = 134)
Referanse
Present (n = 156)
1,60 (1,09 til 2,35)
0,016 product: * Cox-modell, justert for kjønn, alder, venøs infiltrasjon , TNM staging.
CD24 /CD44 uttrykk nivåer og H. pylori
infeksjon
Helicobacter pylori
infeksjon ble påvist i 67 av de 103 (65,4%) mage kreftpasienter som ble testet. Imidlertid var det ingen korrelasjon mellom Helicobacter pylori-infeksjon
og CD44 ekspresjon (P
= 0,815), og ingen signifikant sammenheng mellom Helicobacter pylori-infeksjon
og CD24 ekspresjon (P
= 0,096).
Diskusjons
Flere nyere studier har fokusert på den diagnostiske og prognostisk betydning av CD24 og CD44 uttrykk i kreft hos mennesker [17-19], og rollene til CD24 og CD44 i magekreft har også blitt utforsket [6, 11 , 20, 21]. Takahashi et al. rapportert at CD24 oppregulering var signifikant assosiert med dybde på invasjon og høy patologisk stadium i 173 pasienter med magekreft [22]. Frekvensen av CD44-ekspresjon i magekreft varierer mye 31-72%. Ozmen et al. rapportert signifikante sammenhenger mellom CD44 over-uttrykk og perinevral invasjon og lymfeknute positivitet i mage kreft [23]. Denne studien samtidig analysert CD24 og CD44 uttrykk nivåer selvstendig og viste at positivt uttrykk for CD44 alene, men ikke CD24, var assosiert med dårlig overlevelse i gastrisk karsinom. Ingen CD24 (+) eller CD44 (+) farging ble funnet i normal gastrisk flate epitel i den foreliggende undersøkelse, selv om Bessede et al. har påvise CD44-ekspresjon i normal gastrisk mucosa [12]. Videre studier er nødvendig for å forklare denne tilsynelatende uoverensstemmelsen. CD24 er et mucin-type glykosylfosfatidylinositol bundet celleoverflateprotein som uttrykkes i å utvikle eller regenerering av vev, og i eggstokkreft og hepatocellulært karsinom [20, 24]. Forrige undersøkelse av sammenhengen mellom CD24 /CD44 uttrykk og magekreft viste at CD24 (+) pasienter hadde en høyere sannsynlighet for magekreft tilbakefall enn CD24 (-) pasienter [11]. Men den biologiske funksjonen av CD24 i karsinogenese er ukjent. Tidligere studier observert sammenheng mellom høy CD24 uttrykk og lymfeknutemetastase, venøs invasjon, og lymfatisk invasjon. Imidlertid, selv om den foreliggende studie viste en trend mot kortere overlevelse i CD24 (-) sammenlignet med CD24 (+) pasienter, forskjell ikke signifikant. Duckworth et al. oppdaget CD24 uttrykk i mage parietalceller og viste at det regulert apoptose og responsen på Helicobacter felis
infeksjon i en musemodell [25]. Men den nåværende studien fant ingen signifikant sammenheng mellom Helicobacter
infeksjon og CD24 uttrykk. En mulig forklaring på den signifikant sammenheng mellom CD44 og overlevelse kan være relatert til stamcelle funksjon av CD44 (+) celler [26-29]. I 2009 Takaishi et al. første gang påvist eksistensen av CD44 (+) celler begavet med stamcelleegenskaper i mage svulster. De rapporterte at CD44 (+) magekreftceller viste stamcelle egenskapene til selvfornyelse og evnen til å danne differensiert avkommet og gi opphav til CD44 (-) celler. Takaishi et al. ytterligere bekreftet CD44 som en celleoverflatemarkør av mage cscs i flere humane magekreftcellelinjer, og viste at CD44 (+) magekreftceller viste økt motstand mot chemotherapy- eller strålingsinduserte celledød [29]. Liu et al. rapportert at CD44 var en direkte og relevant nedstrøms mål av MIR-34a i prostatakreft. CD44 protein nivåer ble redusert i cellene over-uttrykker MIR-34a, og slå ned på CD44 funksjonelt lignet Mir-34a effekter av hemming av tumorutvikling og metastase [30]. Vi har derfor vurdert at høyere uttrykk av CD44 i magekreftceller kan representere en høyere prosentandel av cscs, noe som forklarer hvorfor CD44 (+) pasienter demonstrere dårligere total overlevelse enn CD44 (-) pasienter. Videre studier er garantert å undersøke mekanismene for miRNA regulering av cscs.
Konklusjoner
I konklusjonen, uttrykk for CD44 var assosiert med dårlig overlevelse hos pasienter med magekreft. Dette tyder på at CD44 kan være en klinisk nyttig prognostisk markør, og kan også representere et nyttig terapeutisk mål. Men funksjonene til CD24 og CD44 i magekreft fortsatt uklare [31, 33], og videre studier er nødvendig for å avklare sine roller
Erklæringer
Takk.
Dette arbeidet ble støttet av Norman Bethune Program Jilin University [2013025], og Natural Science Foundation National of China (81072369 og 81273065)
Electronic supplerende materiale
12876_2014_1181_MOESM1_ESM.pptx tilleggsfiler. 1: Figur S1: fotografier fra CD44 immunhistokjemi flekker intensiteter: 0, 1 , 2 og 3. (PPTX 5 MB) Forfattere 'originale legges filer for Images Nedenfor er linkene til forfatternes originale innsendte filer for bilder. 12876_2014_1181_MOESM2_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 1 12876_2014_1181_MOESM3_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 2 12876_2014_1181_MOESM4_ESM.pdf Forfatteroriginalfilen for figur 3 konkurrerende interesser
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende interesser.
Forfattere ' bidrag
JJ og XC designet studien og gjennomført det meste av studiet; JJ og XC skrev det første utkastet av manuskriptet; DC utført de molekylære eksperimenter; HM utført patologi eksperimenter; MJ, YW, og FK analyserte patologisk data; DC, ZJ, og FK samlet pasientenes klinisk informasjon; JJ utført den statistiske analysen. Alle forfattere lese og godkjent den endelige manuskriptet.

• De overmethylated gener i Helicobacter pylori-infisert mageslimhinnen blir demetylert i mage cancers
• Spontan ruptur av gigantisk mage stromal tumor i mage lumen